DE2231676A1 - Verfahren zur fraktionierung von blutserum und plasmaprodukten - Google Patents

Verfahren zur fraktionierung von blutserum und plasmaprodukten

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Lajos F Fekete
Frans Peetoom
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Description

DIi. ING. E. HOFFMANN · DIPL. ING. W. EITLE ■ DR. KEK. XAT. K. Hi)I'FMAXX
PATENTANWÄLTE
D-8000 MÜNCHEN 81 · ARABELLASTRASSE 4 · TELEFON (0811) 911087
Baxter Laboratories, Inc., Morton Grove, 111. / USA
Verfahren zur Fraktionierung von Blutserum und Plasraappodukten
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Abtrennung von proteinartigen und Lipidmaterialien aus Blutserum und Plasma.
Die Erfindung bezieht sich insbesondere auf ein Verfahren zur Fraktionierung von Blutserum und Plasmaprodukteh, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man das Produkt mit etwa 1 bis etwa 30 Gew.% auf Volumenbasis Blockcopolymerisaten von Äthylenoxyd und einem Polyoxypropylenpalymeren vermischt, welches im Molekül mindestens 30% Äthylenoxyd enthält und dessen hydrophobe Polyoxypropylen-Basis ein Molekulargewicht von mindestens etwa 950 besitzt,und daß man die gewünschte Fraktion zurückbehält.
Blut ist eine Flüssigkeit, die die roten und weißen Blutzellen und die Blutplättchen enthält. Das Plasma oder der flüssige Teil des Bluts enthält etwa 9O?6 Wasser und 10% Feststoffe. Diese Feststoffe bestehen im wesentlichen aus etwa 7 bis 9% Proteinen, Λ% Salzen und zum Rest aus Lipiden und anderen Substanzen. Frisch abgenommenes Blut gerinnt innerhalb weniger Minuten. Die Bildung der Gerinnsel ist ein komplexer Prozeß, bei welchem das Protein, Fibrinogen, in unlösliches Fibrin umgewandelt wird. Blutserum ist ein Plasma, aus dem das Fibrin entfernt worden ist.
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Die Fraktionierung von Blutplasma und Serum und die labormäßige und klinische Verwendung der abgetrennten Blutkomponenten ist derzeit die übliche Praxis. Unter den verschiedenen aus Blut abgetrennten Komponenten sind Albumin, ct.-Globuline, a2~Globuline, ß-Globuline, y-Globuline, Fibrinogen, Prothrombin, antihaemophiles Globulin, Lipoproteine, Thromboplastin, Komplementärkomponenten, Isoagglutinine, Cholesterin, Phosphatide und zahlreiche Enzyme zu nennen, z.B. Amylase, Fibrinolysin, Esterase und Phosphatase. Bislang sind verschiedene Methoden ausgearbeitet worden, um die vorstehend genannten und andere Blutkomponenten abzutrennen und zu reinigen. Diese Methoden schließen im allgemeinen eine oder mehrere der folgenden Arbeitsweisen ein:
(a) Die fraktionierte Ausfällung mit Ammoniumsulfat und ähnlichen Salzen;
(b) die Ausfällung mit einem organischen Lösungsmittel unter Verwendung von kaltem Äthanol oder Aceton und anderer solcher Alkohole und Ketone;
(c) die selektive Adsorption auf Calciumphosphatgelen oder mit Bariumsulfat;
(d) isoelektrische Ausfällung durch pH-Einstellung auf den Punkt, wo keine Nettocharge des gegebenen Proteins vorliegt, und
(e) die Chromatographie unter Verwendung von Adsorbentien wie CM- oder DEAE-Cellulose oder durch "Sephadex"-Gelfiltration.
Weitere, in neuerer Zeit entwickelte Arbeitsweisen für die selektive Fraktionierung und Reinigung von Blutproteinen umfassen die Verwendung von Aminosäuren wie Glycin und ß-Alanin, von wasserlöslichen organischen Polymeren wie Polyäthylenglykol und Polypropylenglykol und von wasserunlöslichen PoIyelektrolytpolymeren, die basische Aminogruppen, z.B. die Dimethylaminopropylimid-Gruppe, enthalten.
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Gemäß der vorliegenden Erfindung wird nun ein neues und verbessertes Verfahren zur Trennung von proteinartigen bzw. proteinhaltigen und Lipidmaterialien aus Blutserum und Plasma zur Verfügung gestellt. Das Verfahren der vorliegenden Erfindung umfaßt die selektive Ausfällung mit bestimmten Blockcopolymerisaten, die Äthylenoxyd-Propylenglykol-Kondensationsprodukte darstellen. Die Trennung der Blutkomponenten mit diesen Blockcopolymerisaten hat sich als erheblich und signifikant besser als mit polymerem Polyäthylenglykol erwiesen. Die Verbesserung besteht in einer gesteigerten Ausbeute und einer höheren Reinheit der ausgefällten Proteinsubstanzen, einer größeren Klarheit und Stabilität der resultierenden, überstehenden flüssigen Serumprodukte und in der rascheren Trennung der gewünschten Komponenten.
Die erfindungsgemäß verwendeten Äthylenoxyd-Propylenglykol-Kondensationsprodukte können hergestellt werden, indem man Äthylenoxyd mit einem Polyoxypropylenpolymeren kondensiert. Diese Blockcopolymerisate können durch die nachstehende Strukturformel veranschaulicht werden:
HO(CH2CH2O)3 (CHCH2O)b (CH2CH2O)0 H
Für die Zwecke dieser Erfindung enthalten diese Blockcopalymerisate zweckmäßigerweise mindestens 50% Äthylenoxyd im Molekül und das Molekulargewicht der hydrophoben Polyoxy-' propylen-Basis beträgt mindestens 950. Materialien, die weniger als 50% Äthylenoxyd enthalten sind nicht genügend ungiftig, während Produkte mit einem Molekulargewicht der hydrophoben Basis von weniger als 950 nicht die gewünschte Löslichkeit besitzen. In dieser Hinsicht sind die erfindungsgemäß verwendeten Blockcopolymerisate mit Blutplasma-Ersatzmitteln und Mitteln für Herz-Lungen-Apparate verwandt und schließen solche Produkte ein.
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Beispiele für geeignete Blockcopolymerisate sind, die "PLURONICWj-Polyole F-38 und F-68 von Wyandotte Chemicals Corp. Das Produkt F-38 entnält 80% hydrophile Polyoxyäthylen-Einheiten im Molekül. Die hydrophobe Polyoxypropylen-Basis besitzt ein Molekulargewicht von 950. Das Produkt F-68 enthält gleichfalls 80% hydrophile Polyoxyäthylen-Einheiten im Molekül, jedoch hat die hydrophobe Basis ein Molekulargewicht von 1750. Das Gesamtmolekulargewicht dieser beiden "PLURONIC"-Polyole beträgt 4750 bzw. 8750.
Die Menge der bei dem erfindungsgemäßen Trennverfahren verwendeten Blockcopolymerisate kann variieren, was zum Teil von der jeweiligen proteinartigen oder Lipidfraktion abhängt, welche aus dem Blutplasma oder dem -serum ausgefällt werden soll. Im allgemeinen werden etwa 1 bis etwa 30 Gew.% des Copolymerisate je Volumeneinheit des Plasmas oder des Serums verwendet· Relativ niedrige Mengen des Blockcopolymerisats, beispielsweise etwa 1 bis etwa 20%, werden im allgemeinen bei der Fraktionierung von spezifischen Proteinmaterialien verwendet, welche gewünschterweise für laboratoriumsmäßige und klinische Zwecke zurückgehalten werden. Höhere Mengen des Blockcopolymerisats, beispielsweise mehr als etwa 20 bis etwa 30%, werden bevorzugt, um im wesentlichen alle unerwünschten proteinartigen und flüssigen, teilchenförmigen Stoffe aus dem Blutplasma oder dem -serum zu entfernen. Dies wird dadurch erreicht, daß ein Produkt bei dieser Konzentration des Copolymerisate ausgefällt wird, welches von dem teilchenförmigen Material abgetrennt werden kann, das löslich ist und in dem überstehenden Produkt zurückbleibt. Der Niederschlag kann sodann wieder aufgelöst werden, wodurch ein kristallklares Serum erhalten wird.
Die Ausfällung kann bei gewöhnlicher Raumtemperatur (etwa 250C) vorgenommen werden, doch werden geringere Temperaturen im allgemeinen bevorzugt, da diese proteinartigen Materialien bekanntlich einer Wärmedenaturierung unterworfen sind und die optimale
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Wirksamkeit in dem proteinartigen Material beibehalten wird, wenn man niedrige Temperaturen von etwa 4 bis etwa 250C aufrechterhält.
In manchen Fällen ist es zweckmäßig, die Blockcopolymerisat-Mittel in Kombination mit bestimmten anderen Substanzen zu verwenden, die im wesentlichen Ausfällungs- oder Absorptionsmittel darstellen. Insbesondere werden zusammen mit den Blockcopolymerisaten häufig mit Vorteil Glycin, Tricalciumphosphat und Diatomeenerde verwendet. Die Stufe im Trennverfahren, bei welcher diese anderen Mittel verwendet werden, sowie.die verwendeten Mengen variieren und hängen zum Teil von dem jeweiligen proteinartigen oder Lipidmaterial ab, das ausgefällt werden soll. Im allgemeinen sind' in diesen Fällen etwa 0,5 bis 2% Tricalciumphosphat, etwa 0,1 bis 0,5% Diatomeenerde und etwa 2 bis 3 molares Glycin geeignet.
Die Erfindung wird in den nachstehenden Beispielen erläutert. Diese beziehen sich auf die Herstellung eines antihaemophilen Globulins und Prothrombin-Koagulierungsfaktoren, auf Thromboplastin-Kontrollen und auf die Herstellung von geklärten Seren für organische Perfusionsflüssigkeiten und zur Verwendung als Blutgruppierungs- und Typierungsseren.
Beispiel 1
Herstellung von Plasma zur Verwendung als organische Perfusionsflüssigkeit
Plasma, das in einem Antikoagulans gesammelt worden ist, wird zunächst behandelt, indem es mit Glycin 30 bis 45 Minuten in der Kälte (80C) bei einem pH von 6,88 bis zu einer Molarität von Glycin von 2 bzw. 3 vermischt wird. Der gebildete Niederschlag wird verworfen und die zurückbleibende, überstehende Flüssigkeit wird im Verhältnis 1:1 mit normaler Kochsalzlösung (0,85%ige NaCl-Lösung) verdünnt. Bei einem pH von 6,5 bis 7,0 werden etwa 20 bis etwa 30% (Gew./Vol.) »PLURONIC» F-38 zugesetzt und das Gemisch wird 30 Minuten bei Raumtemperatur
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gerührt. Die überstehende Flüssigkeit wird verworfen und der zurückbleibende Niederschlag wird in normaler Kochsalzlösung bis zu ungefähr dem ursprünglichen Plasma-Volumen aufgelöst. Zu dieser Lösung werden 0,5% (Gew./Vol.) Tricalciumphosphat bei einem pH von 7»2 gegeben. Die Suspension wird 15 bis 60 Minuten bei Raumtemperatur (250C) vermischt. Der gebildete Niederschlag wird verworfen und die überstehende Flüssigkeit wird zurückbehalten. Zu der überstehenden Flüssigkeit wird Natriumcitrat bis zu einer Konzentration von 0,02 Mol gegeben. Der pH wird auf 7,5 eingestellt und die Flüssigkeit wird sodann 24 bis 120 Stunden bei 37°C wärmebehandelt, bis der Wert für den Koagulierungsfaktor V (Proaccelerin) auf ungefähr 0% vermindert worden ist. Sodann werden 0,15% (Gew./Vol.) "CELITE"-Diatomeenerde-Filterhilfsmittel zugefügt und die Flüssigkeit wird 10 Minuten bei Raumtemperatur vermischt. Der resultierende Niederschlag wird verworfen und die zurückbleibende überstehende Flüssigkeit wird steril durch ein "MILLIPORE»-Filter (0,3/u) filtriert. Die zurückbleibende Flüssigkeit ist lagerungsstabil und hat ein kristallklares Aussehen. Die Flüssigkeit ist außerordentlich gut zur Verwendung als Perfusions- bzw. Durchspülungsflüssigkeit für Organe geeignet, beispielsweise als Perfusionsflüssigkeit für Nieren, Herz oder Lunge.
Bei dem obigen Beispiel entfernt die Stufe der Glycin-Ausfällung im wesentlichen den gesamten Faktor VIII und das Fibrinogen. Die Ausfällungsstufe mit PLURONIC F-38 entfernt im wesentlichen das gesamte Lipoprotein und das restliche Fibrinogen. Die Stufe der Absorption mit Tricalciumphosphat entfernt die Faktoren II, VII, IX und X. Das Erhitzen bei 37°C inaktiviert den Faktor V. Schließlich entfernt die Stufe der CELITE-Absorption die Faktoren XI und XII.
Beispiel 2
Herstellung eines Serums zur Verwendung als Serum für die Blutgruppen-BeStimmung und für die Typisierung
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Das zu klärende Serum wird zunächst mit normaler Kochsalzlösung (0,85%ige NaCl-Lösung) so verdünnt, daß die Proteinkonzentration etwa 2,5 bis 3,0 g/100 ml beträgt. Der pH-Wert wird auf 6,5 bis 7,0 eingestellt. Sodann werden etwa 20 bis etwa 30% PLURONIC F-38 (vorzugsweise etwa 24 g/80 ml) bei Raumtemperatur zugefügt und es wird 30 bis 60 Minuten vermischt. Das überstehende Produkt, das Lipoprotein und fibrinartige Materialien enthält, wird verworfen und der zurückbleibende Niederschlag wird mit genügend normaler Kochsalzlösung versetzt, daß das Volumen auf ungefähr das ursprüngliche Serumvolumen eingestellt wird. Der pH wird auf 7,2 eingestellt, worauf zu dem aufgelösten Niederschlag 0,5% (Gew./Vol.) Tricalciumphosphat zugegeben werden. Die Suspension wird 30 Minuten bei Raumtemperatur vermischt. Das Gemisch wird sodann zentrifugiert, um das Serum zu klären und das resultierende überstehende Serum wird sorgfältig von dem Tricalciumphosphat und dem aktivierten Gerinnungsfaktoren-Komplex dekantiert und für Blufbankzwecke aufbewahrt. Diese Arbeitsweise ist "beispielsweise für die Klärung von (a) Anti-A- und Anti-B-Blutgruppenbestimmungsseren und (b) Anti-"c- und Anti-"e-Typisierungsseren für den Salzlösungs-Reagenzglas-Test geeignet.
Beispiel 3
Herstellung eines AHF-Konzentrats für klinische Zwecke
Zur Herstellung eines wirksamen antihaemophilen Faktors (AHF, Faktor VIII)-Konzentrats durch Fraktionierung mit PLURONIC F-38 wird die folgende Arbeitsweise angewandt:
Das gesamte Blut wird in einer 4%igen Citrat-Antikoagulierungslösung (1 Teil 4&Lge Citrat-Antikoagulierungslösung plus 9 Teile" Gesamtblut) gesammelt. Die Zellen werden von dem Plasma durch Zentrifugierung abgetrennt. Das zurückbehaltene Plasma wird bei -25°C eingefroren und sodann bei 4 bis 5°C getaut. Der resultierende Cryoniederschlag wird durch Zentrifugierung gesammelt.
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Der Cryoniederschlag wird in 0,1 molarer Glycin-citratisierter Kochsalzlösung (1 Teil 0,1 Mol Natriumeitrat in 4 Gew.Teilen 0,9%iger Kochsalzlösung, welche hinsichtlich des Glycins 0,1 molar gemacht wurde) bei 22 bis 250C (Räumtemperatür)aufgelöst. Der pH-Wert wird mit 1n Essigsäure auf 6,5 eingestellt. Festes PLURONIC F-38, 3,5% (Gew./Vol.), wird zugegeben und die Suspension wird 15 Minuten bei 22 bis 25°C vermischt. Das. Gemisch wird 30 Minuten bei 5000 U/min zentrifugiert und der resultierende Niederschlag (Fibrinogen) wird verworfen.
Das an AHF reiche überstehende Produkt wird gesammelt und der pH-Wert wird mit 1NaOH auf 6,88 eingestellt. Sodann wird zu einer Endkonzentration von 10% (Gew./Vol.) festes PLURONIC F-38 zugesetzt und die Suspension wird 15 Minuten bei 22 bis 25°C gemischt. Das Gemisch wird 30 Minuten bei 5000 U/min zentrifugiert und das überstehende Produkt wird verworfen.
Der durch die zweite Zentrifugierung erhaltene,zurückbleibende AHF-Niederschlag wird in citratisierter Kochsalzlösung (1 Teil 0,1m Natriumeitrat in 4 Gew.Teilen 0,9%iger Kochsalzlösung) bis zu einer Endkonzentration von 20 bis 30 AHF-Einheiten/ml aufgelöst. Die hierin verwendeten AHF-Einhelten sind der AHF-Aktivität in 1 ml gesammeltem normalem Gesamtplasma äquivalent. Das gelöste Produkt wird steril mit einem MILLIPORE-Membranfilter filtriert, wobei Filter mit Porengrößen von 0,3/U, 0,45 /U und 0,2/u verwendet werden. Die filtrierte Lösung wird sodann bei aseptischen Bedingungen in Phiolen mit einem Aufnahmevermögen von 10 bis 30 ml abgefällt, rasch eingefroren und lyophilisiert. Nach der Rekonstituierung mit sterilem Wasser ist das Endprodukt für die Verabreichung an Patienten mit Bluterkrankheit geeignet, die an Ausblutungserscheinungen leiden.
Beispiel 4
Herstellung eines Prothrombin-Komplexes für klinische Zwecke
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Zur Herstellung eines wirksamen Prothrombin-Komplexes (Faktor II plus andere Gerinnungsfaktoren) durch Fraktionieren mit PLURONIC F-38 wird nach folgender Arbeitsweise verfahren:
Eine Cohn-Plasmafraktion IV-1 wird in normaler Kochsalzlösung (0,9?oige NaCl-Lösung) zu einer Konzentration von 10% (Gew./Vol.) aufgelöst und der pH-Wert wird auf 7,2 eingestellt. Zu 50 1 der Fraktion IV-1-Suspension wird tribasisches Calciumphosphat (500 g) gegeben und das Gemisch wird etwa 30 Minuten gerührt. Die Suspension wird sodann zentrifugiert und das überstehende Produkt wird verworfen. Der zurückbehaltene Niederschlag wird in 0,1m Trinatriumcitrat bis zu einem Endvolumen von 5 1 suspendiert. Die Suspension wird zentrifugiert und der Niederschlag wird verworfen. Der pH-Wert des zurückbehaltenen überstehenden Produkts wird auf 7,2 eingestellt. PLURONIC F-38 wird zu einer Endkonzentration von 5% zugegeben und die Suspension wird etwa 15 Minuten gerührt. Die Suspension wird durch Zentrifugierung geklärt, wobei das überstehende Produkt zurückbehalten wird und der Niederschlag verworfen wird. Der pH-Wert des zurückbehaltenen überstehenden Produkts wird sodann auf 5,2 eingestellt. Bis zu einer Endkonzentration von 20% wird PLURONIC F-38 zugesetzt. Die Suspension wird zentrifugiert und der gewonnene Niederschlag wird bis zu einem Volumen von 5 1 in einer Citrat-Kochsalzlösung aufgelöst. Heparin wird in einer Menge von einer Einheit je Milliliter zugesetzt und das gelöste Produkt wird steril durch ein MILLIPORE-Membranfilter gefiltert, wobei Filter mit einer Porengröße von 0,3/U, 0,45Ai und 0,2 /U verwendet werden. Die .filtrierte Lösung wird sodann bei aseptischen Bedingungen in Ampullen mit einer Kapazität von 10 bis 30 ml eingefüllt, rasch gefroren und lyophilisiert. Nach der Rekonstituierung mit sterilem Wasser ist das Endprodukt für die Verabreichung an Patienten geeignet, denen es am Faktor II ermangelt.
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Bei den Beispielen 3 und 4 wird gefunden, daß die Trennung des jeweils gewünschten Proteinniederschlags rascher erhalten wird, als es der Fall ist, wenn anstelle von PHJRONIC F-38 Polyäthylenglykol 4000 verwendet wird und daß die Ausbeute des Endprodukts erheblich gesteigert wird.
Beispiel 5
Herstellung einer Thromboplastin-Kontrolle aus Plasma
Frisches menschliches Blut wird in einer 4&Lgen Natriumcitrat-Antikoagulans-Lösung (1 Teil Antikoagulans und 9 Teile Gesamtblut) gesammelt. Das resultierende Gemisch wird bei 3000 χ G bei 5°C zentrifugiert. Das überstehende resultierende Plasma wird erneut in der gleichen Weise zentrifugiert und sodann bei -200C eingefroren. Das Plasma wird bei Raumtemperatur (ca.250C) aufgetaut und mit 0,9%iger physiologischer normaler Kochsalzlösung verdünnt (1 Teil Plasma und 1 Teil normaler Kochsalzlösung). Der pH-Wert der resultierenden Lösung wird mit 1n HCl auf 6,0 bis 7,0 eingestellt. Zu der Lösung wird PLURONIC F-38 bis zu einer Endkonzentration von 3O?4 zur Bildung eines Niederschlags zugesetzt. Nach der Zentrifugierung wird überschüssiges Citrat und Spurenmengen des Thromboplastin-Aktivmaterials in der überstehenden Flüssigkeit entfernt, welche verworfen wird.
Das auf die obige Weise hergestellte Plasma wird sodann dazu verwendet, um mehrere Thromboplastin-Kontrollen herzustellen, welche für die Durchführung von Prothrombinzeit-Bestimmungen vorgesehen sind. Beispiele hierfür sind der einstufige Prothrombinzeit-Schnelltest oder der modifizierte Owren-Prothrombin-T*st, beschrieben in "Hyland Reference Manual of Coagulation Procedures", veröffentlicht von Hyland Laboratories, Los Angeles, Calif., Seiten 10 bis 14 (2.Auflage 1964). Diese Bestimmungen werden durchgeführt, um dem physiologischen Plasma zu ähneln, indem als einziges Puffermittel für das Plasma (1) Citrat-Imidazol-normale Kochsalzlösung-Puffer oder (2)
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Oxalat-Imidazol-normale Kochsalzlösung-Puffer verwendet wird. Diese Puffer bestehen aus folgenden Komponenten:
(1) Citrat-Imidazol-normale Kochsalzlösung-Puffer
0,9%ige NaCl-Lösung
0,0135 molare + 0,005 Trinatriumcitrat 0,025% bis 0,035% Imidazol
(2) Oxalat-Imidazol-normale Kochsalzlösung-Puffer
0,9%ige NaCl-Lösung
0,0135 molare + 0,005 Natriumoxalat 0,025 bis 0,035% Imidazol
Bei Verwendung der vorstehend genannten Mengen des Citrat- oder Oxalat-Antikoagulans in dem genannten Puffer werden wirksam eine unerwünschte Aktivierung der Gerinnungsfaktoren und eine Thromoplastin-Bildung verhindert. Überschüssiges Citrat und Spuren von Thromboplastin-Aktivmaterial werden entfernt, indem am Anfang eine Behandlung von Plasma mit PLURONIC F-38 vorgesehen ist. Mit diesen kombinierten Stufen wird eine maximale Stabilisierung der Thromboplastin-Kontrollen erzielt.
Die Citrat-Kontrollen (100$ und 20% Kontrollen) werden wie folgt hergestellt:
Für die 100%ige Kontrolle wird die ausgefallene Paste von der Behandlung mit PLURONIC F-38 in dem Citrat-Imidazol-normale Kochsalzlösung-Puffer auf 50 bis 70% des ursprünglichen Volumens des Plasmas aufgelöst.
Für die 20%-Kontrolle wird die ausgefallene Paste von der Behandlung mit PLURONIC F-38 in normaler Kochsalzlösung auf 80 bis 120% des ursprünglichen Volumens des Plasmas aufgelöst. Prothrombin-freies menschliches Plasma wird sodann aus der wiederaufgelösten, ausgefallenen Paste hergestellt, indem der Prothrombin-Komplex (Faktoren II, VII, IX und X) adsorbiert
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wird. Diese Adsorption wird erzielt, indem man Tricalciumphosphat bis zu einer Endkonzenträtion von 1 Gew.% zusetzt, den pH-Wert mit 1n HCl auf 7,2 + 0,2 einstellt und etwa 30 bis 45 Minuten vermischt. Die Suspension wird sodann zentrifugiert. Das überstehende Produkt wird mit 0,0135m + 0,005 Trinatriumcitrat und 0,025# bis 0,035% Imidazol gepuffert und der pH-Wert wird mit 1n NaOH auf 7,8 + 0,2 eingestellt. Diese Lösung wird sodann mit dem angemessenen Volumen der auf die obige Weise hergestellten 100%-Citrat-Kontrolle vermischt, um die gewünschten Gerinnungszeiten für die 20?o-Kontrolle zu ergeben.
Die 100?d- und 20%-Oxalat-Kontrollen werden in der gleichen Weise wie die oben hergestellten Citrat-Kontrollen hergestellt, mit der Ausnahme, daß O,O135m Natriumoxalat anstelle von 0,0135m Trinatriumcitrat verwendet wird.
Die vorstehenden Beispiele können modifiziert werden. So können beispielsweise Albumin, γ-Globuline, Fibrinogen und andere Blutfraktionen verwendet werden, wenn man das Trennverfahren der vorliegenden Erfindung anwendet.
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Claims (6)

  1. - 13 Patentanspr ü-c h e
    (ij Verfahren zur Fraktionierung von Blutserum und Plasmaprodukten, dadurch gekennzeichnet , daß man das Produkt mit etwa 1 bis etwa 30 Gew.% auf Volumenbasis Blockcopolymerisaten von Äthylenoxyd und einem Polyoxypropylenpolymeren vermischt, welches im Molekül mindestens 50% Äthylenoxyd enthält und dessen hydrophobe Polyoxypropylen-Basis ein Molekulargewicht von mindestens etwa 950 besitzt, und daß man die gewünschte Fraktion zurückbehält.
  2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß das Blockcopolymerisat etwa 80% hydrophile Polyoxyäthylen-Einheiten im Molekül enthält und daß die hydrophobe Polyoxypropylen-Basis ein Molekulargewicht von 950 besitzt.
    oder 2,
  3. 3. Verfahren nach Anspruch 1 ,^dadurch gekennzeichnet , daß man ein geklärtes Plasma zur Verwendung als Perfusionsflüssigkeit für Organe aus Blutplasma erhält, indem man das Blutplasma mit Glycin bis zu einer Molarität von etwa 2 bis 3 bezüglich des Glycins vermischt, den resultierenden Niederschlag davon abtrennt, das zurückbehaltene überstehende Produkt nach der Verdünnung auf das etwa doppelte Volumen mit den Blockcopolymerisaten vermischt, den resultierenden Niederschlag durch wäßrige Verdünnung auf etwa das ursprüngliche Plasmavolumen suspendiert, die resultierende Suspension mit etwa 0,5 bis 2% Tricalciumphosphat vermischt, den resultierenden Niederschlag davon abtrennt und die klare überstehende Flüssigkeit zurückbehält.
  4. 4. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß man ein geklärtes Serum für die Verwendung als Blutgruppenbestimmungsmittel und Typisierungsmittel aus Blutserum erhält, indem man das Blutserum mit dem Blockcopolymerisat nach wäßriger Verdünnung auf eine Protein-
    209RR3M175
    konzentration von etwa 2,5 bis 3,0 g/100 ml vermischt, den resultierenden Niederschlag durch wäßrige Verdünnung auf ungefähr das ursprüngliche Serumvolumen suspendiert, die resultierende Suspension mit etwa 0,5 bis 2% Tricalciumphosphat vermischt, den resultierenden Niederschlag davon abtrennt und daß man die klare überstehende Flüssigkeit zurückbehält.
  5. 5· Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß man ein geklärtes Plasma zur Verwendung als Thromboplastin-Kontrolle aus Blutplasma erhält, indem man das Blutplasma mit dem Blockcopolymerisat vermischt und den resultierenden Niederschlag in einem wäßrigen Puffer aus der Gruppe (a) Citrat-Imidazol-normale Kochsalzlösung-Puffer und (b) Oxalat-Imidazol-normale Kochsalzlösung-Puffer suspendiert, wobei man die Puffer auf einen pH-Wert von 7,0 bis 7,4 einstellt.
  6. 6. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man ein geklärtes Plasma zur Verwendung als Thromboplastin-Kontrolle aus Blutplasma erhält, indem man das Blutplasma mit dem Blockcopolymerisat vermischt, den resultierenden Niederschlag in normaler physiologischer Kochsalzlösung suspendiert, die resultierende Suspension mit etwa 0,5 bis etwa 2% tribasisches Calciumphosphat vermischt, den resultierenden Niederschlag entfernt und das überstehende Produkt mit einem wäßrigen Puffer aus der Gruppe (a) Citrat-Imidazol-Puffer und (b) Oxalat-Imidazol-Puffer vermischt, wobei man die Puffer auf einen pH-Wert von 7,6 bis 8,0 einstellt.
    209RR3/1175
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