JPS6112294A - ２−（置換フエニル）プロピオン酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は２−（置換フェニル）プロピオン酸の製造方法
に関し、詳しくは２−（置換フェニル）−プロピオン酸
を１−（置換フェニル）−１−フェニルエタンより微生
物的に製造する方法に関する。

［従来の技術］ ２−（置換フェニル）プロピオン酸は、ヒトや動物に対
して消炎作用、鎮痛作用を有し、なかでも２−（４−イ
ソブチルフェニル）プロピオン酸は優れた抗炎症剤とし
て汎用されている。従来、この物質の製造法に関しては
化学合成による方法が知られているに過ぎない。化学的
合成法としては、例えば特公昭４０−７４９１号、特公
昭４７−１８１０５号、特開昭５０−４０４０号に開示
されるほか、種々の方法か知られているが、これらの方
法は一般に工程か長く、操作も繁雑で必ずしら高定でき
るものではない。

例えば、比較的工程の短い特開昭５０−４０４０号の方
法は次の工程による。

１ｓｏＢｕ　−（Ｑ＋−ＣＩＩＣＯＯＩＩ　　　　　（
Ｒｏｌｌ、　Ｃｌｌ３−　、　Ｃ２１１５−）］１ ［発明が解決しよ・うとする問題点］ 本発明の特徴は、従来の化学合成法におζジる工程の繁
雑さを改善４−べく、化学合成法によらない方法を提案
することにある。

介−ヂ０２■暖 ［問題点を解決するための手段］ 本発明は、化学合成法に代わる手段上して特定の菌を利
用する方法であり、】−（置換フェニル９）−Ｎ−フェ
ニルエタンを資化し、２−（置換フェニル）プロピオン
酸を生産する菌を用いる。即ち、本発明は、１−（置換
フェニル）−１−フェニルエタンを資化し、２〜（置換
フェニル）プロピオン酸を生産する能力を有するシュー
ドモナス属に属する菌を目的物と同し置換フェニル基を
有する１〜（置換フェニル）−１−フェニルエタンを添
加した培地に接種して培養し、培養物から２−（置換フ
ェニル）プロピオン酸を採取する方法である。′本発明
者等は、１−（置換フェニル）−１−フェニルエタンの
資化性菌を検索した結果、福島県いわき重両の土壌より
新たに分離した細菌が前記化合物を酸化して２−（置換
フェニル）プロピオン酸を生産することを見出し、この
微生物変換を利用することにより、従来知られている化
学合成法に比べ、少ない工程数で２−（置換フェニル）
プロピオン酸を得る新規な製造方法を完成させたもので
ある。

新たに分離された前記細菌は、後述するその菌学的性質
をもとにしてＢｅｒｇｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄ
ｅｔｅｒ−ｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ、第８版及びＴｈｅ　Ｐｒｏｋａｒｙ−ｏｔｅｓを検
索した結果、シュードモナス属に属することが判明した
。このものは公知の菌種と比較した場合に１−（置換フ
ェニル）−１−フェニルエタンを資化する点で相異があ
り、新菌種と断定し、シュードモナスセパ−シア（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｃ’ｅｐａｃ、１ａ）ＫＴＢ−０
３と命名した。本細菌は、工業技術院微生物工業技術研
究所に昭和５９年５月２５日付で寄託しており、その受
託番号は微工研条寄第５３４号（ＦＥＲＭ　ＢＰ−５３
４）である。

本細菌の菌学的性質は、次のとおりである。

本発明において使用する菌株としては、上記菌株を好適
な一例として挙げろことができるが、その人工並びに自
然変異株は勿論のこと、シュードモナス属に属し、１−
（Ｗ換フェニル）−１−フェニルエタンから２−（置換
フェニル）プロピオン酸を生産ずろ全での菌を使用する
ことかできる。

本発明に使用する微生物の培養には、通常の培養成分と
して用いられる炭素源を使用することかできるが、２−
（置換フェニル）プロピオン酸を高収率に生産させるた
めには１−（置換フェニル）−１−フェニルエタンを唯
一もしくは主たる炭素源とする。この場合、目的とする
２−（置換フェニル）プロピオン酸によって前記ジフェ
ニルエタン誘導体は選択される。即ち、目的プロピオン
酸誘導体と同し置換フェニル系を有する乙のか用いられ
る炭素源としての１−（置換フェニル）〜１−フェニル
エタンは培地中に０．ＯＩ〜０，５重量％の濃度になる
ように添加するが、所定の全量を一度に添加してもよく
、数回に分割して添加してもよい。

■−ｃｍ換フェニル）−１−フェニルエタンとしては、
次式で表される化合物を挙げることができる。

式中、Ｒは０１〜４の直鎖又は分枝鎖アルキル基、ＣＩ
”、−ＣＨ，ＣＨ２−基又はＣＦ３　ＣＨＣＨｔ−基で
ある。

　Ｈｓ より具体的に好ましい化合物を例示すると、１−（４−
メチルフェニル）−１−フェニルエタン１−（４−エチ
ルフェニル）−１−フェニルエタン１−（４−プロピル
フェニル）−１−フェニルエタン ■−（４−イソブチルフェニル）−１−フェニルエタン １、−’　［４−（３，３，３−トリフルオやロプロピ
ル）−フェニルコー１−フェニルエタン ｌ−［４＝（２−トリフルオロメチルプロピル）フェニ
ル３−ｔ−フェニルエタン 本発明に使用する菌の培養の際、使用する培地の窒素源
としては、特に限定されることはないが、硝酸カリ、硝
安、硫安、塩安、燐安、ポリペプトン等を用いることが
できる。

また、無機塩類として、燐酸二ナトリウム、燐酸−カリ
ウム、燐酸二カリウム等を用い、微量金属として、硫酸
マグネシウム、塩化カルシウム。

塩化第二鉄等を用いることができる。

その他の添加物としては、菌株の生育を良好にするため
の酵母エキス、コーンステイープリカー。

肉エキス等が挙げられる。

培養方法としては、振盪培養１攪拌培養あるいは深部通
気培養等力ぐあり、更にこれらの混合した培養法、例え
ば深部通気攪拌培養等を用いることができる。

また、培養温度は２５〜３５℃、培養ｐＨは中性付近（
６〜８）、培養日数は３〜３５日が適当である。

培養終了後、蓄積された２＝−（置換フェニル）プロピ
オン酸は培養液の濾過や遠心分離等の操作により得られ
る。除菌培養液から抽出、精製することに、Ｊ−リ、精
製２−（置換フェニル）プロピオン酸を得ろことができ
る。精製に際しては、溶媒抽出。

脱水、脱色１分留、カラ１、クロマトグラフィー等のり
段を弔独又は適宜組み合わせて行なうことができろ、。

例えば、培養終了後、培養液を遠心分離することにより
、得られた上澄区分をとり、必要に応し１１１１調整を
した後、ジク〔１０メタン等の有機溶媒を用いてＩ」的
物質を抽出する。次いて、脱水、濃縮後ンリノノゲルタ
ロマトグラフィーにかυ、ヘンゼンー酢酸」−デル（７
１）を用いて溶出１分画ケることにより目的とする物質
を含有する溶出画分か得られる。この両分を濃縮するこ
とによって、粗製の目的物質が得られるが、必要に応じ
て再結晶等の操作を行なって精製する。

以下、実施例について説明するが、本発明は下記実施例
のみに限定されるものではない。

実施例１ Ｋ　　ＪＩ　　Ｐ　　Ｏ４０，０６５ｇ、　　　Ｋ　　
Ｉ−（２Ｐ　　０　４　０．０２６ｇ、　　　Ｎａ２Ｈ
Ｐ　Ｏ４・１２１１２００．１３４ｇ、　ＮＨ４Ｃｊ！
　０．００５ｇ。

ＭｇＳ　Ｏ，・７１−１．ＯＯ，０６８ｇ、　ＣａＣ１
！ｚ　Ｏ，０８３ｇ、　ＦｅＣＱ３・６１−Ｉ、ＯＯ，
０００８ｇ、ポリペプトン０２ｇ、酵母エキス０３ｇ、
蒸留水１！で示される組成をもつ液体培地（ｐＨ７，２
）１００ｄと特開昭５８−２９７２５号に従って合成し
たＩ−［４−（３，３，３−１−リフロロプロピル）−
フェニル］−１−フェニルエタン００５ｇを３００　＋
ｎｆｌの三角フラスコに入れ、１２１０Ｃ，１，５分間
高圧滅菌した後、ンユードモナスセパーソアＫＴＢ−０
３株（微工研条寄第５３４号）を接種し、３０℃で２８
日間回転振盪培養を行なった。培養液を遠心分離して菌
体を除き、上澄液を６規定塩酸でｐＨ２以下とし、クロ
ロホルム１００＋ｎ１２で抽出する。この抽出液を１規
定の苛性ソーダに転溶し、再度酸性にした後、クロロホ
ルムで抽出し、タロロポルム層を減圧濃縮して溶媒を完
全に除いてやや粘性を帯びた赤褐色の液体を得た。これ
をシリカゲルクロマトグラフィー法（ベンゼン−酢酸エ
ヂル）で精製し、更にｎ−ヘキサンから再結晶すること
により２７ｍｇ（収率６１％、但しｌ、　［４−（３，
３，３−トリフルオロプロピル）フェニル」−１−−フ
ェニルエタンに対し）の白色結晶を得た。

得られた結晶の融点は、７５〜７６．５℃でＮＭＲ、赤
外線吸収スペクトル、質量分析の結果は化学合成で得ら
れた２−［４−（３，３，’３−　トリフルオロプロピ
ル）フェニル］−プロピオン酸（特開昭５８−６５２３
７号）と一致した。

実施例２ 実施例１で示した液体培地１００ｄに特開昭５８−２９
７２５号と同様にして合成した１−［４−（２−トリフ
ルオロメチルプロピル）フェニルコー１−フェニルエタ
ン０．０５ｇを３００艷の三角フラスコに入れ、１２１
℃、１５分間高圧滅菌した後、ノコ−トモナスセパ−シ
アＫＴＢ−０３株を接種し、３０℃で２８日間回転振盪
培養を行なった。培養液を実施例１と同様に処理するこ
とにより、精製白色結晶１２ｍｇ（収率２７％、但し１
−［Ｌ−（２−トリフルオロメチルプロピル）フェニル
コー１−フェニルエタンに対し）を得た。

実施例３ 実施例１で示した液体培地１００ｄに１−（４−イソブ
チルフエニルンー１−フェニＪレエタン０．１ｇを３０
０ｍｆ！の三角フラスコに入れ、１２１℃、１５分間高
圧滅菌した後、ンコートモナスセパーンアＫＴＢ−０３
株を接種し、３０°Ｃで２８日間回転振盪培養を行なっ
た。培養液を実施例１と同様に処理することにより、精
製白色結晶６＋ｍｇ（収率７０５％、但し１−４（−イ
ソブチルフェニル）−１〜フエニルエタンに対し）を得
た。このものの融点は、７５〜７７℃でＮＭＲ、赤外線
吸収スペクトル１質量スペクトルの結果は、２−（４−
イソブチルフェニル）プロピオン酸のものと一致　し　
ノこ　。

実施例４　短期培養データ 実施例１に示した液体培地５０艷に１（４−イソブチル
フェニル）−１−フェニルエタンｏ、ｏｔｇを３００＋
Ｉｌｌ！の三角フラスコに入れ、１２１’Ｃ，１５分間
高圧滅菌した後、シュードモナスセパーンアＫＴＢ−０
３株を接種し、３０°Ｃで３日間回転振盪培養した。培
養液を遠心分離して菌体を除き、上澄液を６規定塩酸で
ｐ）１２以下とし、クロロホルム５０ｍで抽出する。

クロロホルム層を減圧濃縮後、ｌ０ＩＩｌ１２にメスア
ップし、高速液体クロマトグラフィーで定量したところ
４ｍｇ（収率４６％、但しＩ−（４−イソブチルフェニ
ル）−１−フェニルエタンに対し）の２−（４−イソブ
チルフェニル）プロピオン酸が生成していることが判っ
た。

実施例５ 実施例１と同様にして上記式で示される基質ｌ−イソプ
ロピルフェニル−Ｉ−フェニルエタン０２ｇをシュード
モナスセバーシアＫＴＢ−０３株で資化さ　せ　ノこ。

２１日間の培養後に得られた生成物２−イソプロピルフ
ェニルプロピオン酸の収量は４９ｍｇＣ収率２８．６％
、但し１−イソプロピルフェニル−Ｉ−フェニルエタン
に対し）であった。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）シュードモナス属に属する菌で、１−（置換フェ
   ニル）−１−フェニルエタンを酸化して２−（置換フェ
   ニル）プロピオン酸を生産する能力を有する菌を、１−
   （置換フェニル）−１−フェニルエタンを添加した培地
   に接種培養して、培養物から２−（置換フェニル）プロ
   ピオン酸を採取することを特徴とする２−（置換フェニ
   ル）プロピオン酸の製造方法。
2. （２）１−（置換フェニル）−１−フェニルエタンが次
   式で表される化合物であることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項に記載の方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、ＲはＣ＿１＿〜＿４の直鎖又は分枝鎖アルキル基
   、ＣＦ＿３−ＣＨ＿２ＣＨ＿２−基又は▲数式、化学式
   、表等があります▼基である。