CN101930009B - 一种血清钙标准物质 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种候选血清钙标准物质。该候选血清钙标准物质,是按照包括如下步骤的方法制备的:对离体血清进行稀释或钙添加,得到5种不同钙浓度的血清溶液,再分别对所述5种不同钙浓度的血清溶液中的每种血清溶液进行定值,得到如下5种钙浓度的血清钙标准物质。本发明的候选血清钙标准物质中不添加其它物质,只以血清作为基体,其互通性好,均匀性好,-80℃储存条件下稳定性也良好,定值的量值溯源可靠,相对合成不确定度为0.83%~1.55%,合成不确定度较小。另外,其与现有的其它血清钙标准物质相比,成本低廉、制备方法简单。
Description
技术领域
本发明涉及一种血清钙标准物质。
背景技术
人体内的钙主要包括细胞内钙和细胞外钙,细胞内钙主要存在于线粒体、肌浆和内质网内,负责触发肌肉兴奋-收缩耦联,作为第二信使参与胞内多种信号转导,参与自身及磷代谢的调节及作为酶的辅助因子。细胞外钙主要存在于血浆中,具有影响神经细胞膜应激性、参与凝血过程等作用。血钙约为2.5mmol/L,以扩散钙和非扩散钙两种形式存在于血清中,非扩散钙约占血清总钙的45%,是指与血清蛋白结合的钙,不能透过毛细血管壁,且结合受pH的影响。扩散钙可透过毛细血管壁,分为离子钙和络合钙两种。离子钙是血清中直接发挥生理作用的部分,约占血清总钙的50%,络合钙主要与柠檬酸、枸橼酸等小分子化合物结合,约占血清总钙的5%。鉴于血钙的多种存在形式,钙的测定包括游离钙和总钙的测定,在反映受激素严格调节的生物活性上,游离钙测定比总钙更有用,但在反映体内钙总体代谢状况上,还是不能完全替代总钙的检测。
标准物质是一种材料或物质,是参考测量系统的重要组成部分。正如ISO指南32、33、35指出的,标准物质用于校准测量系统、评价测量程序或为材料赋值。随着临床实验室常规化学标本检测量的增加,标准物质的需要量也相应大量增加。标准物质的制备途径主要有:人工合成、自然界物质提纯、人或动物组织来源提纯品或者基因工程重组标准物质。作为质控物质,最好选用天然的物质,与待测标本具有尽可能的相似性,否则将不具有充分的代表性。作为质控品的离子参考物质在不同的常规方法与参考方法之间应具有充分的互通性(commutability)。
目前以人血清为基质的无机成分分析标准物质(包括钙)国内主要有GBW09135国家一级标准物质;国外主要有NIST SRM909冻干人血清无机离子标准物质,SRM956b冰冻人血清电解质标准物质,BCR-304冻干人血清无机离子标准物质,CITI(日本)人血清中元素,DGKC人血清中元素,NIES NO.4人血清中元素等。这些血清标准物质来源有限,国内GBW09135国家一级标准物质已经少有商品供应。国外的标准物质价格昂贵,而且加之托运等因素购买周期较长。因此尽快研制人血清质冰冻混合血清无机离子标准物质势在必行。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种血清钙标准物质。
本发明所提供的血清钙标准物质,是按照包括如下步骤的方法制备的:对离体血清进行稀释或钙添加,得到5种不同钙浓度的血清溶液,再分别对所述5种不同钙浓度的血清溶液中的每种血清溶液进行定值,得到如下5种钙浓度的血清钙标准物质:
1)钙浓度的标准值为2.050mmol/L-2.250mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%;2)钙浓度的标准值为2.250mmol/L-2.450mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%;3)钙浓度的标准值为2.450mmol/L-2.650mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%;4)钙浓度的标准值为2.650mmol/L-2.850mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%;5)钙浓度的标准值为2.850mmol/L-3.050mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%。
上述各血清钙标准物质中,取置信区间为95%,扩展因子为2,得到各血清钙标准物质的绝对扩展合成标准不确定度,均为0.030mmol/L-0.080mmol/L。
上述血清钙标准物质中每种的相对合成标准不确定度具体可如下:
1)钙浓度的标准值为2.050mmol/L-2.250mmol/L,相对合成标准不确定度为0.94%-1.55%;2)钙浓度的标准值为2.250mmol/L-2.450mmol/L,相对合成标准不确定度为0.96%-0.98%;3)钙浓度的标准值为2.450mmol/L-2.650mmol/L,相对合成标准不确定度为0.90%-1.43%;4)钙浓度的标准值为2.650mmol/L-2.850mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.10%;5)钙浓度的标准值为2.850mmol/L-3.050mmol/L,相对合成标准不确定度为0.87%-1.02%;
上述血清钙标准物质中,在所述定值前,5种不同钙浓度的血清溶液中钙浓度具体如下:
第1种血清溶液:钙浓度为80ug/g-88ug/g。第2种血清溶液:钙浓度为88ug/g-96ug/g。第3种血清溶液:钙浓度为96ug/g-104ug/g。第4种血清溶液:钙浓度为104ug/g-112ug/g。第5种血清溶液:钙浓度为112ug/g-120ug/g。
上述血清钙标准物质中,所述离体血清为无肝肾功能疾病、无溶血、无黄疸且非乳糜的血清。
上述血清钙标准物质中,所述稀释是用如下稀释剂进行的,所述钙添加是用如下钙添加剂进行的:
1)稀释剂为氯化钠和氯化钾的混合水溶液,所述氯化钠在所述稀释剂中的浓度为135.0mmol/L-145.0mmol/L,所述氯化钾在所述稀释剂中的浓度为4.5mmol/L -5.5mmol/L;
2)钙添加剂为在国家标准物质研究中心的编号为GBW(E)080118的物质。
上述血清钙标准物质中,所述对离体血清进行稀释的方法包括如下步骤:通过称量质量的方法得到所需质量的所述离体血清和所需质量的所述稀释剂,将所需质量的所述离体血清和所需质量的所述稀释剂混匀;
上述血清钙标准物质中,所述对离体血清进行钙添加的方法包括如下步骤:通过称量质量的方法得到所需质量的所述离体血清和所需质量的所述钙添加剂,将所需质量的所述离体血清和所需质量的所述钙添加剂混匀。
上述血清钙标准物质中,在所述对离体血清进行稀释或钙添加前,包括对所述离体血清过滤的步骤。上述血清钙标准物质中,在得到5种不同钙浓度的血清溶液后,在分别对所述5种不同钙浓度的血清溶液中的每种血清溶液进行定值前,还可包括对每种血清溶液过滤的步骤。所述过滤的方法为依次进行0.8um孔径、0.45um孔径和0.2um孔径的过滤。
上述血清钙标准物质中,所述离体血清是由来自于不同个体的离体血清混合而成的。
上述血清钙标准物质中,在其制备方法中,所述对所述5种不同钙浓度的血清溶液中的每种血清溶液进行定值的方法包括如下步骤:
(一)用火焰原子吸收光谱法测量所述血清溶液中钙浓度值,包括如下步骤:
(1)检测空白工作液和钙浓度不同的钙标准工作液中钙的吸光度值,得到工作曲线;所述工作曲线为一元线性回归曲线,其自变量为所述钙标准工作液中钙的浓度值,因变量为所述钙标准工作液中钙的吸光度值;
所述空白工作液中不含有钙,其余组成及浓度与所述钙标准工作液相同;
所述钙标准工作液和所述空白工作液是按照包括如下步骤的方法配制的:通过称量质量的方法得到所需质量的溶质和所需质量的溶剂,将所需质量的溶质和所需质量的溶剂混合;
所述钙标准工作液中钙的浓度为钙的质量与钙标准工作液质量的比;
(2)检测所述血清溶液中钙的吸光度和2种钙标准工作液中钙的吸光度,分别得到所述血清溶液中钙的吸光度读数值和所述2种钙标准工作液中钙的吸光度读数值;所述2种钙标准工作液选自步骤(1)中所述钙浓度不同的钙标准工作液,其钙吸光度值与所述血清溶液的钙吸光度值最接近;所述2种钙标准工作液中钙浓度不同,分别为钙浓度低的钙标准工作液和钙浓度高的钙标准工作液;钙浓度低的钙标准工作液中钙浓度值记作S1,钙浓度高的钙标准工作液中钙浓度值记作S2;
(3)重复步骤(1)和(2);
(4)取所述血清溶液中钙的吸光度读数值的平均值,记作AX;取所述钙浓度低的钙标准工作液中钙的吸光度读数值的平均值,记作AS1;取所述钙浓度高的钙标准工作液中钙的吸光度读数值的平均值,记作AS2;
(5)根据公式I得到所述血清溶液中钙浓度值,记作C;所述血清溶液中钙浓度值为所述血清溶液中钙的质量与所述血清溶液质量的比;
(二)测量所述血清溶液的密度,得到所述血清溶液的密度值,根据所述密度值和所述步骤(一)中得到的所述血清溶液中钙浓度值,得到所述血清溶液中钙浓度的标准值;所述血清溶液中钙浓度的标准值为所述血清溶液中钙的物质的量与所述血清溶液的体积的比。
所述测量所述血清溶液的密度的方法中,是用称量质量的方法进行的。
上述过程中,所述用火焰原子吸收光谱法测量所述血清溶液中钙浓度值的方法,在操作过程中,使仪器满足如下条件:1)对同一钙浓度的钙标准工作液而言,每次检测得到的钙吸光度读数的变异系数小于0.5%;2)所述空白工作液的吸光度读数小于所述钙标准工作液中钙浓度最低的钙标准工作液的钙吸光度读数的3%;3)所述工作曲线的相关系数的平方大于0.9995。
上述血清钙标准物质中,所述钙标准工作液由氯化钙、氯化钠、氯化钾、氯化镧和去离子水组成;所述空白工作液由氯化钠、氯化钾、氯化镧和去离子水组成;
所述氯化钙是通过加入所述SRM915b和盐酸反应得到的;所述氯化镧是通过加入三氧化二镧和盐酸反应得到的;
所述钙标准工作液为如下3种:钙标准工作液1、钙标准工作液2、钙标准工作液3;
所述钙标准工作液1的组成:由终浓度为160ug/100.0000g的钙离子、终浓度为16.360mg/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.746mg/100.0000g的氯化钾、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在所述钙标准工作液1中的浓度;
所述钙标准工作液2的组成:由终浓度为200ug/100.0000g的钙离子、终浓度 为16.360mg/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.746mg/100.0000g的氯化钾、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在所述钙标准工作液2中的浓度;
所述钙标准工作液3的组成:由终浓度为240ug/100.0000g的钙离子、终浓度为16.360mg/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.746mg/100.0000g的氯化钾、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在所述钙标准工作液3中的浓度;
所述空白工作液的组成:由终浓度为0.746mg/100.0000g的KCl、终浓度为16.360mg/100.0000g的NaCl、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在空白工作液中的浓度。
上述血清钙标准物质中,在其制备方法中,在所述分别对所述5种不同钙浓度的血清溶液中的每种血清溶液进行定值前,包括如下对所述血清溶液进行稀释的步骤:通过称量质量的方法得到所需质量的血清溶液和所需质量的稀释液,将所需质量的血清溶液和所需质量的稀释液混匀。
稀释液的组成:由终浓度为10mmol/L的氯化镧、终浓度为50mmol/L的盐酸和去离子水组成。
上述任一所述称量质量是用万分之一电子天平进行的;
上述定值过程中,所述仪器为原子吸收分光光度计,所述原子吸收分光光度计的参数设置如下:空心阴极灯电流大小为10mA;单色器狭缝宽度为0.5nm;乙炔流量为2.0~2.3L/min,燃烧器高度为7mm。在用仪器检测过程中,乙炔气体纯度大于99%,交流电压波动小于5%。
上述定值过程中,操作在温度为20~25℃、温度变化不大于3℃/h、湿度为20%~50%的环境下进行。
本发明的另一个目的是提供一种用于制备血清钙标准物质的稀释添加试剂盒。
本发明所提供的用于制备血清钙标准物质的稀释添加试剂盒,由稀释剂和钙添加剂组成;所述稀释剂为氯化钠和氯化钾的混合水溶液,所述氯化钠在所述稀释剂中的浓度为135.0mmol/L-145.0mmol/L,所述氯化钾在所述稀释剂中的浓度为4.5mmol/L-5.5mmol/L;
所述钙添加剂为在国家标准物质研究中心的编号为GBW(E)080118的物质。
本发明的血清钙标准物质中不添加其它物质,只以血清作为基体,其互通性好,均匀性好,-80℃储存条件下稳定性也良好,可以溯源到SRM915纯度碳酸钙标准物质与SRM956b冰冻人血清电解质标准物质,相对合成不确定度为0.83%~1.55%,合 成不确定度较小,说明定值结果可靠。另外,其与现有的其它血清钙标准物质相比,具有成本低廉、制备方法简单、基质效应小、互通性好的优点。在制备本发明血清钙标准物质的过程中,溶液的配制都是采用了重量/重量法(即称量质量的方法)(如血清的稀释或钙添加、空白工作液和钙标准工作液的配制),减少了容量瓶与吸量管等体积测量引起的测量不确定度,使定值结果更精确;重量法测定血清密度,血清密度更加精确,不确定度小,从而使定值结果更加准确。在稀释血清的过程中,添加的电解质溶液,其电解质浓度与血清中的电解质浓度一致,尽可能地减少了基质效应;在钙添加的过程中,用的是国家标准物质水中钙成分分析标准物质,纯度高,添加的量少,尽可能地减少了基质效应。因此,本发明血清钙标准物质在医药卫生领域将有广阔的应用前景。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
下述实施例中使用的仪器、试剂等如下:
1.仪器
1.1AA-6800型原子吸收分光光度计,日本岛津。北京市计量局每年一次强检,厂家定期检修,每天使用前自检。
1.2Milli-Q净化水装置,密理博中国有限公司。用于实验室去离子水的制备。
1.3瑞士梅特勒十万分之一天平。用于标准物质、贮备液、血清溶液样品的准确称量;容量瓶等的内校。北京市计量局每年一次强检,每天使用前自检。
1.4Eppendorf reference移液器。每年送生产厂家校准1次,每月1次内校。
1.5小型磁力搅拌器90-1型,上海振荣科学仪器厂。
1.6过滤装置,滤膜孔径大小分别为0.8um,0.45um,0.2um。配有真空抽吸泵,美国HENGAO公司。
2.试剂
2.1超纯去离子水(≥18.2MΩ.cm),要有充足的水,用于试剂溶液配置和对所有玻璃器具的冲洗。
2.2血清电解质标准物质,美国NIST SRM956b水平I、III,购自美国NIST。用于室内质量控制与准确度验证。相对扩展不确定度分别为0.64%与0.66%。
2.3碳酸钙标准物质,购自美国国家标准技术研究所(NIST),产品名称为SRM915b。使用之前,200℃~210℃干燥4h,干燥后的SRM915b置于硅胶干燥器中冷却至室温备用。相对扩展不确定度为0.21%。SRM915b CaCO3含量为 99.907±0.0201,其相对标准不确定度为0.105%。
2.4水中钙成分分析标准物质:产品名称为水中钙成分分析标准物质,购自国家标准物质中心,其在国家标准物质研究中心的编号为GBW(E)080118(1000mg/L),用于向混合血清中加标评价回收率,相对扩展不确定度为0.5%。
2.5氧化镧,优级纯,上海化学试剂公司。
2.6氯化钠、氯化钾,分析纯,上海化学试剂公司。每千克中钙含量低于10mg。使用前在干燥器中200℃干燥4小时,并储存于含有硅胶并具有湿度指示的干燥器中冷却到室温。
2.7浓盐酸,优级纯,上海化学试剂公司。其钙含量低于10-6%。
实施例1、血清钙标准物质I的制备及效果检测
一、血清的收集
血清标本收集自北京朝阳医院检验科,收集体检后的剩余血清,年龄20~70岁,所有血清标本均为无肝肾功能疾病、无溶血、无黄疸且非乳糜的血清。所有血清标本的收集均经过受采者的同意。血清采集方法遵照ISO指南34(ISO Guide 34,General requirements for the competence of reference material producers.)。
收集血清于50ml聚乙烯密闭离心管中,75%酒精消毒瓶体表面并密封,外观澄清透明,除外溶血与乳糜等异常性状。共收集5000个个体的血清,不加任何添加物或防腐剂,混匀,过滤,共得到混合血清约3000毫升,-80℃冰箱保存备用。
二、不同钙浓度的血清溶液样品的配制
本实验中测量混合血清中血清钙浓度是用全自动生化分析仪DADE DimensionRxL Max进行的,配套原装试剂,美国德灵诊断产品有限公司生产。其中血清钙检测试剂,Randox2、Randox3质控血清英国Randox(朗道)公司;美国德灵诊断产品有限公司配套定标液。
将收集好的混合血清随机分为5批,每批约600ml。每天从-80℃冰箱取出一批血清,置于室温融化。融化后的血清,置于三角烧瓶中,在磁力搅拌器上充分混匀1h,取出约0.5ml,用全自动生化分析仪DADE Dimension RxL Max测定,测得混合血清中的血清钙浓度(血清钙浓度值的单位名称为mmol/L),同时测定Randox2、Randox3质控血清。将测得的混合血清中的血清钙浓度“mmol/L”换算成“ug/g”,通过钙添加或稀释,得到如下5种钙浓度的血清溶液样品:血清溶液样品1,钙浓度为86ug/g;血清溶液样品2,钙浓度为95ug/g;血清溶液样品3,钙浓度为100ug/g;血清溶液样品4,钙浓度为108ug/g;血清溶液样品5,钙浓度为116ug/g。
钙添加的方法:结合混合血清中钙的浓度,计算确定所需混合血清的质量和所 需钙添加剂的质量,再用天平称量得到所需量的混合血清和钙添加剂,将其混匀,即得到所需浓度的血清溶液样品;
稀释的方法:结合混合血清中钙的浓度,计算确定所需混合血清的质量和所需稀释剂的质量,再用天平称量得到所需量的混合血清和稀释剂,将其混匀,即得到所需浓度的血清溶液样品;
电解质溶液的组成(即稀释剂):由终浓度为5.0mmol/L的KCl、终浓度为140.0mmol/L的NaCl和去离子水组成;所述终浓度为各物质在电解质溶液中的浓度。电解质溶液的配制:取1个干净干燥的小烧杯,准确加入0.8180g氯化钠和0.0373g氯化钾。沿小烧杯壁缓慢加入去离子水溶解。取洁净干燥的100ml容量瓶1只,将小烧杯内的液体用玻璃棒小心转移进入容量瓶,再加入适量去离子水冲洗烧杯、玻璃棒,将冲洗烧杯和玻璃棒的去离子水转移至容量瓶,重复冲洗至少5遍,所有冲洗用的去离子水均收集于容量瓶内。注意液体不能洒到容量瓶之外。加去离子水至刻度处(100ml)。颠倒6次混匀,静置5分钟,再颠倒6次。使用之前上述步骤重复2遍。配制溶液过程中室内温度控制在20℃~25℃,湿度20%~50%。
钙添加剂为水中钙成分分析标准物质。
三、血清溶液样品的过滤
将步骤二中得到的不同血清溶液样品分别放入锥形瓶中,用磁力搅拌器充分混匀1小时;混匀后的血清溶液样品依次使用孔径为0.8um滤膜、0.45um滤膜和0.2um滤膜过滤三次达到清除血清杂质和除菌的目的。将过滤好的无菌血清,取出60ml用于血清密度的测量,其余用加样枪分装到已经贴好标识的无菌聚乙烯分装管中,每管1.0ml,密封。所有的容器及过滤装置必须在120℃条件下高压灭菌;所有操作须在生物安全柜中行无菌操作。分装小管的标识包括血清钙浓度(ug/g)、小管编号、分装时间等项目。分装后的血清小管立刻放入-80℃冰箱中保存,每日监测冰箱温度情况。
四、血清溶液样品的密度测定:
操作过程中注意血清容器的密闭,尽量避免蒸发。
1.1容量瓶体积的校正:控制室温为20℃~22℃,湿度20%-50%。根据JJG196-1990中华人民共和国国家计量检定规程校准容量瓶。将1只待校准的10ml清洁、干燥的容量瓶恒重,称重(M1);测量去离子水的温度(将去离子水置实验室1小时以上,实验室室温即为水的温度)将去离子水注入容量瓶标线处,液面凹陷底部与容量瓶刻线相平齐,称重(M2);根据去离子水的温度,查出该温度下水的密度(ρ水),计算该温度下该容量瓶实际体积为(M2-M1)/ρ水。重复上述步骤20 次,计算该容量瓶实际体积均值(V)与相对标准不确定度。该容量瓶的实际体积为9.964ml,相对标准不确定度为0.034%。
1.2血清溶液样品的密度的计算:将经过体积校正的10ml容量瓶称重为M1;将血清溶液样品小心转移至容量瓶,液面凹陷底部与容量瓶刻线相平齐,称重为M2。血清溶液样品密度(ρ血清溶液样品)为:(M2-M1)/V。重复上述步骤20次,计算ρ血清溶液样品的均值与标准差。
测量血清溶液样品的密度的总不确定度是由如下不确定度构成的合成不确定度:容量瓶体积的相对标准不确定度(0.034%)、重复操作引起的不确定度、称量引起的不确定度。测量血清溶液样品的密度的相对合成标准不确定度为0.05%。
测得5个血清溶液样品的密度(ρ)均为1.024±0.001(g/ml),本发明将以此密度值对钙标准物质中血清钙浓度标准值及绝对合成扩展不确定度值进行浓度单位换算。
五、冰冻混合血清溶液样品均匀性检验
均匀性是标准物质的重要属性之一,ISO Guide 35中完全按照不均匀性的不确定度来判定标准物质的不均匀性。以往的许多文献中,均匀性检验存在一些问题,如测量方法的重复性与灵敏度不够,抽样方法不合理,没有注意测量顺序,用F检验直接判定标准物质的均匀性等。虽然一般认为血清溶液样品为均匀的物质,但均匀性检验不可或缺,血清均匀性检验的主要目的是检出没有预料到的问题,例如在分装过程中受到的差异性污染,或者添加的过程造成的不均匀等。冰冻混合血清溶液样品的均匀性包括瓶间均匀性和瓶内均匀性。冰冻混合血清溶液样品溶化后为液体,从物理(热力学)的角度来看具有高度的均匀性。可以通过搅拌,使瓶内血清物质均匀,故一般不需检测瓶内均匀性。瓶间均匀性检验主要是检测制备期间可能由于未被发现的问题所产生的杂质、干扰物或异常,在这种情况下预计从瓶间均匀性研究得到的不确定度贡献很小。本发明中采用ANOVA方式检验均匀性。ANOVA方式较常用,可以得到较多的数据。ANOVA方式是抽取有代表性的样本数,每瓶重复测量2-3次。(Medical Laboratories-Particular requirement of quality andcompetence[S].International Standard,ISO 15189,2003:1-4)(MedicalLaboratories-Particular requirement of quality and competence[S].International Standard,ISO 15189,2003:21-25)。(In Vitro diagnosticmedical devices-Measurement of quantities in samples of biologicalorigin-Motrological traceability of values assigned to calibrators andcontrol materials[S].ISO/DIS 17511,2003:1-2.)。
抽样方法:采用微软公司Excel程序中的RAND函数随机生成0~600内的随机数字,将血清溶液样品编号与之相对应的血清分装管抽出,用于均匀性性检验。
抽样数量:抽样数要对整体有足够的代表性,通常取10~30个,最典型的是20个,不能少于10个。《一级标准物质技术规范》中要求,当总瓶数少于500个时,抽取瓶数不少于15个,当总体瓶数大于500个时,抽取瓶数为25个。当候选标准物质均匀性较好时,当总瓶数少于500个时,抽取瓶数不少于10个,当总体瓶数大于500个时,抽取瓶数不少于15个。考虑到血清的均匀性较好,用上述方法分别从5种血清溶液样品中随机抽取10个血清小管,共50个小管备检。
测量方法:均匀性检验与测量方法的精密度(重复性)密切相关,所以在最佳重复条件下测量,由同一操作者在同一实验室用同一仪器在尽可能短的时间内完成测量。每天完成1种血清溶液样品的均匀性检验,每种血清溶液样品测量10管,每管测量3次。用下述实验七中所述火焰原子吸收光谱法检测血清溶液样品中钙浓度值。
测量顺序:均匀性检验抽样数较多时,测量时间会比较长,测量结果可能受时间的影响,按随机顺序分析所选样本以区分测量的漂移和该批样本的趋势变化。在测量过程中间隔插入质控样品。每次重复测量都按随机顺序进行。在配制标准曲线与样品稀释的过程中,为了避免蒸发,每一个血清小管在使用前要密闭。
测量结果的数据分析:均匀性检验的数据如果出现离群值也不剔除。按ISOGuide 35的要求,用单因素方差分析法,以不均匀性的不确定度(ubb)作为评价标准物质均匀性的指标。见公式(4)
式中MSamong表示组间的均方,MSwithin表示组内的均方,n0表示每瓶血清重复测量次数,sbb等同于ubb。所有数据用SPSS 11.0统计软件进行处理。
瓶间均匀性结果的判定:若ubb相对于测量不确定度(即由重复测量、标准物质、称量等引起的不确定度)可以忽略(ubb显著低于测量不确定度,两者不在同一个数量级)(Jean Pauwels,Heinz Schimmel,Andree Lamberty.Criteria for thecertification of internationally acceptable reference materials.ClinicalBiochemistry,1998,31(6):437-439.),则认为该标准物质均匀;若ubb在测量不确定度中是一个显著因素,则重新制备或单个定值;更多情况下ubb与测量不确定度在同一个数量级,应将ubb计入总不确定度内(Jean Pauwels,Andree Lamberty, Heinz Schimmel.Homogeneity testing of reference materials.Accred QualAssur,1998,3:51-55.),可以认为样品的均匀度是可以接受的。
异常数据的处理:应注意离散值和异常值的区别。原则上讲,异常值经验证可以被剔除,而离散值应在数据组中予以保留,不应剔出,确保在大多数情况下不确定度不被低估。因为这些值可能预示着测量过程或所抽样品存在严重问题(AdriaanMH van der Veen.Trends in the certification of reference materials.AccredQual Assur,2004,9:232-236)。补充测量一般不可接受,因为获得数据的条件已经与取得所有结果时的条件不同了。
瓶间均匀性检验结果如表1~5。血清钙浓度单位为ug/g。
表1血清溶液样品1的瓶间均匀性数据
瓶 号 | 结果1 | 结果2 | 结果3 |
1 | 91.20 | 91.02 | 91.08 |
2 | 91.20 | 91.58 | 91.57 |
3 | 90.55 | 92.32 | 91.39 |
4 | 90.84 | 91.83 | 91.20 |
5 | 90.79 | 91.16 | 91.67 |
6 | 89.38 | 89.88 | 90.07 |
7 | 90.10 | 89.32 | 88.90 |
8 | 90.94 | 90.32 | 90.12 |
9 | 90.67 | 89.88 | 90.50 |
10 | 90.42 | 89.54 | 89.41 |
表2、冰冻血清溶液样品2的瓶间均匀性数据
瓶 号 | 结果1 | 结果2 | 结果3 |
1 | 95.06 | 97.55 | 96.86 |
2 | 96.60 | 97.63 | 96.77 |
3 | 97.35 | 97.27 | 96.45 |
4 | 97.73 | 98.08 | 98.34 |
5 | 96.55 | 96.79 | 95.66 |
6 | 97.46 | 97.77 | 97.39 |
7 | 96.61 | 97.32 | 97.76 |
8 | 96.55 | 97.08 | 95.73 |
9 | 97.29 | 97.76 | 97.68 |
10 | 96.52 | 95.81 | 96.23 |
表3、冰冻血清溶液样品3的瓶间均匀性数据
瓶 号 | 结果1 | 结果2 | 结果3 |
1 | 104.76 | 105.43 | 106.88 |
2 | 103.94 | 104.33 | 105.65 |
3 | 104.78 | 105.01 | 106.10 |
4 | 104.85 | 105.18 | 106.13 |
5 | 104.46 | 105.99 | 105.85 |
6 | 104.35 | 104.76 | 104.78 |
7 | 104.77 | 104.59 | 105.35 |
8 | 104.41 | 103.88 | 105.25 |
9 | 106.76 | 105.77 | 106.55 |
10 | 105.77 | 104.76 | 105.67 |
表4、冰冻血清溶液样品4的瓶间均匀性数据
瓶 号 | 结果1 | 结果2 | 结果3 |
1 | 111.92 | 111.15 | 110.95 |
2 | 112.04 | 111.28 | 111.06 |
3 | 112.84 | 111.81 | 112.30 |
4 | 113.34 | 110.82 | 111.89 |
5 | 114.27 | 111.82 | 111.98 |
6 | 113.59 | 109.97 | 109.92 |
7 | 113.27 | 110.79 | 110.59 |
8 | 113.45 | 111.55 | 110.98 |
9 | 114.02 | 110.84 | 110.48 |
10 | 113.72 | 111.10 | 110.34 |
表5、冰冻血清溶液样品5的瓶间均匀性数据
瓶 号 | 结果1 | 结果2 | 结果3 |
1 | 117.87 | 120.06 | 122.50 |
2 | 117.34 | 120.32 | 122.75 |
3 | 117.60 | 120.59 | 123.53 |
4 | 116.99 | 120.23 | 122.73 |
5 | 117.56 | 120.76 | 123.63 |
6 | 117.95 | 120.79 | 122.82 |
7 | 119.29 | 121.89 | 123.59 |
8 | 117.32 | 119.61 | 121.83 |
9 | 117.29 | 119.27 | 121.11 |
10 | 118.53 | 122.07 | 121.82 |
表6冰冻血清溶液样品1
变异源 | SS | 自由度 | MS |
瓶间 | 15.73 | 9 | 1.75 |
瓶内 | 4.89 | 20 | 0.24 |
总和 | 20.62 | 29 |
表7冰冻血清溶液样品2
变异源 | SS | 自由度 | MS |
瓶间 | 10.34 | 9 | 1.15 |
瓶内 | 7.38 | 20 | 0.37 |
总和 | 17.72 | 29 |
表8冰冻血清溶液样品3
变异 源 | SS | 自由 度 | MS |
瓶间 | 273.05 | 9 | 0.97 |
瓶内 | 9.76 | 20 | 0.49 |
总和 | 282.81 | 29 |
表9冰冻血清溶液样品4
变异 源 | SS | 自由 度 | MS |
瓶间 | 5.83 | 9 | 0.65 |
瓶内 | 39.09 | 20 | 1.95 |
总和 | 44.92 | 29 |
表10、冰冻血清溶液样品5
变异 源 | SS | 自由 度 | MS |
瓶间 | 11.93 | 9 | 1.33 |
瓶内 | 124.55 | 20 | 6.23 |
总和 | 136.482 | 29 |
根据表1~5的数据,用SPSS10.0软件分别对应得出6~10冰冻血清溶液样品的瓶间均匀性研究的方差分析表。
由表6~10的数据,根据公式(4),计算得到:
冰冻血清溶液样品1瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.71ug/g;
冰冻血清溶液样品2瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.51ug/g;
冰冻血清溶液样品3瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.40ug/g;
冰冻血清溶液样品4瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0ug/g;
冰冻血清溶液样品5瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0ug/g。
上述5种冰冻血清溶液样品的瓶间不均匀性的相对标准不确定度如表16所示。
六、冰冻血清溶液样品在-80℃贮存条件下稳定性检验
只有证明充分均匀之后才能进行稳定性检验。而任何样品(只要不小于均匀性检验所用的取样量)都可以认为具有代表性。对所需样品的数目没有限制,也不要求随机取样。然而,由于测量技术的重复性和精密度的影响,结果会有变化,因此应当进行重复测试。
本发明中检测在-80℃冰冻条件下保存不同时间的血清溶液样品的稳定性。
检测方法:使用下述步骤七中所述的检测方法,检测血清溶液样品中钙浓度;在同一个实验室检测冰冻混合血清溶液样品的稳定性。
检测当天将每种冰冻血清溶液样品从-80℃冰箱中各取2管,在室温下融化后(室温控制在25℃左右)充分混匀,立即检测,每管测定3次,取均值。
将步骤二中得到的未经冷冻的血清溶液样品,按照实验七中所述方法测得的钙浓度值作为稳定性检验的初始值(相当于表11中第0天);也是每种检测2管,每管测定3次。然后分别于第30天、90天、180天(冰冻当天记作第1天)分别从-80℃冰箱中取出已经经过均匀性检验的同一批冰冻混合血清溶液样品进行检测,每次检测包括SRM956b标准物质三个水平之一作为质控血清。
采用双因素方差分析(Two Way ANOVA),用SPSS11.0统计软件进行数据分析。
五种血清溶液样品在-80℃冰箱贮存0天、30天、90天、180天的血清钙浓度检测结果如表11所示。结果P>0.05,即在180天内血清溶液样品中血清钙浓度不随时间延长而改变,血清钙浓度在180天内是稳定的。
表11冰冻血清溶液样品稳定性检验数据(ug/g)
时间 | 0天 | 30天 | 90天 | 180天 |
血清溶液样品1 | 90.63 | 87.87 | 89.24 | 90.42 |
血清溶液样品2 | 96.99 | 94.11 | 94.89 | 95.35 |
血清溶液样品3 | 105.22 | 103.00 | 104.30 | 105.26 |
血清溶液样品4 | 111.80 | 111.30 | 111.54 | 111.49 |
血清溶液样品5 | 120.31 | 118.17 | 119.58 | 119.87 |
七、血清溶液样品中钙浓度的定值
(一)定值中使用的试剂及其配制方法如下:
1、空白工作液的组成及配制
1)空白贮备液的配制:
取1个干净干燥的小烧杯,准确加入0.8180g氯化钠和0.0373g氯化钾,沿小烧杯壁缓慢加入去离子水溶解。取洁净干燥的100ml容量瓶1只,置于天平上调零,将小烧杯内的液体用玻璃棒小心转移进入容量瓶,再加入适量去离子水冲洗烧杯、玻璃棒,将冲洗烧杯和玻璃棒的去离子水转移至容量瓶,重复冲洗至少5遍,所有冲洗用的去离子水均收集于容量瓶内。注意液体不能洒到容量瓶之外。在天平上准确称量,加去离子水至100.0000g。颠倒6次混匀,静置5分钟,再颠倒6次。使用之前上述步骤重复2遍。配制溶液过程中室内温度控制在20℃~25℃,湿度20%~50%。
空白贮备液的组成:由终浓度为0.0373g/100.0000g的KCl、终浓度为0.8180g/100.0000g的NaCl和去离子水组成;所述终浓度为各物质在空白贮备液中的浓度。
2)空白贮备液的稀释:准确称取1.0000g上述空白贮备液,精确加入稀释液至50.0000g,颠倒混匀30次,得到空白工作液。
空白工作液的组成:由终浓度为0.746mg/100.0000g的KCl、终浓度为16.360mg/100.0000g的NaCl、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在空白工作液中的浓度。
2、稀释液(氯化镧10mmol/L和盐酸50mmol/L)的配制:准确称取三氧化二 镧1.63g,加入到干净的小烧杯中,先沿壁缓慢加入10ml去离子水,再用移液管轻轻滴入6.7ml浓盐酸,边滴边缓慢摇动小烧杯,使溶质溶解。将烧杯内液体转移到1000ml容量瓶中,转移方法同空白贮备液的配制。当溶液温度达到环境温度,用去离子水定容到校准的体积,混匀。一次配够一个工作周期的用量。稀释液的组成:由终浓度为10mmol/L的氯化镧、终浓度为50mmol/L的盐酸和去离子水组成。
3、钙标准工作液的组成及配制
所述钙标准工作液在配制过程中,是通过称量质量对溶质和溶剂进行定量的,然后将所述溶质和溶剂混合,得到钙浓度单位名称为质量/质量的钙标准工作液;
所述钙标准工作液的配制方法中使用碳酸钙标准物质,所述碳酸钙标准物质购自美国国家标准技术研究所,产品名称为SRM915b。
所述钙标准工作溶液由氯化钙、氯化钠、氯化钾、氯化镧和去离子水组成;
所述氯化钙是通过加入SRM915b和盐酸反应得到的;所述氯化镧是通过加入三氧化二镧和盐酸反应得到的;
所述钙标准工作液在配制过程中,所述溶质为SRM915b、氯化钠、氯化钾和三氧化二镧;所述溶剂为去离子水。
(1)钙标准工作液1的组成及配制
钙标准工作液1的组成:由终浓度为160ug/100.0000g的钙离子、终浓度为16.360mg/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.746mg/100.0000g的氯化钾、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在钙标准工作液1中的浓度。
钙标准工作液1的配制过程:1)钙标准贮备液1的配制:向小烧杯中准确称量加入0.0200g SRM915b。沿小烧杯壁缓慢加入1ml去离子水,再用移液器轻轻滴入浓盐酸0.1ml。待碳酸钙完全溶解后分别加入0.8180g氯化钠和0.0373g氯化钾,再加去离子水溶解,转移至100ml洁净干燥的容量瓶中,转移方法同空白贮备液的配制。加去离子水稀释至100.0000g,颠倒容量瓶30次以混匀。将容量瓶做好标记。钙标准贮备液1的组成:由终浓度为8.000mg/100.0000g的钙离子、终浓度为0.8180g/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.0373g/100.0000g的氯化钾和去离子水组成;所述终浓度为各物质在钙标准贮备液1中的浓度。2)钙标准贮备液1的稀释:准确称取1.0000g上述钙标准贮备液1,精确加入稀释液至50.0000g,颠倒混匀30次,得到钙标准工作液1。
(2)钙标准工作液2的组成及配制
钙标准工作液2的组成:由终浓度为200ug/100.0000g的钙离子、终浓度为 16.360mg/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.746mg/100.0000g的氯化钾、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在钙标准工作液2中的浓度。
钙标准工作液2的配制过程:1)钙标准贮备液2的配制:方法与钙标准贮备液1的配制方法相同,不同的是加入0.0250g SRM915b。钙标准贮备液2的组成:由终浓度为10.000mg/100.0000g的钙离子、终浓度为0.8180g/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.0373g/100.0000g的氯化钾和去离子水组成;所述终浓度为各物质在钙标准贮备液2中的浓度。2)钙标准贮备液2的稀释:与上述钙标准贮备液1的稀释方法相同,得到钙标准工作液2。
(3)钙标准工作液3的组成及配制
钙标准工作液3的组成:由终浓度为240ug/100.0000g的钙离子、终浓度为16.360mg/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.746mg/100.0000g的氯化钾、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在钙标准工作液3中的浓度。
钙标准工作液3的配制过程:1)钙标准贮备液3的配制:方法与钙标准贮备液1的配制方法相同,不同的是加入0.0300g SRM915b。钙标准贮备液3的组成:由终浓度为12.000mg/100.0000g的氯化钙、终浓度为0.8180g/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.0373g/100.0000g的氯化钾去离子水组成;所述终浓度为各物质在钙标准贮备液3中的浓度。2)钙标准贮备液3的稀释:与上述钙标准贮备液1的稀释方法相同,得到钙标准工作液3。
4、血清溶液样品的稀释:准确称取血清溶液样品1.0000g,加稀释液至50.0000g,颠倒混匀30次,得到血清溶液样品分析溶液。
5、标准参考物质SRM956b-I和II的稀释:取2只洁净干燥50ml容量瓶,分别准确称取SRM956b-I和II各1.000g于容量瓶中,加稀释液至50.000g。颠倒混匀30次,标记为SRM956b-I和SRM956b-II。
(二)实验设计如下:
2.1定值实验室的选择:除了本发明的发明人所在实验室对所制备的标准物质进行定值,还选择能力相当的实验室协助定值。所选实验室应事先通过能力评估,证明合作者在标准物质/标准样品方面具有足够的经验和经历,参加有关的能力验证计划,能够给出符合质量要求的结果。将5个血清溶液样品的待定值血清溶液样品各2瓶发放给所选实验室,同时发放SRM956b标准品1瓶,SRM915b碳酸钙纯度标准物质1小瓶。血清溶液样品及标准品在运输过程中应置于冰盒中,迅速送达该 实验室,实验室接收标本后应检查血清溶液样品外观,确定没有融化,立即置于-80℃冰箱中保存待检。选定岛津国际贸易(上海)有限公司北京分析中心实验室。
2.2对实验室的定值要求:要求实验室在2天内完成定值。每天融化各待定值标准品1瓶,平行定值3次。测量待定值标准品之中穿插测SRM956b 3次。记录实验结果。2.3在试验完成后两天内收集数据。对每个实验数据,用格拉布斯法剔除可疑值。2.4汇总全部数据后,验证数据分布的正态性,在数据服从正态分布的情况下,所有数据构成一组新的测量数据。继续用格拉布斯法剔除可疑值。2.5计算出总平均值和标准差。该均值作为标准品的中间值。2.6根据单位换算公式求得5个浓度水平的血清溶液样品中血清钙浓度(mmol/L)。
(三)钙浓度标准值的定值
仪器参数设置:AA-6800型原子吸收分光光度计,空心阴极灯电流大小为10mA;单色器狭缝宽度为0.5nm;乙炔流量2.0~2.3L/min,为轻度富燃火焰;燃烧器高度为7mm;采用氘灯除背景,采用手动进样。
实验室条件:环境温度20~25℃,变化不大于3℃/h,湿度20%~50%,交流电压波动小于5%,乙炔气体纯度大于99%,排风通畅等。
具体测定步骤如下:
1、根据操作手册的说明准备原子吸收分光光度计。选择仪器波长为钙的共振线422.67nm。同时满足上述参数设置。
2.保证仪器稳定:将上述3种钙标准工作液和空白工作液用仪器重复测量,使仪器满足如下条件:对同一种工作液而言,每次测量得到的钙标准工作液中钙吸光度读数值的变异系数小于等于0.5%。空白工作液的吸光度读数小于钙标准工作液1(即钙浓度最低的钙标准工作液)的吸光度读数的3%。
3.开始测定前,钙空心阴极灯电流稳定至少30min,吸入去离子水至少10min。
4.用去离子水将仪器重新调到吸光度为零。
5.绘制工作曲线:
1)吸入空白工作液、钙标准工作液1、钙标准工作液2、钙标准工作液3并读取吸光度。在每个工作液之间喷一次去离子水,并保证每次喷去离子水的吸光度读数为0。2)重复步骤1);仪器根据钙标准工作液的浓度及吸光度读数,自动生成工作曲线,所述工作曲线为一元线性回归曲线,其自变量为所述钙标准工作液中钙的浓度值,因变量为所述钙标准工作液中钙的吸光度值;
此过程中仪器应满足如下条件:对同一种工作液而言,每次测量得到的钙标准工作液中钙吸光度读数值的变异系数小于等于0.5%;空白工作液的吸光度读数小于 钙标准工作液1(即钙浓度最低的钙标准工作液)的吸光度读数的3%。空白工作液中除了没有钙离子外,其它成分与钙标准工作液完全相同,可以排除其他成分对测定结果的影响。
仪器生成的工作曲线中,R2>0.9995。R值称为相关系数,在-1~1之间,表示相关的程度,绝对值越接近于1说明相关性越好。正值为正相关,负值为负相关。R值的平方R2称为确定系数,表示X变量的变化有百分之多少是由Y变量引起的。
6、用去离子水将仪器重新调到吸光度为零。具体操作是:吸入待测血清溶液样品分析溶液,然后吸入2种最接近所测血清溶液样品分析溶液中钙吸光度值的钙标准工作液,读取每种溶液的钙吸光度值,分别得到所述血清溶液样品分析溶液中钙的吸光度读数值和所述2种钙标准工作溶液中钙的吸光度读数值;所述2种最接近所测血清溶液样品分析溶液中钙吸光度值的钙标准工作溶液中钙浓度不同,分别为钙浓度低的钙标准工作溶液和钙浓度高的钙标准工作溶液;钙浓度低的钙标准工作溶液中钙浓度值记作S1,钙浓度高的钙标准工作溶液中钙浓度值记作S2。
在测定过程中有时仪器会发生漂移,这几乎是不可避免的,用两个最接近的钙标准工作溶液的吸光度夹着血清样品的吸光度,通过下述的公式计算,可以抵消掉仪器的漂移。2种最接近所测血清溶液样品分析溶液中钙吸光度值的钙标准工作液选自上述钙标准工作液1、钙标准工作液2、钙标准工作液3,是按照如下方法确定的:将所测血清溶液样品分析溶液中钙吸光度值与所述工作曲线中的吸光度值进行比较,再选择得到与所测血清溶液样品分析溶液中钙吸光度值最接近的两个钙标准工作液;
钙标准工作液共配制3个,第1个为线性范围的最低值,第3个为线性范围的最高值,第2个为线性范围的中间值,所测的血清钙浓度范围在线性范围内,其必然在1-2之间或者在2-3之间,如果在1-2之间就选择1与2钙标准工作液,如果再2-3之间就选择2与3钙标准工作液。与1、2、3中的某一个值完全重合,这种情况不会发生。
7.重复步骤5和6,按顺序重复检测钙标准工作液中钙的吸光度和血清溶液样品分析溶液中钙的吸光度,直到获得10个有效测量值。取10个所述血清溶液样品分析溶液中钙的吸光度读数值的平均值,记作AX;取10个钙浓度低的钙标准工作溶液中钙的吸光度读数值的平均值,记作AS1;取10个钙浓度高的钙标准工作溶液中钙的吸光度读数值的平均值,记作AS2;
8.如果有多个样本,按5~7步骤进行测量。
9.计算。用内插法计算血清溶液样品中钙浓度。
根据公式(1)计算每个有效测量的血清溶液样品分析溶液中钙浓度,用ug/g表示。
C:血清溶液样品分析溶液中钙浓度,用ug/g表示。
两个实验室血清钙标准物质定值结果如表12,13。
表12本实验室血清钙标准物质结果(ug/g)
SRM956b | 1 | 2 | 3 |
第一天SRM956b-I | 115.51 | 115.36 | 117.15 |
第二天SRM956b-I | 116.04 | 115.59 | 115.20 |
血清溶液样品1 | |||
第一天 | 87.013 | 85.40 | 86.60 |
第二天 | 88.98 | 88.23 | 88.50 |
血清溶液样品2 | |||
第一天 | 93.71 | 94.66 | 94.66 |
第二天 | 95.09 | 94.16 | 93.71 |
血清溶液样品3 | |||
第一天 | 102.00 | 101.98 | 100.34 |
第二天 | 104.99 | 104.21 | 101.20 |
血清溶液样品4 | |||
第一天 | 111.78 | 111.47 | 109.66 |
第二天 | 111.57 | 110.90 | 110.41 |
血清溶液样品5 | |||
第一天 | 118.60 | 118.18 | 117.63 |
第二天 | 119.71 | 119.25 | 118.20 |
表13岛津公司实验室血清钙标准物质测定结果(ug/g)
SRM956b | 1 | 2 | 3 |
第一天SRM956b-II | 99.70 | 99.21 | 100.24 |
第二天SRM956b-III | 77.69 | 77.60 | 77.24 |
血清溶液样品1 | |||
第一天 | 89.34 | 91.97 | 90.72 |
第二天 | 86.43 | 85.57 | 85.58 |
血清溶液样品2 | |||
第一天 | 94.28 | 97.90 | 96.56 |
第二天 | 89.80 | 92.61 | 91.00 |
血清溶液样品3 | |||
第一天 | 104.40 | 108.78 | 108.48 |
第二天 | 104.20 | 102.27 | 99.43 |
血清溶液样品4 | |||
第一天 | 112.17 | 117.19 | 117.86 |
第二天 | 112.41 | 110.76 | 109.76 |
血清溶液样品5 | |||
第一天 | 115.23 | 120.65 | 121.67 |
第二天 | 116.65 | 117.13 | 115.67 |
根据表12、13,依据格拉布斯准则,分别剔除可疑数据后将两组数据合并,计算得到定值结果,如表14。
表14血清钙标准物质定值结果(ug/g)
血清 | 均值 | 标准差 | CV(%) |
血清溶液样品1 | 87.87 | 1.18 | 1.34 |
血清溶液样品2 | 94.11 | 0.77 | 0.82 |
血清溶液样品3 | 103.00 | 1.42 | 1.38 |
血清溶液样品4 | 111.30 | 0.92 | 0.83 |
血清溶液样品5 | 118.17 | 1.03 | 0.87 |
测定SRM956b两个浓度水平的结果如表15。测定结果与认定值之间的偏差分别为+0.33%、+0.43%,均小于0.5%,可以认为赋值结果可靠。
表15SRM956b二个浓度水平测定结果(ug/g)
血清 | 认定值 | 测定均值 | 标准差 | CV(%) | 相对偏差 |
SRM956b-I | 115.43 | 115.81 | 0.72 | 0.62 | +0.33% |
SRM956b-III | 77.18 | 77.51 | 0.24 | 0.31 | +0.43% |
(四)钙浓度标准值的不确定度的评定
不确定度是指与测量结果相关的参数,表征可合理地赋予被测量的值的分散性。标准差或变异系数只能反映所使用的测量程序在规定的条件下的随机不确定性,还有一些因素如血清的均匀性好坏、天平的称量误差、容量器具的校准误差等都会最终影响测定结果。而这些因素造成的不确定性,是重复测量结果的标准差或变异系数所无法反映的。本研究在制备血清钙标准物质时,从血清溶液样品的收集、处理、检测到定值等进行全面质量控制,并对过程中产生的不确定度进行全面评定,使最终的血清定值能够更合理的表征被赋予值的分散程度。确定生产的标准物质/标准样品的特性值时最重要的一个方面是评定测量的不确定度。而每个测量都伴随有相应的不确定度。
4.1测量不确定度
(1)重复测量引起的不确定度。
对同一浓度血清溶液样品在不同时间按相同的条件进行多次测定即重复测定,包括批内和批间重复测定。测量值在一定范围内会出现上下波动,这与仪器自身的性能及测定的浓度水平有关,由此引入重复测量引起的不确定度。因此为了保证分析的准确性,测定前必须检查实验条件,根据所选测量方法和仪器的实际情况,设立重复测量的可接受标准;另外还需要对仪器进行维护,使仪器处于最佳状态,将由重复测量引起的不确定度降低到最小。本发明中分析5个不同浓度的血清溶液样品,每个血清溶液样品测定2批,每批测定3次。计算重复测量产生的不确定度。
重复测量产生的每个血清溶液样品的相对标准不确定度结果:血清溶液样品1:1.34%、血清溶液样品2:0.82%、血清溶液样品3:1.38%、血清溶液样品4:0.83%、血清溶液样品5:0.87%。
(2)标准物质引起的不确定度。
钙标准工作液的配制采用重量法由碳酸钙纯度标准物质SRM915b配制而成,由此引入钙标准物质SRM915b产生的不确定度。SRM915b CaCO3含量为99.907±0.0201,其相对标准不确定度为0.0101%。
(3)称量质量引起的不确定度。
钙标准工作液的配制及血清溶液样品的稀释过程都是用称量质量的方法进行的,都要使用到天平,由此引入称量质量引起的不确定度。万分之一天平精度为0.1mg,按均匀分布计算,取 其称量不确定度为 其相对标准不确定度约为0.006%。
(4)血清溶液样品密度测量引起的不确定度,其相对标准不确定度为0.05%。
(5)血清溶液样品测量的相对合成标准不确定度(Uc(y)),见公式(3)
Uc 2(y)=(u1)2+(u2)2+(u3)2+(u4)2 (3)
其中,u1为重复测量引起的不确定度,u2为标准物质引起的不确定度,u3为称量质量引起的不确定度,u4为血清溶液样品密度测量引起的不确定度。
5种血清溶液样品的钙浓度定值的相对合成标准不确定度依次为1.34%、0.82%、1.38%、0.83%、0.87%。合成标准不确定度中,标准物质、称量、密度等不确定度很小,几乎不影响重复测量的不确定度。
“绝对合成标准不确定度”,见公式(5)
绝对合成标准不确定度=c×Uc(y)(ug/g),(5)
式中c为血清溶液样品中钙浓度的定值(ug/g)。
(6)血清溶液样品测量的相对扩展合成标准不确定度
按照“化学分析中不确定度的评估指南”:在大多数情况下,推荐k=2(95%置信区间),即扩展因子kp=2。
血清溶液样品测量的相对扩展合成标准不确定度=2×Uc(y);
血清溶液样品测量的绝对扩展合成标准不确定度为:U95%=2×c×Uc(y)
5个不同水平的血清溶液样品的绝对扩展合成标准不确定度为1.18(ug/g)、0.77(ug/g)、1.42(ug/g)、0.92(ug/g)、1.03(ug/g)。
4.2不均匀性引起的不确定度分析。
将实验五中得到的5种血清溶液样品的不均匀性的不确定度分别与实验4.1中步骤(5)所述的血清溶液样品测量的相对合成标准不确定度(简称测量不确定度)比较,结果表明:冰冻混合血清溶液样品1、2、3的不均匀性不确定度与测量不确 定度在同一数量级,则将sbb计入定值的总不确定度内。冰冻混合血清溶液样品4、5sbb相对于测量不确定度可以忽略,均匀性的不确定度不计入定值不确定度。基于上述结果,冰冻混合血清钙5个浓度水平的标准物质均匀性是可以接受的。
4.3血清溶液样品中钙浓度标准值的合成标准不确定度:
(1)血清溶液样品中钙浓度标准值的相对合成标准不确定度
式中,Uc为血清溶液样品中钙浓度标准值的相对合成标准不确定度,Ubb=不均匀性引起的相对标准不确定度,Uchar为实验4.1中步骤(5)所述的血清溶液样品测量的相对合成标准不确定度。
确定钙浓度标准值及其相对合成标准不确定度后的血清溶液样品即为血清钙标准物质。
血清钙标准物质中钙浓度标准值的相对合成标准不确定度结果见表16。
表16血清钙标准物质中钙浓度标准值的相对合成标准不确定度(%)
(2)血清溶液样品中钙浓度标准值的绝对扩展合成标准不确定度
推荐k=2(95%置信区间),即扩展因子kp=2。
血清溶液样品中钙浓度标准值的绝对扩展合成标准不确定度=2×c×Uc(y),其中,c为血清溶液样品中钙浓度的定值(ug/g),Uc(y)为血清溶液样品中钙浓度标准值的相对合成标准不确定度。
各血清溶液样品中钙浓度标准值的绝对扩展合成标准不确定度如下:血清溶液样品1:1.55%×2×87.87=2.72(ug/g);血清溶液样品2:0.98%×2×94.11=1.84(ug/g);血清溶液样品3:1.43%×2×103.00=2.95(ug/g);血清溶液样品4:0.83%×2×111.30=1.85(ug/g);血清溶液样品5:0.87%×2×118.17=2.06(ug/g)。
八、将单位名称为ug/g的钙浓度值换算为单位名称为mmol/L的钙浓度值
根据上文测量的血清密度与血清溶液样品稀释倍数,将血清钙浓度由ug/g单位换算为法定计量单位mmol/L,按照公式(2)换算。
C血清=(C×50/40.08)/(1/ρ)=C×1.248×ρ(mmol/L) (2)
C血清:血清溶液样品中钙浓度,用mmol/L表示。C:血清溶液样品中钙浓度,用ug/g表示。50:血清溶液样品稀释至血清溶液样品分析溶液的稀释倍数。40.08:钙元素的原子量。ρ:血清溶液样品密度。
血清溶液样品1:钙浓度标准值为2.245mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.069mmol/L,其相对合成标准不确定度为1.55%;
血清溶液样品2:钙浓度标准值为2.404mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.047mmol/L;其相对合成标准不确定度为0.98%;
血清溶液样品3:钙浓度标准值为2.632mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.075mmol/L;其相对合成标准不确定度为1.43%;
血清溶液样品4:钙浓度标准值为2.844mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.047mmol/L;其相对合成标准不确定度为0.83%;
血清溶液样品5:钙浓度标准值为3.019mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.053mmol/L;其相对合成标准不确定度为0.87%。
九、血清钙标准物质互通性研究
用步骤七中方法和常规方法同时测定血清样本(10例以上,分布范围较宽),评价常规方法;对测定结果作线性回归及相关分析,如果相关系数r≥0.995,表明两种方法间有良好的相关性。挑选临床实验室常用的HITACHI、DADE、BACKMAN、OLYMPUS等生化分析系统作为常规方法,分别测量10份血清,每份血清测量三次,取均值为横坐标。步骤七中方法同时测定该10份血清,均值为纵坐标分别描记直线。分别用常规方法和步骤七中方法测定待认定标准品。结果,测量结果描记的点, 分别落在上述的直线上,说明待认定标准品在常规方法与步骤七中方法之间互通性良好。
十、溯源性
临床检验量值溯源作为提高检验质量的重要手段,已受到越来越广泛的重视。溯源性(traceability)是指通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。ISO 15189:2003文件中的5.6.3指出:应设计并实施一套对测量系统的校准,真实性的检定程序以保证测量结果可溯源到SI单位或可参比到一个自然常数或其它规定的参考值。如果以上都无法实现,还可采用参加适当的实验室间的比对计划使用相应的标准物质(有证书说明其材料的特性)将供应商或制造商提供的关于试剂程序或检验系统的溯源性的说明形成文件等。ISO在溯源性上的目标是改进空间和时间上的试验结果的可比性。
在NIST/CDC/AACC的血清钙火焰原子吸收光度法(FAAS)血清钙测定参考方法的基础上建立我国的血清钙候选参考方法和制备候选血清钙标准物质,通过几个权威实验室构成的参考实验室网络定值,由NIST SRM915b标准物质进行量值传递,用决定性方法定值的SRM956b血清标准物质作为定值质控品。溯源关系明确,溯源性取得令人满意的结果。
实施例2、血清钙标准物质II的制备及效果检测
一、血清的收集
方法与实施例1中所述相同。
二、不同钙浓度血清溶液样品的配制
方法与实施例1中所述相同,不同的是稀释或钙添加得到的血清溶液样品中钙的浓度不同,所用的电解质溶液的浓度不同,得到如下5种钙浓度水平不同的血清溶液样品:
血清溶液样品1:钙浓度为80ug/g。血清溶液样品2:钙浓度为88ug/g。
血清溶液样品3:钙浓度为96ug/g。血清溶液样品4:钙浓度为104ug/g。
血清溶液样品5:钙浓度为112ug/g。
电解质溶液的组成:由终浓度为4.5mmol/L的KCl、终浓度为135.0mmol/L的NaCl和去离子水组成;所述终浓度为各物质在电解质溶液中的浓度。
三、血清溶液样品的过滤
方法与实施例1中所述相同。
四、血清溶液样品的密度测定:方法与实施例1中所述相同。
测得5种血清溶液样品的密度均为1.024±0.001(g/ml)。
五、冰冻血清溶液样品均匀性检验:方法与实施例1中所述相同。
冰冻混合血清溶液样品1瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.39ug/g;
冰冻混合血清溶液样品2瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.44ug/g;
冰冻混合血清溶液样品3瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.50ug/g;
冰冻混合血清溶液样品4瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.42ug/g;
冰冻混合血清溶液样品5瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.53ug/g。
换算为相对标准不确定度分别为0.49%、0.50%、0.52%、0.41%、0.49%。
将此不均匀性的不确定度分别与下述实验七中得到的测量不确定度比较,结果表明:冰冻血清溶液样品1、2、3、4、5不均匀性的不确定度与测量不确定度在同一数量级,则将sbb计入定值的总不确定度内。基于上述结果,5种冰冻血清溶液样品的均匀性是可以接受的。
六、冰冻混合血清溶液样品在-80℃贮存条件下稳定性检验
检测方法:与实施例1中所述相同。结果表明,血清溶液样品在180天内血清钙浓度不随时间延长而改变,血清钙浓度在180天内稳定。
七、血清溶液样品中钙浓度的定值
(一)定值中使用的试剂及其配制方法与实施例1中所述相同。
(二)实验设计与实施例1中所述相同。
(三)钙浓度标准值的定值:方法与实施例1中所述相同;
结果5种血清溶液样品中钙浓度的定值分别为80.42μg/g、87.96μg/g、96.38μg/g、103.84μg/g、111.93μg/g。
(四)钙浓度标准值的不确定度
4.1测量不确定度
(1)重复测量引起的不确定度:方法与实施例1中所述相同。
重复测量产生的每种血清溶液样品的相对标准不确定度结果:血清溶液样品1:0.80%、血清溶液样品2:0.83%、血清溶液样品3:0.74%、血清溶液样品4:0.95%、血清溶液样品5:0.87%。
(2)标准物质引起的不确定度:与实施例1中所述相同,其相对标准不确定度为0.0101%。
(3)称量质量引起的不确定度:与实施例1中所述相同,其相对标准不确定度约为0.006%。
(4)血清溶液样品密度测量引起的不确定度:与实施例1中所述相同,其相对 合成标准不确定度为0.05%。
(5)血清溶液样品测量的相对合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同;结果:血清溶液样品1:0.81%、血清溶液样品2:0.84%、血清溶液样品3:0.75%、血清溶液样品4:0.96%、血清溶液样品5:0.88%。
血清溶液样品测量的绝对合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同。
(6)血清溶液样品测量的相对扩展合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同。
血清溶液样品测量的绝对扩展合成标准不确定度为:计算方法与实施例1中所述相同。
5种血清溶液样品的绝对扩展合成标准不确定度分别依次为0.64、0.73、0.71、0.99、0.97μg/g。
4.2不均匀性引起的不确定度分析。
5种血清溶液样品的瓶间不均匀性的不确定度如本实施例中实验五中所述。将5种血清溶液样品的瓶间不均匀性的不确定度计入血清溶液样品中钙浓度标准值的总不确定度。
4.3血清溶液样品中钙浓度标准值的合成标准不确定度:
(1)血清溶液样品中钙浓度定值的相对合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同。
结果,5种血清溶液样品中钙浓度标准值的相对合成标准不确定度分别为0.94%、0.97%、0.90%、1.03%、1.02%。
(2)血清溶液样品中钙浓度标准值的绝对扩展合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同。
结果,5种血清溶液样品中钙浓度标准值的绝对扩展合成标准不确定度分别为血清溶液样品1:1.51ug/g;血清溶液样品2:1.71ug/g;血清溶液样品3:L 73ug/g;血清溶液样品4:2.13ug/g;血清溶液样品5:2.28ug/g。
八、将单位名称为ug/g的钙浓度值换算为单位名称为mmol/L的钙浓度值
方法与实施例1中所述相同。
血清溶液样品1:钙浓度标准值为2.050mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.039mmol/L;其相对合成标准不确定度为0.94%;
血清溶液样品2:钙浓度标准值为2.250mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.044mmol/L;其相对合成标准不确定度为0.97%;
血清溶液样品3:钙浓度标准值为2.460mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.044mmol/L;其相对合成标准不确定度为0.90%;
血清溶液样品4:钙浓度标准值为2.650mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.054mmol/L;其相对合成标准不确定度为1.03%;
血清溶液样品5:钙浓度标准值为2.860mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.058mmol/L;其相对合成标准不确定度为1.02%;
九、血清钙候选标准物质互通性研究
方法与实施例1中所述相同,结果表明待认定标准品在常规方法与本实施例中步骤七的方法之间互通性良好。
十、溯源性
溯源关系明确,溯源性取得令人满意的结果。
实施例3、血清钙标准物质III的制备及效果检测
一、血清的收集:方法与实施例1中所述相同。
二、不同钙浓度血清溶液样品的配制
方法与实施例1中所述相同,不同的是稀释或钙添加得到的血清溶液样品中钙的浓度不同,所用的电解质溶液的浓度不同,得到如下5种钙浓度水平不同的血清溶液样品:
血清溶液样品1:钙浓度为88ug/g。血清溶液样品2:钙浓度为96ug/g。
血清溶液样品3:钙浓度为104ug/g。血清溶液样品4:钙浓度为112ug/g。
血清溶液样品5:钙浓度为120ug/g。
电解质溶液的组成:由终浓度为5.5mmol/L的KCl、终浓度为145.0mmol/L的NaCl和去离子水组成;所述终浓度为各物质在电解质溶液中的浓度。
三、血清溶液样品的过滤:方法与实施例1中所述相同。
四、血清溶液样品的密度测定:方法与实施例1中所述相同。
测得5种血清溶液样品的密度均为1.024±0.001(g/ml)。
五、冰冻血清溶液样品均匀性检验:方法与实施例1中所述相同。
冰冻混合血清溶液样品1瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.44ug/g。
冰冻混合血清溶液样品2瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.56ug/g;
冰冻混合血清溶液样品3瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.60ug/g;
冰冻混合血清溶液样品4瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.65ug/g;
冰冻混合血清溶液样品5瓶间不均匀性的绝对标准不确定度sbb为0.72ug/g。
转化为相对标准不确定度分别为0.50%、0.58%、0.57%、0.58、0.60%。
将此不均匀性的不确定度分别与下述实验七中得到的测量不确定度比较,结果表明:冰冻血清溶液样品1、2、3、4、5不均匀性的不确定度与测量不确定度在同一数量级,则将sbb计入定值的总不确定度内。基于上述结果,5种冰冻血清溶液样品的均匀性是可以接受的。
六、冰冻血清溶液样品在-80℃贮存条件下稳定性检验
检测方法:与实施例1中所述相同。结果表明,血清溶液样品在180天内血清钙浓度不随时间延长而改变,血清钙浓度在180天内稳定。
七、血清溶液样品中钙浓度的定值
(一)定值中使用的试剂及其配制方法与实施例1中所述相同。
(二)实验设计与实施例1中所述相同。
(三)钙浓度标准值的定值:方法与实施例1中所述相同;
结果5种血清溶液样品中钙浓度的定值分别为88.06μg/g、96.11μg/g、103.96μg/g、112.04μg/g、119.95μg/g。
(四)钙浓度标准值的不确定度
4.1测量不确定度
(1)重复测量引起的不确定度:方法与实施例1中所述相同。
重复测量产生的每种血清溶液样品的相对标准不确定度结果:血清溶液样品1:0.81%、血清溶液样品2:0.77%、血清溶液样品3:0.90%、血清溶液样品4:0.94%、血清溶液样品5:0.76%。(2)标准物质引起的不确定度:与实施例1中所述相同,其相对标准不确定度为0.0101%。(3)称量质量引起的不确定度:与实施例1中所述相同,其相对标准不确定度约为0.006%。(4)血清溶液样品密度测量引起的不确定度:与实施例1中所述相同,其相对合成标准不确定度为0.05%。(5)血清溶液样品测量的相对合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同;结果血清溶液样品1:0.82%、血清溶液样品2:0.78%、血清溶液样品3:0.91%、血清溶液样品4:0.95%、血清溶液样品5:0.77%。
血清溶液样品测量的绝对合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同。
(6)血清溶液样品测量的相对扩展合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同。血清溶液样品测量的绝对扩展合成标准不确定度为:计算方法与实施例1中所述相同。
5种血清溶液样品的绝对扩展合成标准不确定度分别依次为0.71、0.74、0.94、1.05、0.91μg/g。
4.2不均匀性引起的不确定度分析。
5种血清溶液样品的瓶间不均匀性的不确定度如本实施例中实验五中所述。将5种血清溶液样品的瓶间不均匀性的不确定度计入血清溶液样品中钙浓度标准值的总不确定度。
4.3血清溶液样品中钙浓度标准值的合成标准不确定度:
(1)血清溶液样品中钙浓度标准值的相对合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同。
结果,5种血清溶液样品中钙浓度标准值的相对合成标准不确定度分别为0.95%、0.96%、1.07%、1.10%、0.97%。
(2)血清溶液样品中钙浓度标准值的绝对扩展合成标准不确定度:计算方法与实施例1中所述相同。
结果,5种血清溶液样品中钙浓度标准值的绝对扩展合成标准不确定度分别为血清溶液样品1:1.67ug/g;血清溶液样品2:1.84ug/g;血清溶液样品3:2.20ug/g;血清溶液样品4:2.45ug/g;血清溶液样品5:2.31ug/g。
八、将单位名称为ug/g的钙浓度值换算为单位名称为mmol/L的钙浓度值
方法与实施例1中所述相同。
血清溶液样品1:钙浓度标准值为2.249mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.043mmol/L;其相对合成标准不确定度为0.95%;
血清溶液样品2:钙浓度标准值为2.450mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.047mmol/L;其相对合成标准不确定度为0.96%;
血清溶液样品3:钙浓度标准值为2.630mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.056mmol/L;其相对合成标准不确定度为1.07%;
血清溶液样品4:钙浓度标准值为2.847mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.063mmol/L;其相对合成标准不确定度为1.10%;
血清溶液样品5:钙浓度标准值为3.046mmol/L,其绝对扩展合成标准不确定度为0.059mmol/L;其相对合成标准不确定度为0.97%;
九、血清钙候选标准物质互通性研究
方法与实施例1中所述相同,结果表明待认定标准品在常规方法与本实施例中步骤七的方法之间互通性良好。
十、溯源性
溯源关系明确,溯源性取得令人满意的结果。
Claims (8)
1.一种血清钙标准物质,是按照包括如下步骤的方法制备的:对离体血清进行稀释或钙添加,得到5种不同钙浓度的血清溶液,再分别对所述5种不同钙浓度的血清溶液中的每种血清溶液进行定值,得到如下5种钙浓度的血清钙标准物质:
1)钙浓度的标准值为2.050mmol/L-2.250mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%;
2)钙浓度的标准值为2.250mmol/L-2.450mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%;
3)钙浓度的标准值为2.450mmol/L-2.650mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%;
4)钙浓度的标准值为2.650mmol/L-2.850mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%;
5)钙浓度的标准值为2.850mmol/L-3.050mmol/L,相对合成标准不确定度为0.83%-1.55%;
所述稀释是用如下稀释剂进行的,所述钙添加是用如下钙添加剂进行的:
1)稀释剂为氯化钠和氯化钾的混合水溶液,所述氯化钠在所述稀释剂中的浓度为135.0mmol/L-145.0mmol/L,所述氯化钾在所述稀释剂中的浓度为4.5mmol/L-5.5mmol/L;
2)钙添加剂为在国家标准物质研究中心的编号为GBW(E)080118的物质;
所述对所述5种不同钙浓度的血清溶液中的每种血清溶液进行定值的方法包括如下步骤:
(一)用火焰原子吸收光谱法测量所述血清溶液中钙浓度值,包括如下步骤:
(1)检测空白工作液和钙浓度不同的钙标准工作液中钙的吸光度值,得到工作曲线;所述工作曲线为一元线性回归曲线,其自变量为所述钙标准工作液中钙的浓度值,因变量为所述钙标准工作液中钙的吸光度值;
所述空白工作液中不含有钙,其余组成及浓度与所述钙标准工作液相同;
所述钙标准工作液和所述空白工作液是按照包括如下步骤的方法配制的:通过称量质量的方法得到所需质量的溶质和所需质量的溶剂,将所需质量的溶质和所需质量的溶剂混合;
所述钙标准工作液中钙的浓度为钙的质量与钙标准工作液质量的比;
(2)检测所述血清溶液中钙的吸光度和2种钙标准工作液中钙的吸光度,分别得到所述血清溶液中钙的吸光度读数值和所述2种钙标准工作液中钙的吸光度读数值;所述2种钙标准工作液选自步骤(1)中所述钙浓度不同的钙标准工作液,其钙吸光度值与所述血清溶液的钙吸光度值最接近;所述2种钙标准工作液中钙浓度不同,分别为钙浓度低的钙标准工作液和钙浓度高的钙标准工作液;钙浓度低的钙标准工作液中钙浓度值记作S1,钙浓度高的钙标准工作液中钙浓度值记作S2;
(3)重复步骤(1)和(2);
(4)取所述血清溶液中钙的吸光度读数值的平均值,记作AX;取所述钙浓度低的钙标准工作液中钙的吸光度读数值的平均值,记作AS1;取所述钙浓度高的钙标准工作液中钙的吸光度读数值的平均值,记作AS2;
(5)根据公式I得到所述血清溶液中钙浓度值,记作C;所述血清溶液中钙浓度值为所述血清溶液中钙的质量与所述血清溶液质量的比;
(二)测量所述血清溶液的密度,得到所述血清溶液的密度值,根据所述密度值和所述步骤(一)中得到的所述血清溶液中钙浓度值,得到所述血清溶液中钙浓度的标准值;所述血清溶液中钙浓度的标准值为所述血清溶液中钙的物质的量与所述血清溶液的体积的比。
2.根据权利要求1所述的血清钙标准物质,其特征在于:所述离体血清为无肝肾功能疾病、无溶血、无黄疸且非乳糜的血清。
3.根据权利要求1所述的血清钙标准物质,其特征在于:所述对离体血清进行稀释的方法包括如下步骤:通过称量质量的方法得到所需质量的所述离体血清和所需质量的所述稀释剂,将所需质量的所述离体血清和所需质量的所述稀释剂混匀;
所述对离体血清进行钙添加的方法包括如下步骤:通过称量质量的方法得到所需质量的所述离体血清和所需质量的所述钙添加剂,将所需质量的所述离体血清和所需质量的所述钙添加剂混匀。
4.根据权利要求1-3中任一所述的血清钙标准物质,其特征在于:所述离体血清是由来自于不同个体的离体血清混合而成的。
5.根据权利要求1所述的血清钙标准物质,其特征在于:
所述用火焰原子吸收光谱法测量所述血清溶液中钙浓度值的方法,在操作过程中,使仪器满足如下条件:1)对同一钙浓度的钙标准工作液而言,每次检测得到的钙吸光度读数的变异系数小于0.5%;2)所述空白工作液的吸光度读数小于所述钙标准工作液中钙浓度最低的钙标准工作液的钙吸光度读数的3%;3)所述工作曲线的相关系数的平方大于0.9995。
6.根据权利要求5所述的血清钙标准物质,其特征在于:所述钙标准工作液由氯化钙、氯化钠、氯化钾、氯化镧和去离子水组成;所述空白工作液由氯化钠、氯化钾、氯化镧和去离子水组成;
所述氯化钙是通过加入碳酸钙标准物质和盐酸反应得到的;所述氯化镧是通过加入三氧化二镧和盐酸反应得到的;
所述钙标准工作液为如下3种:钙标准工作液1、钙标准工作液2、钙标准工作液3;
所述钙标准工作液1的组成:由终浓度为160ug/100.0000g的钙离子、终浓度为16.360mg/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.746mg/100.0000g的氯化钾、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在所述钙标准工作液1中的浓度;
所述钙标准工作液2的组成:由终浓度为200ug/100.0000g的钙离子、终浓度为16.360mg/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.746mg/100.0000g的氯化钾、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在所述钙标准工作液2中的浓度;
所述钙标准工作液3的组成:由终浓度为240ug/100.0000g的钙离子、终浓度为16.360mg/100.0000g的氯化钠、终浓度为0.746mg/100.0000g的氯化钾、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在所述钙标准工作液3中的浓度;
所述空白工作液的组成:由终浓度为0.746mg/100.0000g的KCl、终浓度为16.360mg/100.0000g的NaCl、终浓度为0.2404g/100.0000g的氯化镧和去离子水组成;所述终浓度为各物质在空白工作液中的浓度。
7.根据权利要求6所述的血清钙标准物质,其特征在于:所述方法中,在所述分别对所述5种不同钙浓度的血清溶液中的每种血清溶液进行定值前,包括如下对所述血清溶液进行稀释的步骤:通过称量质量的方法得到所需质量的血清溶液和所需质量的稀释液,将所需质量的血清溶液和所需质量的稀释液混匀。
8.一种用于制备血清钙标准物质的稀释添加试剂盒,由稀释剂和钙添加剂组成;所述稀释剂为氯化钠和氯化钾的混合水溶液,所述氯化钠在所述稀释剂中的浓度为135.0mmol/L-145.0mmol/L,所述氯化钾在所述稀释剂中的浓度为4.5mmol/L-5.5mmol/L;
所述钙添加剂为在国家标准物质研究中心的编号为GBW(E)080118的物质。
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Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3466249A (en) * | 1967-02-13 | 1969-09-09 | Baxter Laboratories Inc | Blood serum reference standard for multi-automated analytical procedures |
US3682835A (en) * | 1970-11-24 | 1972-08-08 | Baxter Laboratories Inc | Liquid blood serum control standard |
US3728226A (en) * | 1970-06-01 | 1973-04-17 | Baxter Laboratories Inc | Blood serum analytical control standard |
US3955925A (en) * | 1973-11-12 | 1976-05-11 | Proksch Gary J | Preparation of optically clear serum |
US4158544A (en) * | 1978-07-17 | 1979-06-19 | Beckman Instruments, Inc. | Process for preparing a biological composition for use as a reference control in diagnostic analysis |
CN1149722A (zh) * | 1995-11-09 | 1997-05-14 | 祁进龙 | 多项液体质量控制猪血清及制备方法 |
CN101561409A (zh) * | 2009-05-31 | 2009-10-21 | 河北科技大学 | 电解质分析标准溶液及其配制方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS4977685A (zh) * | 1972-11-29 | 1974-07-26 | ||
JPH0989899A (ja) * | 1995-09-28 | 1997-04-04 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 臨床検査用標準液 |
-
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- 2009-11-19 CN CN2009102376070A patent/CN101930009B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3466249A (en) * | 1967-02-13 | 1969-09-09 | Baxter Laboratories Inc | Blood serum reference standard for multi-automated analytical procedures |
US3728226A (en) * | 1970-06-01 | 1973-04-17 | Baxter Laboratories Inc | Blood serum analytical control standard |
US3682835A (en) * | 1970-11-24 | 1972-08-08 | Baxter Laboratories Inc | Liquid blood serum control standard |
US3955925A (en) * | 1973-11-12 | 1976-05-11 | Proksch Gary J | Preparation of optically clear serum |
US4158544A (en) * | 1978-07-17 | 1979-06-19 | Beckman Instruments, Inc. | Process for preparing a biological composition for use as a reference control in diagnostic analysis |
CN1149722A (zh) * | 1995-11-09 | 1997-05-14 | 祁进龙 | 多项液体质量控制猪血清及制备方法 |
CN101561409A (zh) * | 2009-05-31 | 2009-10-21 | 河北科技大学 | 电解质分析标准溶液及其配制方法 |
Non-Patent Citations (10)
Title |
---|
JP特开平9-89899A 1997.04.04 |
JP特开昭49-77685A 1974.07.26 |
人血清中几种元素的ICP-AES法测定;何才云等;《光谱实验室》;19940331;第11卷(第2期);57-59 * |
何才云等.人血清中几种元素的ICP-AES法测定.《光谱实验室》.1994,第11卷(第2期),57-59. |
姜典镇.火焰原子吸收法测定元素钙的影响因素及其校正.《微量元素与健康研究》.2008,第22卷(第4期),43-44. |
室内质控血清的制备与应用;李振堂等;《综合临床医学》;19921231;第8卷(第1期);46-48 * |
曹芳红.血清总钙的火焰原子吸收分光光度测定法.《职业与健康》.2002,第18卷(第11期),41. |
李振堂等.室内质控血清的制备与应用.《综合临床医学》.1992,第8卷(第1期),46-48. |
火焰原子吸收法测定元素钙的影响因素及其校正;姜典镇;《微量元素与健康研究》;20080831;第22卷(第4期);43-44 * |
血清总钙的火焰原子吸收分光光度测定法;曹芳红;《职业与健康》;20021130;第18卷(第11期);41 * |
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