JPS6115697A - Ｌ−フエニルアラニンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は微生物を用いるし一フェニルアラニンの製造法
に関する。

従来の技術 従来、フェニルピルビン酸を基質とする酵素法によるし
一フェニルアラニンの製法としては、各種微生物菌体に
、フェニルピルビン酸とアミノ基供与体としての各種ア
ミノ酸類を作用せしめる方法（Ａｍ１ｎｏ　Ａｃ１ｄｓ
、第２巻、１８頁、１９６０年；特公昭３７−１０６７
２号公報、　Ａｍ１ｎｏ　Ａｃ１ｄｓ第１ｄｓ６１頁、
１９６２年；特公昭４５−２０５５６号公報）、コリネ
バクテリウム属細菌の菌体にフェニルピルビン酸とナイ
ロン環状□オリゴマー（特公昭４４−１’？’９９１号
公報）、ナイロン６加水分解物（特公昭４４−１７９９
２号公報）あるいはラクタム（特公昭４４−１７９９０
号公報）を作用せしめる方法が知られている。

発明が解決しようとする問題点 従来の方法においては、用いるアミノ供与体原料が高価
である上に、Ｌ−フェニルアラニンの収量もまだ満足す
べきものではない。常に優れたし−フェニルアラニンの
製造方法が求められている。

問題点を解決するだめの手段 本発明によると、フマール酸及びアンモニウムイオン又
は尿素の存在下、フェニルピルビン酸をＬ−フェニルア
ラニンに変換する能力を有する微生物を用いることによ
り著量のＬ−フェニルアラニンを得ることができる。

本発明に用いられる微生物としては、フマール酸及びア
ンモニウムイオン又は尿素の存在下に、フェニルピルビ
ン酸をＬ−フェニルアラニンに変換できる能力を有する
。

セラチア属、エッシェリヒア属、シュードモナス属、エ
ンテロバクタ−属、サルモネラ属、エルビニア属、プロ
テウス属、シトロバククー属又はパラコッカス属に属す
る微生物であれば、野生株。

変異株、細胞融合法あるいは遺伝子操作法その他の遺伝
的手法で誘導される組換え株等いずれも用いられ、具体
的には、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ
　ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ　）　　ＩΔＭ１２０５．−［
−ッシェリヒア・コリ（Ｂｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏ
ｌｉ　＞　Ａ　ＴＣＣロ３０３、シュードモナス・プチ
ダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａ）　ＮＲＲＬ
−Ｂ　−ロ０６４、エンテロバクタ−ｅりｏ　Ｔ＊　−
（Ｂｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ｃｌｏａｃａｅ）ＩＡＭ
１５２８．サルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉ＋＋＋Ｊｒｉｕｍ）　ＡＴＣＣ１
９５８５。

エルビニア・ヘルビコラ（Ｂｒｗｉｎｉａ　ｈｅｒｂｉ
ｃｏｌａ　）ＡＴＣＣ２１４３４，プロテウス・ミラビ
リス（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ　）−Ｉ　
Ｆ　０３８４９　、シトロバクタ−・フロインディ（Ｃ
ｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ　ｆｒｅｕｎｄｉｉ）ＡＴＣＣ６
７５０，パラコッカス・デニトリフィカンス（Ｐａｒａ
ｃｏｃｃｕｓ　ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ　）　Ａ　
Ｔ　ＣＣ１９３６７等があげられる。

これらの微生物を培地に培養して、Ｌ−フェニルアラニ
ンを得る培地としては、炭素源、窒素源。

無機塩などを含む培地であれば、天然培地１人工培地の
いずれでもよい。

炭素源としては、グルコース、シュークロース。

廃糖蜜などの糖類、グリセロール、ソルビトール。

マンニトール等の糖アルコール類、酢酸、−ｆ酸。

フマール酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸等の有機
酸類、メタノール、エタノール、プロパツール等のアル
コール類が使用される。窒素源としては、アンモニア水
、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニ
ウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウム等のアンモ
ニウム化合物。

尿素等の窒素化合物、グルタミン酸、アスパラギン酸、
メチオニン、グリシン、リジン、アルギニン１．オルニ
チン等のアミノ酸類、ペプトン、酵母エキス、カゼイン
加水分解物、脱脂大豆あるいはその消化物等の天然栄養
物が使用される。

無機物としては、リン酸第−カリウム、リン酸第二カリ
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、炭酸カルシウム
などを使用する。勿論、本発明に使用する微生物が生育
のために特定の栄養素を必要とする場合には、その栄養
素を適当量培地中に存在させなければならないが、これ
らの物質は窒素源として例示した天然物に含まれて添加
される場合もある。

フェニルピルビン酸、フマール酸及ヒアンモニウムイオ
ン又は尿素は前記培地に最初から加えられてもよいし、
又微生物の培養途中でくわえられてもよい。

フェニルピルビン酸およびフマール酸は、アンモニウム
塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルンウム塩等の各種
の塩として使用される。

アンモニウムイオンは、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、酢酸
アンモニウム、キ酸アンモニウム。

フマール酸アンモニウム、リンゴ酸アンモニウム等の塩
類として、あるいはアンモニア水あるいはアンモニアガ
スとして供給される。

培養は、温度２０〜４０℃、ｐＨ５〜８で１〜５日間行
う。かくして、培養液中にＬ−フェニルアラニンが生成
する。

次に、前記微生物の菌体を得る場合の培地組成及び培養
条件としては、前記組成の培地及び培養条件が用いられ
る。

かくして、得られる微生物菌体はそのまま反応に使用で
きるし、さらに該菌体を種々処理して得られる処理物を
反応に用いても良い。

微生物菌体としては、菌体そのもの又は菌体を含む培養
液が用いられる。

菌体処理物としては、菌体の機械的摩砕処理物。

超音波処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理物、酵素処理
物、乾燥処理物、界面活性剤処理物、菌体の蛋白質分画
、菌体及び菌体処理物の固定化物等が用いられる。

反応は水性液中、前記で得られる菌体もしくはソノ処理
物ヲ■フェニルピルビン酸、■フマール酸及び■アンモ
ニウムイオン又は尿素に作用することによって行われる
。

反応に使用するフェニルピルビン酸、フマール酸及びア
ンモニウムイオンとしては前記と同じものが用いられる
。

反応に使用するフェニルピルビン酸の濃度としては０．
０１〜１モル、フマール酸の濃度としては０．０１〜２
モル、アンモニウムイオンもしくは尿素の濃度としては
０．０１〜１０モルの範囲である。

これらの原料は、一括または間歇的に供給される。

作用条件としては、温度２０〜６０℃、好ましくは２５
〜４５℃、ｐＨ６〜１０、好ましくは７〜９で行う。

かくして、水性液中にＬ−フェニルアラニンが生成する
。

培養液もしくは水性液中からし一フェニルアラニンを回
収する方法としては、イオン交換樹脂法。

沈殿法等が用いられる。

以下に実施例を示す。

実施例１゜ グルコース０５％、酵母工千ス０．３％、粉末肉エキス
１．５％（ｐ　Ｈ７，Ｏ）の組成の培地１０ｍ１を含む
試験管に、第１表に示す微生物を１工−ゼ宛接種し、２
１Ｏｒｐｍの振盪条件、２８℃の温度条件下で１８時間
振盪培養する。

培養終了後、遠心分離により集菌し、菌体を凍結保存（
−２０℃）する。１日凍結保存後、１０ｍ１の０，８５
％食塩溶液を試験管に加え、融解後遠心、洗浄を行う。

得られた菌体を、下記組成の反応液１．５ｍｌに懸濁し
、４０℃、静置条件下で１８時間反応させたところ、各
々の微生物が第１表に示す濃度のし一フェニルアラニン
を生成した。

反応液の組成は次のとおり：β−フェニルピルビン酸ナ
トリウム１００ｍＭ、ピリドキサールリン酸２００４Ｍ
、）リスバッフ７１００ｍＭ（ｐＨ８，４）、フマル酸
アンモニウム２００ｍＭ０実施例２゜ プロテウス・ミラビリスＩＦＯ３８４９を使用し、反応
液の組成を下記のとおりに変えた他は実施例１と同様に
実施した結果反応液中に８．３　ｍｇ　／ｍ１のＬ−フ
ェニルアラニンが生成した。

反応液組成；β−フェニルピルビン酸ナトリウム１００
ｍＭ、ピリドキサールリン酸２００ｕＭ。

フマル酸ナトリウム１００ｍＭ、尿素１００ｍＭ。

トリスバッフｙ　　１００ｍＭ　（ｐＨ８，４）特許出
願（１０２）協和醗酵工業株式会社代表者　加　藤　幹
　夫

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 セラチア属、エッシェリヒア属、シュードモナス属、エ
   ンテロバクター属、サルモネラ属、エルビニア属、プロ
   テウス属、シトロバクター属又はパラコッカス属に属し
   、（１）フマール酸及び（２）アンモニウムイオン又は
   尿素の存在下フェニルピルビン酸をＬ−フェニルアラニ
   ンに変換する能力を有する微生物を Ａ、（イ）フェニルピルビン酸（ロ）フマール酸及び（
   ハ）アンモニウムイオン又は尿素の存在下に培地に培養
   することにより、又は Ｂ、培地に培養して得られる菌体もしくはその処理物及
   び前記（イ）、（ロ）及び（ハ）を含有する水性液中で
   反応させ、 培養液もしくは水性液中にＬ−フェニルアラニンを生成
   させこれを採取することを特徴とするＬ−フェニルアラ
   ニンの製造法。