JPS61212292A - Ｄ−α−アミノ酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は５−置換ヒダントイン類をＤ−α−アミノ酸に
変換する能力を有するハンセニーラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌ
ａ）　＠に属する微生物を用いることによりＤ−α−ア
ミノ酸を極めて有利に製造する方法に関するものである
。

（従来の技術とその問題点） Ｄ−α−アミノ酸の製造法の一つとして対応する５−置
換ヒダントインを化学的に水解してＤＬ−α−アミノ酸
を製造しこれを光学分割してＤ−α−アミノ酸とする方
法が知られている。しかしこの方法は特に光学分割の工
程が煩雑でありその収率も高くない。また更に５−置換
ヒダントインに微生物の培養液、菌体、菌体処理物又は
菌体から抽出した酵素を作用させて光学活性のＮ−カル
バモイル−Ｄ−α−アミノ酸を生成させた後亜硝酸ソー
ダ液処理によりＤ−α−アミノ酸とする方法が知られて
いる。

しかしこの方法も反応工程及び精製工程が煩雑である。

又、更に５−置換ヒダントインにある種の微生物・・・
例えばシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍａｓ）　、モラ
キセラ（Ｍｏｒａｘｅｌ　ｌａ　）　、バラコツカス（
Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）、アースロバフタ−（Ａｒｔｈ
ｒｏｂａｃｔｅｒ）。

アルカリジェネス（Ａｌｃａｌ　ｉｇｅｎｅｓ）　、フ
ラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）　
　・−の培養液、菌体、菌体処理物を作用させて直接に
Ｄ−α−アミノ酸とする方法も知られているが収率は高
くない。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、この様な従来の製造法に対しより効率の
よい方法を見い出すべく研究した結果。

ハンセニーラ属の微生物に５−置換ヒダントインをＤ−
α−アミノ酸に変換する能力を有することを見い出した
。しかし従来ハンセニーラ属に属する微生物が５−置換
ヒダントインをＤ−α−アミノ酸に変換する能力を有す
ることは知られていない。この発明はこの知見に基いて
更に研究した結果、完成されるに至ったものである。

すなわち本発明は （式中　Ｒはアルキル基、置換アルキル基、フェニル基
または置換フェニル基） で表わされる５−置換ヒダントイン類にノ・ンセコラ（
Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属に属する微生物を作用させてＤ
−α−アミノ酸に変換さ斗ることを特徴とする一般式　
Ｒ−ＣＩ−１−ＣＯＯＨ（式中Ｒは式（１）に同じ）Ｈ
２ で表わされるＤ−α−アミノ酸の製造方法である。

本発明の方法で用いられる微生物は、例えば代表例とし
ては、ハンセニエラ・シフエＩＪ−（Ｈａｎ−ｓｅｎｕ
ｌａ　ｃｉｆｅｒｒｉｉ）　、　ハンセニエラ・ヘンリ
ノン−（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｈｅｎｒｉｃｉｉ）、　
ハ７セニエラ・ノフエルメンタス（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ
　ｎｏｎｆｅｒｍｅｎｔａｕｓ）ハンセニエラ・ホリモ
ルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ　）
などが挙げられ、これらは本発明の目的に使用されうる
かぎり自然界に存在する野生株および公的な微生物保存
機関に保存されている微生物が用いられる。５−置換ヒ
ダントインをＤ−α−アミノ酸に変換する能力を有する
微生物の検定方法としては１例えば次の様な方法が用い
られる。検定微生物の培養液５ｄを採取し、遠心分離に
よって集菌した後、この集菌菌体を同容量の殺菌した生
理食塩水で洗滌後　２ｄの０．５重量％濃度のＤ−イン
プロピルヒダントインのリン酸カリウムバッファ（０，
１Ｍ濃度ｐＨ＝７．５　　）基質液中に分散させて３５
℃、２４時間反応させる。

ついで反応液を１０．ＯＯＯｒｐｍで１０分間遠心分離
して上澄液を得て、その上澄液をペーパークロマトグラ
フ（展開液、ＢＭ−リＨ：酢酸：水＝４：１：１）に分
離後ニンヒドリン発色させ１発色部を切り取り、更に７
５％エタノール溶液５−にて発色部を抽出後、波長５７
０　ｎｍで比色定量する。

上記のようにしてヒダントイン環をアミノ酸に変換する
能力を有すると認められた菌株について更に生成したア
ミノ酸を常法により単離、精製し旋光度を測定すること
により検定した。本発明に用いられるハンセニーラ属の
微生物は前記の検定に合格したものである。

本発明で用いられる５−置換ヒダントイン類とは、ヒダ
ントインの５位の水素原子がアルキル基フェニル基また
はそれらの置換誘導体であり、アルキル基またはフェニ
ル基に附随する置換基としては１例えばハロゲン原子ア
ルキルメルカプト基。

ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミ７基、インドリル基
、アルコキシカルボニル基などがある。本発明で用いら
れる５−置換ヒダントイン類および夫々のヒダントイン
に対応するＤ−アミノ酸を具体的に例示すれば表−１に
示すようなものである。

本発明のハンセニーラ属に属する微生物を５−置換ヒダ
ントイン類に作用させる方法は、本発明の微生物の菌体
及び菌体処理物を水溶液中で接触させる方法である。

本微生物の培養に用いられる培地は通常資化しうる炭素
源、窒素源および微生物の生育に必要な無機塩栄養素を
含有させる通常の培地である。培養条件は好気的条件下
にてｐＨ＝４〜９．温度２５〜４５℃の適当な範囲に制
御しつつ行なえばよい。

酵素反応における反応基質の濃度は０．１〜１０重量％
の濃度まで用いることが出来る。反応温度は使用する微
生物のＤ−α−アミノ酸への変換する能力を持つ酵素の
至適温度が採用されるが１通常２０〜６０℃の範囲にあ
る。反応中のｐＨは使用する微生物のＤ−α−アミノ酸
への変換する能力を持つ酵素の至適ｐＨが採用されるが
１通常ｐＨ＝５〜９の範囲にある。特に好ましくは温度
２０〜５０°ＣＩ）ｌ−１＝６〜８．５　である。前述
したような５−置換ヒダントインを不斉的に変換して生
成したＤ−α−アミノ酸類の単離は濃縮、中和。

イオン交換処理などの公知の方法を利用することにより
目的物であるＤ−α−アミノ酸を取得出来る。

（発明の作用及び効果） 本発明は、ハンセニーラ属の微生物を用いることにより
５−置換ヒダントインから容易にＤ−α−アミノ酸を取
得できるのでＤ−α−アミノ酸の製造に際し極めて有利
な方法である。

（実施例） 以下の例により本発明を具体的に説明するが本発明はこ
れらの例のみに限定されるものでない。

実施例−１ 表−２に示した培地を２５０−三角フラスコに２０１ｎ
ｔ入れ１２０°Ｃで１５分間殺菌し、ＤＬ−５−イソプ
ロピルヒダントインは別殺菌して混合した。

これに酵母ＹＭ培地で２８°Ｃ４０時間培養したハンセ
ニエラ・ポリモルファ（ＮＲＲＬ　Ｙ−２４２３）を１
白金耳液種し２８℃で２４時間培養した。

この培養液を遠心分離により菌体を採取し、培養液と同
量の殺菌された生理食塩水にて１回洗滌し菌体を集めた
。この菌体を表−３に示す５−置換ヒダントインのいず
れか一種を５り／ｌ含む０．１Ｍリン酸カリウムバッフ
ァ（ｐＨ＝７．５）に３０ｇ／ｌになるように添加し、
その５−を３６°Ｃ２０時間反応した。生成する各種ア
ミノ酸は前記の方法にて測定し、またこれらのアミノ酸
を分離・精製し旋光度の測定を行なった結果、全ての場
合生成するアミノ酸は０体であることを確認した。

結果は表−３に示す。

表−３ 実施例−２ 表−２に示す培地を２５０−三角フラスコに２０−入れ
１２０℃で１５分間殺菌し、ＤＬ−イソプロピルヒダン
トインは別殺菌して混合した。これに表−４に示す微生
物を酵母ＹＭ培地で２８℃４０時間培養し、これらの１
白金耳を接種し２８℃で２４時間培養した。これらの培
養液から菌体を遠心分離し、以下実施例−１と同様な操
作を行って菌体を集めた。この菌体な５−フェニルヒダ
ントインを５９／ｌ含む０．１　Ｍリン酸カリウムバッ
ガ（ｐＨ＝７．５）　　　−Ｋ３０ｇ／１ｌＶｃなるよ
うに添加しその５４を３６℃　２０時間反応した。反応
後も実施例−１と同様に分離・精製し分析した結果を表
−４に示す。

表−４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式▲数式、化学式、表等があります▼・・・（１） （式中Ｒはアルキル基、置換アルキル基、フェニル基ま
   たは置換フェニル） で表わされる５−置換ヒダントイン類にハンセニュラ（
   Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属に属する微生物の培養液、菌体
   又は菌体処理物を作用させてＤ−α−アミノ酸に変換さ
   せることを特徴とする一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（式中Ｒは式（１）
   に同じ）で表 わされるＤ−α−アミノ酸の製造方法。