JPS6039B2 - 多糖類の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は多糖類を製造する方法に関する。

さらに詳しくはシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ肌ｓ
）属に属し「 メタノールを資化し酸性多糖類を産生す
る新菌株を、メタノルを唯一の又は主たる炭素源とする
培地に培養し、多糖類を培養液中に生成せしめ〜該培養
液より酸性多糖類を分離することを特徴とする、多糖類
の製造方法に関する発明である。その目的とするところ
は廉価なる原料より食料用、医薬用及び工業用など利用
範囲の広い水溶性多糖類を容易に且つ高収率に得るにあ
る。本発明は本質的にメタノールを基質として、塔養法
により多糖類を製造する方法であるが、培地にメタノー
ルの他に若干量のグルコース等の炭素源を併用してもさ
しつかえない。従来発酵法による多糖類の製造方法とし
ては、多くの方法が開示されているが、糖質を主炭素源
とする培地を用いるものが大部分であり、糖質以外には
ノルマルパラフィン、エタノール、ブロパノール、エチ
レングリコール、有機酸などの石油化学製品が用いられ
てきた（特開昭４８一１８４９３）。

しかしこれらの炭素源は水に対する溶解度、発酵原料と
しての供給量および価格などの点に問題があり、しかも
良好な収率で多糖類を得ることが出来なかった。本発明
者らは最近安価な炭素源として注目されてきたメタノー
ルに着目し、１９７ヱモ５月１日茨城県下妻方面の土壌
より多数のメタノール資化細菌を分離してスクリーニン
グを実施した結果、メタノールを唯一の又は主たる炭素
源とする培地で培養することにより、水または温湯に溶
解して粘性を示す酸性多糖類を容易に且つ高収率に培地
中に生成するシュ−ドモナス層の新菌種の分離に成功し
本発明を完成した。

本発明はメタノールを、唯一の又は主たる炭素源として
含有する培地に、酸性多糖類を産生するシュードモナス
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する菌を培養し、該
培養液より該多糖類を分離する方法において、該菌がシ
ュードモナスメチロボラＭ−１５、シユードモナスポリ
サツカロゲネスＭ−３０、シユードモナスメチロビスコ
サＭ−３９、シユードモナスシュードキサンタＭ−４２
及びシユードモナ＊スメチロミクソゲネスＭ−７２から
なる群より選ばれた一つの菌であることを特徴とする多
糖類の製造方法である。

以下に、本発明を実施するに当って使用する新菌種であ
るシュードモナスメチロボラＭ−１５（Ｐｓｅｕｄｍｏ
ｎａｓｍｅｔｈｙｌｏｖｏｌａＭ−１５）微生物工業技
術研究所 微生物受託番号 微工研菌寄第４０５３号Ｆ
ＥＲＭ−ＰＮｏ。

４０５３（以下本菌種をＭ−１５と略記する場合がある
。

）、シュードモナスポリサツカ ロ ゲ ネ ス Ｍ
− ３０ （ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｏｌ船ａｃｃ
ｈａｒｏｇｅｎｅｓＭ−３０）微生物工業技術研究所
微生物受託番号 徴工研菌寄第４０５４号ＦＥＲＭ−Ｐ
Ｎｏ．４０５４（以下本菌種をＭ−３０と略記する場合
がある。）、シュードモナスメチロビスコサＭ−３９（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｔｈｙｌｏｖｉｓｃｏｓ
ａＭ−３９）微生物工業技術研究所 微生物受託番号
徴工研菌寄第４０５５号 ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．４０５５
（以下本菌種をＭ−３９と略記する場合がある。）、シ
ュ−ドモ ナ ス シ ユ ードキ サ ン タ Ｍ一
４２（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｓｅｕｄｏｘａｎ
ｔｈａｍ−４２）微生物工業技術研究所 微生物受託番
号 徴工研菌寄第４０５６号 ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．４０
５６（以下本菌種をＭ−４２と略記する場合がある。）
、及びシュードモナスメチロミクソゲネスＭ一７２（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏ船ｓｍｅｔｈｙｌｏｍｙｘｏｇｅｎｅｓ
Ｍ−７２）微生物工業技術研究所 微生物受託番号 微
工研菌寄第４０５７号ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．４０５７（以
下本菌種をＭ−７２と略記する場合がある。）、の菌学
的性質を述べる。Ｍ−１５Ｍ−３０Ｍ−３９Ｍ−４２、
Ｍ−７２の菌学的性質で特に菌種別に記載されてないも
のは各菌共通の性質及び生育状態である。１ 形態学的
性質 肉汁メタノール（０．球容量％）３０午○４８時間静暦
培養のものにつき観察した。

１ 細胞の形：直棒状 大きさ：０．３〜０．５×１．０〜２．５ｒ‘２ー 集
団：通常単独であるがいよいよ二蓮となる。

｛３； 運動性さ−本の鞭毛で運動する。

｛４’胞子の有無：なし ‘５｝ グラム染色性：陰性 棚 抗酸性：陰性 ｎ 各培地における生育状態 ｉ 肉汁培養三Ｍ−４２は生育せず。

基の他は生育する。（１） 肉汁液体静贋培養：（３０
ｑ０５日間培養）：生育−良好ト皮膜の形成一なし、沈
簿−あり「混濁−あり ■ 肉汁寒天斜面培養（３００ＣＩＯ日間培養）生育−
良好「形状一糸状、表面−円滑、光沢あり、周縁−波状
、透明性−不透明、色調−オレンジ色｛３｝ 肉汁寒天
平板培養（３０ｏ０２１日間培養）形状−やや不規則状
、辺縁−波状、表面隆起の形一息平状、表面一円婿 ｛４｝肉汁寒天穿刺培養（３０午０７日間培養）表面及
び上部穿刺にそって生育ｉｉ 肉汁メタノール（０．５
容量％含有）寒天平板培養（３０ｑ０３０日間培養）形
状一円形、辺緑−波状、表面隆起の形−局平状、表面−
円滑、色調−強いオレンジ色ｉｉｉ メタノール合成液
体培地※（３０ｑ０５日間培養）生育−良好、Ｍ−７沙
〆外は汝溝−あり、混濁−あり、皮膜の形成−なし※硝
酸カリウム０．５夕、リン酸２水素カリウム１夕、硫酸
マグネシウム７水塩０．５夕、硫酸第１鉄７水塩１０の
９、酵母エキス０．１夕、メタノール１容量％を純水１
夕に溶解し、ｐＨ７．０とした培地 ｍ 生理学的性質 【１｝ 硝酸塩の還元性：陽性 ‘２）脱窒反応：陰性 ‘３｝ ＭＲテスト：Ｍ−４雄〆外は陰性、Ｍ−４２は
陽性‘４’ＶＰテスト：陰性 ■ インドールの生成：陰性 ‘６１硫化水素の生成：陰性 ‘７｝ デンプンの加水分解：陰性 ■ 無機窒素源の利用：アンモニウム塩、硝酸塩のみを
窒素源として利用する。

脚 色素の生成：なし （１０）ゥレァーゼ：Ｍ−３９Ｍ−４沙〆外は腸性（１
１）オキシターゼ：陽性（１２）カタラーゼ：陽性 （１３）酸素要求性；好気性 （１４）ゼラチンの液化：陰性 （１５）リトマスミルク：Ｍ−３９は退色、Ｍ−４２は
不変、基の他は赤変べプトン化（１６）生育温度：１０
〜３７０、最適生育温度２６〜３１００（１７）生育ｐ
Ｈ：ｐＨ５〜１０、最適ｐＨ６〜８（１８）メチルアミ
ンの資化性：なし（１９）糠類よりガス及び酸の生成：
第１表参照（２０）炭素源の資化性：第２表参照第 １
表 糖類より酸及びガス（）の生成第２表−１ 糖
類の資化性第２表−２ アルコール類の資化性 第２表−３ 有機酸類の資化性 以上の菌学的諸性質を茂ｒ舞ｙ′ｓＭａｎ岬ｌｏｆＤｅ
にｒｍｊＭｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ，
がｈ．ｅｄ。

，Ｒ．Ｅ．Ｂｕｃｈａｎａｎ＆Ｎ．Ｅ．Ｇｉｂかｎｓ
，Ｗｍｊａｍｓ ＆ＷｉｌｋｉｎｓＣｏ．，１９７４
を参考に属を検討するに５種の本菌は全てグラム陰性、
程状、極鞭毛を有し運動し、好気性であり「グルコース
を酸化的に分解することなどより、シュードモナス属に
属することは明確である。この属の種の分類と対比する
と厳密にこれらと固定し得るものの記載がない。また本
菌の特徴として、一般にメタノール資化性菌のコロニー
の色調がピンク系が多いのに対し、本菌等のそれはオレ
ンジ色であり、メタン資化性及びエタノール資化性がな
く、メタノールより薯量の多糖類を生産すること、各種
炭素源より酸の生成能及び資化性などの相違により、シ
ュ−ドモナスメタニ力、シヤードモナスメチロトロフア
、シユードモナスロゼア、シユードモナスメチロオキシ
ダンスＭ−５９ シユードモナスエアロゲネス「シユー
ドモナスインスエタ、シユードモナスＰＲＬ−Ｗ４、シ
ユードモナスＡＭ−１、シユードモナスＭ一２７、シュ
ードモナスＣ等の公知種とは異なる。またメタノールを
資化し、多糖類を生産する株と対比するに、メチロモナ
スムコサ、メタノールモナスポリサッカロゲネスとはグ
ルコースの資化性が異なり、シュードモナスＳＰ．Ｓ４
６−ＢＩとはコロニーの色調と各種糖よりの酸生成で異
なる。

Ｍ−３０とＭ−７２とは類似の性質が多いが、グルコー
スよりの酸の生成及びデンプン、デキストリン、グルコ
ン酸の資化性が異なる。またＭ−３０とＭ−４２をこれ
らと比較的類似の公知の菌種であるメタノモナスポリサ
ッカロゲネス２６と比較すると「Ｍ−３０の場合はリト
マスミルク反応と硫化水素の生成において主に異なり、
Ｍ−４２の場合は肉汁済地での生育及びメチルレッド反
応、硫化水素の生成「尿素の分解性の点で主に異なり別
種と判断される。これ等の緒点からこれら５種の本菌は
シュードモナス属に属する新菌種であるとするのが妥当
であり既に記載した如くシユードモナス メチロボラ
Ｍ−１５シェードモナス ポリサツカロゲネス
Ｍ−３０シユードモナス メチロビスコサ Ｍ一３
９シユードモナス シユードキサンタ Ｍ−４２シ
ュードモナス メチロミクソゲネス Ｍ−７２と命名し
た。

以下本発明につき更に具体的に説明する。

本発明において使用する菌株の培養は、メタノールと唯
一のあるいは主たる炭素源とした培地中で、好気的に行
なれる。

ここで培地に添加するメタノールの量は培地に対して４
容量％以下にするのが望ましい。

又連続フィードする場合は渚地中のメタノール含量を１
容量％以下にするのが望ましい。無機の窒素源としては
硝酸アンモン、硝酸カリ、硫安などが利用でき、天然の
窒素源としては酵母エキス、ベプトンなどが利用できる
。窒素源以外の無機成分としては、リン酸１カリ、リン
酸２カリ、硫酸マグネシウム「硫酸第１鉄「塩化カルシ
ウム、硫酸マグネシウム「硫酸マンガン及び塩化ナトリ
ウムを使用する。ビタミン類は特に必要としないがビオ
チン、チアミンもしくは酵母エキス、コーンステイープ
リカーなどを添加してもよい。

培養は通常好気的条件下がよく、例えば振顔培養法もし
くは通気蝿拝培養法で、２８〜３０００の培養温度で実
施するのがよい。

培養ｐＨは６．５〜７．ふまた培養時間は２独時間以上
であればよく、好ましくは４８〜７幼時間である。醗酵
終了後、培養液を１０〜２の音‘こうすめ連続遠心分離
もしくは１０，００比ｐｍ６０分間のパッチ遠心分離し
て菌体及び固型物を除いた後、２倍量のアセトンを添加
することにより、白色繊維状の粗多糖類を得る。

粗多糖類を再び水に溶解し、８０つ０１８分間加熱処理
、クロロホルム・アミルアルコール（３：２）漉液処理
及びトリクロル酢酸処理などの除蛋白操作を実施したの
ち、再び１０，００びｐｍ３０分間遠心分離を行ない蛋
白を除去する。

次いで上透液に２倍量のアセトンを加え、得られる沈澱
物をェーブル、エタノールでよく洗液したのち、再び少
量の水に溶解し、流水中で透析するか、イオン交モ期間
脂、ゲル猿過などの処理をして脱塩し、凍結乾燥を行な
い白色海綿状の精製多糖類を得る。本発明で得られる、
Ｍ−１与Ｍ−３０、Ｍ−３９Ｍ−４２及びＭ−７２のそ
れぞれが生産する多糖類の理化学的性質を以下に示す。

但し特に繭種別に記載されていないものは各菌種の生産
する多糖類の共通する性質である。｛１｝ 呈色反応糖
に有用なァンスロン反応、フェノール硫酸法などの呈色
反応は陽・性である。

■ 塩基性、酸性、中性の区別 多糖類の水溶液にセチルトリメチルアンモニウムブロマ
イドあるいはセチルピリジニウムクｏラィドを添加する
と白色沈澱を生じる。

従って本多糖類は酸性多糖類である。‘３’溶剤に対す
る溶解度 水に可溶でエタノール「エーテル及びアセトン等に不溶
である。

■色調 乾燥状態では白色の綿状または繊維状であり、水溶液は
無色透明である。

‘５｝ 粘 度 １重量％水溶液２０ｏｏの粘度は次の通りである。

（東京計器製 ＢＬ型粘度計にて測定）菌 種 名
粘度（ＣＰＳ）Ｍ−１５ ７０ Ｍ−３０ １３５００ Ｍ−３９ ２９０ Ｍ−４２ ４４００ Ｍ−７２ ８２００ ｛６’元素分析値 各菌種の生成する多糖類の元素分析値は次の通りである
。

繭 種 名 Ｃ（％） 日（％） Ｎ（％）Ｍ−１５
３７．３ ５．６ ０．ＩＭ−３
０ ３７．７ ５．８ ０．ＩＭ−３９
３６．４ ５．５ ０．２Ｍ−４２
３８４ ５．８ ０，ＩＭ−７２
３９．２ ６．０ ０．０｛７｝ 構成
糖各菌種の生成する多糖類を州硫酸により１００℃８時
間加水分解し、ペーパークロマトグラフィ法及びガスク
ロマトグラフィ一法により基の主構成糠を分析した結果
は次の通りである。

菌種名 主 構 成 糖Ｍ−１５ クシレコース
ガラクトース キシロースＭ−３０ クンレコース
マンノースＭ−３９ クンレコース ガラクト一ス マ
ンノースＭ−４２ クンレコース マンノースＭ−７２
クンレコース マンノース 本発明により得られる粘性多糖類はその粘稲性、粘着性
を生かした食品、医薬品を初め工業用途においても懸濁
補助剤、被覆剤、糊料、油由搾井用粘着剤、潤滑剤、サ
ィジング剤、化粧品素材などとしての用途が考えられる
。

本発明においてＭ−３０によって生産される多糖類をＭ
−３０一Ｃと呼ぶ。

同様にＭ−１５Ｍ−３９Ｍ−４２及びＭ−７２のそれぞ
れによって生産される多糖類をそれぞれＭ−１５一Ｃ、
Ｍ−３９−Ｃ、Ｍ−４２一Ｃ及びＭ−７２一Ｃと呼ぶこ
ととする。既に述べたことと一部重複するが、次にＭ−
３０−Ｃ、Ｍ−１５一Ｃ、Ｍ−３９一Ｃ、Ｍ−４２一Ｃ
及びＭ−７２−Ｃの物理的化学的性質について説明する
。多糖類Ｍ−３０−Ｃの物理的性質は次の通りである。

【ィ’旋光度 〔Ｑ〕智＝十４８．４０（０．１重量／容量％水溶液）
【〇｝ 平均分子量１び〜１０７「ゲル櫨過法による測
定結果。

多糖類Ｍ−３０−Ｃの分子量は培養の際の培養時間によ
り変わる。し一 元素分析Ｃ：３７．７％、Ｈ：５．８
％ （精製が不十分であると、交雑物としてＮが０．１％含
有される場合がある。

）Ｑ 呈色反応 アンスロン反応、フェノール硫酸反応に腸性。

的 塩基性酸性中性の区別 セチルトリメチルアンモニウムプロマイドあるいは、セ
チルピリジニウムクロラィドを多糖類Ｍ−３０一Ｃ水溶
液に添加すると白色沈澱が生じる。

従って多糖類Ｍ−３０−Ｃは酸性多糖類である。Ｎ 赤
外線吸収スペクトル 特徴的な吸収値を波数（弧‐１）で示す。

３４５０（Ｓ）、２９４０（Ｍ）、１６２０（Ｍ）、１
４００（Ｍ）、１０４０（Ｓ）「８９０（Ｗ）上記にお
いてＳは強い吸収をＭは中度の吸収をＷは弱い吸収を表
わす。

第１一１図参照 … 溶解度 水「 ＩＮ塩酸、ＩＮ硫酸及びＩＮ−アンモニア水に溶
解する。

エタノール「エーテル、アセトン、クロロホルム及びジ
メチルスルホキシドに不落。併粘度 多糠類Ｍ−３０−Ｃの水溶液の粘度は次の通り。

２０午０、１．０（重量／容量）％水溶液、６仇ｐｍの
回転数の条件でＢＬ型粘度計（東京計器製）で測定した
粘度は１０００〜３００比ｐＳである。

【リ｝ ｐＨによる水溶液の粘度の変化（平均分子量１
８０方のＭ−３０−Ｃについて測定結果）ｐＨ２〜１１
において粘度はｐＨが中性附近でやや高い、ｐＨ粘度２
の粘度は９３比ｐｓであり、ｐＨ７の粘度は１２５比ｐ
ｓであり、ｐＨｉｌの粘度は１１０比ｐｓである。粘度
計はＢＬ型粘度計（東京計器製）のものに少量アダプタ
ーＨＭ−３を使用「測定条件は２０ｑｏ、０．２５（重
量／容量）％、位Ｐｍ。第１−３図参照。

Ｐ）温度による水溶液の粘度の変化（平均分子量１８０
万のＭ−３０一Ｃについての測定結果）２０〜８００の
こおいて粘度は温度が高くなるほどやや低下する。

２０００の粘度は１３，５０比ｐｓであり「 ８０ご０
の粘度は１１，００比ｐｓである。

粘度計及び濃度は仔｝と同一、回転速度は６ｒｐｍであ
る。第１−４図参照 妙 濃度による水溶液の粘度の変化（平均分子量１８０
万のＭ−３０−Ｃについての測定結果）多糖類Ｍ−３０
一Ｃの水溶液の濃度を０．２（重量／容量）％〜１．０
（重量／容量）％まで変化させると０．２％では５０比
ｐｓ、１．０％では１３，５０比ｐｓと濃度が高まると
粘度も上昇した。

測定温度は２００○。粘度計及び測定条件（ｒｐｍ）は
ニと同一である。

第ｌｎ５図参照 （ヲ）塩による水溶液の粘度の変化 塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化アルミニウム又
は硫酸アンモニウムの５（重量／容量）％水溶液或は飽
和塩化ナトリウム水溶液中においてＭ−３０−Ｃの水溶
液の粘度は低下しない。

（ヮ） 構成糖 多糖類Ｍ−３０−Ｃを洲硫酸で１００ｑｏ、９時間封管
中で加水分解する。

反応生成物を水酸化バリウムで処理し硫酸を除去する。
次いでイオ交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０（日型）（ダウケミ
カル社製）のカラムを通し過剰のバリウムイオン及び硫
酸バー」ゥムに微粒子を除く。溶出液を減圧下に濃縮す
る。濃縮液を展開溶媒（ブタノール：酢酸；水白４：１
：５）にてペーパークロマトグラフィーを実施するとグ
ルコース、マンノースのスポットを与える。濃縮液を更
に乾固させたのち「トリメチルシリル化しガスクロマト
グラフィ一にて分析した結果、構成比はグルコ−ス：マ
ンノース＝３：２であった。（が 色及び形 多糖類Ｍ−３０−Ｃは白色不定形であり、水溶液は無色
透明である。

ｅ）味及びにおし、 多糖類Ｍ−３０一Ｃ及びその水溶液は無味無臭である。

（力 粘度の比較平均分子量１８０万の多糖類Ｍ−３０
−Ｃはキサンタンガムと比較し粘度が高い。

測定条件は１．０（重量／容量）％水溶液、温度２０℃
、回転速度６仇ｐｍ粘度計は前記‘升の場合と同じ。測
定結果：平均分子量１８０万の多糖類Ｍ−３０−Ｃは２
１０比ｐｓキサンタンガムは１００比ｐＳＭ チキント
ロピーな性質多糖類Ｍ−３０−Ｃの水溶液はチキントロ
ピーな（レオロジー：中川鶴太郎等岩波全書９７〜９８
頁参照）性質を有する。

平均分子量１８０万のＭ−３０−Ｃ水溶液についての粘
度計回転数と粘度との関係を第１一２図に示す。粘度計
及び測定条件は前記のの場合と同一である。（ソ）曳糸
性多糖類Ｍ−３０−Ｃの水溶液はほとんど曳糸性を示さ
ない。

（力 紫外線吸収スペクトル ２８０の〆近辺に弱い吸収を示す（第１−６図参照）。

稀融点融点を持たない。

加熱により分解し炭化する。

多糖類Ｍ−１５−Ｃの物理化学的性質は次の通りである
。

‘ィ｝′ 旋光度 〔Ｑ〕幹＝十４７．４０（０．１重量／容量％水溶液）
仰′ 平均分子量１び〜１０７、ゲル櫨過法による測定
結果。

多糖類Ｍ−１５一Ｃの分子量は、培養の際の培養時間に
より変わる。し一′ 元素分析 Ｃ：３７．３％、Ｈ：５．６％ （精製が不十分であると爽雑物としてＮを０．１％位含
有する場合がある。

）〇′ 皇色反応 ‐ ァンスロン反応、フェノール硫酸反応に陽性。

‘対′ 塩基性酸性中性の区別 セチルトリメチルアンモニウムブロマイドあるいは、セ
チルピリジウムクロラィドを多糖類Ｍ−１５−Ｃ水溶液
に添加すると白色沈澱が生じる。

従って多糖類Ｍ−１５−Ｃは酸性多糖類であるＨ′ 赤
外線吸収スペクトル 特徴的な吸収値を波数（肌‐１）で示す。

３４５０（Ｓ）、２９４０（Ｍ）、１７３０（Ｍ）、１
６２０（Ｍ）、１４００（Ｍ）、１１５０（Ｍ）、１０
５０（Ｓ）上記においてＳは強い吸収をＭは中度の吸収
をわす。

１７３０ｃｍ‐１付近にカルボン酸に由来すると思われ
る吸収が見られる。

第２−１図参照。‘ト）′ 溶解度水、ＩＮ塩酸、ＩＮ
硫酸及びＩＮアンモニア水に溶解する。エタノール、エ
ーテル、アセトン・クロロホルム及びジメチルスルホキ
シドに不溶。｛チ｝′ 粘 度 多糖類Ｍ−１５−Ｃの水溶液の粘度は次の通り。

２０００、１．０（重量／容量）％水溶液６ｒｐｍの回
転速度の条件でＢＬ型粘度計（東京計器製）で測定した
粘度は６０〜８比ｐｓである。

‘ＩＪ｝′ ｐＨによる水溶液の粘度の変化（平均分子
量１１５万のＭ−１５−Ｃについての測定結果）ｐＨ２
〜１２において粘度は中性付近で高い。

ｐＨ２の粘度は４８ｐｓ、ｐＨ７の粘度は７比ｐｓ、ｐ
Ｈ１２の粘度は５＆ｐｓである。第２−４図参照。粘度
計「 ｒｐｍ、温度及び濃度は稀′と同一である。技）
′ 温度による水溶液の粘度の変化（平均分子量１１５
万のＭ−１５−Ｃについての測定結果）２ぴ０〜８０ｑ
ｏにおいて粘度は温度が高くなると低「ごする。

２０ｑｏの粘度は７比ｐｓであり、８０ｑｏの粘度は３
比ｐｓである。

粘度計、ｒｐｍ及び濃度は扮′と同一である。第２一５
図参照。しり′ 濃度による水溶液の粘度変化（平均分
子量１１５万のＭ−１５−Ｃについての測定結果）多糖
類Ｍ−１５一Ｃの水溶液の濃度を０．２（重量／容量）
％〜１．０（重量／容量）％まで変化させると０．２％
で３＆ｐｓ、１．０％では７比ｐｓと濃度が高まると粘
度も上昇する。

測定に際しての粘度計、ｒｐｍ及び温度は扮′と同一で
ある。第２−３図参照。６）′ 塩による水溶液の粘度
の変化 多糖類Ｍ−１５−Ｃを飽和塩化ナトリウム水溶液に溶解
したものの粘度は純水溶解したものに比し差が無いが、
Ｍ−１５一Ｃを塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化
アルミニウムまたは硫酸アンモニウムの５（重量／容量
）％水溶液に溶解したものは、純水に溶解したものと比
較し粘度は約５０％低下する。

肋′ 構成糖 多糖類Ｍ−１５−Ｃに関し前記Ｍ−３０−Ｃの構成糖に
つき行なったと全く同じ方法にて分析した結果、グルコ
ース、キシロース及びガラクトースを確認しその構成比
はグルコース：キシロース：ガラクトース＝２：１：１
であった。

糊′ 有機酸多糖類Ｍ−１５−Ｃを（ワ）と同様に加水
分解、中和処理後の濃縮乾固物をＩＮギ酸ソーダに溶解
した液体クロマトグラフィーを実施した結果、酢酸及び
ビルビン酸を含有することが確認された。

（ョ）′ 色及び形 多糖類Ｍ−１５一Ｃは白色不定形であり、水溶液は無色
透明である。

俊′ 味及びにおし、 多糖類Ｍ−１５−Ｃ及びその水溶液は無味無臭である。

Ｍ′ チキントロビーな性質多糖類Ｍ−１５−Ｃの水溶
液はチキントロピーな性質を有する。

第２−２図参照。粘度計及び回転数以外の測定条件は併
′と同一である。し）′ 曳糸性多糖類Ｍ−１５一Ｃの
水溶液は殆んど曳糸性を示さない。

（ッ）〆 融 点 融点を持たない。

加熱により分解して炭化する。多糖類Ｍ−３９−Ｃの物
理化学的性質は次の通りである。

【ィｒ 旋光度 〔Ｑ〕谷＝１２．００山（重量／容量）％水溶液。

‘。

）″ 平均分子量１び〜１０７、ゲル櫨過法による測定
結果。

多糖類Ｍ−３９−Ｃの分子量は培養の際の培養時間によ
り変わる。し一″ 元素分析Ｃ；３６．４％、Ｈ：５．
５％ （精製が不十分であると爽雑物としてＮを０．２％位含
有することがある。

）Ｗ″ 星色反応 アンスロン反応、フェノール硫酸反応に陽性。

■″ 塩基性酸性中性の区別 セチルトリメチルアンモニウムブロマドあるいはセチル
ピリジニウムクロラィドを多糖類Ｍ−３９−Ｃの水溶液
に添加すると白色の沈澱が生じる。

従って多糖類Ｍ−３９−Ｃは酸性糖類である。Ｍ″ 赤
外線吸収スペクトル 特徴的な吸収値を波数（肌‐１）で示す。

３４５０（Ｓ）、２９４０（Ｍ）、１６１０（Ｍ）、１
４００（Ｍ）、１１５０（Ｍ）、１０５０（Ｍ）、上記
においてＳは強い吸収をＭは中度の吸収を表わす。

第３−１図参照。‘トｒ 溶解度 水「 ＩＮ水酸、ＩＮ硫酸及びＩＮアンモニア水に溶解
する。

エタノール、エーテル、アセトン、クロロホルム及びジ
メチルスルホキシドに不溶。ｔ分″ 粘 度 多糖類Ｍ−３９−Ｃの水溶液の粘度は次の通り。

２び０「１−０（重量／容量）％水溶液Ｌ批ｐｍの回転
速度の条件でＢＬ型粘度計（東京計器製）で測定した粘
度は２００〜３５比ｐｓである。

｛リｒ による水溶液の粘度の変化（平均分子量１１５
万のＭ−３９一Ｃについての測定結果）多糖類Ｍ−３９
一Ｃの水溶液の粘度はｐＨ２〜１２においてｐＨが中性
附近で最も高い。

ｐＨ２における粘度は８比ｐｓトｐＨ７においては２７
比ｐｓ又ｐＨ１２においては１２■ｐｓである。粘度計
には仔ｒの場合と同一のものに少量アダプターＨＭ一２
を使用したものを用いた。又測定条件は併″の場合と同
一である。第３−３図参照。Ｐ）″ 温度による水溶液
の粘度の変化（平均分子量１１５方のＭ−３９−Ｃにつ
いての測定結果）２０〜８０午０において多糖類Ｍ山３
９一Ｃの水溶液の粘度は温度が高くなると低下する。２
０つＣＩこおいては２７比ｐｓであり、８０ｑ０におい
ては７比ｐＳである。

粘度計「濃度及びｒｐｍは併″の場合と同一である。第
３−４図参照。しり″ 濃度による水溶液の粘度変化（
平均分子量１１５方のＭ−３９一Ｃについての測定結果
）多糖類Ｍ−３９−Ｃの水溶液の濃度を０．２５（重量
／容量）％〜１．０（重量／容量）％まで変化させると
０．２５％では５＆ｐｓ、１．０％では２７比ｐｓと濃
度が高まると粘度も上昇した。

粘度計及び濃度以外の測定条件は扮″と同一である。第
３−５図参照。６）″ 塩による水溶液の粘度の変化 多糖類Ｍ−３９−Ｃを、塩化カリウム、塩化マグネシウ
ム、硫酸アンモニウムの５（重量／容量）％水溶液又は
飽和塩化ナトリウム水溶液に溶解した液の粘度は多糖類
Ｍ−３９−Ｃを純水に溶解したものの度に比し約５０％
上昇する。

又多糖類Ｍ−３９−Ｃは５（重量／容量）％の塩化アル
ミニウムには溶解しない。（ヮ）″ 構成糖 多糖類Ｍ−３９一Ｃに関し前記Ｍ−３０−Ｃの構成糖に
つき行なったと全く同じ方法にて分析した結果、構成糖
としてグルコース、マンノース及びラクトースを確認し
ての構成比はグルコース：マンノース：ガラクトース＝
３：３：１であった。

（功″ 色及び形 多糖類Ｍ−３９一Ｃは白色、不定形であり「水溶液は無
色透明であるＥ）″ 味及びにおし、 多糖類Ｍ−３９一Ｃ及びその水溶液は無味無臭である（
めｒ 曳糸性 多糖類Ｍ−３９−Ｃの水溶液はほとんど曳糸性を示さな
い。

Ｍ″ 融点 融点を持たない。

加熱により分解し炭化する。

多糖類Ｍ−４２一Ｃの物理化学的性質は次の通りである
。

Ｎ 旋光度 〔Ｑ〕背＝十５７ぴ肌（重量／容量）％水溶液。

周 平均分子量 １び〜１０７、ゲル櫨過法による測定結果。

多糖類Ｍ−４２一Ｃの分子量は培養の際の培養時間によ
り変わる。■ 元素分析Ｃ：３８．４％、Ｈ：５．８０
０ （精製が不十分であると爽雑物としてＮを０．１％位含
有する場合がある。

）的 呈色反応 アンスロン反応、フェノール硫酸反応に陽・性。

■ 塩基性酸性中性の区別セチルトリメチルアンモニウ
ムブロマイドあるいはセチルピリジニウムクロラィドを
多糖類Ｍ−４２一Ｃの杉溶液に添加すると白色沈澱が生
じる。

従って多糖類Ｍ−４２一Ｃは酸性多糖類である。Ｎ 赤
外線吸収スペクトル 特徴的な吸収値を波数（伽‐１）で示す。

３４５０（Ｓ）、２９４０（Ｍ）、１６１０（Ｍ）、１
４２０（Ｍ）、１０５０（Ｓ）、９００（Ｍ）上記にお
いてＳは強い吸収をＭは中度の吸収を表わす。

第４一１図参照。ビー 溶解度 水「 ＩＮ塩酸、ＩＮ硫酸及びＩＮアンモニア水に溶解
する。

エタノール、エーテル、アセトン、クロロホルム及びジ
メチルスルホキシドーこ不溶。脇粘度多糖類Ｍ−４２一
Ｃの水溶液の粘度は次の通り。

２ぴ○「１．０（重量ノ容量）％水溶液、抗ｐｍの回転
速度の条件でＢＬ型粘度計（東京計器製）で測定した結
果は３５００〜５５０比ｐｓである。

（り｝ ｐＨによる水溶液の粘度の変化（平均分子１６
０万のＭ−４２山Ｃについての測定結果）多糖類Ｍ−４
２一Ｃの水溶液の粘度はｐＨ２〜１２においてｐＨが酸
性城では余り変化しないが塩基性城で低下する。

ｐＨ２の粘度は１１９比ｐｓ、ｐＨ７の粘度は１２５比
ｐｓであり、ｐＨ１２の粘度は６３比ｐｓである。但し
粘度計は（ち）の場合と同一。又測定条件は回転速度を
６びｐｍとした他は（ち）の場合と同じである。第４−
３図参照。蟻 温度による水溶液の粘度の変化（平均分
子量１６０万のＭ−４２−Ｃについての測定結果）２０
〜８０ｑｏにおいて多糖類Ｍ−４２一Ｃの水溶液の粘度
は温度が高くなると低下する。

２０午Ｃの粘度は１２５比ｐｓであり、８０ｑｏの粘度
は４９比ｐｓである。

使用した粘度計は（ち）の場合と同じ。測定条件はｒｐ
ｍ６０、濃度１．０（重量／容量）％、但しｐＨは中性
。第４−４図参照。

■ 濃度による水溶液の粘度の変化（平均分子量１６０
方のＭ−４２一Ｃについての測定結果）多糖類Ｍ−４２
一Ｃの水溶液の濃度を０．２５（重量／容量）％〜１．
０（重量／容量）％まで変化させると、０．２５％では
６比ｐｓ、１．０％では１２５比ｐｓと濃度が高くなる
と粘度も上昇する。

第４一５図参照。使用した粘度計は（ち）の場合と同一
。

測定条件は濃度以外（り）の場合と同一である。但しｐ
Ｈは中性。勉 塩による粘度の変化 塩化カリウム、塩化マグネシウム、硫酸アンモニウム又
は塩化アルミニウムの５（重量／容量）％水溶液あるい
は飽和塩化ナトリウム水溶液に多糖類Ｍ−４２−Ｃを溶
解した液の粘度は、純水に溶解したものの粘度と変らな
い。

俊 構成糖 多糖類Ｍ−４２一Ｃに関し前記Ｍ−３０一Ｃの構成糖に
つき行なったと全く同じ方法にて分析した結果、グルコ
ース及びマンノースを構成糖として確認しその構成比は
グルコース：マンノース＝２：１であった。

■ 色及び形 多糖類Ｍ−４２一Ｃは白色、不定形であり、水溶液は無
色透明である。

瓜 味及びにおし、 多糖類Ｍ−４２−Ｃ及びその水溶液は無味無臭である。

■ 曳糸性多糖類Ｍ−４２一Ｃの水溶液はほとんど曳糸
性を示さない。

洲 チキントロピーな性質 多糖類Ｍ−４２−Ｃはチキントロピーな性質を有する。

第４−２図参照。粘度計及び測定条件は前記（ち）の場
合と同一。賄融点 融点をもたない。

加熱により分解し炭化する。

多糖類Ｍ−７２−Ｃの物理化学的性質は次の通りである
。

Ｌ→′ 旋効度 〔Ｑ〕谷二２７．３００．１（重量／容量）％水溶液。

偽′ 平均分子量１び〜１０７、ゲル櫨過法による測定
結果。

多糖類Ｍ−？２−Ｃの分子量は培養の際の培養時間に、
より変わる。風′ 元素分析 Ｃ：３９．２％、Ｈ：６．０％ 豚〕′ 呈色反応 アンスロン反応、フェノール硫酸反応に陽・性。

燭′ 塩基性酸性中性の区別セチルトリメチルアンモニ
ウムプロマイドあるいはセチルピリジニウムクロラィド
を多糖類Ｍ−７２−Ｃの水溶液に添加すると白色沈澱が
生じる。

従って多糖類Ｍ−７２一Ｃは酸性多糖類である。Ｎ′
赤外線吸収スペクトル 特徴的な吸収値を波数（抑‐１）で示す。

３４５０（Ｓ）、２９４０（Ｍ入 １６１０（Ｍ）、１
４００（Ｍ）、１０５０（Ｓ）、９００（Ｍ）上記にお
いてＳは強い吸収をＭは中度の吸収を表わす。

第５−１図参照。（と〕′ 溶解度 水ｔＩＮ塩酸、ＩＮ硫酸及びＩＮアンモニア水に溶解す
る。

エタノール、エーテル、アセトン・クロロホルム及びジ
メチルスルホキシドに不溶。脇′粘度 多糖類Ｍ−７２−Ｃ水溶液の粘度は次の通り。

２０ｏｏ、１．０（重量／容量）％水溶液、＆ｐｍの回
転速度の条件でＢＬ型粘度計（東京計器製）で測定した
粘度は７０００〜９００比ｐｓである。

ゆ′ ｐＨによる水溶液の粘度の変化（平均分子量１８
０万のＭ−７２−Ｃについての測定結果）多糖類Ｍ−７
２−Ｃの水溶液の粘度はｐＨ２〜１２においてｐＨが中
性附近で最も高い。ｐＨ２における粘度は８５比ｐｓ、
ｐＨ７においては１２０比ＰＳであり、ｐＨ１２におい
ては１０５比ｐｓである。但し粘度計は（ち）′の場合
と同一、測定条件は回転速度を６仇ｐｍとした他は（ち
）′の場合と同じである。第５一３図参照。蟻′ 温度
による水溶液の粘度の変化（平均分子量１８０万のＭ−
７２一Ｃについての測定結果）２０〜８０００において
多梶類Ｍ−７２−Ｃの水溶液の粘度は温度が高くなると
やや低下する。

２０午○の粘度は１２０比ｐｓであり、８０ｏｏの粘度
は１０５比ｐｓである。

使用した粘度計は（ち）′の場合と同じ。測定条件は温
度以外（り）′の場合と同一。但しｐＨは中性。第５−
４図参照。脇′ 濃度による水溶液の粘度の変化（平均
分子量１８０方のＭ−７２−Ｃについての測定結果）多
糖類Ｍ−７２一Ｃの水溶液の濃度を０．２５（重量／容
量）％〜１．０（重量／容量）％まで変化させると、０
．２５％では１４比ｐｓ、ｉ．０％では１２０比ｐｓと
濃度が高くなると粘度も上昇する。使用した粘度計は（
ち）′の場合と同一。測定条件は濃度以外（り）′の場
合と同じである。但しｐＨは中性。第５一５図参照。脇
′ 塩による粘度の変化 塩化カリウム、塩化マグネシウム、硫酸アンモニウム又
は塩化アルミニウムの５（重量／容量）％に多糖類Ｍ−
７２一Ｃを溶解した液の粘度は純水に熔解したものの粘
度と変らない。

的′ 構成糖 多糖類Ｍ−７２−Ｃに関し前記Ｍ−３０−Ｃの構成糖に
つき行なったと全く同じ方法にて分析した結果、グルコ
ース及びマンノースを構成糖として確認し、その構成比
はグルコース：マンノース＝３：２であった。

糊′ 色及び形 多糖類Ｍ−７２−Ｃは白色不定形であり「水溶液は無色
透明である。

瓜′ 珠及びにおし、 多糖類Ｍ−７２一Ｃ及びその水溶液は無味無臭である。

■′ 曳糸性多糖類Ｍ−７２−Ｃの水溶液はほとんど曳
糸性を示さない。

■′ チキントロピーな性質 多糖類Ｍ−７２一Ｃはチキントロピーな性質を有する。

第５一２図参照。粘度計及び測定条件は（ち）′の場合
と同一。俗′ 融点 融点を持たない。

加熱により分解し炭化する。

実施例 １ リン酸１カリ １夕、硝酸カリ １夕、硫酸マグネシウ
ム７水塩 ０．５夕、塩化カリウム ０．５久酵母エキ
ス ０．１夕、硫酸第１鉄７水塩 １０の９、硫酸亜鉛
７水塩 ２の９、硫酸マンガン４〜６水塩 ２の９、塩
化カルシウム２水塩 ２の９、塩化ナトリウム ２腿及
びメタノール ３２夕を１その純水に溶解して培地とし
た。

この培地７〆を調製しｐＨを７．０としたのち、１０ク
客のジャーファーメンタ‐‘こ注入し、１２０ｑｏで１
雌ふ間殺菌した。上記と同一組成の培地を用い坂口フラ
スコで前培養したシュードモナスメチロボラＭ−１５を
上記のジャーファーメンターに接種し、培養温度３０こ
００．５ＶＶＭの通気量にて培養した。６畑時間の培養
の後、培養液に水を加えて１００夕とし、シャープレス
型遠心分離機にて２０，００仇ｐｍ７夕／ｈｒの条件で
連続遠心し、菌体を除去した。

次いで遠心上燈を８０℃１５分間加熱した後、塩酸にて
ｐＨを３．５〜４５として蛋白質を等霞点沈澱させたの
ち、再び遠心分離しこれを除去した。遠心分離上澄をｐ
Ｈ７．０とした後濃縮して２５〆とし、クロホルムーア
ミルアルコール（３：２）液にて処理して再び除蛋白し
た後、アセトン５０〆を加えると粘費物質は繊維状の塊
となる。これを櫨過しエーテル及びエタノールで十分に
洗い、再び水に溶解して透析を行ない、再び２倍量のア
セトンを加えて多糖類を析出させ、次いで２その純水に
溶解して凍結乾燥を行ない４９９の精製多糖類を得た。
これは培養液１のこつき７．０夕の生産量である。実施
例 ２〜５ 菌種以外の条件は実施１と同様の条件で実施し次の結果
を得た。

蚕施亀使用菌種渚事簿擬手濁亨 ２ Ｍ−３０ ７２ １４．０３
Ｍ−３９ ８０ １３．３４
Ｍ−４２ ８０ ９．０５
Ｍ−７２ ４８ ５．６

【図面の簡単な説明】

第１−１図は多糖類Ｍ−３０−Ｃの赤外線吸収スペクト
ルを、第１−２図は多糖類Ｍ−３０−Ｃ水溶液のチキン
トロピーな性質を、第１一３図は多糠類Ｍ一３０−Ｃ水
溶液のｐＨによる粘度変化を「第１−４図は多糖類Ｍ−
３０−Ｃ水溶液の温度による粘度変化を、第竃−５図は
多糖類Ｍ−３０−Ｃ水溶液の濃度による粘度の変化を、
又第１−６図は多糖類Ｍ−３０一Ｃの紫外線吸収スペク
トルをそれぞれ表わす。 第２−１図は多糖類Ｍ−１５−Ｃの赤外線吸収スペクト
ルを、第２−２図は多糠類Ｍ−１５一Ｃ水溶液のチキン
トロピーな性質を、第２−３図は多糖類Ｍ−１５−Ｃ水
溶液の濃度による粘度の変化を、第２−４図は多糖類Ｍ
−１５一Ｃ水溶液のｐＨによる粘度の変化を、第２−５
図は多糖類Ｍ−１５−Ｃ水溶液の温度による粘度の変化
を、それぞれ表わす。第３−１図は多糖類Ｍ−３９−Ｃ
の赤外線吸収スペクトルを、第３−２図は多糖類Ｍ−３
９一Ｃ水溶液につき粘度計ローターの回転数による粘度
の変化を、第３一３図は多糖類Ｍ−３９−Ｃ水溶液のｐ
Ｈによる粘度の変化を、第３一４図は多糖類Ｍ−３９−
Ｃ水溶液の温度による粘度の変化を、第３−５図は多糖
類Ｍ−３９−Ｃ水溶液の濃度による粘度の変化をそれぞ
れ表わす。第４−１図は多糖類Ｍ−４２−Ｃの赤外線吸
収スペクトルを、第４−２図は多糖類Ｍ−４２一Ｃ水溶
液のチキントロピーな性質を、第４−３図は多糖類Ｍ−
４２−Ｃ水溶液のｐＨによる粘度変化を、第４−４図は
多糖類Ｍ−４２−Ｃ水溶液の温度による粘度変化を、第
４−５図は多糖類Ｍ−４２−Ｃ水溶液の濃度による粘度
変化をそれぞれ表わす。第５−１図は多糖類Ｍ−７２−
Ｃの赤外線吸収スペクトルを、第５−２図は多糖類Ｍ−
７２一Ｃ水溶液のチキントロピーな性質を「第５−３図
は多糖類Ｍ−７２−Ｃ水溶液のｐＨによる粘度変化を、
第５一４図は多糖類Ｍ−７２−Ｃ水溶液の温度による粘
度変化を、第５−５図は多糖類Ｍ−７２−Ｃ水溶液の濃
度による粘度の変化をそれぞれ表わす。券１‐１■ 多１−２図 茅１−３図 ※ー‐４図 多ー‐ｓ図 多‘−ら図 菱２‐１図 多２‐２図 第２【３図 多２‐４図 券２‐５図 多３‐１図 多３‐２図 多３‐３図 茅３‐４図 券３′；解 多４−ー’図 第４‐２図 髪４‐３図 多４‐４図 券４‐Ｓ図 多５‐１図 努夕‐２図 多５‐３図 多ｓ′４図 多６−；図

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ メタノールを、唯一の又は主たる炭素源として含有
   する培地に、酸性多糖類を産出するシユードモナス（Ｐ
   ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する菌を培養し、該培養
   液より該多糖類を分離する方法において、該菌がシユー
   ドモナスメチロポラＭ−１５、シユードモナスポリサツ
   カロゲネスＭ−３０、シユードモナスメチロビスコサＭ
   −３９、シユードモナスシユードキサンタＭ−４２及び
   シユードモナスメチロミクソゲネスＭ−７２からなる群
   より選ばれた一つの菌であることを特徴する多糖類の製
   造方法。