JPH0380476B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野） 本発明はＤ−５−置換ヒダントイン類をＤ−α
−アミノ酸に変換する能力を有するハンセニユラ
（Hansenula）属に属する微生物を用いることに
よりＤ−α−アミノ酸を極めて有利に製造する方
法に関するものである。 （従来の技術とその問題点） Ｄ−α−アミノ酸の製造方の一つとして対応す
る５−置換ヒダントインを化学的に水解してDL
−α−アミノ酸を製造しこれを光学分割してＤ−
α−アミノ酸とする方法が知られている。しかし
この方法は特に光学分割の工程が煩雑でありその
収率も高くない。 また更に５−置換ヒダントインに微生物の培養
液菌体、菌体処理物又は菌体から抽出した酵素を
作用させて光学活性のＮ−カルバモイル−Ｄ−α
−アミノ酸を生成させた後化学的処理によりＤ−
α−アミノ酸とする方法が知られている。しかし
この方法も反応工程及び精製工程が煩雑である。 又、更に５−置換ヒダントインに微生物の培養
液、菌体、菌体処理物を作用させて直接にＤ−α
−アミノ酸とする方法も知られているが収率は高
くない。 （問題点を解決するための手段） 本発明者らは、この様な従来の製造法に対しよ
り効率のよい方法を見い出すべく研究した結果、
ハンセニユラ属に属する微生物にＤ−５−置換ヒ
ダントインをＤ−α−アミノ酸に変換する能力を
有することを見い出した。 しかし、５−置換ヒダントインに微生物を作用
させてＮ−カルバモイル−Ｄ−α−アミノ酸又は
Ｄ−α−アミノ酸に変換する方法はすでに公知で
ある。（特開昭51−139687、53−91189、54−
2398）しかし従来ハンセニユラ属に属する微生物
が５−置換ヒダントインをＤ−α−アミノ酸に変
換する能力を有することは知られていない。 この発明はこの知見に基いて更に研究した結果
完成されるに至つたものである。 すなわち本発明は 一般式 （式中 Ｒはアルキル基、置換アルキル基、アラ
ルキル基、置換アラルキル基、フエニル基、置換
フエニル基、フリル基、ピリジル基、チアゾリル
基、イミダゾリル基、またはインドリル基を示
す。）で表わされるＤ−５−置換ヒダントイン類
に５−置換ヒダントインをＤ−α−アミノ酸に変
換する能力を有するハンセニユラ・ポリモルフア
（Hansenula polymorpha）（FERM Ｐ−8013）
を作用せしめてＤ−α−アミノ酸に変換せしめる
ことを特徴とする 一般式

【式】（式中Ｒは式(1)に同 じ） で表わされるＤ−α−アミノ酸の製造方法に関す
るものである。 本発明の方法で使用する微生物は土壌から採
取、分離された酵母菌で、以下に示す菌学的性状
の所見よりハンセニユラ・ポリモルフアと同定し
た。 １ 形態 (1) 細胞の形状、大きさ：1.5〜３×２〜4μ、
卵形、白またはクリーム色、 (2) 胞子の形成…帽子形 ２ 生理学的性質 (1) 成育の範囲：温度42℃まで生育 (2) 無機窒素源：硝酸塩＋アンモニウム塩＋ (3) ビタミン要求性：＋ (4) 糖の発酵性：Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−ガラクトース ＋ マルトース − ラクトース − ラヒノース − シユークロース − (5) 糖類の資化性：Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−ガラクトース − Ｄ−リボース ＋ Ｄ−キシロース ＋ シユクロース ＋ マルトース ＋ メリビオース − ラクトース − エタノール ＋ メタノール ＋ グリセロール ＋ Ｄ−５−置換ヒダントインに本発明のハンセニ
ユラ・ポリモルフアを作用せしめる方法は、本微
生物の菌体または菌体の処理物を水溶液中で接触
せしめる方法である。本微生物の培養に用いられ
る培地は、通常資化しうる炭素源、窒素源および
微生物の生育に必要な無機塩栄養素を含有させる
通常の培地である。培養条件は好気的条件下に
て、PH＝４〜９、温度25〜45℃の適当な範囲に制
御しつつ行なえば望ましい。 本発明で用いられる微生物は自然界に存在する
野生株からＤ−５−置換ヒダントインをＤ−α−
アミノ酸に変換する能力の有無を調べることによ
つて分解、選択されたものである。このＤ−５−
置換ヒダントインをＤ−α−アミノ酸への変換す
る能力の検定方法としては例えば次の様な方法が
用いられる。検定微生物の培養液５mlを採取し、
遠心分離によつて集菌した後、この集菌菌体を同
容積の殺菌した生理食塩水で洗滌後２mlの0.5重
量％の濃度のＤ−イソプロピルヒダントインのリ
ン酸カリウムバツフア（0.1M濃度PH＝7.5）基質
液中に分散させて35℃24時間反応させる。ついで
反応液を10000rpmで10分間遠心分離して上澄液
を得て、その上澄液をペーパークロマトグラフ
（展開液Bu−OH：酢酸：水＝４：１：１）にて
分離後ニンヒドリン発色させ、発色部を切り取り
更に75％エタノール溶液５mlにて発色部を抽出
後、波長570mmで比色定量する。 上記のようにしてヒダントイン環をアミノ酸に
変換する能力を有すると認められた菌株につい
て、更に生成したアミノ酸を常法により単離、精
製した施光度を測定することにより検定した。 本発明で用いられる微生物であるハンセニユ
ラ・ポリモルフアは前記の検定に合格したもので
ある。 本発明に用いられる微生物であるハンセニユ
ラ・ポリモルフアは前記の検定に合格したもので
ある。 本発明に用いられる酵素反応基質とは各種Ｄ−
５−置換ヒダンドインで具体的に例示するとＤ−
５−メチルヒダントイン、Ｄ−５−イソプロピル
ヒダントイン、Ｄ−５−イソブチルヒダントイ
ン、Ｄ−５−secブチルヒダトイン、Ｄ−５−メ
チルチオエチルヒダントイン、Ｄ−５−フエニル
ヒダントイン、Ｄ−５−ベンジルヒダントイン、
Ｄ−５−インドリルメチルヒダントインなどがあ
る。酵素反応における反応基質の濃度は0.1〜10
重量％の濃度まで用いることが出来る。反応温度
は使用する微生物のＤ−α−アミノ酸への変換す
る能力を持つ酵素の至適温度が採用されるが、通
常20〜60℃の範囲にある。反応中のPHは使用する
微生物のＤ−α−アミノ酸への変換する能力を持
つ酵素の至適PHが採用されるが通常PH＝５〜９の
範囲にある。特に好ましくは温度20〜50℃、PH＝
６〜8.5である。前述したようなＤ−５−置換ヒ
ダントイン類を不斉的に変換して生成したＤ−α
−アミノ酸類の単離は濃縮、中和、イオン変換樹
脂処理などの公知の方法を利用することにより目
的物であるＤ−α−アミノ酸を取得出来る。 本発明の実施においては、技術常識に従い適宜
界面活性剤を併用することができる。 （発明の作用及び効果） 本発明は、Ｄ−５−置換ヒダントイン類をＤ−
α−アミノ酸に変換する能力を有するハンセニユ
ラ・ポリモルフアを用いることによりＤ−５−置
換ヒダントインから容易に高収率でＤ−α−アミ
ノ酸を取得できるので、Ｄ−α−アミノ酸類の製
造に際し極めて有利な方法である。 （実施例） 以下の例により本発明を具体的に説明するが本
発明はこれらの例のみに限定されるものではな
い。 実施例 １ 表−１に示した培地を250ml三角フラスコに20
ml入れ120℃で15分間殺菌し、DL−イソプロピル
ヒダントインは別殺菌して混合した。これに酵母
YM培地で28℃、40時間培養したハンセニユラ・
ポリモルフア（Hansenula polymorpha）
（FERM Ｐ−8013）（MT−40096）を１白金耳接
種し28℃で24時間培養した。 この培養液を遠心分離により菌体を採取し、培
養液と同量の殺菌された生理食塩水にて１回洗滌
し菌体を集めた。 この菌体を表−２に示すＤ−５−置換ヒダント
インのいずれか一種を５ｇ／含む0.1Mリン酸
カリウムバツフア（PH＝7.5）…終末５ml…に30
ｇ／になる様に添加し36℃、20時間反応した。
生成する各種アミノ酸は前記の方法にて測定しま
たこれらのアミノ酸を分離、精製し施光度の測定
を行なつた結果、生成するアミノ酸は全ての場合
Ｄ体であることを確認した。 結果は表−２に示す。

【表】

【表】

【表】

【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中 Ｒはアルキル基、置換アルキル基、アラ
   ルキル基、置換アラルキル基、フエニル基、置換
   フエニル基、フリル基、ピリジル基、チアゾリル
   基、イミダゾリル基またはインドリル基を示す。）
   で表わされるＤ−５−置換ヒダントイン類に５−
   置換ヒダントインをＤ−α−アミノ酸に変換する
   能力を有するハンセニユラ・ポリモルフア
   （Hansenula polymorpha）MT40096（FERM Ｐ
   −8013）を作用せしめてＤ−α−アミノ酸に変換
   せしめることを特徴とする一般式 【式】（式中Ｒは式(1)に同じ） で表されるＤ−α−アミノ酸の製造方法。