JP2899106B2 - Ｄ―プロリンの製造法 - Google Patents
Ｄ―プロリンの製造法Info
- Publication number
- JP2899106B2 JP2899106B2 JP31092190A JP31092190A JP2899106B2 JP 2899106 B2 JP2899106 B2 JP 2899106B2 JP 31092190 A JP31092190 A JP 31092190A JP 31092190 A JP31092190 A JP 31092190A JP 2899106 B2 JP2899106 B2 JP 2899106B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- proline
- medium
- culture
- yes
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はＤ−プロリンの製造法に関する。
Ｄ−プロリンは医薬品および各種工業製品の合成中間
体として重要な化合物である。
体として重要な化合物である。
従来の技術 Ｄ−アミノ酸は、一般に有機合成化学的に製造された
DL−アミノ酸を光学分割する方法および化学合成的に安
価に得られる光学不活性な前駆物質を酵素により光学活
性な化合物に転換させる方法などが知られている（特公
昭41−22380号公報、特公昭54−2274号公報）。
DL−アミノ酸を光学分割する方法および化学合成的に安
価に得られる光学不活性な前駆物質を酵素により光学活
性な化合物に転換させる方法などが知られている（特公
昭41−22380号公報、特公昭54−2274号公報）。
Ｄ−プロリンの製造方法に関しては、プロテウス属に
属する微生物を用いてＬ−オルニチンよりＤ−プロリン
を製造する方法および光学活性酒石酸を用いるジアステ
レオアイソマー晶析法による光学活性プロリンの製法が
知られている（特公昭46−27354号公報、特公昭50−101
355号公報）が、前者では反応収率が低く、また後者で
は高価なＤ−（−）酒石酸が必要であり、工業的な手法
とは言い難い。
属する微生物を用いてＬ−オルニチンよりＤ−プロリン
を製造する方法および光学活性酒石酸を用いるジアステ
レオアイソマー晶析法による光学活性プロリンの製法が
知られている（特公昭46−27354号公報、特公昭50−101
355号公報）が、前者では反応収率が低く、また後者で
は高価なＤ−（−）酒石酸が必要であり、工業的な手法
とは言い難い。
一方、従来キャンジタ属またはトリコスポロン属に属
する微生物が有する、Ｌ−プロリンの分解活性を利用し
てDL−プロリンからＤ−プロリンを製造する方法は知ら
れていない。
する微生物が有する、Ｌ−プロリンの分解活性を利用し
てDL−プロリンからＤ−プロリンを製造する方法は知ら
れていない。
発明が解決しようとする課題 本発明は微生物が有するＬ−プロリンを立体選択的に
分解する作用を利用することにより、DL−プロリンから
光学純度の高いＤ−プロリンを工業的により効率よく安
価に製造する方法を提供することを目的としている。
分解する作用を利用することにより、DL−プロリンから
光学純度の高いＤ−プロリンを工業的により効率よく安
価に製造する方法を提供することを目的としている。
課題を解決するための手段 本発明はキャンジタ属またはトリコスポロン属に属
し、Ｌ−プロリンの分解活性を有する微生物の培養物、
菌体またはそれらの処理物を水性媒体中でDL−プロリン
に作用させＬ−プロリンを選択的に分解し、該水性媒体
よりＤ−プロリンを採取することを特徴とするＤ−プロ
リンの製造法を提供する。
し、Ｌ−プロリンの分解活性を有する微生物の培養物、
菌体またはそれらの処理物を水性媒体中でDL−プロリン
に作用させＬ−プロリンを選択的に分解し、該水性媒体
よりＤ−プロリンを採取することを特徴とするＤ−プロ
リンの製造法を提供する。
本発明で用いる微生物としては、キャンジタ属または
トリコスポロン属に属し、DL−プロリンからＬ−プロリ
ンを立体選択的に分解してＤ−プロリンを生成する能力
を有する微生物であればいずれでもよいが、例えばキャ
ンジタ・エスピー（Candida sp.）PRD−238（FERM BP−
3159）およびトリコスポロン・エスピー（Trichosporon
sp.）PRD−317（FERMBP−3160）があげられる。
トリコスポロン属に属し、DL−プロリンからＬ−プロリ
ンを立体選択的に分解してＤ−プロリンを生成する能力
を有する微生物であればいずれでもよいが、例えばキャ
ンジタ・エスピー（Candida sp.）PRD−238（FERM BP−
3159）およびトリコスポロン・エスピー（Trichosporon
sp.）PRD−317（FERMBP−3160）があげられる。
ギャンジタ・エスピーPRD−238およびトリコスポロン
・エスピーPRD−317は、自然界より新たに分離された微
生物である。
・エスピーPRD−317は、自然界より新たに分離された微
生物である。
キャンジタ・エスピーPRD−238の菌学的性質を以下に
述べる。
述べる。
（ａ） 各培地における生育状態 MY液体培地： 栄養細胞の大きさ:3〜４×５μｍ 形 状；楕円形 増殖の形式；多極出芽、真性菌糸あり MY観点培地： 栄養細胞の大きさ;4〜５×６〜７μｍ 形 状；楕円形 増殖の形式；多極出芽、真性菌糸あり バレイショ抽出液寒天培地によるスライド培養： 増殖の形式；真性菌糸あり （ｂ） 子嚢胞子の形成 有無：なし （マックレアリーズ酢酸寒天培地） （ｃ） 射出胞子の形成 有無：なし （MY寒天培地） （ｄ） 各生理的性質 最適生育条件： pH;5〜７ 温度;23〜28℃ 生育の範囲： pH;2.5〜9.5 温度;4〜31℃ 硝酸塩の同化：なし 脂肪の分解：あり 尿素の分解：あり ゼラチンの液化：あり 好浸透圧性または耐浸透圧性：あり 塩化ナトリウムの最適濃度;0〜３％ 塩化ナトリウムの最高濃度;15％ カロチノイドの生成；なし 顕著な有機酸の生成；なし デンプン様物質の生成；なし ビタミンの要求性；あり （ｅ） 各炭素源の同化性 Ｌ−アラビノース；なし Ｄ−キシロース；なし シュークロース；なし Ｄ−グルコース；あり マルトース；なし Ｄ−ガラクトース；なし セロビオース：なし ラクトース：なし トレハロース；なし ラフィノース；なし メレジトース；なし α−メチル−Ｄ−グリコシド；なし アドニット；なし イノシット；なし グリセリン；あり ２−ケト−Ｄ−グリコン酸塩；なし カダベリン；なし エリスリトール；あり （ｆ） 各炭素源の発酵性 Ｄ−グリコース；なし シュークロース；なし マルトース；なし Ｄ−ガラクトース；なし ラフィノース；なし ラクトース；なし 以上の菌学的性質を有する微生物について、クレーガ
ーバン リジ（Kreger−van Rij）編によるザ・イース
ト・タキソノミック・スタディー（The Yeast taxonomi
c study）Vol.3（1984年）の記載と照合し検索した結
果、本菌株はキャンジタ属（Candida）属に属する酵母
と同定し、本菌株をキャンジタ・エスピー（Candida s
p.）PRD−238と命名した。
ーバン リジ（Kreger−van Rij）編によるザ・イース
ト・タキソノミック・スタディー（The Yeast taxonomi
c study）Vol.3（1984年）の記載と照合し検索した結
果、本菌株はキャンジタ属（Candida）属に属する酵母
と同定し、本菌株をキャンジタ・エスピー（Candida s
p.）PRD−238と命名した。
本菌株は平成２年11月９日付で工業技術院微生物工業
技術研究所にFERM BP−3159として寄託されている。
技術研究所にFERM BP−3159として寄託されている。
トリコスポロン・エスピー−PRD−317の菌学的性質を
以下に述べる。
以下に述べる。
（ａ） 各培地における生育状態 MY液体培地： 栄養細胞の大きさ;5×８〜９μｍ 形 状；楕円形 増殖の形式；多極出芽、真性菌糸あり MY寒天培地： 栄養細胞の大きさ;4×５〜６μｍ 形 状；楕円形 増殖の形式；多極出芽、分節型、真性菌糸あり バレイショ抽出液寒天培地によるスライド培養： 増殖の形式；真性菌糸あり （ｂ） 子嚢胞子の形成 有無：なし （マックレアリーズ酢酸寒天培地） （ｃ） 射出胞子の形成 有無：なし （MY寒天培地） （ｄ） 各生理的性質 最適生育条件： pH;5〜6.5 温度;24〜33℃ 生育の範囲： pH;3.0〜9.5 温度;11〜36.5℃ 硝酸塩の同化：なし 脂肪の分解：あり 尿素の分解：あり ゼラチンの液化：なし 好浸透圧性または耐浸透圧性：あり 塩化ナトリウムの最適濃度;0％ 塩化ナトリウムの最高濃度;12％ カロチノイドの生成；なし 顕著な有機酸の生成；なし デンプン様物質の生成；なし ビタミンの要求性；なし （ｅ） 各炭素源の同化性 Ｌ−アラビノース；なし Ｄ−キシロース；あり シュークロース；あり Ｄ−グルコース；あり マルトース；あり Ｄ−ガラクトース；あり セロビオース：あり ラクトース：あり トレハロース；なし ラフィノース；なし メレジトース；あり α−メチル−Ｄ−グリコシド；あり アドニット；なし イノシット；なし グリセリン；なし ２−ケト−Ｄ−グリコン酸塩；あり クエン酸；なし エタノール；あり エリスリトール；なし （ｆ） 各炭素源の発酵性 Ｄ−グリコース；なし シュークロース；なし Ｄ−ガラクトース；なし ラフィノース；なし ラクトース；なし マルトース；なし 以上の菌学的性質を有する微生物について クレーガー バン リジ（Kreger−van Rij）編によ
るザ・イースト・タキソノミック・スタディー（The Ye
ast taxonomic study）Vol.3（1984年）の記載と照合し
検索した結果、本菌株はトリコスポロン（Trichosporo
n）属に属する酵母と同定し、本菌株をトリコスポロン
・エスピー（Trichosporon sp.）PRD−317と命名した。
るザ・イースト・タキソノミック・スタディー（The Ye
ast taxonomic study）Vol.3（1984年）の記載と照合し
検索した結果、本菌株はトリコスポロン（Trichosporo
n）属に属する酵母と同定し、本菌株をトリコスポロン
・エスピー（Trichosporon sp.）PRD−317と命名した。
本菌株は平成２年11月９日付で工業技術院微生物工業
技術研究所にFERM BP−3160として寄託されている。
技術研究所にFERM BP−3160として寄託されている。
本発明の微生物を培養する培地は、用いる微生物が資
化し得る炭素源、窒素源、無機物などを含有し、Ｌ−プ
ロリンを分解する能力を有する微生物の培養を効率的に
行なえる培地であれば、天然培地、合成培地のいずれで
も良い。
化し得る炭素源、窒素源、無機物などを含有し、Ｌ−プ
ロリンを分解する能力を有する微生物の培養を効率的に
行なえる培地であれば、天然培地、合成培地のいずれで
も良い。
炭素源としては、グリコース、フラクトース、シュー
クロースなどの炭水化物、およびこれらを含有する糖
蜜、デンプン加水分解物が用いられる。
クロースなどの炭水化物、およびこれらを含有する糖
蜜、デンプン加水分解物が用いられる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウ
ムなどの各種無機および有機アンモニウム塩類ならびに
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーン・スチープ・
リカー、カゼイン加水分解物、大豆粕加水分解物、各種
発酵菌体およびその消化物などの窒素含有有機物など種
々のものが用いられる。
酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウ
ムなどの各種無機および有機アンモニウム塩類ならびに
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーン・スチープ・
リカー、カゼイン加水分解物、大豆粕加水分解物、各種
発酵菌体およびその消化物などの窒素含有有機物など種
々のものが用いられる。
無機物としては、リン酸一水素カリウム、リン酸二水
素カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、
塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅お
よび炭酸カルシウムなどが用いられる。
素カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、
塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅お
よび炭酸カルシウムなどが用いられる。
培養は、振盪培養または深部通気撹拌培養などの好気
的条件下で行う。培養温度は15〜35℃、培養時間は通常
12〜72時間である。培養中pHは5.0〜8.0に保持する。pH
の調整は塩酸、硫酸などの無機酸あるいは酢酸などの有
機の際、炭酸カルシウムなどの塩、アンモニアなどのア
ルカリ溶液を用いて行う。
的条件下で行う。培養温度は15〜35℃、培養時間は通常
12〜72時間である。培養中pHは5.0〜8.0に保持する。pH
の調整は塩酸、硫酸などの無機酸あるいは酢酸などの有
機の際、炭酸カルシウムなどの塩、アンモニアなどのア
ルカリ溶液を用いて行う。
培養の際、高いＬ−プロリン分解活性を誘導させるた
めに、Ｌ−プロリンを培地に添加することは効果的であ
り、その添加量は培地に対して0.1〜5.0％程度が好まし
い。
めに、Ｌ−プロリンを培地に添加することは効果的であ
り、その添加量は培地に対して0.1〜5.0％程度が好まし
い。
このようにして培養した培養物、菌体またはそれらの
処理物が本発明のＬ−プロリンの分解反応に用いられ
る。
処理物が本発明のＬ−プロリンの分解反応に用いられ
る。
培養物、菌体の処理物としては、乾燥物、界面活性剤
処理物、酵素処理物、超音波処理物、溶媒処理物、固定
化物などがあげられる。
処理物、酵素処理物、超音波処理物、溶媒処理物、固定
化物などがあげられる。
水性媒体としては、水、リン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、
ホウ酸塩、クエン酸塩およびトリス塩酸などの緩衝液な
どがあげられる。
ホウ酸塩、クエン酸塩およびトリス塩酸などの緩衝液な
どがあげられる。
反応は通常15〜35℃でpH5.0〜8.0で12〜72時間通気撹
拌しながら行う。
拌しながら行う。
通気量は通常0.1〜3.0VVM、好ましくは0.5〜2.0VVMで
ある。通気量が少なすぎるとＬ−プロリンの資化速度が
遅くなる。反応液中の培養物、菌体またはそれらの処理
物の濃度は、Ｌ−プロリンの量および反応時間により適
宜決定すれば良いが、通常乾燥菌体として反応液当たり
5g/〜100g/である。
ある。通気量が少なすぎるとＬ−プロリンの資化速度が
遅くなる。反応液中の培養物、菌体またはそれらの処理
物の濃度は、Ｌ−プロリンの量および反応時間により適
宜決定すれば良いが、通常乾燥菌体として反応液当たり
5g/〜100g/である。
被分割物質であるＤ−およびＬ−プロリン混合物は、
Ｄ体およびＬ体が等量混合したものに限られず、いずれ
か一方の光学活性プロリンがその対掌体に対して当量以
上含まれているものでもよい。反応に用いるDL−プロリ
ンの濃度は、反応液当たり10g/〜600g/、好ましく
は10g/〜200g/である。DL−プロリン濃度が低いと
生産性が低下し、逆に濃度が高いと反応が阻害される。
Ｄ体およびＬ体が等量混合したものに限られず、いずれ
か一方の光学活性プロリンがその対掌体に対して当量以
上含まれているものでもよい。反応に用いるDL−プロリ
ンの濃度は、反応液当たり10g/〜600g/、好ましく
は10g/〜200g/である。DL−プロリン濃度が低いと
生産性が低下し、逆に濃度が高いと反応が阻害される。
DL−プロリンは始めから培養液に全量添加してもよい
が、初濃度を10g/〜50g/とし、残りのDL−プロリン
を分割添加すると反応阻害が軽減され有効である。
が、初濃度を10g/〜50g/とし、残りのDL−プロリン
を分割添加すると反応阻害が軽減され有効である。
本発明に用いるDL−プロリンは、ジャーナル・オブ・
オーガニック・ケミストリー〔Journal of Organic Che
mistry,48,843−846（1983）〕および特公昭57−123150
号公報に記載の方法で合成することができる。また、DL
−プロリンは、市販（シグマ社）されていて容易に入手
することができる。
オーガニック・ケミストリー〔Journal of Organic Che
mistry,48,843−846（1983）〕および特公昭57−123150
号公報に記載の方法で合成することができる。また、DL
−プロリンは、市販（シグマ社）されていて容易に入手
することができる。
反応が終了した時点で反応液を加熱あるいはpHを低下
させるなどの常法により処理し速やかに反応を停止させ
た後、反応液から目的物質であるＤ−プロリンを分離、
回収する。分離方法としては、イオン交換樹脂などを用
いるカラムクロマトグラフィーあるいは晶出法など通常
の分離方法が用いられる。
させるなどの常法により処理し速やかに反応を停止させ
た後、反応液から目的物質であるＤ−プロリンを分離、
回収する。分離方法としては、イオン交換樹脂などを用
いるカラムクロマトグラフィーあるいは晶出法など通常
の分離方法が用いられる。
以下、実施例により本発明を説明する。
実施例において、生成したＤ−プロリンの分析は下記
条件下で高速液体クロマトグラフィー（HPLC）により行
なう。
条件下で高速液体クロマトグラフィー（HPLC）により行
なう。
カラム:TSK−GEL ERCタイプ（東ソー社製） 移動層：アセトニトリル:0.5mM硫酸銅水溶液（1:9） 流 速:0.7ml/分 カラム温度:40℃ 検出UV:254nm 実施例1. ペプトン10g/、イーストエキス5g/および塩化ナ
トリウム5g/を含む培地（pH7.2）40mlを250ml容三角
フラスコに分注し、120℃、120分間オートクレーブにか
けて滅菌し種培養培地とした。この培地にキャンジタ・
エスピーPRD−238を一白金耳植菌し、30℃で24時間振盪
培養し、種培養液として用いた。
トリウム5g/を含む培地（pH7.2）40mlを250ml容三角
フラスコに分注し、120℃、120分間オートクレーブにか
けて滅菌し種培養培地とした。この培地にキャンジタ・
エスピーPRD−238を一白金耳植菌し、30℃で24時間振盪
培養し、種培養液として用いた。
一方、グルコース10g/、ペプトン10g/、肉エキス
5g/、リン酸二水素カリウム2g/、硫酸マグネシウム
0.5g/、硫酸第一鉄1mg/、硫酸マンガン1mg/およ
びＬ−プロリン10g/を含む培地（pH7.0）１を２
容量のミニジャーファーメンターに分注し、120℃、30
分間オートクレーブにかけて滅菌し主培養培地とした。
この培地に種培養液20mlを無菌的に接種し、30℃で24時
間通気撹拌培養（通気量1.0VVM）した。なお、培養中、
４規定アンモニア水により培地のpHを7.0±0.1に調整し
た。この主培養液１を遠心分離（10,000rpm,10分間）
し、生菌体39g（乾燥菌体重量8.6g）を得た。
5g/、リン酸二水素カリウム2g/、硫酸マグネシウム
0.5g/、硫酸第一鉄1mg/、硫酸マンガン1mg/およ
びＬ−プロリン10g/を含む培地（pH7.0）１を２
容量のミニジャーファーメンターに分注し、120℃、30
分間オートクレーブにかけて滅菌し主培養培地とした。
この培地に種培養液20mlを無菌的に接種し、30℃で24時
間通気撹拌培養（通気量1.0VVM）した。なお、培養中、
４規定アンモニア水により培地のpHを7.0±0.1に調整し
た。この主培養液１を遠心分離（10,000rpm,10分間）
し、生菌体39g（乾燥菌体重量8.6g）を得た。
DL−プロリン（シグマ社製）40gを含む25mMリン酸緩
衝液（pH7.0）１を２容量のミニジャーファーメン
ターに分注し、120℃、15分間オートクレーブにかけて
滅菌し、生菌体6.6g（乾燥菌体重量換算）加え、30℃で
48時間通気撹拌（通気量1.0VVM）して反応を行った。な
お、反応中、４規定硫酸により反応液のpHを7.0±0.1に
調整した。
衝液（pH7.0）１を２容量のミニジャーファーメン
ターに分注し、120℃、15分間オートクレーブにかけて
滅菌し、生菌体6.6g（乾燥菌体重量換算）加え、30℃で
48時間通気撹拌（通気量1.0VVM）して反応を行った。な
お、反応中、４規定硫酸により反応液のpHを7.0±0.1に
調整した。
反応終了後、反応液を遠心分離（10,000rpm,10分間）
して得られた上澄液をイオン交換樹脂ダイヤイオンSK−
1B（Ｈ型）（三菱化成社製）500mlに通塔し、Ｄ−プロ
リンを吸着させた。該樹脂を水洗後、１規定アンモニア
水でＤ−プロリンを溶出した。溶出液を減圧濃縮し、乾
固して、Ｄ−プロリンの粗結晶14gを得た。
して得られた上澄液をイオン交換樹脂ダイヤイオンSK−
1B（Ｈ型）（三菱化成社製）500mlに通塔し、Ｄ−プロ
リンを吸着させた。該樹脂を水洗後、１規定アンモニア
水でＤ−プロリンを溶出した。溶出液を減圧濃縮し、乾
固して、Ｄ−プロリンの粗結晶14gを得た。
得られた粗結晶14gを蒸留水に溶解し、活性炭7gを加
え脱色を行ない過して脱色液を得た。この脱色液
を濃縮後、冷却して析出した結晶を乾燥した結果、Ｄ−
プロリン6g（光学純度99.5ee％以上）を得た。
え脱色を行ない過して脱色液を得た。この脱色液
を濃縮後、冷却して析出した結晶を乾燥した結果、Ｄ−
プロリン6g（光学純度99.5ee％以上）を得た。
旋光度▲〔α〕20 D▼＝＋84.8゜（ｃ＝10,水） 実施例2. 粉末ブイヨン20g/、イーストエキス5g/および塩
化ナトリウム2.5g/を含む培地（pH7.2）40mlを250ml
用三角フラスコに分注し、120℃、20分間オートクレー
ブにかけて滅菌して種培養培地とした。この培地にトリ
コスポロン・エスピーPRD−317を一白金耳植菌し、30℃
で24時間振盪培養し、種培養液として用いた。
化ナトリウム2.5g/を含む培地（pH7.2）40mlを250ml
用三角フラスコに分注し、120℃、20分間オートクレー
ブにかけて滅菌して種培養培地とした。この培地にトリ
コスポロン・エスピーPRD−317を一白金耳植菌し、30℃
で24時間振盪培養し、種培養液として用いた。
主培養培地は実施例１と同じ培地を用い、この培地
に、種培養液20mlを無菌的に接種し、30℃で24時間通気
撹拌培養（通気量1.0VVM）した。なお、培養中、４規定
アンモニア水により培地のpHを7.0±0.1に調整した。こ
の主培養液１を遠心分離（10,000rpm,10分間）し、生
菌体30g（乾燥菌体重量6.3g）を得た。
に、種培養液20mlを無菌的に接種し、30℃で24時間通気
撹拌培養（通気量1.0VVM）した。なお、培養中、４規定
アンモニア水により培地のpHを7.0±0.1に調整した。こ
の主培養液１を遠心分離（10,000rpm,10分間）し、生
菌体30g（乾燥菌体重量6.3g）を得た。
DL−プロリン（シグマ社製）30gを含む25mMリン酸緩
衝液（pH7.0）１を２容量のミニジャーフォーメン
ターに分注し、120℃、15分間オートクレーブにかけて
滅菌し、生菌体6.3g（乾燥菌体重量換算）を加え、30℃
で24時間通気撹拌（通気量1.0VVM）して反応を行なっ
た。以下実施例１と同様の操作を行ない、Ｄ−プロリン
3g（光学純度99.5ee％以上）を得た。
衝液（pH7.0）１を２容量のミニジャーフォーメン
ターに分注し、120℃、15分間オートクレーブにかけて
滅菌し、生菌体6.3g（乾燥菌体重量換算）を加え、30℃
で24時間通気撹拌（通気量1.0VVM）して反応を行なっ
た。以下実施例１と同様の操作を行ない、Ｄ−プロリン
3g（光学純度99.5ee％以上）を得た。
旋光度▲〔α〕20 D▼＝＋84.7゜（ｃ＝10,水） 実施例3. ペプトン10g/、イーストエキス5g/、肉エキス7g/
、Ｌ−プロリン10g/および塩化ナトリウム3g/を
含む培地（pH7.0）40mlを250ml容三角フラスコに分注
し、120℃、20分間オートクレーブにかけて滅菌し種培
養培地とした。この培地にキャンジタ・リポリティカを
一白菌耳滅菌し、30℃で24時間振盪培養し、種培養液と
して用いた。
、Ｌ−プロリン10g/および塩化ナトリウム3g/を
含む培地（pH7.0）40mlを250ml容三角フラスコに分注
し、120℃、20分間オートクレーブにかけて滅菌し種培
養培地とした。この培地にキャンジタ・リポリティカを
一白菌耳滅菌し、30℃で24時間振盪培養し、種培養液と
して用いた。
一方、ペプトン10g/、イーストエキス5g/、肉エ
キス7g/、DL−プロリン25g/および塩化ナトリウム3
g/を含む培地（pH7.0）１を２容量のミニジャー
ファーメンターに分注し、120℃、30分間オートクレー
ブにかけて滅菌し主培養培地とした。この培地に種培養
液120mlを無菌的に接種し、30℃で24時間通気撹拌培養
（通気量1.0VVM）した。得られた培養液を遠心分離（1
0,000rpm,10分間）し、上澄液を以下実施例１と同様の
分離、回収操作を行ないＤ−プロリン2.2g（光学純度9
9.5ee％以上）を得た。
キス7g/、DL−プロリン25g/および塩化ナトリウム3
g/を含む培地（pH7.0）１を２容量のミニジャー
ファーメンターに分注し、120℃、30分間オートクレー
ブにかけて滅菌し主培養培地とした。この培地に種培養
液120mlを無菌的に接種し、30℃で24時間通気撹拌培養
（通気量1.0VVM）した。得られた培養液を遠心分離（1
0,000rpm,10分間）し、上澄液を以下実施例１と同様の
分離、回収操作を行ないＤ−プロリン2.2g（光学純度9
9.5ee％以上）を得た。
旋光度▲〔α〕20 D▼＝＋84.5゜（ｃ＝10,水） 発明の効果 本発明方法により、医薬品および各種工業部品の合成
中間体として重要なアミノ酸であるＤ−プロリンを安価
にかつ効率よく製造することができる。
中間体として重要なアミノ酸であるＤ−プロリンを安価
にかつ効率よく製造することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C21P 41/00 ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】キャンジダ属またはトリコスポロン属に属
し、Ｌ−プロリンの分解活性を有する微生物の培養物、
菌体またはそれらの処理物を水性媒体中で、DL−プロリ
ンに作用させ、Ｌ−プロリンを選択的に分解し、該水性
媒体よりＤ−プロリンを採取することを特徴とするＤ−
プロリンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31092190A JP2899106B2 (ja) | 1990-11-16 | 1990-11-16 | Ｄ―プロリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31092190A JP2899106B2 (ja) | 1990-11-16 | 1990-11-16 | Ｄ―プロリンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04183399A JPH04183399A (ja) | 1992-06-30 |
| JP2899106B2 true JP2899106B2 (ja) | 1999-06-02 |
Family
ID=18010992
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31092190A Expired - Lifetime JP2899106B2 (ja) | 1990-11-16 | 1990-11-16 | Ｄ―プロリンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2899106B2 (ja) |
-
1990
- 1990-11-16 JP JP31092190A patent/JP2899106B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04183399A (ja) | 1992-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0249188B1 (en) | Process for the production of L-2-amino-4-(hydroxymethyl-phosphinyl)-butyric acid | |
| US5166061A (en) | Process for the production of 4-halo-3-hydroxybutyronitrile with Corynebacterium or Microbacterium | |
| JP3834960B2 (ja) | Ｄ−アミノ酸の製造方法 | |
| JP2899106B2 (ja) | Ｄ―プロリンの製造法 | |
| JP3072670B2 (ja) | ガラクトオリゴ糖の製造方法 | |
| JPH09154589A (ja) | エリスリトールの製造方法 | |
| JPH022589B2 (ja) | ||
| JP3117790B2 (ja) | Ｌ−α−アミノアジピン酸の製造法 | |
| KR950009200B1 (ko) | D-알라닌의 제조방법 | |
| JPH01277499A (ja) | Ｌ−α−アミノ酸の製造法 | |
| JPH1042886A (ja) | 微生物によるβ−アラニンの製造法 | |
| JP2000201690A (ja) | キシリト―ルの製造法 | |
| JP2899071B2 (ja) | Ｌ―α―アラニンの製造法 | |
| WO1996031616A1 (fr) | Procede de production d'acide l-2-aminoadipique | |
| JPS58877B2 (ja) | ｌ↓−コロナミン酸の製法 | |
| JPS615793A (ja) | Ｄ−アスパラギン酸の製法 | |
| JPH01265896A (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造法 | |
| JPH0440996B2 (ja) | ||
| JPH07250694A (ja) | Ｌ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−酪酸の製法 | |
| JPS6248395A (ja) | Ｌ−トリプトフアンの製造法 | |
| JPH04267886A (ja) | βーグルコオリゴ糖の製造方法 | |
| JPS6363377A (ja) | シユウドモナス属ｎｓ３０３菌及びｌ−アミノ酸の製法 | |
| JPS6219093A (ja) | Ｌ−フエニルアラニンの製造方法 | |
| JPH01215297A (ja) | Ｌ−α−アミノ酸の製造法 | |
| JPS62201589A (ja) | ピルビン酸の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 9 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080312 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090312 Year of fee payment: 10 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090312 Year of fee payment: 10 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090312 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100312 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110312 Year of fee payment: 12 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 12 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110312 |