JPS63146796A

JPS63146796A - Ｌ−ヒスチジンの製造法

Info

Publication number: JPS63146796A
Application number: JP29450086A
Authority: JP
Inventors: Kazumi Araki; 和美荒木; Shuichi Ishino; 石野　修一
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1986-12-10
Filing date: 1986-12-10
Publication date: 1988-06-18

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は酵素法によるＬ−ヒスチジンの製法に関する。

Ｌ−ヒスチジンは、医薬・食品などの産業分野で広く利
用されている。

従来の技術Ｌ−ヒスチジンの製造法としては、コリネバクテリウム
属、ブレビバクテリウム属、セラチアＬなどのＬ−ヒス
チジン生産変異株を用いる糖質からの直接発酵法による
製法が知られている（「アミノ酸発酵」相１）浩他編（
学会出版センター）、４２３頁参照）。

発明が解決しようきする問題および解決手段上記した従
来の方法ではまだまだ改善の必要があり、すぐれたし−
ヒスチジンの製造法の開発が望まれている。本発明者ら
は、化学合成によってえられるウロカニン酸とアンモニ
アから、酵素法によりＬ−ヒスチジンを生成する新たな
方法を開発した。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明はヒスチジンアンモニアリアーゼ生成能を有する
微生物菌体もしくはその処理物に、ウロカニン酸とアン
モニウム源を作用させて反応液中にＬ−ヒスチジンを生
成させ、これを採取することを特徴とするＬ−ヒスチジ
ンの製造法を提供する。

本発明で用いる微生物としては、ヒスチジンアンモニア
リアーゼ生成能を有し、ウロカニン酸およびアンモニウ
ム源とから、Ｌ−ヒスチジンを生成する能力を有するも
のであればいずれも使用できる。例えば、ブレビバクテ
リウム・アンモニアゲネスＡＴＣＣ６８７２、セラチア
・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｃｅｓｃｅ
ｎｓ）　ＩＡＭ　１１８４、クレブシェラ・オキシト力
（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｏｘｙｔｏｃａ）ＡＴＣＣ８
７２４、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ　）　ＡＴＣＣ
９４８、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ　ｐｕｔｉｄａ　）ＡＴＣＣ３１１７１、バチルス
・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ　）
　ＡＴＣＣ３３６８あるいはこれらから誘導された変異
株、細胞融合または遺伝子操作法その他の遺伝的手法で
誘導される組換え株などがいずれも用いられる。

これらの微生物を培養する培地としては、炭素源、窒素
源、無機塩などを含む培地であれば、天然培地、人工培
地のいずれでもよい。

炭素源としては、グルコース、フラクトース、シューク
ロース、マルトース、澱粉、澱粉加水分解物、廃糖蜜な
どの糖類、グリセローノペソルビトール、マンニトール
ナトの糖アルコール類、酢酸、ギ酸、フマール酸、リン
ゴ酸、クエン酸、グルコン酸などの有機酸類、メタノー
ル、エタノール、フロパノールなどのアルコール類が使
用できる。

窒素源としては、アンモニア水、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸アンモニウム
、リン酸アンモニウムなどのアンモニウム化合物、尿素
などの窒素化合物、グルタミン酸、アスパラギン酸、メ
チオニン、グリシン、リジン、アルギニン、オルニチン
、ヒスチジンなどのアミノ酸類、ペプトン、酵母エキス
、カゼイン加水分解物、脱脂大豆またはその消化物など
の天然栄養物が使用できる。

無機物としては、リン酸第−カリウム、リン酸第二カリ
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネンウｌ１、塩化
す）　ＩＪウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、炭酸カル
シウムなどが使用できる。

本発明に使用する微生物が生育のために特定の栄養素を
必要とする場合には、その栄養素を適量培地中に存在さ
せなければならないが、これらの物質は窒素源として例
示した天然物に含まれて添加される場合もある。

培養は、２０〜４０℃、ｐＨ５〜８で１〜５日間行う。

得られる微生物菌体はそのままでも反応に使用できるし
、さらに該菌体を種々処理して１尋られる処理物を反応
に用いてもよい。

菌体処理物としては、菌体の機械的摩砕物、超音波処理
物、凍結乾燥処理物、溶媒処理物、酵素処理物、界面活
性剤処理物、菌体の蛋白質分画、菌体および前記菌体処
理物の固定化物などが用いられる。

反応は、前記で得られる菌体またはその処理物を、ウロ
カニン酸およびアンモニウム源を含有する水溶液中で反
応させることによって行われる。

反応に使用するウロカニン酸はアンモニウム塩、ナトリ
ウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などの各種の塩とし
て用いることができる。

アンモニウム源としては、硫酸アンモニウム、リン酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、酢
酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム、フマール酸アンモ
ニウム、リンゴ酸アンモニウム、炭酸アンモニウムなど
の塩類として、またはアンモニア水もしくはアンモニア
ガス等が用いられる。

反応に使用するウロカニン酸の濃度は反応水溶液に対し
０．０１〜２モノベアンモニウムイオンの濃度は反応水
溶液に対し０．０１〜１０モルの範囲が好適である。こ
れらの原料は、一括または間歇的に供給される。

反応条件としては、温度２０〜６０℃、好ましくは２８
〜４５℃、ｐＨ６〜１０、好ましくは７〜９で、１〜５
０時間反応を行う。

かくして反応液中にＬ−ヒスチジンが生成する。反応液
からＬ−ヒスチジンを回収する方法としては、イオン交
換樹脂法、沈殿法など通常の方法が用いられる。

以下に実施例を示す。

実施例１グルコース２％、ペプトン２％、ＫＨ２Ｐ０゜０．１５
％、Ｋ２８　Ｐ　Ｏ−０，０５９６、Ｍｇ５Ｏ，・７８
２０　０．０５％、Ｆ　ｅ　Ｓ　０４　・７　Ｈ２Ｏ０
，００１％、Ｍ　ｎ　Ｓ○、・　７Ｈ２００，００１％
、β−アラニン０．０１％、パントテン酸・Ｃａ０．０
０１％、Ｌ−システィン・ＨＣｊＨ］、００２％、Ｌ−
ヒスチジン・ＨＣｆ　０．２％、ｆ：　ａ　ＣＯｓ２％
（ｐＨ７，２−ＮａＯＨで調整）の組成の培地３Ｑｍｌ
を含む３０　Ｑｍｌｍｌ用フラスコにブレビバクテリウ
ム・アンモニアゲネスＦＥＲＭＰ−２９０１（ウロカナ
ーゼ欠失株）を−エーゼ宛接種し、２ｔｏｒｐｍの振盪
条件下、２８℃の温度条件下で１８時間振盪培養した。

培養終了後、遠心分離により集菌し、菌体を凍結保存し
た（−２０℃）。−日凍結保存後、ｌ　Ｑｍｌの０．８
５％食塩溶液を試験管に加え、融解後３，０００ｒｐｍ
　、　１０分間遠心分離し、その沈殿を０．８％食塩水
で１回洗浄した。得られた菌体を、下記の組成の反応液
Ｉ　Ｑｍｌに懸濁し、３０℃で２４時間静置条件下で反
応させたところ１．２ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンが反
応液中に生成した。

反応液の組成は次のとおり：ウロカニン酸７．２ｍＭ、
７ン％ニア７５　ｍＭ、　２００　ｍＭ炭酸（ナトリウ
ム）緩衝液（ｐＨ１０，５）　、ポリオキシエチレンス
テアリルアミン１．６７ｎ／ｍ１０なお、Ｌ−ヒスチジ
ンであることの確言忍（ま、ｎ−ブタノール−酢酸−水
（＝５：２：２＞の溶媒系で展開した薄層クロマトグラ
ム上のＲｆ値、ポーリー反応陽性、ニンヒドリン反応陽
性であること、アミノ酸アナライザーでの分析、コリネ
バクテリウム・グルタミクムのヒスチジン要求性変異株
によるバイオアッセイによって行った。

実施例２種菌として、第１表に示す微生吻を用い、実施例１と同
様に実施した。その結果第１表に示すように、各々の場
合にウロカニン酸からＬ−ヒスチジンが生成した。

第　　　１　　　表

Claims

【特許請求の範囲】

ヒスチジンアンモニアリアーゼ生成能を有する微生物菌
体もしくはその処理物に、ウロカニン酸およびアンモニ
ウム源を作用させてＬ−ヒスチジンを生成させ、これを
採取することを特徴とするＬ−ヒスチジンの製造法。