JPS58121798A - 多糖類ｍｐ−６７物質およびその製造法 - Google Patents
多糖類ｍｐ−６７物質およびその製造法Info
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- JPS58121798A JPS58121798A JP57003410A JP341082A JPS58121798A JP S58121798 A JPS58121798 A JP S58121798A JP 57003410 A JP57003410 A JP 57003410A JP 341082 A JP341082 A JP 341082A JP S58121798 A JPS58121798 A JP S58121798A
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- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A61P37/04—Immunostimulants
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は多糖類ＭＰ −４７物質およびその製造法に関
する・ 多糖類はこれまでに数多くのｌｌｌ１ｌｌが見出されて
おり、その用途も又多岐にわたっている。
する・ 多糖類はこれまでに数多くのｌｌｌ１ｌｌが見出されて
おり、その用途も又多岐にわたっている。
本発明者らは、特定の微生物が新規な多糖類ＭＰ −４
７物質を生産することおよび該多糖類ＭＰ −４７物質
が抗重瘍作用および免疫賦活作用を有することを見出し
、本発明を完成するに至った。
７物質を生産することおよび該多糖類ＭＰ −４７物質
が抗重瘍作用および免疫賦活作用を有することを見出し
、本発明を完成するに至った。
本発明の多糖類ＭＰ −６７物質は下記０性質を有する
ものである。
ものである。
（イ）元素分析値 吸渥性のため正確な分析は圃■であ
るが、炭素と窒素の比祉ｏｓｍ−２ｇｔ１である （口）分 子 量 セファ璽−ス０Ｌ−４１を用いるｊ
ゲル濾過法によると平均分子置紘２に１０ａ〜
４×１０Ｓである （ハ）有機溶媒には不溶であるが、水に可溶であるに）
フェノール硫酸法による発色試験 陽性（ホ）ガスタロ
マドグラフ法による糖組成ラムノース５５±５襲、グル
コース２１±２弧、マンノースｚＯ±ａ７襲、ガツクト
ース４０±ａ６％ （へ）赤外ｍｓ収スペクトル 第５図に示す通りである
（ト）紫外ＩＩｒＩｋ収スペクＦル 第４図に示す通り
であるコ（Ｄ 多１１１１ 類ＭＰ −６７物質は、ア
ルテロモナス（Ａｌｔ＠ｒ傭鵬−）属に属する微生物の
培養液中に存在し、これを採取することによって得るこ
とができる。本発明の多糖類ＭＰ −４７物質は、例え
ば以下の方法で製造することができる。
るが、炭素と窒素の比祉ｏｓｍ−２ｇｔ１である （口）分 子 量 セファ璽−ス０Ｌ−４１を用いるｊ
ゲル濾過法によると平均分子置紘２に１０ａ〜
４×１０Ｓである （ハ）有機溶媒には不溶であるが、水に可溶であるに）
フェノール硫酸法による発色試験 陽性（ホ）ガスタロ
マドグラフ法による糖組成ラムノース５５±５襲、グル
コース２１±２弧、マンノースｚＯ±ａ７襲、ガツクト
ース４０±ａ６％ （へ）赤外ｍｓ収スペクトル 第５図に示す通りである
（ト）紫外ＩＩｒＩｋ収スペクＦル 第４図に示す通り
であるコ（Ｄ 多１１１１ 類ＭＰ −６７物質は、ア
ルテロモナス（Ａｌｔ＠ｒ傭鵬−）属に属する微生物の
培養液中に存在し、これを採取することによって得るこ
とができる。本発明の多糖類ＭＰ −４７物質は、例え
ば以下の方法で製造することができる。
本発明の多糖類ＭＰ −６７物質を生産する能力を有す
るアルテロモナス属に属する微生物を炭素源、窒素源、
無機イオンおよび必要によりビタミン、ア之ノ酸等の有
機栄養素を海水（人工海水を含む）に溶解した培地を用
いて培養し、培養液中に生成蓄積され九多糖類ＭＰ −
４７物質を分離、採取すればよい。炭素源としては、微
生物の培養に通常用いられるものを任意に使用でき、例
えばグルコース、シェフロース、１１１１）、デキスト
リンなどの炭水化物が好ましい。窒素源としては、同様
に通常の微生物培養に供されるものを使用でき、例えば
ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーン・ステイープ
−リカー、大豆粉、カゼイン、アンモニウムイオンなど
がある。
るアルテロモナス属に属する微生物を炭素源、窒素源、
無機イオンおよび必要によりビタミン、ア之ノ酸等の有
機栄養素を海水（人工海水を含む）に溶解した培地を用
いて培養し、培養液中に生成蓄積され九多糖類ＭＰ −
４７物質を分離、採取すればよい。炭素源としては、微
生物の培養に通常用いられるものを任意に使用でき、例
えばグルコース、シェフロース、１１１１）、デキスト
リンなどの炭水化物が好ましい。窒素源としては、同様
に通常の微生物培養に供されるものを使用でき、例えば
ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーン・ステイープ
−リカー、大豆粉、カゼイン、アンモニウムイオンなど
がある。
培養は、液体通気攪拌培養が好ましく、培養温度は該多
糖類生産菌が発育し、多糖類ＭＰ −６７物質を生産す
る範囲で適用することができ、通常は１０〜５５℃が好
ましく、より好ましくは２４〜３０℃である。培養は目
的とする多糖類ＭＰ −６７物質が″培養液中に充分蓄
積するまで継続され、通常その時間は１５〜１００時間
である。
糖類生産菌が発育し、多糖類ＭＰ −６７物質を生産す
る範囲で適用することができ、通常は１０〜５５℃が好
ましく、より好ましくは２４〜３０℃である。培養は目
的とする多糖類ＭＰ −６７物質が″培養液中に充分蓄
積するまで継続され、通常その時間は１５〜１００時間
である。
本発明の多糖類ＭＰ −６７物質を生産する能力を有す
る微生物としては、例えばアルテロモナス・バーガ（Ａ
ｌｔ＠ｒ輯−シμ地） Ｍｌ −，６ｙ （１ｍ１Ｍ
Ｐ −６２’８１）がある。零曹は海洋よ秒分離し九も
のであり、以下のような菌学的性質を有している。
る微生物としては、例えばアルテロモナス・バーガ（Ａ
ｌｔ＠ｒ輯−シμ地） Ｍｌ −，６ｙ （１ｍ１Ｍ
Ｐ −６２’８１）がある。零曹は海洋よ秒分離し九も
のであり、以下のような菌学的性質を有している。
（１）形 態
１）細胞の形および大きさ：桿菌、（１５〜α５× α
７〜α９ ｐｍ ２）細胞の多形性の有無：なし ５）運動性の有無、鞭毛の着生状態；ある、極鞭毛４）
胞子の有無、形状、大きさ、部位：なし５）ダラム染色
性：陰性 ６）抗酸性：陰性 伽）各培地における生育状態 １）肉汁寒天平板培養型生育しない １）マリーン寒天２２１６培地平板培養：中程度の生育
、円形、Ｓ平伏〜凸円状、金縁。
７〜α９ ｐｍ ２）細胞の多形性の有無：なし ５）運動性の有無、鞭毛の着生状態；ある、極鞭毛４）
胞子の有無、形状、大きさ、部位：なし５）ダラム染色
性：陰性 ６）抗酸性：陰性 伽）各培地における生育状態 １）肉汁寒天平板培養型生育しない １）マリーン寒天２２１６培地平板培養：中程度の生育
、円形、Ｓ平伏〜凸円状、金縁。
円滑、湿光、半透明、パター質Ｐａｌ・ｙ＠ｌｌｏｗＮ
ＸａｉｇＪｄ ｙ＊１１ａｖｒ色２）肉汁寒天斜ＷＪ培
養：生育しない ２）！リーン寒天２２１６ｊｉ！Ｆ地斜面培養：適度の
生育、薄膜状、糸状、ｉ１光、２社・ ｙｓｌｌｏｖＡ７Ｌｉ＃Ｌｔｙ＠ｎｅｗ色Ｓ）肉汁液体
培養；生育しない めマリーン２２１４ＩＩＩＩ地液体培養：やや濁る１表
面にｌｌＩ形威しない、粉状沈綾４）肉汁七うチン穿刺
培養；変化なし ４５ ｖ ！ｊ−＞ ２２１６＠Ｊ１１Ｉ４５チン穿刺
培養：液化する ５）リドマス慨ミルク：変化なし く０）生理学的性質 １）硝酸塩の還元：陰性 ２）脱窒反応：１ＩｉｌＩ性 Ｓ）ＭＲテスト：陰性 ４）７Ｆテスト：陰性 ５）インドールの生成！陰性 ６）硫化水素の生成：陰性 ７）デンプンの加水分解ＳＩｋ性 １０色素の生成：水溶性色素生成しない１１）ウレアー
−？＠性 １２）オキシダー４１陰性 １５）カタテーゼ富陽性 １４）生育の範Ｈ！温度１４〜５７℃で良（生育する。
ＸａｉｇＪｄ ｙ＊１１ａｖｒ色２）肉汁寒天斜ＷＪ培
養：生育しない ２）！リーン寒天２２１６ｊｉ！Ｆ地斜面培養：適度の
生育、薄膜状、糸状、ｉ１光、２社・ ｙｓｌｌｏｖＡ７Ｌｉ＃Ｌｔｙ＠ｎｅｗ色Ｓ）肉汁液体
培養；生育しない めマリーン２２１４ＩＩＩＩ地液体培養：やや濁る１表
面にｌｌＩ形威しない、粉状沈綾４）肉汁七うチン穿刺
培養；変化なし ４５ ｖ ！ｊ−＞ ２２１６＠Ｊ１１Ｉ４５チン穿刺
培養：液化する ５）リドマス慨ミルク：変化なし く０）生理学的性質 １）硝酸塩の還元：陰性 ２）脱窒反応：１ＩｉｌＩ性 Ｓ）ＭＲテスト：陰性 ４）７Ｆテスト：陰性 ５）インドールの生成！陰性 ６）硫化水素の生成：陰性 ７）デンプンの加水分解ＳＩｋ性 １０色素の生成：水溶性色素生成しない１１）ウレアー
−？＠性 １２）オキシダー４１陰性 １５）カタテーゼ富陽性 １４）生育の範Ｈ！温度１４〜５７℃で良（生育する。
至適２６〜ｓ４℃Ｉ ４ Ｇ ℃では生育しない
、Ｍ ４〜９
１５）＠素に対する態度：好気性
１４） Ｏ−］Ｆテスト（ＨＬＬｇｌｌ ｈＸａＬｔ
劇１法による）：酸を生成しない１７１糖類から酸およ
びガスの生成の有無酸の生成 ガスの生成 Ｌ−アラビノース −− 〕−キシｐ−ス 十 −Ｄ−グ
ルコース ＋１ −Ｄ−マンノース
＋・ −Ｄ−７ラクトース
十〇 −Ｄ−ガラクトース
− −麦芽糖 ＋・ − シ 曹 糖 −−乳 糖
−− Ｆレバロース −− Ｄ−ソルビット − −１）
−Ｙンエット ＋ −イノシフ
ト −− グリセリン 十 − 酸の生成 ガスの生成 デンプン −− ラフィノース −− セルビオース 土 −フ
ーリ〆−ス −− ラムノース − −・弱い １８） アルギニン、ジヒドロラー的！応（机軸ｄ＠
ｒ ＠ｔ ｍｌの方法による） ：陰性 １９）カゼインの分解性：なし ２０）ぎり一β−ヒトーキシ酪酸の蓄積：なし２１）栄
養要求性−海水を入れないと生育しない２２）下記の化
合物の資化性（ｈ鯨Ｌ・ｒの竺地＋−８助Ｓ社ｔ１）Ｄ
−グルコース ＋ 酪 酸 −Ｌ−アラ
ビノース ± メタ−安息香酸 −Ｄ−キシロース
＋ バラ−安息香酸 −Ｄ−マンノース 十
メソ−酒石酸 −Ｄ−ガラクトース − レ
ブリン酸 −サッカロース − シシラコン酸
−ラクトース − ダ＃−ン酸 十セロ
ビオース ± ！璽ン酸 −すリクン
− Ｌ−アラニン −エリストール ±
β−アラニン −ｎ−ｖンニトール ＋ Ｌ
−バリン −グリセリン ＋ −−オルニ
チン 十Ｄ−７ツクトース ＋ Ｌ−リジン
＋イノシフト ＋ Ｌ−チロシン −
トレハローλ 士 ルーアルギニン 士酢
酸 十 ベタイン ±コハク酸
＋ エタノール −クエン酸 十
Ｉ）ゝ７−９〜彬 十ブチレート 乳 酸 ＋ ７マール酸 十プロピ
オン酸 −α−ケトダルタール酸十Ｌしヒスチジン
＋ ２５） ＤｌｉｉムのＧＯ含有量！４表２襲以上の菌学
的性質からｂｒｇｓ−Ｍａｘｕｓｌ ｏｆ Ｄｏｔ・ｎ
ａｉｎａ−ｔ１マ・ｌａａｔｅｒｉｏｌｏｇｙ 、第８
版によって検索したがＰｓ＠嘘罰Ｉ属は１）ＭムーＧＯ
含量が５８〜７０％であるので合致しないし、Ｖｉ’ｂ
しｏ Ｉ ｂｔｏ１３ａａｔｓｒｉ国＃胸助ｅｂ＆およ
び一１ｂａｃｔｊｒｉ−属社通性嫌気性であシ、他の性
質も一致しない。また、細論１１ｏｂａａｔ・ｒおよび
Ｍｏｒ＆ｘａｌｌａ属は非運動性であるので異なシ、Ｂ
ｄ＠１１ａｘｉｂｒｉＯ属は優性寄生性であるため一致
せず、Ｈａ１０ｂ＆ｌ！Ｉｔｅｒｉｔｕｍ属はＤＭムー
Ｇｏ含量が５７〜６８％であるため合致しない。このよ
うに、重曹は上記マニュアルに記載されている属と重要
な性質において異なっておシ合致する属がない。
劇１法による）：酸を生成しない１７１糖類から酸およ
びガスの生成の有無酸の生成 ガスの生成 Ｌ−アラビノース −− 〕−キシｐ−ス 十 −Ｄ−グ
ルコース ＋１ −Ｄ−マンノース
＋・ −Ｄ−７ラクトース
十〇 −Ｄ−ガラクトース
− −麦芽糖 ＋・ − シ 曹 糖 −−乳 糖
−− Ｆレバロース −− Ｄ−ソルビット − −１）
−Ｙンエット ＋ −イノシフ
ト −− グリセリン 十 − 酸の生成 ガスの生成 デンプン −− ラフィノース −− セルビオース 土 −フ
ーリ〆−ス −− ラムノース − −・弱い １８） アルギニン、ジヒドロラー的！応（机軸ｄ＠
ｒ ＠ｔ ｍｌの方法による） ：陰性 １９）カゼインの分解性：なし ２０）ぎり一β−ヒトーキシ酪酸の蓄積：なし２１）栄
養要求性−海水を入れないと生育しない２２）下記の化
合物の資化性（ｈ鯨Ｌ・ｒの竺地＋−８助Ｓ社ｔ１）Ｄ
−グルコース ＋ 酪 酸 −Ｌ−アラ
ビノース ± メタ−安息香酸 −Ｄ−キシロース
＋ バラ−安息香酸 −Ｄ−マンノース 十
メソ−酒石酸 −Ｄ−ガラクトース − レ
ブリン酸 −サッカロース − シシラコン酸
−ラクトース − ダ＃−ン酸 十セロ
ビオース ± ！璽ン酸 −すリクン
− Ｌ−アラニン −エリストール ±
β−アラニン −ｎ−ｖンニトール ＋ Ｌ
−バリン −グリセリン ＋ −−オルニ
チン 十Ｄ−７ツクトース ＋ Ｌ−リジン
＋イノシフト ＋ Ｌ−チロシン −
トレハローλ 士 ルーアルギニン 士酢
酸 十 ベタイン ±コハク酸
＋ エタノール −クエン酸 十
Ｉ）ゝ７−９〜彬 十ブチレート 乳 酸 ＋ ７マール酸 十プロピ
オン酸 −α−ケトダルタール酸十Ｌしヒスチジン
＋ ２５） ＤｌｉｉムのＧＯ含有量！４表２襲以上の菌学
的性質からｂｒｇｓ−Ｍａｘｕｓｌ ｏｆ Ｄｏｔ・ｎ
ａｉｎａ−ｔ１マ・ｌａａｔｅｒｉｏｌｏｇｙ 、第８
版によって検索したがＰｓ＠嘘罰Ｉ属は１）ＭムーＧＯ
含量が５８〜７０％であるので合致しないし、Ｖｉ’ｂ
しｏ Ｉ ｂｔｏ１３ａａｔｓｒｉ国＃胸助ｅｂ＆およ
び一１ｂａｃｔｊｒｉ−属社通性嫌気性であシ、他の性
質も一致しない。また、細論１１ｏｂａａｔ・ｒおよび
Ｍｏｒ＆ｘａｌｌａ属は非運動性であるので異なシ、Ｂ
ｄ＠１１ａｘｉｂｒｉＯ属は優性寄生性であるため一致
せず、Ｈａ１０ｂ＆ｌ！Ｉｔｅｒｉｔｕｍ属はＤＭムー
Ｇｏ含量が５７〜６８％であるため合致しない。このよ
うに、重曹は上記マニュアルに記載されている属と重要
な性質において異なっておシ合致する属がない。
そこで、上記！ニエアル以外の分類体系によって検索し
九ところ重両は一謝顛ら（Ｔａ２ｃ１ｍｏＩｖｏｆａｅ
ｒｏｂｉｏ ＩＩ＆ｒｉｎ＊ ｅｕｌｓａｏｔ＊ｒｌａ
、 Ｊ、石−ｒｅｅｌ 、 １１０．４０２−４２９
．１９７２年）が提唱しているアルテロモナス属（ダラ
ム陰性、桿菌、非発酵性、極ベン毛。
九ところ重両は一謝顛ら（Ｔａ２ｃ１ｍｏＩｖｏｆａｅ
ｒｏｂｉｏ ＩＩ＆ｒｉｎ＊ ｅｕｌｓａｏｔ＊ｒｌａ
、 Ｊ、石−ｒｅｅｌ 、 １１０．４０２−４２９
．１９７２年）が提唱しているアルテロモナス属（ダラ
ム陰性、桿菌、非発酵性、極ベン毛。
ＤＭＡ −Ｇｏｏｌｉ４ （１〜５ ｏｌ、 ｉｉｔ洋
性細曹、好気性）に良く一致している。し九がって、重
曹をアルテロモナス属に属する細菌であると同定した。
性細曹、好気性）に良く一致している。し九がって、重
曹をアルテロモナス属に属する細菌であると同定した。
次に、種について検索すると、重曹のＤＭＡ−ａａ含有
量が１４２％であり、オキシダーイが１性。
量が１４２％であり、オキシダーイが１性。
、 ４０℃で生育しない、澱粉の分解性がない
等の蘭学的性質は既知のアルテＷ４ナス属の菌種のうち
アルテロモナス争パーガ（蘇ｔ＠憤１鴨−）Ｂ鴎−ａｔ
ａｌ １９７２と合致する。重両は微工研に］ＦＩＲ
Ｍ Ｐ −６２８１として寄託されている。
等の蘭学的性質は既知のアルテＷ４ナス属の菌種のうち
アルテロモナス争パーガ（蘇ｔ＠憤１鴨−）Ｂ鴎−ａｔ
ａｌ １９７２と合致する。重両は微工研に］ＦＩＲ
Ｍ Ｐ −６２８１として寄託されている。
なお、重両を紫外線、エックス線、化学薬剤等を用いて
人工的に変異させ、あるいは自然に変異して得られる変
異株であっても本発明の多糖＄ＭＰ−６７物質を生産す
る能力を有するものはすべて本発明に使用することがで
きる。
人工的に変異させ、あるいは自然に変異して得られる変
異株であっても本発明の多糖＄ＭＰ−６７物質を生産す
る能力を有するものはすべて本発明に使用することがで
きる。
本発明の多糖類ＭＰ −６７物質は培養液から公知の方
法で採取するεとができ、例えば培養液を遠心分離（７
５００ｒｐｍ、１５分）して得た上清液にエタノールを
加え、氷室に放置して生じた沈でんを分取し、これを減
圧乾燥することにより粗多糖類ＭＰ −６７物質を得る
ことができる。
法で採取するεとができ、例えば培養液を遠心分離（７
５００ｒｐｍ、１５分）して得た上清液にエタノールを
加え、氷室に放置して生じた沈でんを分取し、これを減
圧乾燥することにより粗多糖類ＭＰ −６７物質を得る
ことができる。
この粗多糖類ＭＰ −６７物質の精製法の一例を示すと
、粗多糖類ＭＰ −６７物質の水溶液にクロ四ホルふと
鳳−ブタノールを加えて攪拌した後、遠心分離して上清
液を得、この上清液について上記操作を１乃至１回繰返
し、得られた上清液にエタノールを加えて精製多糖類Ｍ
Ｐ −４７物質の沈でんを得る。さらに、この多糖類Ｍ
Ｐ −６７物質のａＯＳ舅−ＮａＯＬ溶液を七７アａ
−Ｘ ０Ｘｒ４Ｂカラムにかけ、（Ｌ Ｄ ５ Ｎ −
１ａＯｔにて適当な流速で流し、所定１！毎に分画して
多糖類ＭＰ −４７物質を含む両分を集め、透析にて璽
＆ａＬを除去した後、エタノールを加えて沈でんさせて
精製多糖類ＭＰ−６７物質画分を得る。
、粗多糖類ＭＰ −６７物質の水溶液にクロ四ホルふと
鳳−ブタノールを加えて攪拌した後、遠心分離して上清
液を得、この上清液について上記操作を１乃至１回繰返
し、得られた上清液にエタノールを加えて精製多糖類Ｍ
Ｐ −４７物質の沈でんを得る。さらに、この多糖類Ｍ
Ｐ −６７物質のａＯＳ舅−ＮａＯＬ溶液を七７アａ
−Ｘ ０Ｘｒ４Ｂカラムにかけ、（Ｌ Ｄ ５ Ｎ −
１ａＯｔにて適当な流速で流し、所定１！毎に分画して
多糖類ＭＰ −４７物質を含む両分を集め、透析にて璽
＆ａＬを除去した後、エタノールを加えて沈でんさせて
精製多糖類ＭＰ−６７物質画分を得る。
本発明の多糖類ＭＰ −４７物雪の物理化学的性質は次
のとおシである。
のとおシである。
多糖＠ＭＰ−６７物１１［１０ｑに７２−硫酸ａ５ｍを
加え、室温で２時間放電した。この液に水７ｄを加え封
管し油浴により１０５℃で２時間加熱した。反応液を水
酸化パックムで中和し、生成した硫酸バリウムを濾去し
、濾液を減圧乾燥し、布敷の？ＭＳ化剤によ）！ＭＢ化
し、ガスタロマドグラフィーによシ響準物質と比稜分析
したところ、本発明の多糖類ＭＰ −４７物質の構成糖
とその組成は下表の如くであった。
加え、室温で２時間放電した。この液に水７ｄを加え封
管し油浴により１０５℃で２時間加熱した。反応液を水
酸化パックムで中和し、生成した硫酸バリウムを濾去し
、濾液を減圧乾燥し、布敷の？ＭＳ化剤によ）！ＭＢ化
し、ガスタロマドグラフィーによシ響準物質と比稜分析
したところ、本発明の多糖類ＭＰ −４７物質の構成糖
とその組成は下表の如くであった。
第 １ 表
ラムノース ５ｓ±５襲
ダルコース ２１±２１ｓ
！ンノース ｔｏ±１７％
ガラタシース ムｏ！ｃｃＬ６％
次に、本発明の多糖類ＭＡＦ −６７物質は多糖の一般
的性質として＠１ｍ性のため、正確な分析は困難である
が、その元素分析値の一例はＯ２！１９．８７≦、！！
Ｅ＆１５？襲、ｍ：ｔｔｓ襲である。なお、炭素と窒素
の比は（１：１１−２０！１である。また、セフ了り一
ス０Ｌ−４］１を用いるゲル濾過法で測定した平均分子
量は２Ｘ１０１〜４Ｘ１０’であり、口ｒ錠剤法によ〉
測定し良法外線吸収スペクトルは第Ｓ図に示し九と＞ｂ
であるが、水溶液（１ｍｇ／−）中での紫外線吸収スペ
タ）ルは第４図に示したとおりである。本発明の多糖類
ＭＰ −６７物質は白色である。本物質社有機溶媒には
不溶であるが、水に可溶である。本物質の７エノール硫
酸法による発色試験は陽性である。
的性質として＠１ｍ性のため、正確な分析は困難である
が、その元素分析値の一例はＯ２！１９．８７≦、！！
Ｅ＆１５？襲、ｍ：ｔｔｓ襲である。なお、炭素と窒素
の比は（１：１１−２０！１である。また、セフ了り一
ス０Ｌ−４］１を用いるゲル濾過法で測定した平均分子
量は２Ｘ１０１〜４Ｘ１０’であり、口ｒ錠剤法によ〉
測定し良法外線吸収スペクトルは第Ｓ図に示し九と＞ｂ
であるが、水溶液（１ｍｇ／−）中での紫外線吸収スペ
タ）ルは第４図に示したとおりである。本発明の多糖類
ＭＰ −６７物質は白色である。本物質社有機溶媒には
不溶であるが、水に可溶である。本物質の７エノール硫
酸法による発色試験は陽性である。
本発明の多糖類ＭＰ −６７物質の構成成分には未同定
物質が含まれておシ、この物質について検討するため、
後記の試料■約５■に１１１−Ｈ，８０４１ＩＩ７を加
え封管し、油浴にてｔｏｏ”ｃで５時間加水分解した。
物質が含まれておシ、この物質について検討するため、
後記の試料■約５■に１１１−Ｈ，８０４１ＩＩ７を加
え封管し、油浴にてｔｏｏ”ｃで５時間加水分解した。
冷却後、水酸化バリウム飽和濱液にて中和し、５０００
ｒｐｍ、１５分の遠心分離を行なって沈でんを除去した
。上澄を凍結乾燥したのち、コレラα５−の水に溶解し
たものをイソプｐパノール；ア七トン：（ＬＩＭ乳酸（
４： ４ ！ ２）を展開剤とし、薄層プレー）（ｎ＠
ｓ・１息・１６０１Ｆ、 メルク社１りを（１５Ｍの１
ｈＢ禽２０４溶液に浸漬後風乾して１０５℃で１時間加
熱し喪ものを用いて薄層クロマトグラフィーを行なった
ところ下表の如き結果を得た。なお、検出は了ニスアル
デヒド硫酸溶液をスプレィし１０５℃で加熱することに
よシ行な第 ２ 表 ラムノース α６ｏ 黄 色 α６ｏ 黄
色マンノース α３６ 褐 色 α３６
褐 色グルコース α３ｏ 青 色
（１５０青 色＋１２７ 褐 色 ガラクトース α２５ 青緑色 α２３ 青緑
色さらにＨ１ｔ＠ｎ２７の物質をアテピノース、ソルボ
ース、グルコペプトース、タロース、アルドロース、タ
ガｐ−ス、７ラクトースおよびりが一スと比較したが、
これらの糖にも該当しないことが判明した。
ｒｐｍ、１５分の遠心分離を行なって沈でんを除去した
。上澄を凍結乾燥したのち、コレラα５−の水に溶解し
たものをイソプｐパノール；ア七トン：（ＬＩＭ乳酸（
４： ４ ！ ２）を展開剤とし、薄層プレー）（ｎ＠
ｓ・１息・１６０１Ｆ、 メルク社１りを（１５Ｍの１
ｈＢ禽２０４溶液に浸漬後風乾して１０５℃で１時間加
熱し喪ものを用いて薄層クロマトグラフィーを行なった
ところ下表の如き結果を得た。なお、検出は了ニスアル
デヒド硫酸溶液をスプレィし１０５℃で加熱することに
よシ行な第 ２ 表 ラムノース α６ｏ 黄 色 α６ｏ 黄
色マンノース α３６ 褐 色 α３６
褐 色グルコース α３ｏ 青 色
（１５０青 色＋１２７ 褐 色 ガラクトース α２５ 青緑色 α２３ 青緑
色さらにＨ１ｔ＠ｎ２７の物質をアテピノース、ソルボ
ース、グルコペプトース、タロース、アルドロース、タ
ガｐ−ス、７ラクトースおよびりが一スと比較したが、
これらの糖にも該当しないことが判明した。
本発明の多糖類ＭＰ −４７物質は、非常に強力な免疫
賦活作用を有してシシ、感染症の予防および治療に有用
である。まえ、宿主の免疫機能を介して制癌効果を発揮
する。
賦活作用を有してシシ、感染症の予防および治療に有用
である。まえ、宿主の免疫機能を介して制癌効果を発揮
する。
次に、本発明を実施例により詳しく説明する。
実施例１
アルテロモナス・パーガＭＰ −６７株（？ｍＲＭｐ−
６２ａｔ）をダｋ ） −Ｘ （Ｌ ８ ％ 、 ｇ
９ ヘフ）ンα５襲、酵母エキスα１襲を含む人工海水
（ジャ！リンラボラ）り一製、２１山８）の培地（９■
７．２）１５ｊを入れたＳａｔ容゛ジャーファーメンタ
−に接種し、２７℃で通気量１／、ママｌ、攪拌５００
ｒｐｙａの条件で２５時間培養した。
６２ａｔ）をダｋ ） −Ｘ （Ｌ ８ ％ 、 ｇ
９ ヘフ）ンα５襲、酵母エキスα１襲を含む人工海水
（ジャ！リンラボラ）り一製、２１山８）の培地（９■
７．２）１５ｊを入れたＳａｔ容゛ジャーファーメンタ
−に接種し、２７℃で通気量１／、ママｌ、攪拌５００
ｒｐｙａの条件で２５時間培養した。
次いで、培養液を遠心分離（７５００ｒｐｍ 、 １５
分）して除菌して上清液を得、この上清液にｔ５５倍量
エタノールを加えた後、−夜氷室に放置した。生じた沈
でんを集め、減圧下に乾燥して粗多糖−ＭＰ −６７物
質（以下、試料Ｉという。）を得た。収量は４４７Ｆで
あった。粗多糖類ＭＰ −６７物質のフェノール硫拳法
（標準：ダルコース）による糖含量はＳ翫６襲であ）、
ローリ−法（標準：ウシ自涜アルブミン）による蛋白含
量は１ ｔ４％であった。
分）して除菌して上清液を得、この上清液にｔ５５倍量
エタノールを加えた後、−夜氷室に放置した。生じた沈
でんを集め、減圧下に乾燥して粗多糖−ＭＰ −６７物
質（以下、試料Ｉという。）を得た。収量は４４７Ｆで
あった。粗多糖類ＭＰ −６７物質のフェノール硫拳法
（標準：ダルコース）による糖含量はＳ翫６襲であ）、
ローリ−法（標準：ウシ自涜アルブミン）による蛋白含
量は１ ｔ４％であった。
この試料１１ＰをａＯＳ輩−１ａＯ４２００−に溶解し
、この液をりｐ！シダラフ１回当シ１０ｍ使用して七７
ア０−０−Ｘ０ｋ４φ７．５×４Ｑｅ１Ｍ。
、この液をりｐ！シダラフ１回当シ１０ｍ使用して七７
ア０−０−Ｘ０ｋ４φ７．５×４Ｑｅ１Ｍ。
α０５Ｍ−１１ａ０４）カラムにかけ、α０５Ｍ−Ｍａ
Ｏｊにて流速８０ ｄ／ｂｒで流し、２０ｉｄ毎に分画
して第１図に示したム画分を集めた。
Ｏｊにて流速８０ ｄ／ｂｒで流し、２０ｉｄ毎に分画
して第１図に示したム画分を集めた。
このムー分を濃縮、透析して得た透析液５８１１ｊに２
倍量のエタノールを加え、生じた沈でんを集め、減圧下
に乾燥して乾燥物（以下、試料■という。）を得九。収
量は５ｏｏｑであった。試料■について試料■と同様に
分析したところ糖含量Ｓ直１−１蛋白質含量ａ６％であ
った。
倍量のエタノールを加え、生じた沈でんを集め、減圧下
に乾燥して乾燥物（以下、試料■という。）を得九。収
量は５ｏｏｑであった。試料■について試料■と同様に
分析したところ糖含量Ｓ直１−１蛋白質含量ａ６％であ
った。
次に、この試料ｌｌ５２０１１を５２−のα０ト１Ｎ＊
Ｏ１に溶解し、再びゲル濾過（１回に５ｄ使ったこと以
外は上記と同様）を行なって精製を、ｍｅ返した。
Ｏ１に溶解し、再びゲル濾過（１回に５ｄ使ったこと以
外は上記と同様）を行なって精製を、ｍｅ返した。
上記精製試料液を５ｔの脱イオン水で５回繰返して透析
し、次いでセファデックスＧ−５０（φ５Ｘ４０５１）
カラムで脱塩し、得られ良港出液を１０−に澁縮した。
し、次いでセファデックスＧ−５０（φ５Ｘ４０５１）
カラムで脱塩し、得られ良港出液を１０−に澁縮した。
しかる後、脱イオン水で透析し先後、２倍量Ｏ工身ノー
ルを加えて沈でんを生成せしめ、得られた沈でんを減圧
下に乾燥して純粋な多糖標品の白色粉末（以下、試料■
という。）１４０吋を得た。このものの糖含量はＳｔＯ
％であシ、蛋白質含量は８％であった。この試料■のク
リマＦグテムを第２図に示す。また、この試料ｍ＃ｉ前
記したような物理的化学的性質を有していた。
ルを加えて沈でんを生成せしめ、得られた沈でんを減圧
下に乾燥して純粋な多糖標品の白色粉末（以下、試料■
という。）１４０吋を得た。このものの糖含量はＳｔＯ
％であシ、蛋白質含量は８％であった。この試料■のク
リマＦグテムを第２図に示す。また、この試料ｍ＃ｉ前
記したような物理的化学的性質を有していた。
実施例２
５を容フラスコに実施例１と同じ組成の培地（但し、ダ
ルコース含量は１４％）１ｔを加え、実施例１と同じ菌
株を植菌し、２７℃で５日間往復銀とう培養を行なった
。しかる後、実施例１と同じ操作を行ない粗多糖類ＭＰ
−４７物質３１０１１９を得た。
ルコース含量は１４％）１ｔを加え、実施例１と同じ菌
株を植菌し、２７℃で５日間往復銀とう培養を行なった
。しかる後、実施例１と同じ操作を行ない粗多糖類ＭＰ
−４７物質３１０１１９を得た。
このものは糖含量はｓ７弧であり、蛋白質含量は１五５
襲であった。
襲であった。
実施例Ｓ
荀すルコー！１８０腹水癌に対する抗腫瘍試験１０Ｒｖ
？Ｘ （５運令、雌）にｌＸｌ０・個のサルコーマ１８
０腫瘍細胞を腹腔内移植した。
？Ｘ （５運令、雌）にｌＸｌ０・個のサルコーマ１８
０腫瘍細胞を腹腔内移植した。
ｉ 翌日より゛０日間所定量の試料を腹腔内投与し
／％平均生存日数と延命率を求めた。結果を第１表に示
す。
／％平均生存日数と延命率を求めた。結果を第１表に示
す。
Ｓ＠
ｂ） ｗウス胛細胞の幼若化に対する作用０Ｄ１１マウ
ス（６運令、雌）よ１牌細胞を集め、１弧の牛胎児血清
を含むＩＩＰＭ１１６４ｏｊ４ｊ地にＩ Ｘ １０’個
／ｄとなるように懸濁した。
ス（６運令、雌）よ１牌細胞を集め、１弧の牛胎児血清
を含むＩＩＰＭ１１６４ｏｊ４ｊ地にＩ Ｘ １０’個
／ｄとなるように懸濁した。
この細胞懸濁液α２−に試料溶液１０μｔを加え、Ｓ襲
ａＯ，存在下５７℃で培養を開始し、５４時間後にα１
Ｐ０１の一−チミジンを添加し、さらに１８時間培養を
続けえ。しかる後、培養碑細胞に取り込まれ九１−チミ
ジンをラジオアイソトープのカウントＩＩ（０１＞１ｍ
１）を測定することにより求めた。結果を第４Ｉｌに示
す。
ａＯ，存在下５７℃で培養を開始し、５４時間後にα１
Ｐ０１の一−チミジンを添加し、さらに１８時間培養を
続けえ。しかる後、培養碑細胞に取り込まれ九１−チミ
ジンをラジオアイソトープのカウントＩＩ（０１＞１ｍ
１）を測定することにより求めた。結果を第４Ｉｌに示
す。
Ｏ５５５
ａ１ ５８７
（Ｌ４ Ｂ５５
ｔ６ １１０８
瓜２ ２２８７
２！Ｌ０ ５４０２
１０００ ２４２７
第１ＷＪおよび第２図はそれぞれ試料！および試料ｍｌ
■昧の溶出曲線である。第５図は本発明の多糖類ＭＰ
−６７物質の赤外ｌＩ＠収スペクトルであり、第４１１
４は紫外ＩＩ＠収スペクトルである。 第１頁の続き ０発 明 者 椎尾剛 鎌倉市山崎１４９５−５ ０発 明 者 石塚雅章 東京都大田区田園調布本町３− ７ ０発 明 者 大貫隆 川崎市中原区中丸子１１５５−２
■昧の溶出曲線である。第５図は本発明の多糖類ＭＰ
−６７物質の赤外ｌＩ＠収スペクトルであり、第４１１
４は紫外ＩＩ＠収スペクトルである。 第１頁の続き ０発 明 者 椎尾剛 鎌倉市山崎１４９５−５ ０発 明 者 石塚雅章 東京都大田区田園調布本町３− ７ ０発 明 者 大貫隆 川崎市中原区中丸子１１５５−２
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 を下記の性質を有する多糖類ＭＰ −６７物質。 ヒ）元素分析値 ＠湿性Ｑため正確な分析は困難である
が、炭素と窒素０比は０：ｌ−２０：１である。 （→分 子 量 七７アリース０ｎ−４１Ｂを用いるゲ
ル濾過法によると平均分子量は２Ｘ１０１〜４×１０藝
である。 （ハ）有機溶媒に祉不溶であるが、水に可溶である に）フェノール硫酸法による発色試験 陽性に）ガスク
ロマシダラフ法による糖組成ラムノース５５±５憾、ダ
ルコース！１±２襲、マンノース２０±ａ７％、ガラク
トース＆０±ａ６憾 （へ）赤外線吸収スペク）ル第Ｓ図に示す通勤である（
０紫外線吸収スペタシル第４図に示す通りであるＬアル
テａ毫ナス属に属し、下記の性質を有する多糖＠ＭＷ−
６７物質 頓元素分析値 ＠湿性のため正確な分析は困−であるが
、炭素を窒素の比社０２ｍ−２０：１である Ｍ分 子 量 七７アーース６Ｊ４ｍを用いるゲル濾過
法、によると平均分子量は２Ｘ１．Ｏｍ〜４×１０Ｓで
ある （ハ）有機溶媒に社不溶であるが、水に可溶である 、に）フェノール硫酸法による発色試験 陽性（ホ）ガ
スタ田マＦダラ７法による糖組成ラムノース５Ｓ±５ｓ
、ダルコース２１±２−、マンノースｚＯ±αア襲、ガ
ラタトース瓜Ｏ±ａ４％ ・。 （へ）赤外線！収スペクトル第５図に示す、通勤である
（ト）紫外１１１ｒＩｋ収スペク）ル第４図に示す通り
であるを生産する能力を有する微生物を培−し、培地、
中に生成され大上記多糖類菖Ｗ−４７＠質を採取するこ
とを特徴とする多糖類Ｍｌ −４７物質のＳ＊法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57003410A JPS58121798A (ja) | 1982-01-14 | 1982-01-14 | 多糖類ｍｐ−６７物質およびその製造法 |
| EP83100111A EP0084333B1 (en) | 1982-01-14 | 1983-01-08 | Polysaccharide substance, process for the production of same, pharmaceutical compositions containing the same and their use as medicaments |
| DE8383100111T DE3363975D1 (en) | 1982-01-14 | 1983-01-08 | Polysaccharide substance, process for the production of same, pharmaceutical compositions containing the same and their use as medicaments |
| AT83100111T ATE20360T1 (de) | 1982-01-14 | 1983-01-08 | Polysaccharidsubstanz, verfahren zu deren herstellung, dieselbe enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen sowie deren verwendung als medikamente. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57003410A JPS58121798A (ja) | 1982-01-14 | 1982-01-14 | 多糖類ｍｐ−６７物質およびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58121798A true JPS58121798A (ja) | 1983-07-20 |
| JPS61361B2 JPS61361B2 (ja) | 1986-01-08 |
Family
ID=11556606
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57003410A Granted JPS58121798A (ja) | 1982-01-14 | 1982-01-14 | 多糖類ｍｐ−６７物質およびその製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0084333B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58121798A (ja) |
| AT (1) | ATE20360T1 (ja) |
| DE (1) | DE3363975D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994018340A1 (fr) * | 1993-02-15 | 1994-08-18 | Institut Français De Recherche Pour L'exploitation De La Mer - Ifremer | Bacteries du type alteromonas, polysaccharides produits par ces bacteries, ose contenu dans ces polysaccharides et applications |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0568288A (ja) * | 1991-09-06 | 1993-03-19 | Hanshin Electric Co Ltd | 遠隔操作型自動給湯システム |
| FR2755142B1 (fr) * | 1996-10-30 | 1999-01-15 | Ifremer | Souche bacterienne marine du genre alteromonas, exopolysaccharides hydrosolubles produits par cette souche, et leurs utilisations |
-
1982
- 1982-01-14 JP JP57003410A patent/JPS58121798A/ja active Granted
-
1983
- 1983-01-08 EP EP83100111A patent/EP0084333B1/en not_active Expired
- 1983-01-08 DE DE8383100111T patent/DE3363975D1/de not_active Expired
- 1983-01-08 AT AT83100111T patent/ATE20360T1/de not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994018340A1 (fr) * | 1993-02-15 | 1994-08-18 | Institut Français De Recherche Pour L'exploitation De La Mer - Ifremer | Bacteries du type alteromonas, polysaccharides produits par ces bacteries, ose contenu dans ces polysaccharides et applications |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE20360T1 (de) | 1986-06-15 |
| DE3363975D1 (en) | 1986-07-17 |
| EP0084333B1 (en) | 1986-06-11 |
| JPS61361B2 (ja) | 1986-01-08 |
| EP0084333A1 (en) | 1983-07-27 |
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