JPS61199796A - Ｌ−チロシンの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は微生物を用いるＬ−チロシンの製法に関する。

従来の技術 従来、フェノールを主原料とする酵素法によるＬ−チロ
シンの製造法としては、フェノール、アンモニア及びピ
ルビン酸に、エルビニア属、シュー。トモナス属又はプ
ロテウス属に属する微生物（特公昭５３−１７６７６号
公報）又はエシェリヒア属又はシトロバクタ−属に属す
る微生物（Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　４
６巻、３７０頁、１９７２年；Ｃｈｅｍｉｃａｌ＾ｂｓ
ｔｒａｃｔ　５１００巻、１１９３２１ｄ　、　１９８
４年）の菌体を作用させる方法が知られている。

発明の目的 上述の微生物以外のクレブシェラ属に属する微生物を用
いてＬ−チロシンを製造する方法を提供する。

問題を解決するための手段 本発明によると、クレブシェラ属に属し、Ｌ−チロシン
生産能を有し、かつ■フェノール、（２）アンモニア源
、■２−ケトカルボン酸類および■アスパラギン酸又は
フマール酸からＬ−チロシンを生成する能力を有する微
生物を培地に培養して得れる菌体又はその処理物の存在
下に上記■、（２）。

■および■を水性液中で反応させＬ−チロシンを生成さ
せ、反応液からこれを採取することによりＬ−チロシン
を得ることができる。

本発明に用いる微生物としては、上記■、（２）。

■および■の成分からＬ−チロシンを生成する能力を有
するクレブシェラ属に属する微生物であれば、野性株、
変異株、細胞融合法・遺伝子操作法・形質転換法その他
の遺伝子手法で誘導される組換え株がいずれも用いられ
る。具体的には、クレブシエラ・ニューモニア（Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）ＪＡＭ　１１８
３があげられる。

この微生物の菌体を得るための生育培地としては、炭素
源、窒素源、無機物などを含む培地であれば、天然培地
、人工培地のいずれでもよい。

炭素源としては、グルコース、シュークロース、廃糖蜜
などの糖類、グリセロール１．ソルビトーノペマンニト
ール等の糖アルコール類、酢酸、キ酸、フマール酸、リ
ンゴ酸、クエン酸、コハク酸、グルコン酸等の有機酸類
、メタノール、エタノール、プロパツール等のアルコー
ル類が使用される。

窒素源としては、アンモニア水、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸アンモニウム
、燐酸アンモニウム等のアンモニウム化合物、尿素等の
窒素化合物、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、
グルタミン酸、アスパラギン酸、メチオニン、グリシン
、リジン、アルボ　ニン、オルニチン等のアミノ酸類、
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、カゼイン加水分解物
、脱脂大豆あるいはその消化物等の天然栄養物が使用さ
れる。

無機物としては、リン酸第１カリウム、リン酸第２カリ
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第１鉄、硫酸マンガン、炭酸カルシウム
等を使用する。勿論、本発明に使用する微生物が生育の
ために特定の栄養素を必要とする場合にはその栄養素を
適当量培地中に存在させなければならないが、これらの
物質は□窒素源として例示した天然物に含まれて添加さ
れる場合もある。

培養は、温度２０〜４０℃、ｐＨ５〜８で１〜８日間行
う。

かくして得られる微生物菌体は集菌されたもの又は培養
液としてそのまま反応に使用できるし、さらに種々処理
して得られる処理物を用いてもよい。

菌体処理物としては、菌体の機械的摩砕処理物、超音波
処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理物、酵素処理物、乾
燥処理物、界面活性剤処理物、菌体の蛋白質分画、菌体
もしくは菌体処理物の固定化物等が用いられる。

反応は水溶液中、前記で得られる菌体もしくはその処理
物をフェノール、アンモニア源、２−ケトカルボン酸及
びアスパラギン酸又はフマール酸の組合せに作用させる
ことによって行われる。

２−ケトカルボン酸類としては、ピルビン酸、フェニル
ピルビン酸、２−ケトイソカプロン酸、２−ケトイソ吉
草酸、ヒドロキシピルビン酸、イン、ドールピルビン酸
等が用いられる。

アンモニア源としては、アンモニアガス、アンモニア水
、各種アンニウム塩（例えば、硫酸アンモニウム、硝酸
アンモニウム）、尿素等が用いられる。

反応に使用するフェノールの濃度としては０，０１〜１
モル、アンモニア源の濃度としては０．１〜１０モル、
２−ケトカルボン酸類の濃度としては０１１〜１モル、
アスパラギン酸又はフマール酸の濃度としては０．０１
〜２モルの範囲である。これらの原料は一括又は間歇的
に供給される。

反応条件としては、温度２０〜６０℃、好ましくは２０
〜４５℃、ｐＨは４〜１０、好ましくは７〜９で、１〜
５０時間行う。

かくして水溶液中にＬ−チロシンが生成する。

水溶液中からＬ−チロシンを回収する方法としては、イ
オン交換樹脂法、沈殿法等が用いられる。

以下に実施例を示す。

実施例１゜ 酵母エキス１％、ペプトン０．５％、肉エキス０．５％
、Ｌ−チロシン０．２％、ＫＨ，ＰＯ４０，２％、Ｍｇ
５Ｏ，・７）１．０　、０．１％、　ＦｅＳ口、　−７
）１，０　、０．００１　　％、ピリドキシン０．０１
％、グリセロール０．６％、コハク酸０．５％、ＯＬ−
メチオニン０．１％、ＯＬ−アラニン０．２％、グリシ
ン０．０５％、Ｌ−フェニルアラニン０．１％（ｐ）１
７．２　　ＮａＯＨで中和）の組成の培地１０ｍ１を含
む試験管にクレブシェラ・ニューモニアＩ　Ａ　Ｍ１１
８３をｌエーゼ宛接種し、２１Ｏｒｐｍの振盪条件下、
２８℃の温度条件下で１８時間振盪培養した。

培養終了後、遠心分離により集菌し、菌体を凍結保存（
−２０℃）した。１日凍結保存後、１０ｍ１（７）０．
８５％食塩溶液を試験管に加え、下記組成の反応液１．
５＋ｎ＋に懸濁し、３０℃、静置条件下で１８時間反応
させたところ１．３ｍｇ／ｍｌのＬ−チロシンが生成し
た。

反応液の組成は次のとおり：β−フェニルピルビン酸ナ
トリウム１００ｍＭ、ピリドキサール燐酸２００μＭ、
）リスバッファー１０　（１ｍＭ　（ｐ）ｌ　８．４）
、フェノールＩＱＯｍＭ、酢酸アンモニウム２００ｍＭ
　。

フマール酸アンモニウム２００ｍＭ　０実施例２゜ 実施例１において、反応液組成中のフマール酸アンモニ
ウムに代えてアスパラギン酸アンモニウムを用い、かつ
反応液組成から酢酸アンモニウムを除いた他は実施例１
と同様に行い、１．５　ｍｇ　／ｍｌのＬ−チロシンを
得た。

発明の効果 本発明方法により収率よくＬ−チロシンを得ることがで
きる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. クレブシエラ属に属し、Ｌ−チロシン生産能を有し、か
   つ（１）フェノール、（２）アンモニア源、（３）２−
   ケトカルボン酸類および（４）アスパラギン酸又はフマ
   ール酸からＬ−チロシンを生成する能力を有する微生物
   を培地に培養して得られる菌体又はその処理物の存在下
   に上記（１）、（２）、（３）および（４）を水性液中
   で反応させてＬ−チロシンを生成させ、反応液からこれ
   を採取することを特徴とするＬ−チロシンの製法。