JPS6028812B2 - 副作用のない血漿分別物の製造方法 - Google Patents
副作用のない血漿分別物の製造方法Info
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- JPS6028812B2 JPS6028812B2 JP55049124A JP4912480A JPS6028812B2 JP S6028812 B2 JPS6028812 B2 JP S6028812B2 JP 55049124 A JP55049124 A JP 55049124A JP 4912480 A JP4912480 A JP 4912480A JP S6028812 B2 JPS6028812 B2 JP S6028812B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、血糠または血環粗分別物から副作用のない血
糠分別物、特に凝固因子製剤を、クエン酸塩イオンの如
きカルシウム結合性抗凝固剤の存在下での血糠蛋白の精
製および段階的濃厚化によって、例えば櫨過、寒冷沈降
、沈殿、吸着、限外櫨週、遠心分離および凍結乾燥によ
って製造する方法に関する。
糠分別物、特に凝固因子製剤を、クエン酸塩イオンの如
きカルシウム結合性抗凝固剤の存在下での血糠蛋白の精
製および段階的濃厚化によって、例えば櫨過、寒冷沈降
、沈殿、吸着、限外櫨週、遠心分離および凍結乾燥によ
って製造する方法に関する。
人間−および動物蛋白を貯蔵および加工する場合、多く
の酵素、殊に高分子量の血糠蛋白の分解または活性化の
如き変化をもたらす酵素が有効である。
の酵素、殊に高分子量の血糠蛋白の分解または活性化の
如き変化をもたらす酵素が有効である。
血※蛋白のかかる変化は、生物学的活性の為に、望ま〈
ない副作用を生物体中および試験管中でもたらす副生成
物を生ぜしめ得る。非常に有効な凝固因子と生物学的効
果のある他の血数蛋白との濃縮物を製造する場合には、
望ましくない副反応を起し得る酵素的原因による蛋白変
化の危険が特に大きい。
ない副作用を生物体中および試験管中でもたらす副生成
物を生ぜしめ得る。非常に有効な凝固因子と生物学的効
果のある他の血数蛋白との濃縮物を製造する場合には、
望ましくない副反応を起し得る酵素的原因による蛋白変
化の危険が特に大きい。
皿嬢からプロトロンビンーコンプレックスを得る際に溶
離溶液のトロンビンを不活性化する為にアンチトロンビ
ンｍを添加ることは既に公知である〔サドヒシユ・チア
ンドラ（ＳｕｄｈｊｓｈＣｈａｎｄｒａ）およびマイラ
ン・ヴインカーハウザー（ＭｉｌａｎＷｉｃｋｅｒｈａ
雌ｅｒ）の“ラージ・スケール・プレパレーション・オ
ブ・ノントロンボゲニツク・プロトロンビンーコンプレ
ツクス（ＬａｒｇｅＳｃａｌｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｊ
ｏｎ ｏｆ Ｎｏｎｔｈｒｏｍｂｏ鉾ｎｌｃＰｒｏ
ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｃｏｍｐｌｅｘ）’’、血栓症リサ
ーチ（ｍｒｏｍかｓｉｓ Ｒｅｓｅａｃｈ ），１２・
第 ５７１ 頁（１９７８）〕。
離溶液のトロンビンを不活性化する為にアンチトロンビ
ンｍを添加ることは既に公知である〔サドヒシユ・チア
ンドラ（ＳｕｄｈｊｓｈＣｈａｎｄｒａ）およびマイラ
ン・ヴインカーハウザー（ＭｉｌａｎＷｉｃｋｅｒｈａ
雌ｅｒ）の“ラージ・スケール・プレパレーション・オ
ブ・ノントロンボゲニツク・プロトロンビンーコンプレ
ツクス（ＬａｒｇｅＳｃａｌｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｊ
ｏｎ ｏｆ Ｎｏｎｔｈｒｏｍｂｏ鉾ｎｌｃＰｒｏ
ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｃｏｍｐｌｅｘ）’’、血栓症リサ
ーチ（ｍｒｏｍかｓｉｓ Ｒｅｓｅａｃｈ ），１２・
第 ５７１ 頁（１９７８）〕。
更に、プロトロンビンーコンプレックスを製造する際に
、プロトロンビン活性化を阻止する為に、最終生成物に
へパリンを加えることも公知である〔‘‘ニュー・イン
グランド・ジャーナル・オフ ．メデシン（Ｎｅｗ Ｅ
ｎｇａｎｄ Ｊｏ川雌ｌ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）”，
２８０、第２９１頁（１９６９）〕。
、プロトロンビン活性化を阻止する為に、最終生成物に
へパリンを加えることも公知である〔‘‘ニュー・イン
グランド・ジャーナル・オフ ．メデシン（Ｎｅｗ Ｅ
ｎｇａｎｄ Ｊｏ川雌ｌ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ）”，
２８０、第２９１頁（１９６９）〕。
他の著述家〔ジヤンーピーレ・ソーウリェル（Ｊｅａｎ
−ＰｉｅｒｒｅＳｏｕｌｉｅｒ）およびマリオン・スタ
ィンブック（Ｍａｒｉｏｎ Ｓｐｉｎｂｕｃｋ）の雑誌
“ゲス・ィン・メディ（蛇ｓ．Ｉｎｎ．Ｍｅｄ．ゾ，２
０、補巻、３１１頁（１９６５）〕によれば、ヘパリン
はプロトロンビン・コンプレックスの安定化に効果があ
る。Ｄ−メナシェ（Ｍｅｎａｃｈｅ）および日・ロバー
ツ（Ｒｏ戊ｒｔｓ）も、“トロンージエス・ハエモル、
（Ｔｈｒｏｍ．Ｄｊａｔｈ・ｈａｌｍｏｎｈ．）’’、
シトッガルト、３３第６５４頁（１９７５）にて、プロ
トロンビンーコンプレックス製剤にへパリンを添加する
ことを提案している。更に、ドイツ特許出願公開第２３
２４７１７号明細書によって、因子側−製剤の分別の際
に、因子肌の収率を高める為にへパリンを添加すること
が公知である。
−ＰｉｅｒｒｅＳｏｕｌｉｅｒ）およびマリオン・スタ
ィンブック（Ｍａｒｉｏｎ Ｓｐｉｎｂｕｃｋ）の雑誌
“ゲス・ィン・メディ（蛇ｓ．Ｉｎｎ．Ｍｅｄ．ゾ，２
０、補巻、３１１頁（１９６５）〕によれば、ヘパリン
はプロトロンビン・コンプレックスの安定化に効果があ
る。Ｄ−メナシェ（Ｍｅｎａｃｈｅ）および日・ロバー
ツ（Ｒｏ戊ｒｔｓ）も、“トロンージエス・ハエモル、
（Ｔｈｒｏｍ．Ｄｊａｔｈ・ｈａｌｍｏｎｈ．）’’、
シトッガルト、３３第６５４頁（１９７５）にて、プロ
トロンビンーコンプレックス製剤にへパリンを添加する
ことを提案している。更に、ドイツ特許出願公開第２３
２４７１７号明細書によって、因子側−製剤の分別の際
に、因子肌の収率を高める為にへパリンを添加すること
が公知である。
要するに凝固因子製剤の製造の際にアンチトロンビンを
添加すること並びにへパリンを添加することは多くの著
述家によって提起されているが、従来には人間または動
物から得る複作用のない血数分別物、特に、一様な作用
を示し且つ副作用のない凝固因子製剤を、信頼し得て且
つ操返えし可能な様に製造することに成功しておらず、
この課題を解決することが要求されている。
添加すること並びにへパリンを添加することは多くの著
述家によって提起されているが、従来には人間または動
物から得る複作用のない血数分別物、特に、一様な作用
を示し且つ副作用のない凝固因子製剤を、信頼し得て且
つ操返えし可能な様に製造することに成功しておらず、
この課題を解決することが要求されている。
本発明者は、皿擬あるいは皿糠分別物中に於ける不所望
の生物学的変化を阻止するには、アンチトロンビンまた
はへパリンそれ自体が決定的に有効であるのではなく、
迅速な反応性の（親和性の）アンチトロンビンの存在が
重要であることを見出した。
の生物学的変化を阻止するには、アンチトロンビンまた
はへパリンそれ自体が決定的に有効であるのではなく、
迅速な反応性の（親和性の）アンチトロンビンの存在が
重要であることを見出した。
それ故に本発明の方法は、皿糠蛋白、特に凝固因子の精
製および濃厚化を迅速な反応性の（親和性の）アンチト
ロンビンの存在下に実施することにある。
製および濃厚化を迅速な反応性の（親和性の）アンチト
ロンビンの存在下に実施することにある。
本発明者は、安定化剤を単に最終生成物に添加するかあ
るいは上記従来技術に属する如き分別工程のいずれかの
中間段階に於て多かれ少なかれ任意に添加することでは
充分ではなく、迅速な反応性の（親和性の）アンチトロ
ンビンの濃度を分別全工程の間一定の程度あるいはそれ
以上に維持しなければならないことも見出した。
るいは上記従来技術に属する如き分別工程のいずれかの
中間段階に於て多かれ少なかれ任意に添加することでは
充分ではなく、迅速な反応性の（親和性の）アンチトロ
ンビンの濃度を分別全工程の間一定の程度あるいはそれ
以上に維持しなければならないことも見出した。
それ故に、分別工程の全段階の間迅速な反応性の（親天
０１性の）アンチトロンビンの濃度を各段階のそれぞれ
の溶液１の‘当り０．０５〜５０単位、殊に０．５〜５
０単位（該アンチトロンビン）に維持することも本発明
に従う方法に属する。１のＮＩＨ（Ｎａｔｉｏｎａｌｌ
船ｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅａｌｔｈ）−単位のトロンビン
が１分間に抑制するその量ＡＴ肌の親和性アンチトロン
ビンの１単位（以下ＩＡＴａｖ−Ｅと略す）と定義され
る。
０１性の）アンチトロンビンの濃度を各段階のそれぞれ
の溶液１の‘当り０．０５〜５０単位、殊に０．５〜５
０単位（該アンチトロンビン）に維持することも本発明
に従う方法に属する。１のＮＩＨ（Ｎａｔｉｏｎａｌｌ
船ｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅａｌｔｈ）−単位のトロンビン
が１分間に抑制するその量ＡＴ肌の親和性アンチトロン
ビンの１単位（以下ＩＡＴａｖ−Ｅと略す）と定義され
る。
測定する為に２のＮＩＨ−単位のトロンビンを、ＡＴｗ
で試験すべき試料と一緒に３７ｏ０のもとで垣温貯蔵す
る。１分後に恒温貯蔵混合物に、ベプチドをベースとす
るトロンビン感性の色素体培養基〔例えば、カービー（
Ｋａｂｉ）社の培養基Ｓ−２２３８〕を加えそして未抑
制のトロンビン量を光度測定法で測定する。
で試験すべき試料と一緒に３７ｏ０のもとで垣温貯蔵す
る。１分後に恒温貯蔵混合物に、ベプチドをベースとす
るトロンビン感性の色素体培養基〔例えば、カービー（
Ｋａｂｉ）社の培養基Ｓ−２２３８〕を加えそして未抑
制のトロンビン量を光度測定法で測定する。
本発明に従う方法は色々な仕方で実施し得る。本発明の
有利な実施形態は、迅速な反応性の（親和性の）アンチ
トロンビンを抑制因子ーコフアクターの添加によってそ
の場で形成することである。抑制因子ーコフアクターと
してはへパリンまたはへパリノイドを使用することがで
きる。本発明に従う方法の特に有利で且つ重要な実施形
態は、迅速な反応性の（親和性の）アンチトロンビンを
殊にアンチトロンビンｍ−共因子−コンプレックスの形
で、予め形成しそしてその予め形成されたアンチトロン
ピンー共因子ーコンプレックスとして、分別処理の個々
段階の間に回分的に添加することである。本発明に従う
方法を以下の実施例によって更に詳細に説明する。
有利な実施形態は、迅速な反応性の（親和性の）アンチ
トロンビンを抑制因子ーコフアクターの添加によってそ
の場で形成することである。抑制因子ーコフアクターと
してはへパリンまたはへパリノイドを使用することがで
きる。本発明に従う方法の特に有利で且つ重要な実施形
態は、迅速な反応性の（親和性の）アンチトロンビンを
殊にアンチトロンビンｍ−共因子−コンプレックスの形
で、予め形成しそしてその予め形成されたアンチトロン
ピンー共因子ーコンプレックスとして、分別処理の個々
段階の間に回分的に添加することである。本発明に従う
方法を以下の実施例によって更に詳細に説明する。
例１：（因子肌−濃縮物の製造）
人間の新鮮な冷凍クエン酸塩皿糠１夕を００〜２℃のも
とで融かしそしてその際に生ずる寒冷沈降物を遠心分離
によって分離する。
とで融かしそしてその際に生ずる寒冷沈降物を遠心分離
によって分離する。
因子肌を含有する上澄み液（寒冷上澄み液）中に於て１
の【当り０．５国際単位（ＩＥ）のへパリンを添加する
ことによって１の‘当り７単位の迅速な反応性の（親和
性の）アンチトロンビン（７ＡＴＷ−Ｅ／舵【）がその
場で形成される。１８分後に、氷点上澄み園に櫨梓下に
０．５夕 のＤＥＡＥー セ フアデツクス（Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ）ジェチルーアミノェチル基を含有する交叉架
橋したデキストラン、製造元：ファルマシア（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ）○ｍｂｈ、パッド・ナウハイム（母ｄＮａ
血ｅｉｍ）／ウプサラ（Ｕｐｐｓａｌａ）、スエーデン
）を加え、５℃を超えない温度のもとで更に３庇ご間損
梓した後にＤＥＡＥ−セファデックスを沈殿処理または
遠心分離によって分離する。
の【当り０．５国際単位（ＩＥ）のへパリンを添加する
ことによって１の‘当り７単位の迅速な反応性の（親和
性の）アンチトロンビン（７ＡＴＷ−Ｅ／舵【）がその
場で形成される。１８分後に、氷点上澄み園に櫨梓下に
０．５夕 のＤＥＡＥー セ フアデツクス（Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ）ジェチルーアミノェチル基を含有する交叉架
橋したデキストラン、製造元：ファルマシア（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ）○ｍｂｈ、パッド・ナウハイム（母ｄＮａ
血ｅｉｍ）／ウプサラ（Ｕｐｐｓａｌａ）、スエーデン
）を加え、５℃を超えない温度のもとで更に３庇ご間損
梓した後にＤＥＡＥ−セファデックスを沈殿処理または
遠心分離によって分離する。
ＤＥＡＥーセフアデックス−上澄み液中に於て、再び１
心当り０．１５１Ｅのへパリンと添加することによって
７ＡＴａＶ−Ｅ／の上がその場で形成される。１５分後
にＤＥＡＥ−セフアデックス上澄み液に、鍵投下に水酸
化アルミニウム５％懸濁液７の‘を添加し、５℃以下の
温度のもとで更に１粉ご間婿拝した後に水酸化アルミニ
ウムを遠心分離によって分離する。
心当り０．１５１Ｅのへパリンと添加することによって
７ＡＴａＶ−Ｅ／の上がその場で形成される。１５分後
にＤＥＡＥ−セフアデックス上澄み液に、鍵投下に水酸
化アルミニウム５％懸濁液７の‘を添加し、５℃以下の
温度のもとで更に１粉ご間婿拝した後に水酸化アルミニ
ウムを遠心分離によって分離する。
因子刑を吸着した状態で含有している水酸化アルミニウ
ムを、４タノそのクエン酸一三一ナトリウム・２水和物
と７夕／その塩化ナトリウムとを含有する１００の【（
本来の血糠の容量の１／１０）の洗浄溶液にて処理する
。更に該溶液に１の単位／机上の予め形成された親和性
アンチトロンビン（１０ＡＴ肌−Ｅ／肌）を加える。親
和性アンチトロンビン（即ち、アンチトロンビンｍ−共
因子コンプレックス）の前形成は、本来の分別工程の他
に、精製したアンチトロンビンｍの溶液とへパリン溶液
とを一緒にすることによって行ない、その際得られる溶
液中には１心当り０．９単位の精製アンチトロンビンｍ
および０．９８のへパリンが含まれている。５℃のもと
で１０分燈拝した後に、洗浄した水酸化アルミニウムを
遠心分離によって分離しそして因子皿を高いイオン濃度
のもとで港離する。
ムを、４タノそのクエン酸一三一ナトリウム・２水和物
と７夕／その塩化ナトリウムとを含有する１００の【（
本来の血糠の容量の１／１０）の洗浄溶液にて処理する
。更に該溶液に１の単位／机上の予め形成された親和性
アンチトロンビン（１０ＡＴ肌−Ｅ／肌）を加える。親
和性アンチトロンビン（即ち、アンチトロンビンｍ−共
因子コンプレックス）の前形成は、本来の分別工程の他
に、精製したアンチトロンビンｍの溶液とへパリン溶液
とを一緒にすることによって行ない、その際得られる溶
液中には１心当り０．９単位の精製アンチトロンビンｍ
および０．９８のへパリンが含まれている。５℃のもと
で１０分燈拝した後に、洗浄した水酸化アルミニウムを
遠心分離によって分離しそして因子皿を高いイオン濃度
のもとで港離する。
この目的の為に水酸化アルミニウムを、４５夕／どの第
２‐リン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰ０４・１が２０）お
よび４タノそのクエン酸一三ーナトリウム・汎２０並び
に溶鍵溶液中で予め形成した１山単位／泌の親和性アン
チトロンビン（１ＭＴｗ−Ｂ／の‘）を含有する５０の
上（本来の皿糠の容量の１／２０）の溶離溶液にて処理
する。アンチトロンビンｍ−共因子ーコンプレックスの
前形成を前述の如く行なう。溶離溶液のｐＨ−値は、酸
性のリン酸塩溶液１夕当り７８夕のＮａＨ２Ｐ０４・班
２０）にて８．５に調節する。５℃で２び分蝿拝した後
に水酸化アルミニウムを遠心分離によって分離しそして
棄てる。
２‐リン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰ０４・１が２０）お
よび４タノそのクエン酸一三ーナトリウム・汎２０並び
に溶鍵溶液中で予め形成した１山単位／泌の親和性アン
チトロンビン（１ＭＴｗ−Ｂ／の‘）を含有する５０の
上（本来の皿糠の容量の１／２０）の溶離溶液にて処理
する。アンチトロンビンｍ−共因子ーコンプレックスの
前形成を前述の如く行なう。溶離溶液のｐＨ−値は、酸
性のリン酸塩溶液１夕当り７８夕のＮａＨ２Ｐ０４・班
２０）にて８．５に調節する。５℃で２び分蝿拝した後
に水酸化アルミニウムを遠心分離によって分離しそして
棄てる。
因子皿を含有する溶離液を酸性のリン酸塩溶液にて７．
５のｐＨ−値に調整し、次いで５℃のもとで脱鉱物水に
対して透析する。透析した溶離液を最初の凍結乾燥に委
ね、そうして得られる嵩ばつた物質を因子Ｗ含有量につ
いて並びに下記の“ＮＡＰＴＴ−試験〔非活性化の部分
トロンポプラスチンー時間（ＮＯＮ −ＡＣＴＩＶＡＴ
Ｅ○ −ＰＡＲＴＩＡＬ −ＴＨＲＯＭＢＯＰＬＡＳＴ
ＩＮ−ＴＩＭＥ）試験〕によって活性化した凝固因子の
存在についておよび該ＮＡＰＴＴ−試験にて梶めない活
性化した因子肌（因子肌ａ）について試験する。活性化
した凝固因子の存在についてのＮＡＰＴＴ試験：ａ試薬
ａ，合成樹旨装置だけによって得た人間の標準クエン酸
塩血酸、ａ２ 部分トロンポプラスチン（フオスフオー
リポイド）：“タコスティプタン（Ｔａｃｈｏｓｐｙｔ
ａｎ）’’〔ホルモンーシェミー（ＨｏｒｍｏｎＣｈｅ
ｍｉｅ）社、ミュンヒェン〕を１：２００の割合で“ト
リス（Ｔｒｉｓ）’’（トリスーヒド。
５のｐＨ−値に調整し、次いで５℃のもとで脱鉱物水に
対して透析する。透析した溶離液を最初の凍結乾燥に委
ね、そうして得られる嵩ばつた物質を因子Ｗ含有量につ
いて並びに下記の“ＮＡＰＴＴ−試験〔非活性化の部分
トロンポプラスチンー時間（ＮＯＮ −ＡＣＴＩＶＡＴ
Ｅ○ −ＰＡＲＴＩＡＬ −ＴＨＲＯＭＢＯＰＬＡＳＴ
ＩＮ−ＴＩＭＥ）試験〕によって活性化した凝固因子の
存在についておよび該ＮＡＰＴＴ−試験にて梶めない活
性化した因子肌（因子肌ａ）について試験する。活性化
した凝固因子の存在についてのＮＡＰＴＴ試験：ａ試薬
ａ，合成樹旨装置だけによって得た人間の標準クエン酸
塩血酸、ａ２ 部分トロンポプラスチン（フオスフオー
リポイド）：“タコスティプタン（Ｔａｃｈｏｓｐｙｔ
ａｎ）’’〔ホルモンーシェミー（ＨｏｒｍｏｎＣｈｅ
ｍｉｅ）社、ミュンヒェン〕を１：２００の割合で“ト
リス（Ｔｒｉｓ）’’（トリスーヒド。
キシメチルーアミノーメタン）／Ｎａｃｌ−緩衝液にて
希釈したもの、ａ３ 緩衝液（試験試料の為のおよびフ
オスフオリリポィドの為の希釈剤として）：０．０６肌
の“トリズ’−７．２Ｍ／〆、０．０９机の塩化ナトリ
ウム−５．２７夕／夕、ｐＨ−値はＦＮの塩酸で７．５
に調節する、ａ４ 塩化カルシウム：０．０２５肌（風
／４にａＣ１２）、ＣａＣ１２溶液を試験期間の間３７
ｑ０に維持する。
希釈したもの、ａ３ 緩衝液（試験試料の為のおよびフ
オスフオリリポィドの為の希釈剤として）：０．０６肌
の“トリズ’−７．２Ｍ／〆、０．０９机の塩化ナトリ
ウム−５．２７夕／夕、ｐＨ−値はＦＮの塩酸で７．５
に調節する、ａ４ 塩化カルシウム：０．０２５肌（風
／４にａＣ１２）、ＣａＣ１２溶液を試験期間の間３７
ｑ０に維持する。
試験試料およびその希釈物並びにクエン酸塩血鰍（ａ，
）を試験の間氷浴中に保管する。
）を試験の間氷浴中に保管する。
ｂ 試験方法：
試験すべき試料から、“トリス”／ＮａＣＩ−緩衝液の
使用下に合成樹脂小管中で１の固の等比級数的希釈物（
１：２，１：４〜１：１０２４）を製造した。
使用下に合成樹脂小管中で１の固の等比級数的希釈物（
１：２，１：４〜１：１０２４）を製造した。
これらの試料を“ブランク値”（試料として緩衝液を使
用する）と一緒に以下の方法に従う二重測定に於て試験
するぐブランク値’’を試験期間の初めと終りに測定す
る）：０．１叫の人間の標準クエン酸塩血験、０１の‘
の部分トロンポプラスチン、 ０．１のＺの試料、 ３７０で１分間恒温貯蔵、 ０，１机【のれ／４にａＣ１２。
用する）と一緒に以下の方法に従う二重測定に於て試験
するぐブランク値’’を試験期間の初めと終りに測定す
る）：０．１叫の人間の標準クエン酸塩血験、０１の‘
の部分トロンポプラスチン、 ０．１のＺの試料、 ３７０で１分間恒温貯蔵、 ０，１机【のれ／４にａＣ１２。
塩化カルシウムの添加から凝固形成までの時間を測定す
る（試験小管を３７０の氷浴中に於て傾けるかまたは自
動式凝固速度計を使用する）。
る（試験小管を３７０の氷浴中に於て傾けるかまたは自
動式凝固速度計を使用する）。
希釈していない試料あるいは最初の希釈物が‘‘ブラン
ク値”に比較して凝固時間を延長している場合には、延
長される凝固時間を出来るだけ短い値に減少させる量の
プロタミンーサルフェートを試料に添加しなければなら
ない。
ク値”に比較して凝固時間を延長している場合には、延
長される凝固時間を出来るだけ短い値に減少させる量の
プロタミンーサルフェートを試料に添加しなければなら
ない。
試験結果の評価：
試験すべき試料は、もし該試料あるいはその希釈物の添
加後の凝固時間が試験時間の前および後に測定した“プ
ランク値”の最短凝固時間＊よりも短か〈ない場合には
、活性化した凝固因子を含有していない （‘‘活性化
していない”）〔但し、許容限度：１０〜２■段（方法
の誤差限度に相当する）、ブランク値：少なくとも２０
町妙〕活性化した因子肌（因子肌ａ）の存在についての
試験：試験の原理： 因子皿ａは、アンチトロンビン町（ＡＴｍ）およびへパ
リンと一緒に冷却状態で恒温貯蔵によって抑制すること
ができる。
加後の凝固時間が試験時間の前および後に測定した“プ
ランク値”の最短凝固時間＊よりも短か〈ない場合には
、活性化した凝固因子を含有していない （‘‘活性化
していない”）〔但し、許容限度：１０〜２■段（方法
の誤差限度に相当する）、ブランク値：少なくとも２０
町妙〕活性化した因子肌（因子肌ａ）の存在についての
試験：試験の原理： 因子皿ａは、アンチトロンビン町（ＡＴｍ）およびへパ
リンと一緒に冷却状態で恒温貯蔵によって抑制すること
ができる。
天然の、即ち活性化してない因子Ｗはかかる条件のもと
では安定である。因子皿−欠乏皿磯（ＡＴｍ源）および
へパリンと一緒に陣温貯蔵した後の試料の因子Ｗ−活性
の、緩衝液と一緒に恒溢貯蔵（コントロール）した後の
同じ試料の因子Ｗ−活性に比較しての、減少量が、試料
中に存在する因子肌ａ量の目安である。試験用混合液（
プラスチック小管中）： １．０柵の試験用試料（１の‘当り因子肌１山単位に緩
衝液で希釈したもの）、０．１の上のへパリン（１の‘
当りへパリン１００国際単位に緩衝液で希釈したもの）
および０．９の‘の因子肌−欠乏血簿（ＡＴｍ源）コン
トロール混合液（プラスチック製小管中）：０．１私の
試験用試料（１泌当り因子ＷＩＯ単位）および１．０の
‘の緩衝液（０．７％の塩化ナトリウム：０．７％のク
エン酸ナトリウム）上記両混合液を夜通し冷蔵庫中に放
置する。
では安定である。因子皿−欠乏皿磯（ＡＴｍ源）および
へパリンと一緒に陣温貯蔵した後の試料の因子Ｗ−活性
の、緩衝液と一緒に恒溢貯蔵（コントロール）した後の
同じ試料の因子Ｗ−活性に比較しての、減少量が、試料
中に存在する因子肌ａ量の目安である。試験用混合液（
プラスチック小管中）： １．０柵の試験用試料（１の‘当り因子肌１山単位に緩
衝液で希釈したもの）、０．１の上のへパリン（１の‘
当りへパリン１００国際単位に緩衝液で希釈したもの）
および０．９の‘の因子肌−欠乏血簿（ＡＴｍ源）コン
トロール混合液（プラスチック製小管中）：０．１私の
試験用試料（１泌当り因子ＷＩＯ単位）および１．０の
‘の緩衝液（０．７％の塩化ナトリウム：０．７％のク
エン酸ナトリウム）上記両混合液を夜通し冷蔵庫中に放
置する。
次の日に両方の混合液について因子血−活性を、因子肌
欠乏皿酸の使用下での通例の凝固試験によって測定する
。試験結果の評価： 試験用混合液中の試料の因子肌−活性の、コントロール
混合液に比しての、減少量あるいは抑制率は、試料の因
子肌ａ−含有量に比例している。
欠乏皿酸の使用下での通例の凝固試験によって測定する
。試験結果の評価： 試験用混合液中の試料の因子肌−活性の、コントロール
混合液に比しての、減少量あるいは抑制率は、試料の因
子肌ａ−含有量に比例している。
その計算は下記式によって行なう：的主肌−旧姓（試験
混合物） 抑制率（％）＝（１一因子風一滴性（コントロール混合
物））×１００抑制率０％：試料が活性化していない因
子血しか含有していない。
混合物） 抑制率（％）＝（１一因子風一滴性（コントロール混合
物））×１００抑制率０％：試料が活性化していない因
子血しか含有していない。
抑制率１００％：試料が活性化した因子肌しか含有して
いない（因子肌ａ）。
いない（因子肌ａ）。
例１の最終生成物について行なった試験は活性化した凝
固因子が存在していないことを示した。
固因子が存在していないことを示した。
高ばつた物質を溶解し、クエン酸ナトリウムおよび塩化
ナトリウムと混合し、無菌櫨過し、無菌条件下に最終的
容器中に充填しそして最後に凍結乾燥する。例２（比較
実験） この実験では因子血濃縮物を実質的に例１に記載の方法
に従って製造する。
ナトリウムと混合し、無菌櫨過し、無菌条件下に最終的
容器中に充填しそして最後に凍結乾燥する。例２（比較
実験） この実験では因子血濃縮物を実質的に例１に記載の方法
に従って製造する。
但し寒冷上澄み液中での親和性アンチトロンビンの形成
並びにＤＥＡＥ−セフアデックス−上澄み液中での形成
は省略するが、僅かな量の親和性アンチトロンビン（０
．４ＡＬｖ−Ｅ／泌）が天然の含有物として存在してい
る。
並びにＤＥＡＥ−セフアデックス−上澄み液中での形成
は省略するが、僅かな量の親和性アンチトロンビン（０
．４ＡＬｖ−Ｅ／泌）が天然の含有物として存在してい
る。
予め形成した親和性アンチトロンビンを洗浄溶液および
溶磯溶液に添加しない。
溶磯溶液に添加しない。
ＮＡＰＴＴ試験および肌ａ一試験は正である。即ち、最
縮生成物は活性化した凝固因子を含有している。例１お
よび例２の生成物の性質の比較を下記第１表に数字によ
って示す。第 １ 表 例３： 皿環とへパリンとから予め形成された親和性アンチトロ
ンピンを含有する因子畑−濃縮物の製造人間の新鮮な凍
結クエン酸塩血鰍１０．８〆を０〜２℃のもとで融かす
。
縮生成物は活性化した凝固因子を含有している。例１お
よび例２の生成物の性質の比較を下記第１表に数字によ
って示す。第 １ 表 例３： 皿環とへパリンとから予め形成された親和性アンチトロ
ンピンを含有する因子畑−濃縮物の製造人間の新鮮な凍
結クエン酸塩血鰍１０．８〆を０〜２℃のもとで融かす
。
その際に生ずる寒冷沈降物１００夕の量を遠心分離しそ
して４００肌の０．２％クエン酸塩緩衝液中に７．５の
ｐＨ−値および３７℃の温度のもとで溶解する。但し該
クエン酸塩溶液中には、予め形成された親和性アンチト
ロンビンが添加されている。この親和性アンチトロンビ
ンの予めの形成は、７３．５の‘の人間の血鰍と１４７
ｍのへパリンとの溶液を混入することによって行ない、
その結果寒冷沈降溶液は６．０ＡＴａｖ−Ｅ／の‘を含
有する。寒冷沈降溶液に１９．６の‘の３％ＡＩ（ＯＨ
）３懸濁液を添加し、この混合物を室温のもとで３０分
間に亘つて櫨拝しそしてＡＩ（ＯＨ）３を遠心分離によ
って分離する。上澄み液に、予め形成した他の親和性ア
ンチトロンビン（このものは人間の３７の‘の血験と７
４ｍのへパリンとを混合することによって製造した）を
、ＡＩ（ＯＨ）３に吸着された親和性アンチトロンビン
の１部分を補充しそして溶液中に於けるその濃度を更に
６．ＭＴａｖ‐Ｅ／の‘に維持する為に、添加する。
して４００肌の０．２％クエン酸塩緩衝液中に７．５の
ｐＨ−値および３７℃の温度のもとで溶解する。但し該
クエン酸塩溶液中には、予め形成された親和性アンチト
ロンビンが添加されている。この親和性アンチトロンビ
ンの予めの形成は、７３．５の‘の人間の血鰍と１４７
ｍのへパリンとの溶液を混入することによって行ない、
その結果寒冷沈降溶液は６．０ＡＴａｖ−Ｅ／の‘を含
有する。寒冷沈降溶液に１９．６の‘の３％ＡＩ（ＯＨ
）３懸濁液を添加し、この混合物を室温のもとで３０分
間に亘つて櫨拝しそしてＡＩ（ＯＨ）３を遠心分離によ
って分離する。上澄み液に、予め形成した他の親和性ア
ンチトロンビン（このものは人間の３７の‘の血験と７
４ｍのへパリンとを混合することによって製造した）を
、ＡＩ（ＯＨ）３に吸着された親和性アンチトロンビン
の１部分を補充しそして溶液中に於けるその濃度を更に
６．ＭＴａｖ‐Ｅ／の‘に維持する為に、添加する。
最初の段階に、７％のエタノール濃度を達成しそしてそ
れによって不活性の（因子側活性でない）蛋白の一部分
を沈殿させる為に、７５の‘の５３％エタノール溶液を
添加する。この蛋白を分離しそして棄てる。上澄み液に
３９のＺのエタノールを添加し、それによって溶液中に
１０％のエタノール濃度を達成する。温度を−２℃に下
げ、それによって因子風合有分別物の主要量を沈殿させ
る。この分別物を分離しそして０．２％のクエン酸塩お
よび１．０％のグリシンとを含有する１５０の‘の０．
５％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この段階に於て
も該塩化ナトリウム溶液に、６．０ＡＴｗ−Ｅ／の‘の
濃度を不変的に維持する為に、予め形成した親和性アン
チトロンビン（２７の【の人間の血※と５４伍のへバリ
ンとから製造）を添加する。この溶液を０．２山肌まで
の徴孔径の膜フィルターに通して櫨適し、その因子肌濃
縮物を最終的容器中に充填しそして凍結乾燥する。この
因子側濃縮物を、実施例１〜２に記載されている様に、
活性化した凝固因子の存在について試験した。
れによって不活性の（因子側活性でない）蛋白の一部分
を沈殿させる為に、７５の‘の５３％エタノール溶液を
添加する。この蛋白を分離しそして棄てる。上澄み液に
３９のＺのエタノールを添加し、それによって溶液中に
１０％のエタノール濃度を達成する。温度を−２℃に下
げ、それによって因子風合有分別物の主要量を沈殿させ
る。この分別物を分離しそして０．２％のクエン酸塩お
よび１．０％のグリシンとを含有する１５０の‘の０．
５％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この段階に於て
も該塩化ナトリウム溶液に、６．０ＡＴｗ−Ｅ／の‘の
濃度を不変的に維持する為に、予め形成した親和性アン
チトロンビン（２７の【の人間の血※と５４伍のへバリ
ンとから製造）を添加する。この溶液を０．２山肌まで
の徴孔径の膜フィルターに通して櫨適し、その因子肌濃
縮物を最終的容器中に充填しそして凍結乾燥する。この
因子側濃縮物を、実施例１〜２に記載されている様に、
活性化した凝固因子の存在について試験した。
結果は負であった。即ち、活性化した凝固因子が存在し
ていなかった。例４： 精製したアンチト。
ていなかった。例４： 精製したアンチト。
ンビンｍとへパリンとから予め形成した親和性アンチト
ロンビンを有する因子皿濃縮物の製造人間の新鮮な凍結
クエン酸塩血凝１０．８夕を０〜２℃のもとで融かす。
ロンビンを有する因子皿濃縮物の製造人間の新鮮な凍結
クエン酸塩血凝１０．８夕を０〜２℃のもとで融かす。
その際に生ずる寒冷沈降物１００夕の量を遠心分離しそ
して０．２％のクエン酸塩緩衝液４００の【中に７．５
のｐＨ−値および３７０の温度のもとで溶解する。但し
、該クエン酸塩溶液中には、予め形成された親和性アン
チトロンビンが添加されている。親和性アンチトロンビ
ンの予めの形成は、７３．９単位の精製したアンチトロ
ンビンｍと１４７１Ｅのへパリンとの溶液を浸入するこ
とによって行ない、その結果寒冷沈降溶液は６．０ＡＴ
柵一Ｅ／の‘を含有する。この寒冷沈降溶液に１９．６
の‘の３％ＡＩ（ＯＨ）３懸濁物を添加し、この混合物
を室温のもとで３０分間に亘つて燭拝しそしてＡＩ（Ｏ
Ｈ）３を遠心分離によって分離する。上澄み液に、３７
ｍ‘の人間の血数と７４１Ｅのへパリンとを混合するこ
とによって予め製造した他の親和性アンチト。ンビンを
、ＡＩ（ＯＨ）３に吸着された親和性アンチトロンビン
の１部分を補充しそして溶液中に於けるその濃度を更に
６．０ＡＴａｖ−Ｅ／叫に維持する為に、添加する。最
初の段階に、７％のエタノール濃度を達成しそしてそれ
によって不活性の（因子肌活性でない）蛋白の一部分を
沈殿させる為に、７５の‘の５３％エタノール溶液を添
加する。この蛋白を分離しそして棄てる。上澄み液に３
９の‘のエタノールを添加し、それによって溶液中に１
０％のエタノール濃度を達成する。温度を−２℃に下げ
、それによって因子側含有分別物の主要量を沈殿させる
。この分別物を分離しそして０．２％のクエン酸塩およ
び１．０％のグリシンとを含有する１５０の‘の０．５
％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この段階に於ても
該塩化ナトリウム溶液に、６．０ＡＴｗ−Ｅ／叫の濃度
を不変的に維持する為に、予め形成した親和性アンチト
ロンビン（２７単位の精製アンチトロンビン皿と５４ｍ
のへパリンとから製造）を添加する。この溶液を０．２
ム肌までの徴孔径の膿フィルターに通して猿遇し、その
因子肌濃縮物を最終的容器中に充填しそして凍結乾燥す
る。この因子肌濃縮物を、例１および２に記載した様に
、活性化した凝固因子の存在について調べる。
して０．２％のクエン酸塩緩衝液４００の【中に７．５
のｐＨ−値および３７０の温度のもとで溶解する。但し
、該クエン酸塩溶液中には、予め形成された親和性アン
チトロンビンが添加されている。親和性アンチトロンビ
ンの予めの形成は、７３．９単位の精製したアンチトロ
ンビンｍと１４７１Ｅのへパリンとの溶液を浸入するこ
とによって行ない、その結果寒冷沈降溶液は６．０ＡＴ
柵一Ｅ／の‘を含有する。この寒冷沈降溶液に１９．６
の‘の３％ＡＩ（ＯＨ）３懸濁物を添加し、この混合物
を室温のもとで３０分間に亘つて燭拝しそしてＡＩ（Ｏ
Ｈ）３を遠心分離によって分離する。上澄み液に、３７
ｍ‘の人間の血数と７４１Ｅのへパリンとを混合するこ
とによって予め製造した他の親和性アンチト。ンビンを
、ＡＩ（ＯＨ）３に吸着された親和性アンチトロンビン
の１部分を補充しそして溶液中に於けるその濃度を更に
６．０ＡＴａｖ−Ｅ／叫に維持する為に、添加する。最
初の段階に、７％のエタノール濃度を達成しそしてそれ
によって不活性の（因子肌活性でない）蛋白の一部分を
沈殿させる為に、７５の‘の５３％エタノール溶液を添
加する。この蛋白を分離しそして棄てる。上澄み液に３
９の‘のエタノールを添加し、それによって溶液中に１
０％のエタノール濃度を達成する。温度を−２℃に下げ
、それによって因子側含有分別物の主要量を沈殿させる
。この分別物を分離しそして０．２％のクエン酸塩およ
び１．０％のグリシンとを含有する１５０の‘の０．５
％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この段階に於ても
該塩化ナトリウム溶液に、６．０ＡＴｗ−Ｅ／叫の濃度
を不変的に維持する為に、予め形成した親和性アンチト
ロンビン（２７単位の精製アンチトロンビン皿と５４ｍ
のへパリンとから製造）を添加する。この溶液を０．２
ム肌までの徴孔径の膿フィルターに通して猿遇し、その
因子肌濃縮物を最終的容器中に充填しそして凍結乾燥す
る。この因子肌濃縮物を、例１および２に記載した様に
、活性化した凝固因子の存在について調べる。
結果は負であった。即ち、活性化した凝固因子は存在し
ていなかった。例５： 血数とへバリノイドとから予め形成された親和性アンチ
トロンビンと含有する因子肌濃縮物の製造人間の新鮮な
凍結クエン酸塩皿嫌１０．８〆を０〜２００のもとで融
かす。
ていなかった。例５： 血数とへバリノイドとから予め形成された親和性アンチ
トロンビンと含有する因子肌濃縮物の製造人間の新鮮な
凍結クエン酸塩皿嫌１０．８〆を０〜２００のもとで融
かす。
その際に生ずる寒冷沈降物１００夕の量を遠心分離しそ
して０．２％のクエン酸塩緩衝液４００地中に７．５の
ｐＨ−値および３７℃の温度のもとで溶解する。但し、
該クエン酸塩溶液中には、予め形成された親和性アンチ
トロンビンが添加されている。親和性アンチトロンビン
の予めの形成は、７３．５の‘の人間の血糠と１４７■
単位のェレパロン（商標、Ｅ１ｅｐａｒｏｎ）（ヘパリ
ノィド：ムコポリサツカリドーポリ硫酸ェステル）との
溶液を混入することによって行ない、その結果寒冷沈降
溶液は１．弘Ｔ肌‐Ｅ／の‘を含有する。この寒冷沈降
溶液に１９．６の‘の３％ＡＩ（ＯＨ）３懸濁液を添加
し、この混合物を室温のもとで３０分間に亘つて櫨拝し
そして山（ＯＨ）３を遠心分離によって分離する。上澄
み液に、３７の‘の人間の血嬢と７４０単位のェレパロ
ンとを混合することによって予め形成された別の親和性
アンチトロンビンを、Ｎ（ＯＨ３）に吸着される親和性
アンチトロンビンの１部分を補充しそして溶液中に於け
るその濃度を更に１．私ＬＶ−Ｅ／の‘に維持する為に
、添加する。
して０．２％のクエン酸塩緩衝液４００地中に７．５の
ｐＨ−値および３７℃の温度のもとで溶解する。但し、
該クエン酸塩溶液中には、予め形成された親和性アンチ
トロンビンが添加されている。親和性アンチトロンビン
の予めの形成は、７３．５の‘の人間の血糠と１４７■
単位のェレパロン（商標、Ｅ１ｅｐａｒｏｎ）（ヘパリ
ノィド：ムコポリサツカリドーポリ硫酸ェステル）との
溶液を混入することによって行ない、その結果寒冷沈降
溶液は１．弘Ｔ肌‐Ｅ／の‘を含有する。この寒冷沈降
溶液に１９．６の‘の３％ＡＩ（ＯＨ）３懸濁液を添加
し、この混合物を室温のもとで３０分間に亘つて櫨拝し
そして山（ＯＨ）３を遠心分離によって分離する。上澄
み液に、３７の‘の人間の血嬢と７４０単位のェレパロ
ンとを混合することによって予め形成された別の親和性
アンチトロンビンを、Ｎ（ＯＨ３）に吸着される親和性
アンチトロンビンの１部分を補充しそして溶液中に於け
るその濃度を更に１．私ＬＶ−Ｅ／の‘に維持する為に
、添加する。
最初の段階に、７％のエタノール濃度を達成しそしてそ
れによって不活性の（因子肌活性のない）蛋白の一部分
を沈殿させる為に、７５叫の５３％エタノール溶液を添
加する。この蛋白を分離しそして棄てる。上澄み液に３
９の‘のエタノールを添加し、それによって溶液中に１
０％のエタノール濃度を達成する。温度を−２％に下げ
、それによって因子地含有分別物の主要量を沈殿させる
。この分別物を分離しそして０．２％のクエン酸塩およ
び１．０％のグリシンとを含有する１５０のＺの０．５
％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この段階に於ても
該塩化ナトリウム溶液に、１．私Ｔｗ−Ｅ／の上の濃度
を不変的に維持する為に、予め形成した親和性アンチト
ロンビン（２７舷の人間の皿糠と５４０単位のェレパロ
ンとより製造）を添加する。この溶液を０．２仏凧まで
の微細孔雀の膜フィルターに通して櫨遇し、その因子風
濃縮物を最終的容器に充填しそして凍結乾燥する。この
因子脚濃縦物を、例１および例２に記載した様に、活性
化した凝固因子の存在について調べる。
れによって不活性の（因子肌活性のない）蛋白の一部分
を沈殿させる為に、７５叫の５３％エタノール溶液を添
加する。この蛋白を分離しそして棄てる。上澄み液に３
９の‘のエタノールを添加し、それによって溶液中に１
０％のエタノール濃度を達成する。温度を−２％に下げ
、それによって因子地含有分別物の主要量を沈殿させる
。この分別物を分離しそして０．２％のクエン酸塩およ
び１．０％のグリシンとを含有する１５０のＺの０．５
％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この段階に於ても
該塩化ナトリウム溶液に、１．私Ｔｗ−Ｅ／の上の濃度
を不変的に維持する為に、予め形成した親和性アンチト
ロンビン（２７舷の人間の皿糠と５４０単位のェレパロ
ンとより製造）を添加する。この溶液を０．２仏凧まで
の微細孔雀の膜フィルターに通して櫨遇し、その因子風
濃縮物を最終的容器に充填しそして凍結乾燥する。この
因子脚濃縦物を、例１および例２に記載した様に、活性
化した凝固因子の存在について調べる。
結果は負であった。即ち、活性化した凝固因子が存在し
ていなかった。例６： 精製したアンチトロンビンｍとへパリ／イドとから予め
形成された親和性アンチトロンビンを含有する因子風濃
縮物の製造人間の新鮮な凍結クエン酸塩血鍬１０．８夕
を０〜２００のもとで融かす。
ていなかった。例６： 精製したアンチトロンビンｍとへパリ／イドとから予め
形成された親和性アンチトロンビンを含有する因子風濃
縮物の製造人間の新鮮な凍結クエン酸塩血鍬１０．８夕
を０〜２００のもとで融かす。
その際に生ずる寒冷三沈降物１００夕の量を遠心分離し
そして０．２％のクエン酸塩緩衝液４００地中に、７．
５のｐＨ−値および３７０の温度のもとで溶解する。但
し、該クエン酸塩溶液中には、予め形成された親和性ア
ンチトロンビンが添加されている。親和性アンチトロン
ピンの予めの形成は、７３．５の‘の精製したアンチト
ロンビンｍと１４７山単位のェレパロンとの溶液を混入
することによって行ない、その結果氷点沈降溶液は１．
班ＴａＶ−Ｅ／の上を含有する。この寒冷沈降溶液に１
９．６泌の３％ＡＩ（ＯＨ）３懸濁液を添加し、この混
合物を室温のもとで３０分間に亘つて燭拝しそしてＡＩ
（ＯＨ）３を遠心分離によって分離する。上澄み液に、
３７単位の精製アンチトロンビンｍと７４山単位のェレ
パロンとを混合することによって予め製造した他の親天
び性アンチトロンピンを、Ｎ（ＯＨ）３に吸着される親
和性アンチトロンビンの１部分を補充しそして溶液中に
於けるその濃度を更に１．＊Ｔｗ−Ｅ／泌に維持する為
に、添加する。
そして０．２％のクエン酸塩緩衝液４００地中に、７．
５のｐＨ−値および３７０の温度のもとで溶解する。但
し、該クエン酸塩溶液中には、予め形成された親和性ア
ンチトロンビンが添加されている。親和性アンチトロン
ピンの予めの形成は、７３．５の‘の精製したアンチト
ロンビンｍと１４７山単位のェレパロンとの溶液を混入
することによって行ない、その結果氷点沈降溶液は１．
班ＴａＶ−Ｅ／の上を含有する。この寒冷沈降溶液に１
９．６泌の３％ＡＩ（ＯＨ）３懸濁液を添加し、この混
合物を室温のもとで３０分間に亘つて燭拝しそしてＡＩ
（ＯＨ）３を遠心分離によって分離する。上澄み液に、
３７単位の精製アンチトロンビンｍと７４山単位のェレ
パロンとを混合することによって予め製造した他の親天
び性アンチトロンピンを、Ｎ（ＯＨ）３に吸着される親
和性アンチトロンビンの１部分を補充しそして溶液中に
於けるその濃度を更に１．＊Ｔｗ−Ｅ／泌に維持する為
に、添加する。
最初の段階に、７％のエタノール濃度を達成しそしてそ
れによって不活性の（因子風活性でない）蛋白の一部分
を沈殿させる為に、７５の‘の５３％エタノール溶液を
添加する。この蛋白を分離しそして棄てる。上澄み液に
３９泌のエタノールを添加し、それによって溶液中に１
０％のエタノール濃度を達成する。温度を−２℃に下げ
、それによって因子肌含有分別物の主要量を沈殿させる
。この分別物を分離しそして０．２％のクエン酸塩およ
び１．０％のグリシンとを含有する１５０机‘の０．５
％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この段階に於ても
該塩化ナトリウム溶液に、１．虫Ｔｗ−Ｂ／叫の濃度を
不変的に維持する為に、予め形成した親和性アンチトロ
ンビン（２７単位の精製アンチトロンビンｍと５４０単
位のェレパロンとより製造）を添加する。この溶液を０
．２山仇までの微細孔径の膿フィルターに通して櫨遇し
、その因子価濃縮物を最終的容器に充填しそして凍結乾
燥する。この因子側濃縮物を、例１および２に記載した
様に、活性化した凝固因子の存在について調べる。
れによって不活性の（因子風活性でない）蛋白の一部分
を沈殿させる為に、７５の‘の５３％エタノール溶液を
添加する。この蛋白を分離しそして棄てる。上澄み液に
３９泌のエタノールを添加し、それによって溶液中に１
０％のエタノール濃度を達成する。温度を−２℃に下げ
、それによって因子肌含有分別物の主要量を沈殿させる
。この分別物を分離しそして０．２％のクエン酸塩およ
び１．０％のグリシンとを含有する１５０机‘の０．５
％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この段階に於ても
該塩化ナトリウム溶液に、１．虫Ｔｗ−Ｂ／叫の濃度を
不変的に維持する為に、予め形成した親和性アンチトロ
ンビン（２７単位の精製アンチトロンビンｍと５４０単
位のェレパロンとより製造）を添加する。この溶液を０
．２山仇までの微細孔径の膿フィルターに通して櫨遇し
、その因子価濃縮物を最終的容器に充填しそして凍結乾
燥する。この因子側濃縮物を、例１および２に記載した
様に、活性化した凝固因子の存在について調べる。
結果は負であった。即ち、活性化した凝固因子が存在し
ていない。例７： 親和性アンチトロンビンないこ因子肌濃縮物を製造し、
但し血糠留分にへパリンを添加（比較例）人間の新鮮な
凍結クエン酸塩血嬢１０．８そを０〜２００のもとで融
かす。
ていない。例７： 親和性アンチトロンビンないこ因子肌濃縮物を製造し、
但し血糠留分にへパリンを添加（比較例）人間の新鮮な
凍結クエン酸塩血嬢１０．８そを０〜２００のもとで融
かす。
その際に生ずる寒冷沈降物１００夕の量を遠心分離しそ
して０．２％のクエン酸塩緩衝液４００必中に７．５の
ｐＨ−値および３７０の温度のもとで溶解する。この寒
冷沈降溶液に１９．６の‘の３％Ｎ（ＯＨ）３懸濁物を
添加し、この混合物を室温のもとで３０分間に亘つて櫨
拝しそしてＮ（ＯＨ）３を遠心分離によって分離する。
上澄み液に７５の‘の５３％エタノール溶液を、７％の
エタノール濃度を達成しそしてそれによって不活性の（
因子風活性のない）蛋白を沈殿させる為に、添加する。
して０．２％のクエン酸塩緩衝液４００必中に７．５の
ｐＨ−値および３７０の温度のもとで溶解する。この寒
冷沈降溶液に１９．６の‘の３％Ｎ（ＯＨ）３懸濁物を
添加し、この混合物を室温のもとで３０分間に亘つて櫨
拝しそしてＮ（ＯＨ）３を遠心分離によって分離する。
上澄み液に７５の‘の５３％エタノール溶液を、７％の
エタノール濃度を達成しそしてそれによって不活性の（
因子風活性のない）蛋白を沈殿させる為に、添加する。
この上澄み液に３９の‘のエタノールを添加し、それに
よって溶液中に１０％のェタノ−ル濃度を達成する。温
度を−２℃に下げ、それによって因子側含有分別物の主
要量を沈殿させる。この分別物を分離しそして０．２％
のクエン酸塩と１．０％のグリシンとを含有する１５０
の‘の０．５％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この
塩化ナトリウム溶液に５４１Ｅのへパリンを添加する。
この溶液を、０．２仏肌までの微細孔径の膜フィルター
を通して猿適し、その因子肌−濃縮物を最終的容器中に
充填しそして凍結乾燥する。この製剤を、前述の様に、
活性化した血液凝固因子の存在について試験した。
よって溶液中に１０％のェタノ−ル濃度を達成する。温
度を−２℃に下げ、それによって因子側含有分別物の主
要量を沈殿させる。この分別物を分離しそして０．２％
のクエン酸塩と１．０％のグリシンとを含有する１５０
の‘の０．５％塩化ナトリウム溶液中に溶解する。この
塩化ナトリウム溶液に５４１Ｅのへパリンを添加する。
この溶液を、０．２仏肌までの微細孔径の膜フィルター
を通して猿適し、その因子肌−濃縮物を最終的容器中に
充填しそして凍結乾燥する。この製剤を、前述の様に、
活性化した血液凝固因子の存在について試験した。
その際、分別工程の最後の分別物にへパリンを添加した
のでは活性化を阻止するには充分でないことが判った。
活性化試験は正であった。即ち、活性化凝固因子が存在
しており、この製剤は棄てなければならない。例８：親
和性アンチトロンビンもへパリンも添加せずに因子肌濃
縮物も製造（比較例）人間の新鮮な凍結クエン酸塩血鰍
１０．８そを０〜２℃のもとで融かす。
のでは活性化を阻止するには充分でないことが判った。
活性化試験は正であった。即ち、活性化凝固因子が存在
しており、この製剤は棄てなければならない。例８：親
和性アンチトロンビンもへパリンも添加せずに因子肌濃
縮物も製造（比較例）人間の新鮮な凍結クエン酸塩血鰍
１０．８そを０〜２℃のもとで融かす。
その際に生ずる寒冷沈降物１００夕の量を遠心分離しそ
して４００Ｍの０．２％のクエン酸塩緩衝液中に７．５
のｐＨ−値および３７００の温度のもとで溶解する。こ
の寒冷沈降溶液に１９．６の‘の３％ＡＩ（ＯＨ）３懸
濁液を添加し、この混合物を室温のもとで３０分間に亘
つて燈拝しそしてＡＩ（ＯＨ）３を遠心分離によって分
離する。上澄み液に、７％のエタノール濃度を達成しそ
してそれによって不活性の（因子血清性でない）蛋白の
１部分を沈殿させる為に、７５のとの５３％のエタノー
ル溶液を添加する。
して４００Ｍの０．２％のクエン酸塩緩衝液中に７．５
のｐＨ−値および３７００の温度のもとで溶解する。こ
の寒冷沈降溶液に１９．６の‘の３％ＡＩ（ＯＨ）３懸
濁液を添加し、この混合物を室温のもとで３０分間に亘
つて燈拝しそしてＡＩ（ＯＨ）３を遠心分離によって分
離する。上澄み液に、７％のエタノール濃度を達成しそ
してそれによって不活性の（因子血清性でない）蛋白の
１部分を沈殿させる為に、７５のとの５３％のエタノー
ル溶液を添加する。
この蛋白を分離しそして棄てる。この上澄み液に３９の
‘のエタノールを添加し、それによって因子皿含有分別
物の主要量を沈殿させる。この分別物を分離しそして０
．２％のクエン酸および１．０％のグリシンとを含有す
る１５０の‘の０．５％塩化ナトリウム溶液中に溶解す
る。この溶液を０．２仏のまでの微細孔径の膜フィルタ
ーに通して櫨過し、因子肌濃縮物を最終的容器中に充填
しそして凍結乾燥する。この製剤を、前述の様に、活性
化した血液凝固因子の存在について試験した。
‘のエタノールを添加し、それによって因子皿含有分別
物の主要量を沈殿させる。この分別物を分離しそして０
．２％のクエン酸および１．０％のグリシンとを含有す
る１５０の‘の０．５％塩化ナトリウム溶液中に溶解す
る。この溶液を０．２仏のまでの微細孔径の膜フィルタ
ーに通して櫨過し、因子肌濃縮物を最終的容器中に充填
しそして凍結乾燥する。この製剤を、前述の様に、活性
化した血液凝固因子の存在について試験した。
この活性化試験は正であった。即ち、活性化したかかる
因子が存在しており、この製剤は棄てなければならなか
った。因子肌一および因子風−濃縮物を製造する為の本
発明に従う方法を以上に於て詳細に説したが、本発明の
方法は因子Ｋ濃縮物あるいはプロトロンビンーコンブレ
ックス濃縮物を製造するのにも同様に適しており且つ有
利である。
因子が存在しており、この製剤は棄てなければならなか
った。因子肌一および因子風−濃縮物を製造する為の本
発明に従う方法を以上に於て詳細に説したが、本発明の
方法は因子Ｋ濃縮物あるいはプロトロンビンーコンブレ
ックス濃縮物を製造するのにも同様に適しており且つ有
利である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 血漿または血漿粗分別物から副作用のない血漿分別
物を、カルシウム結合性抗凝固剤の存在下での血漿蛋白
の精製および段階的濃厚化によつて製造するに当つて、
血漿蛋白の精製および濃厚化を迅速な反応性の（親和性
の）アンチトロンビンの存在下に実施し、その際分別工
程の全段階の間該迅速な反応性の（親和性の）アンチト
ロンビンの濃度を各段階の溶液１ｍｌ当り０．０５〜５
０単位（アンチトロンビン）に維持することを特徴とす
る、上記副作用のない血漿分別物の製造方法。 ２ 迅速な反応性（親和性の）アンチトロンビンを抑制
因子−コフアクターの添加によつてその場で形成する特
許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 抑制因子−コフアクターとしてヘパリンを添加する
特許請求の範囲第１項または第２項記載の方法。 ４ 抑制因子−コフアクターとしてヘパリノイドを添加
する特許請求の範囲第１項または第２項記載の方法。 ５ 迅速な反応性の（親和性の）アンチトロンビンを、
殊にアンチトロンビンIII−共因子−コンプレツクスの
形で、予め形成しそしてその予め形成されたアンチトロ
ンビン−共因子−コンプレツクスとして、分別処理の個
々の段階の間に回分的に添加する特許請求の範囲第１項
記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT294079A AT359646B (de) | 1979-04-19 | 1979-04-19 | Verfahren zur herstellung von nebenwirkungs- freien plasmafraktionen |
| AT2940/79 | 1979-04-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55141414A JPS55141414A (en) | 1980-11-05 |
| JPS6028812B2 true JPS6028812B2 (ja) | 1985-07-06 |
Family
ID=3542732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55049124A Expired JPS6028812B2 (ja) | 1979-04-19 | 1980-04-14 | 副作用のない血漿分別物の製造方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4388232A (ja) |
| EP (1) | EP0018353B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6028812B2 (ja) |
| AT (1) | AT359646B (ja) |
| DE (1) | DE3066240D1 (ja) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2472390A1 (fr) * | 1979-05-04 | 1981-07-03 | Merieux Inst | Procede de preparation de concentres de complexe prothrombinique hautement purifies, et concentres obtenus |
| US4412985A (en) * | 1980-10-06 | 1983-11-01 | Edward Shanbrom | Depyrogenation process |
| DE3473407D1 (en) * | 1983-05-02 | 1988-09-22 | Immuno Ag | Method of inactivating pathogens |
| AT379510B (de) * | 1983-05-20 | 1986-01-27 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf) -haeltigen praeparation |
| AT379310B (de) * | 1983-05-20 | 1985-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines antithrombin iii-heparin- bzw. antithrombin iii-heparinoidkonzentrates |
| AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| GB8505882D0 (en) * | 1985-03-07 | 1985-04-11 | Central Blood Lab Authority | Purification of blood coagulation factor viii |
| AT391808B (de) * | 1986-11-03 | 1990-12-10 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf)-haeltigen fraktion |
| DE3640513A1 (de) * | 1986-11-27 | 1988-06-09 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur herstellung eines virussicheren, lagerstabilen und intravenoes vertraeglichen immunglobulin-g-praeparates |
| DK18288D0 (da) * | 1988-01-15 | 1988-01-15 | Nordisk Gentofte | Fremgangsmaade til pasteurisering af vandige oploesninger af faktor viii |
| US5110907A (en) * | 1989-08-01 | 1992-05-05 | Alpha Therapeutic Corporation | Factor viii complex purification using heparin affinity chromatography |
| US5264549A (en) * | 1989-09-12 | 1993-11-23 | The Beth Israel Hospital Association | Characterization and method of isolation of factor J, an inhibitor of complement C1 |
| US5268363A (en) * | 1989-09-12 | 1993-12-07 | The Beth Israel Hospital Association | Method of treatment to inhibit the undesirable activation of the complement cascade with factor J, an inhibitor of complement C1 |
| US5109114A (en) * | 1989-09-12 | 1992-04-28 | Beth Israel Hospital | Characterization and method of isolation for an inhibitor of complement C1 |
| JPH0429769U (ja) * | 1990-07-02 | 1992-03-10 | ||
| US5278289A (en) * | 1991-11-12 | 1994-01-11 | Johnson Alan J | Antihemophilic factor stabilization |
| CA2137258A1 (en) * | 1993-04-05 | 1994-10-13 | Yoshitomi Pharmaceutical Industries Ltd. | Liquid preparation of antithrombin-iii and stabilizing method therefor |
| AT501088A2 (de) * | 2002-12-18 | 2006-06-15 | Bio Prod & Bio Eng Ag | Stabile therapeutische proteine |
| US7498130B2 (en) * | 2003-05-13 | 2009-03-03 | Massachusetts General Hospital | Method of reducing viral load |
| US20040229778A1 (en) * | 2003-05-13 | 2004-11-18 | Elmaleh David R. | Pharmaceutical compositions of antithrombin III for the treatment of retroviral diseases |
| JP4613133B2 (ja) * | 2003-10-09 | 2011-01-12 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | アンチトロンビンｉｉｉ含有止血用組成物 |
| EP2522354B1 (en) * | 2011-05-12 | 2017-08-23 | CSL Behring GmbH | Methods to reduce adverse events caused by pharmaceutical preparations comprising plasma derived proteins |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3803115A (en) | 1972-05-17 | 1974-04-09 | Baxter Laboratories Inc | Stabilization of ahf using heparin |
| US4137223A (en) * | 1977-05-16 | 1979-01-30 | Edward Shanbrom, Inc. | Method of preserving blood plasma II |
| JPS6040859B2 (ja) * | 1977-07-27 | 1985-09-12 | 喜温 三浦 | 抗血栓性人工医療材料 |
| CA1074698A (en) * | 1977-12-19 | 1980-04-01 | Gail A. Rock | Method of collecting anti-hemophilic factor viii from blood and blood plasma |
-
1979
- 1979-04-19 AT AT294079A patent/AT359646B/de not_active IP Right Cessation
-
1980
- 1980-04-14 JP JP55049124A patent/JPS6028812B2/ja not_active Expired
- 1980-04-15 DE DE8080890044T patent/DE3066240D1/de not_active Expired
- 1980-04-15 EP EP80890044A patent/EP0018353B1/de not_active Expired
-
1982
- 1982-05-05 US US06/375,044 patent/US4388232A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4388232A (en) | 1983-06-14 |
| EP0018353B1 (de) | 1984-01-25 |
| ATA294079A (de) | 1980-04-15 |
| AT359646B (de) | 1980-11-25 |
| EP0018353A1 (de) | 1980-10-29 |
| DE3066240D1 (en) | 1984-03-01 |
| JPS55141414A (en) | 1980-11-05 |
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