JPS61141893A - Ｌ−フエニルアラニンの製造法 - Google Patents
Ｌ−フエニルアラニンの製造法Info
- Publication number
- JPS61141893A JPS61141893A JP26585884A JP26585884A JPS61141893A JP S61141893 A JPS61141893 A JP S61141893A JP 26585884 A JP26585884 A JP 26585884A JP 26585884 A JP26585884 A JP 26585884A JP S61141893 A JPS61141893 A JP S61141893A
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- Japan
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- phenylalanine
- acid
- ammonium
- fumaric acid
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は微生物を用いるし一フェニルアラニンの製造法
に関する。
に関する。
従来の技術
従来、フェニルピルビン酸を基質とする酵素法によるし
一フェニルアラニンの製法としては、各種微生物菌体に
、フェニルピルビン酸とアミノ基供与体としての各種ア
ミノ酸類を作用せしめる方法（Ａｍｉｎｏ Ａｃ１ｄｓ
、 第２巻、１８頁、 １９６０年；特公昭３７−１
０６７２号公報；＾ａ＋ｉｎｏ＾ｃｉｄｓ、第５巻。
一フェニルアラニンの製法としては、各種微生物菌体に
、フェニルピルビン酸とアミノ基供与体としての各種ア
ミノ酸類を作用せしめる方法（Ａｍｉｎｏ Ａｃ１ｄｓ
、 第２巻、１８頁、 １９６０年；特公昭３７−１
０６７２号公報；＾ａ＋ｉｎｏ＾ｃｉｄｓ、第５巻。
６１頁、 １９６２年； 特公昭４５−２０５５６号公
報）、コリネバクテリウム属ａｍの菌体にフェニルピル
ビン酸とナイロン環状オリゴマー（特公昭４４−１７９
９１号公報）、ナイロン６加水分解物（特公昭４４−１
７９９２号公報）あるいはうｃＩ数ム（特公昭４４−１
７９９０号公報）を作用せしめる方法が知られている。
報）、コリネバクテリウム属ａｍの菌体にフェニルピル
ビン酸とナイロン環状オリゴマー（特公昭４４−１７９
９１号公報）、ナイロン６加水分解物（特公昭４４−１
７９９２号公報）あるいはうｃＩ数ム（特公昭４４−１
７９９０号公報）を作用せしめる方法が知られている。
発明が解決しようとする問題点
従来の方法においては、用いるアミノ基供与体原料が高
価である上に、Ｌ−フェニルアラニンの収量もまだ潰延
すべきものではない。常に優れたし一フェニルアラニン
の製造方法が求められている。
価である上に、Ｌ−フェニルアラニンの収量もまだ潰延
すべきものではない。常に優れたし一フェニルアラニン
の製造方法が求められている。
間離を解決するための 段
本発明によると、フマール酸及びアンモニウムイオン又
は尿素の存在下、フェニルピルビン酸をＬ−フェニルア
ラニンに変換する能力を有すφ微生物を用いるこ゛とに
より著量のＬ−フェニルアラニンを得ることができる。
は尿素の存在下、フェニルピルビン酸をＬ−フェニルア
ラニンに変換する能力を有すφ微生物を用いるこ゛とに
より著量のＬ−フェニルアラニンを得ることができる。
本発明に用いられる微生物としては、フマール酸及びア
ンモニウムイオン又は尿素の存在下にフェニルピルビン
酸をＬ−フェニルアラニア １：変換する能力を有する
アスロバクター属、バチルス属、ブレビバクテリウム属
、コリネバクテリウム属、゛フラボバクテリウム属、ク
レブシェラ属、クルイペラ属又はミクロコツカス属に属
する微生物であれば、野生株、変異株、細胞融合法ある
いは遺伝子操作法その他の遺伝的手法で誘導される組換
え株等いずれも用い、られ、具体的には、アースロバク
ター・グロビホルミス（＾ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇ
ｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ）ＡＴＣＣ８０１０、バチルス・
ス７エリカｘ （Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕ
ｓ）ＡＴＣＣ１０２０８、ブレビバクテリウム・ラクト
７ ｇ ルメンタム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
Ｉａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＡＴＣＣ１３６５５、
コリネバクテリウム・ハイドロヵーポクラスタム（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｃ
ｌａｓｔｕｍ）Ａ丁ＣＣｌ３１０８、フラボバクテリウ
ム・スアベオレンス（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
５ｕａｎｅｏｌｅｎｓ）ＡＴＣＣ９５８、タレブシエラ
・オキシト力（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ
）ＡＴＣＣ８７２４、クルイヘラ・クリオレセンス（に
１ｕ７Ｖｅｒ＆ｃｒｙｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＡＴＣＣ１４
２３７、ミクロコツカス・ルテウス（’１ｉｃｒｏｃｏ
ｃｃｕｓ １ｕｔｅｕ８）ＡＴＣＣ１０２４Ｑ等があげ
られる０ これらの微生物を培地に培養して、Ｌ−フェニルアラニ
ンを得る培地としては、炭素源、窒素源、無機塩などを
含む培地であれば、天然培地、人工培地のいずれでもよ
い。
ンモニウムイオン又は尿素の存在下にフェニルピルビン
酸をＬ−フェニルアラニア １：変換する能力を有する
アスロバクター属、バチルス属、ブレビバクテリウム属
、コリネバクテリウム属、゛フラボバクテリウム属、ク
レブシェラ属、クルイペラ属又はミクロコツカス属に属
する微生物であれば、野生株、変異株、細胞融合法ある
いは遺伝子操作法その他の遺伝的手法で誘導される組換
え株等いずれも用い、られ、具体的には、アースロバク
ター・グロビホルミス（＾ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇ
ｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ）ＡＴＣＣ８０１０、バチルス・
ス７エリカｘ （Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕ
ｓ）ＡＴＣＣ１０２０８、ブレビバクテリウム・ラクト
７ ｇ ルメンタム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
Ｉａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＡＴＣＣ１３６５５、
コリネバクテリウム・ハイドロヵーポクラスタム（Ｃｏ
ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｃ
ｌａｓｔｕｍ）Ａ丁ＣＣｌ３１０８、フラボバクテリウ
ム・スアベオレンス（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
５ｕａｎｅｏｌｅｎｓ）ＡＴＣＣ９５８、タレブシエラ
・オキシト力（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ
）ＡＴＣＣ８７２４、クルイヘラ・クリオレセンス（に
１ｕ７Ｖｅｒ＆ｃｒｙｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＡＴＣＣ１４
２３７、ミクロコツカス・ルテウス（’１ｉｃｒｏｃｏ
ｃｃｕｓ １ｕｔｅｕ８）ＡＴＣＣ１０２４Ｑ等があげ
られる０ これらの微生物を培地に培養して、Ｌ−フェニルアラニ
ンを得る培地としては、炭素源、窒素源、無機塩などを
含む培地であれば、天然培地、人工培地のいずれでもよ
い。
炭！１としては、グルコース、フラクトース、シューク
ロース、マルトース、澱粉、廃糖蜜などの糖類、グリセ
ロール、ソルビトール、マンニトール等の晴アルコール
類、酢酸、ギ酸、フマール酸、リンゴ酸、クエン酸、グ
ルコン酸等の有機酸類メタノール、エタノール、プロパ
ツール等のアルコール類が使用される。
ロース、マルトース、澱粉、廃糖蜜などの糖類、グリセ
ロール、ソルビトール、マンニトール等の晴アルコール
類、酢酸、ギ酸、フマール酸、リンゴ酸、クエン酸、グ
ルコン酸等の有機酸類メタノール、エタノール、プロパ
ツール等のアルコール類が使用される。
窒素源としては、アンモニア水、塩化アンモニ１、硫［
２アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸アンモニウム
、燐酸アンモニウム等のアンモニウム化合物、尿素等の
窒素化合物、グルタミン酸、′アスパラギン酸、メチオ
ニン、グリシン、リジン、アルギニン、オルニチン等の
アミノ酸類、ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水分解
物、脱脂大豆あるいはその消化物等の天然栄養物が使用
される。
２アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸アンモニウム
、燐酸アンモニウム等のアンモニウム化合物、尿素等の
窒素化合物、グルタミン酸、′アスパラギン酸、メチオ
ニン、グリシン、リジン、アルギニン、オルニチン等の
アミノ酸類、ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水分解
物、脱脂大豆あるいはその消化物等の天然栄養物が使用
される。
無機物としては、リン酸第−カリウム、リン酸第二カリ
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、炭酸カルシウム
等が使用される。本発明に使用する微生物が生育のため
に特定の栄養素を必要とする場合には、その栄養素を適
量培地中に存在させなければならないが、これらの物質
は窒素源として例示した天然物に含まれて添加される場
合もある。
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、炭酸カルシウム
等が使用される。本発明に使用する微生物が生育のため
に特定の栄養素を必要とする場合には、その栄養素を適
量培地中に存在させなければならないが、これらの物質
は窒素源として例示した天然物に含まれて添加される場
合もある。
フェニルピルビン酸、フマール酸及びアンモニウムイオ
ン又は尿素は前記培地に最初から加えられてもよいし、
又微生物の培養途中で加えられてもよい。
ン又は尿素は前記培地に最初から加えられてもよいし、
又微生物の培養途中で加えられてもよい。
フェニルピルビン酸およびフマール酸は、アンモニウム
塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等の各種
の塩として使用される。
塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等の各種
の塩として使用される。
アンモニウムイオンは、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、酢酸
アンモニウム、ギ酸アンモニウム、フマール酸アンモニ
ウム、リンゴ酸アンモニウム等の塩類として、あるいは
アンモニア水あるいはアンモニアガスとして供給される
。
モニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、酢酸
アンモニウム、ギ酸アンモニウム、フマール酸アンモニ
ウム、リンゴ酸アンモニウム等の塩類として、あるいは
アンモニア水あるいはアンモニアガスとして供給される
。
培養は、温度２０〜４０℃、ｐＨ５〜８で１〜５日間行
う。かくして、培養液中にＬ−フェニルアラニンが生成
する。
う。かくして、培養液中にＬ−フェニルアラニンが生成
する。
一次に、前記微生物の菌体を得る場合の培地組成及び培
養条件としては、前記組成の培地及び培養条件が用いら
れる。
養条件としては、前記組成の培地及び培養条件が用いら
れる。
かくして得られる微生物菌体はそのまま反応に使用でき
るし、さらに該菌体を種々処理して得られる処理物を反
応に用いてもよい。
るし、さらに該菌体を種々処理して得られる処理物を反
応に用いてもよい。
微生物図体としては、菌体の機械的摩砕処理物、超音波
処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理物、酵素処理物、乾
燥処理物、界面活性剤処理物、菌体の蛋白質分画、菌体
及び菌体処理物の固定化物等が用いられる。
処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理物、酵素処理物、乾
燥処理物、界面活性剤処理物、菌体の蛋白質分画、菌体
及び菌体処理物の固定化物等が用いられる。
反応は水性液中、前記で得られる菌体もしくはその処理
物を■フェニルピルビン酸、■フマール酸及び■アンモ
ニウムイオン又は尿素に使用することによって行われる
。
物を■フェニルピルビン酸、■フマール酸及び■アンモ
ニウムイオン又は尿素に使用することによって行われる
。
反応に使用するフェニルピルビン酸、フマール酸及びア
ンモニウムイオンとしては前記と同じものが用いられる
。
ンモニウムイオンとしては前記と同じものが用いられる
。
反応に使用するフェニルピルビン酸の濃度としては、０
．０１〜１モル、フマール酸の濃度としては０．０１〜
２モル、アンモニウムイオンもしくは尿素の濃度として
は０．０１〜１０モルの範囲である。
．０１〜１モル、フマール酸の濃度としては０．０１〜
２モル、アンモニウムイオンもしくは尿素の濃度として
は０．０１〜１０モルの範囲である。
これらの原料は、一括または間歇的に供給される。
作用条件としては、温度２０〜６０℃、好ましくは２５
〜４５℃、ｐＨ６〜ｌＯ１好ましくは７〜９で、ｌＯＸ
〜４８時間行う。
〜４５℃、ｐＨ６〜ｌＯ１好ましくは７〜９で、ｌＯＸ
〜４８時間行う。
カくシて、水性液中ｌコヒーフェニルアラニンが生成す
る。
る。
培養液もしくは水性液中かりＬ−フェニルアラニンを回
収する方法としては、イオン交換樹脂法、沈殿法等が用
いられる。
収する方法としては、イオン交換樹脂法、沈殿法等が用
いられる。
以下に実施例を示す。
実施例１゜
グルコース０．５％、酵母エキス０．３％、粉末肉二キ
ス１，５％の組成の培地（ｐ Ｈ７，０） ｌ Ｏｍｌ
を含む試験管に、第１表に示す微生物をｌエーゼ宛接種
し、２１０ｒｐｍの振盪条件、２８℃の温度条件下で１
８時間振動培養する。
ス１，５％の組成の培地（ｐ Ｈ７，０） ｌ Ｏｍｌ
を含む試験管に、第１表に示す微生物をｌエーゼ宛接種
し、２１０ｒｐｍの振盪条件、２８℃の温度条件下で１
８時間振動培養する。
培養終了後、遠心分離により集菌し、菌体を凍結保存（
−２０℃）する。１日凍結保存後、１０ｍ１の０．８５
％食塩溶液を試験管に加え、融解後、遠心及び洗浄を行
う。帰られた菌体を、下記組成の反応液１．５ｍＭにＩ
！ｌ！濁し、４０℃の静置条件下で、１８時間反応させ
たところ、各々の微生物が第１表に示す濃度のし一フェ
ニルアラニンを生成した。
−２０℃）する。１日凍結保存後、１０ｍ１の０．８５
％食塩溶液を試験管に加え、融解後、遠心及び洗浄を行
う。帰られた菌体を、下記組成の反応液１．５ｍＭにＩ
！ｌ！濁し、４０℃の静置条件下で、１８時間反応させ
たところ、各々の微生物が第１表に示す濃度のし一フェ
ニルアラニンを生成した。
反応液の組成は次のとおり；β−フェニルピルビン酸ナ
トリウム１００ｍＭ、ピリドキサールリン酸２００／Ｊ
Ｍ、）リスバフ７７−１００ｍＭ（ｐＨ８，４）、フマ
ール酸アンモニウム２００ｍＭ。
トリウム１００ｍＭ、ピリドキサールリン酸２００／Ｊ
Ｍ、）リスバフ７７−１００ｍＭ（ｐＨ８，４）、フマ
ール酸アンモニウム２００ｍＭ。
′！Ｊ１表
実施例２゜
クレブシェラ・オキシト力ＡＴＣＣ８７２４を使用し、
反応液の組成を下記の如く変えた他は実施例１と同様に
行った結果反応液中に３．５ ｍｇ ７ｍＭのし一フェ
ニルアラニンが生成した。
反応液の組成を下記の如く変えた他は実施例１と同様に
行った結果反応液中に３．５ ｍｇ ７ｍＭのし一フェ
ニルアラニンが生成した。
反応液組成：β−フェニルピルビン酸す） ＩＪウム１
００ｍＭ、ピリドキサールリン酸２００μＭ１フマール
酸ナトリウム１００ｍＭ、尿素１００ｄ。
００ｍＭ、ピリドキサールリン酸２００μＭ１フマール
酸ナトリウム１００ｍＭ、尿素１００ｄ。
トリスバッフｙ−１００ｍＭ （ｐＨ８，４＞発明の効
果 本発明方法により著量のＬ−フェニルアラニンを得るこ
とができる。
果 本発明方法により著量のＬ−フェニルアラニンを得るこ
とができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 アースロバクター属、バチルス属、ブレビバクテリウム
属、コリネバクテリウム属、フラボバクテリウム属、ク
レブシエラ属、クルイペラ属又はミクロコッカス属に属
し、（１）フマール酸及び（２）アンモニウムイオン又
は尿素の存在下フェニルピルビン酸をＬ−フェニルアラ
ニンに変換する能力を有する微生物を、 Ａ、（イ）フェニルピルビン酸（ロ）フマール酸及び（
ハ）アンモニウムイオン又は尿素の存在下に培地に培養
することにより、又は Ｂ、培地に培養して得られる菌体もしくはその処理物及
び前記（イ）、（ロ）及び（ハ）を含有する水性液中で
反応させ、 培養液もしくは水性液中にＬ−フェニルアラニンを生成
させこれを採取することを特徴とするＬ−フェニルアラ
ニンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26585884A JPS61141893A (ja) | 1984-12-17 | 1984-12-17 | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26585884A JPS61141893A (ja) | 1984-12-17 | 1984-12-17 | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61141893A true JPS61141893A (ja) | 1986-06-28 |
| JPH055478B2 JPH055478B2 (ja) | 1993-01-22 |
Family
ID=17423060
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26585884A Granted JPS61141893A (ja) | 1984-12-17 | 1984-12-17 | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61141893A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0151488A2 (en) * | 1984-02-08 | 1985-08-14 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing L-phenylalanine |
-
1984
- 1984-12-17 JP JP26585884A patent/JPS61141893A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0151488A2 (en) * | 1984-02-08 | 1985-08-14 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing L-phenylalanine |
| US4783403A (en) * | 1984-02-08 | 1988-11-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing l-phenylalanine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH055478B2 (ja) | 1993-01-22 |
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