JPH0378999B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はDL−アスパラギン酸またはその塩に
微生物を作用せしめて生化学的にＤ−アスパラギ
ン酸を製造する方法に関するものである。

〔従来の技術〕

従来DL−アスパラギン酸に微生物を作用させ
てＤ−アスパラギン酸を得る方法として特公昭53
−1831号公報記載の方法がある。

この方法は微生物としてアクロモバクター属等
に属する微生物を利用しており、相当すぐれた方
法ではあるが、この方法はＬ−アラニンが同時に
できるので、反応生成物から同じアミノ酸である
Ｄ−アスパラギン酸を高純度で分離するのが容易
ではないという問題がある。

〔発明が解決しようとする問題〕

そこで本発明者らはDL−アスパラギン酸から
高純度のＤ−アスパラギン酸を得る方法の確立を
目的に鋭意研究した。

〔問題を解決するための手段〕

その結果、上記の目的はクリプトコツカス属お
よびキヤンデイダ属から選ばれる少なくとも一種
の微生物であつて、Ｌ−アスパラギン酸をオキシ
カルボン酸および脂肪族カルボン酸の少なくとも
１種から選ばれる有機酸に変換することができる
微生物またはその処理物の含有液と、DL−アス
パラギン酸及び／又はその塩を接触反応させ、次
いで前記微生物の作用を受けなかつたＤ−アスパ
ラギン酸を反応生成物から分離するという手段に
よつて達成できる。

なおDL−アスパラギン酸からＤ−アスパラギ
ン酸を取得する方法としては、有機合成的にDL
−アスパラギン酸を合成し、ラセミ体より、ジア
ステレオマー分割する方法（特公昭32−5419号公
報）、優先晶析する方法（特公昭54−25006号公
報）等により分割する方法が知られているが、反
応工程が複雑で、高価な光学分割剤を必要とする
等、工業的に有利な方法ではない。

以下本発明の構成を詳述し、次いで本発明の効
果を述べる。

本発明に用いる微生物はクリプトコツカス属ま
たはキヤンデイダ属に属する微生物である。より
具体的には、クリプトコツカス・ラウレンテイー
（Cryptococcus laurentii）FERM−P709、キヤ
ンデイダ・フミコーラ（Candida humicola）
FERM−P715等が好適にあげられる。

前述の如き微生物を培養するための培地には通
常の栄養培地を適宜使用すればよく、例えば炭素
源としてはグルコース、シユークロース、糖蜜等
の糖類、酢酸等の有機酸、エタノール、メタノー
ル等のアルコール類等、窒素源としては硫酸アン
モニウム、塩化アンモニウム等、有機栄養源とて
は酵母エキス、ペプトン、コーン・ステイープ・
リカー、肉エキス等、無機イオンとしてマグネシ
ウム、鉄、マンガン、カリウム、ナトリウム等の
イオンが適宜用いられる。培養は常法によればよ
く、例えば培地のPH６〜９とし、接種後20〜40℃
で１〜３日、好気的に培養する。

このようにして得られた培養物はＬ−アスパラ
ギン酸を有機酸に変換する能力を有し、その形態
は培養中、もしくは得られた培養後、分離菌体、
洗浄生菌体、凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、
物理的、化学的もしくは生化学的に破壊された菌
体、抽出液、粗精製物、精製物、又は菌体もしく
は精製処理物の固定化物等のいずれであつてもよ
い。

本発明で原料としてDL−アスパラギン酸また
はその塩が用いられるが、ここでいう塩とはアン
モニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、マグネ
シウム塩、カルシウム塩等が好適にあげられる。

本発明に言う有機酸とは、フマール酸、コハク
酸等の脂肪族カルボン酸やリンゴ酸等のオキシ酸
をいう。

反応はかくして得られた微生物に存在下、通常
PH５〜11、好ましくはPH６〜９の水性媒質中で行
なわれる。反応温度は15〜80℃、好ましくは30〜
50℃が適当である。反応時間は、酵素の活性、基
質濃度およびその種類、ならびに反応温度によつ
てかわるが、１〜100時間程度である。基質濃度
は0.1〜30％、好ましくは0.5〜20％程度である。
反応終了後、例えば直接晶析法、イオン交換樹脂
処理等により、Ｄ−アスパラギン酸を分離する。

〔発明の効果〕

本発明法は次の効果を有する。反応生成物から
Ｄ−アスパラギン酸を純度高く取得できる。ま
た、DL体からの分割法に比して簡単な操作で低
コストである。

〔実施例〕

実施例 １ グルコース２％、ポリペプトン0.5％、酵母エ
キス0.1％の組成の培地100mlを１容フラスコに
入れ、クリプトコツカス・ラウレンテイ
（FERM−P709）を接種し、30℃で24時間種培養
を行なつた。この種培養液20mlを、グルコース
0.5％、DL−α−アミノ−ε−カプロラクタム１
％、KH₂PO₄0.2％、MgSO₄・7H₂O0.05％、
MnCl₂・4H₂O0.02％、コーン・ステイープ・リ
カー0.2％、PH７の培地１に添加し、30℃で15
時間主培養する。この培養液を遠心分離し、集菌
する。培地30mlより得られる菌体をDL−アスパ
ラギン酸３ｇを含むPH6.4の水溶液100mlに添加
し、40℃で48時間反応を行なつた。反応終了後、
遠心除菌し上清を15mlまで減圧濃縮する。この濃
縮液をPH2.8に調整し、10℃にて３時間撹拌する、
析出した結晶をロ取し、冷水で洗浄することによ
りＤ−アスパラギン酸1.3ｇを得た。

〔α〕²⁵ _D＝−24.8゜（Ｃ＝２，6NHCl） 実施例 ２ 実施例１と同様にして培養したクリプトコツカ
ス・ラウレンテイ（FERM−P709）の培地30ml
より得られる菌体をDL−アスパラギン酸３ｇを
含むPH6.5の水溶液100mlに添加し、40℃で反応を
行なつた。さらに24.48時間目にDL−アスパラギ
ン酸を各々４ｇずつ添加し、その後24時間反応を
続けた。反応終了後、遠心除菌し上清を20mlまで
減圧濃縮する。この濃縮液をPH2.8に調整し、10
℃にて３時間撹拌する。析出した結晶をロ取、冷
水で洗浄することによりＤ−アスパラギン酸4.7
ｇを得た。〔α〕²⁵ _D＝−25.0゜（Ｃ＝２，6NHCl） 実施例 ３ 実施例１と同様にして培養したキヤンデイダ・
フミコーラ（FERM−P715）の培地50mlより得
られる菌体をDL−アスパラギン酸３ｇを含むPH
7.0の水溶液100mlに添加し、40℃で48時間反応を
行なつた。反応終了後、実施例１と同様に処理
し、Ｄ−アスパラギン酸1.3ｇを得た。〔α〕²⁵ _D＝
−24.5゜（Ｃ＝２，6NHCl）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ クリプトコツカス属およびキヤンデイダ属か
   ら選ばれる少なくとも一種の微生物であつて、Ｌ
   −アスパラギン酸をオキシカルボン酸及び脂肪族
   カルボン酸の少なくとも１種から選ばれる有機酸
   に変換することができる微生物またはその処理物
   の含有液と、DL−アスパラギ酸及び／又はその
   塩を接触反応させ、次いで前記微生物の作用を受
   けなかつたＤ−アスパラギン酸を反応生成物から
   分離することを特徴とするＤ−アスパラギン酸の
   製法。