KR870001814B1 - 고분자 β-1, 3-글루칸의 제조방법 - Google Patents

고분자 β-1, 3-글루칸의 제조방법 Download PDF

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오사무 다나베
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오오미야 타카시
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Abstract

내용 없음.

Description

고분자 β-1, 3-글루칸의 제조방법
제1도는 본 발명 물질의 적외선 흡수 스펙트라를 나타낸 것임.
본 발명은 항종양 작용을 갖는 다당류의 제조방법에 관한 것이다.
특히, 본 발명은, 항종양성 다당류를 생성할 수 있고 아스코미코티니아(Ascomycotinia)아부(亞部)디스코미세테스(Discomycetes)강, 페지잘레스(Pezizales)목, 사르코스시피니애(Sarcoscyphineae)아목, 사르코마타세애(Sarcomataceae)과, 사르코마테애(Sarcomateae)족, 슈도플렉타니아(Pseudoplectania)속에 속하는 균주의 균사체 및/또는 자실체(子實體)로부터, 또는 상기 균주주가 배양된 배지로부터 항종양성 작용이 우수한 신규 β-1, 3-글루칸을 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 β-1, 3-글루칸은 신규 고분자 다당류이며 다음 구조식을 갖는 글루코피라노스 단위체로 중합된 것이다:
Figure kpo00001
상기식에서, "Glu"는 글루코피라노스 잔류물을 나타낸다.
본 발명의 β-1, 3-글루칸은 변태인자 종양뿐만 아니라 선천성 종양에 대해 강한 항종양작용을 갖는데, 이러한 작용은 종래의 β-1, 3-글루칸과 관련되어 보고되지 않았다. 더우기, 이 β-1, 3-글루칸은, 또한 C3H/He 생쥐에 있어서 변태성 종양 "Sarcoma-180"에 대해 강한 항종양 작용을 가지며, 상기 생쥐는 면역반응이 낮은 것으로 알려져 있다.
지금까지는 항종양성 β-1, 3-글루칸의 화학적 구조를 언급한 수개의 문헌이 알려져 있다:그들은 다음과 같다:
(1) 스키조필란(Schizophyllan):
스키조필럼 코뮨(Schizophyllum commune)(Fries)(일본 농예 화학회지 제44권, 337-342항, 1970: 동 45권, 162-168항, 1971년)로 부터 생성된 β-1, 3-글루칸. 여기서 제안된 화학적 구조는 다음과 같다
Figure kpo00002
(2) 바시디오마세테스(Basidiomycetes)강의 아우리큘라리아(Auricularia)속으로 부터 생성된 β-1, 3-글루칸(일본특허 공개번호 제63012/1979 참조). 여기서 제안된 화학적 구조는 다음과 같다:
Figure kpo00003
(3) 렌티난(Lentinan):
렌티너스 에도데스(Lentinus edodes)(Berk) 신저(Nature 222, 687-688, 1969):Garbohydr. Research 47, 99-104, 1976: "Gan to Menekizokyo"(저자:고로지하라, 일본, 도꾜 고단샤 발행, 1980)로 부터 생성된 β-1, 3-글루칸. 여기에서 제안된 화학적 구조는 다음과 같다.
Figure kpo00004
이들 공지의 β-1, 3-글루칸과 본 발명의 β-1, 3-글루칸은, D-글루코피라노스 단위체의 β-1, 3-결합 주쇄와 β-(1, 6)-연결된 D-글루코피라노스 측쇄를 일반적으로 갖는다. 그러나, 구조식(I)을 구조식(II), (III) 및 (IV)와 비교할 때, 본 발명의 β-1, 3-글루칸은, β-1, 3 고리의 수와 β-1, 6 측쇄고리의 수의 비율에 있어서 공지의 β-1, 3-글루칸과 다르다는 것을 알 수 있다. 이와같이, 본 발명의 β-1, 3-글루칸은 공지의 β-1, 3-글루칸과는 화학적 구조가 다른 새로운 것이다.
더우기, 본 발명의 β-1, 3-글루칸은 변태성 종앙 뿐만아니라 선천성 종양에 대해 강한 항종양 작용을 갖는다. 지금까지는 선천성 종양에 대해 강한 항종양성 작용을 갖는 본 발명의 β-1, 3-글루칸이 보고되지 않았었다. 더우기, 본 발명의 β-1, 3-글루칸은, 면역반응이 낮은 것으로 알려진 C3H/He 생쥐에 있어서 변태성 종양 "Sarcoma-180"에 대해 강한 항종양 작용을 갖는다. 그러므로, 본 발명의 β-1, 3-글루칸은, 암의 면역요법 약품으로써 알려진 β-1, 3-글루칸보다 더 효과적일 것이라고 예측된다.
본 발명의 β-1, 3-글루칸에 대한 화학적 구조 및 성질은 다음과 같다:
(1) 화학적 구조:
β-1, 3-글루칸의 화학적 구조는 반복되는 단위체로서 구조식(I)로 나타내지는데 이는 다음 실험에 의해 확인되었다:
(A) 본 다당류를 미생물 비시디오마이세테스 QM806으로부터 유도된 엑소-β-1, 3-글루칸으로 처리하면 D-글루코스와 겐티오비오스를 형성하며, 그들의 몰비는 바이오겔 P-2 겔-침투크로마토그라피에 의해 측정될 때 1:0.8이다.
(B) 본 다당류를 하코머리법에 의해 메틸화시킨 후 가수분해하면 2, 3, 4, 6-테트라-0-메틸-D-글루코스, 2, 4, 6-트리-0-메탈-D-글루코스와 2, 4-디-0-메틸-D-글루코스를 얻는데, 이들은 종이 크로마토그라피, 가스크로마토그라피 및 질량분광법에 의해 확인되었으며, 그들의 몰비는 각각 0.8:1:0.8이다.
(C) 본 다당류를 과요오드산염 산화반응(0.05몰의 과요오드산염에 의해)시키면, 포름산 0.344몰을 유지시키면서 무수글루코스 단위체당 0.667몰의 과요오드산염을 소비한다.
(D) 상기 산화된 생성물을 스미스 변화법으로 처리하면 글리세롤과 글루코스(몰비:1:2.1)를 얻는다.
(E) 상기 산화되고 환원된 생성물을 온화하게 가수분해(0.03몰의 황산으로)하면 글리세롤과 비수용성 물질을 얻으며, 이 비수용성 물질을 메틸화 및 가수분해하면 유일한 2, 4, 6-트리-0-메틸-D-글루코스를 얻는다.
(F) 본 다당류를 온화하게 가수분해(0.03몰의 황산으로)하면 D-글루코스와 비수용성 물질을 얻는다. 한편, 상기 비수용성 물질을 상기한 엑소β-1, 3-글루카나제로 처리하면 유일한 D-글루코스를 얻는다 이들 결과로부터, 본 발명의 다당류는 하기구조식으로 나타내는 글루코피라노스 단위체가 중합된 β-1, 3-글루칸이라는 것이 분명하다:
Figure kpo00005
여기서, β-(1, 6) 결합의 측쇄 D-글루코피라노스 단위체(각 측쇄는 단일 D-글루코피라노스 단위체임)와 β-(1, 3)에 결합된 D-글루코피라노스 단위체의 선상쇄가 9:1의 비율로 존재한다.
(2) 원소분석:
C:43.88%
H:6.18%
(2) 분자량:
2.5×105이상(겔여과 방법)
(4) 융점:
본 물질은 명확한 융점을 나타내지는 않지만, 강열시 탄화된다.
(5) 고유광 회전도:
[α)D 25=+35°(0.5N의 NaOH, C=0.5%)
(6) 극한 점도:
[η]=20-25
극한점도는 다음 식에 의해 결정된다:
Figure kpo00006
ηsp=(η-η0)/η0=η/η0 -1
η:용액의 점도(0.1몰의 NaCl, 30℃)
η0: 용매의 점도
C:100ml 용액에서 물질의 g수
(7) 자외선 스펙트럼:
말단흡수
(8) 적외선 스펙트럼:
본 물질은 890cm-1를 흡수하는데, 이는 β-글리코시드 결합이 존재한다는 것을 나타낸다.
(9) 용해성:
본 물질은 물, 0.5N의 NaOH와 디메틸 황화물에 용해할 수 있으나, 석유 에테르, 에테르, 아세톤, 벤젠, 에탄올 및 메탄올 등에는 용해할 수 없다.
(10) 색반응:
상기 물질은 몰리쉬(Molish) 시약과 안트론(Anthrone) 시약에 대해서는 양성적인 반응을 나타내지만, 요도-전분. 시약, 바이얼(Bial)시약, 카르바솔(Carbasol)-H2SO4시약, 닌히드린 시약과 엘손-모르간(Elson-Morgan) 시약에 대해서는 음성적 반응을 나타낸다.
(11) 용액의 pH:
중성
(12) 모양:
백색분말
(13) 설탕선분
본 물질은 D-글루코스 만으로 구성되어 있다(종이 크로마토그라피, 박층 크로마토그라피, 기체-액체 크로마토그라피와 글루코스산화효소 방법에 의해 확인되었음).
상기한 바와 같이, 본 발명의 β-1, 3-글루칸은 구조식(I)의 구조를 갖고 (2)-(13)의 물리-화학적 성질을 갖는 신규 β-1, 3-글루칸이다.
본 발명의 β-1, 3-글루칸은 항종양 작용을 갖는다. 신규 β-1, 3-글루칸(실시예 3에서 얻어짐)의 항종양 작용은, 하기에서와 같이 별도로 나타낸 것을 제외하고는 종래의 방법에 의해 확인 및 결정되었다.
[실험 (1)]
본 발명의 β-1, 3-글루칸은, ICR 생쥐에 있어서 사르코마-180에 대한 항종양 작용을 갖는 것으로 밝혀졌다. 그 결과를 표 1에 나타낸다.
[표 1]
Figure kpo00007
종양: 사르코마-180
이식세포수:4×106/생쥐
생쥐:ICR계 ♀
투여:종양이식후 1일부터 매일 5번 복강내 투여한다.
(대로:염수)
판정:고체 형태의 종양 무게는 종양 이식후 4주에 측정되었다.
종양 저지율=
Figure kpo00008
Figure kpo00009
:대조군의 평균 종양중량
Figure kpo00010
:치료군의 평균 종양중량
[실험 (2)]
C3H/He 생쥐에 있어서의 사르코마-180, ICR 생쥐에 있어서의 엘리치-카시노마와 BALB/C 생쥐에 있어서의 Meth-A 피브로사르코마에 대한 본 발명의 β-1, 3-글루칸의 항종양 작용이 결정되었으며 그 결과를 표 2, 3 및 4에 나타냈다.
[표 2]
Figure kpo00011
종양: 사르코마-180 고형암.
이식세포수:4×106/생쥐
생쥐:C3H/He ♀
투여:이식후 첫날부터 매일 10번 복강내 투여한다.
(대로:염수)
판정:종양 이식후 5일간 고체형 종양의 중량을 측정하였다.
저지율=
Figure kpo00012
Figure kpo00013
:대조군의 평균 종양중량
Figure kpo00014
:β-1, 3-글루칸으로 치료된 군의 평균종양 중량
[표 3]
Figure kpo00015
종양: 엘리치 카시노마 고형암
이식세포수:4×106/생쥐
생쥐:CIR ♀
투여:이식후 첫날부터 매일 8번 복강내 투여한다. (대로:염수)
판정:이식후 5주간 고형 종양 중량을 측정하였다.
저지율=
Figure kpo00016
Figure kpo00017
:대조군의 평균 종양 중량
Figure kpo00018
:β-1, 3-글루칸으로 치료된 군의 평균 종양 중량
[표 4]
Figure kpo00019
종양: Meth-A 고형암
이식세포수:1×105/생쥐
생쥐:BALB/C ♀
투여:이식후 첫날부터 매일 10번 복강내 투여(대로:염수)
판정:이식후 5주간 고형의 종양 중량을 측정하였다.
저지율=
Figure kpo00020
Figure kpo00021
:대조군의 평균 종양 중량
Figure kpo00022
:β-1, 3-글루칸으로 치료된 군의 평균 종양 중량
[실험 3]
ICR 생쥐에 있어서 엘리치 복수암에 대한 본 발명의 β-1, 3-글루칸의 항종양 작용을 측정하였다. 그 결과를 표 5에 나타냈다.
[표 5]
Figure kpo00023
종양: 엘리치 복수암
이식세포수:5×105/생쥐
생쥐:ICR ♀
투여:이식후 첫날부터 매일 10번 복강내 투여.(대로:염수)
판정:이식후 7주동안 생쥐의 생존수와 생존일수를 측정하였다.
상기 실험(1)-(3)에서 나타낸 바와같이, 본 발명의 β-1, 3-글루칸은, ICR 생쥐에 있어서의 변태성종양 "사르코마-180" 뿐만아니라 BALB/C 생쥐에 있어서 선천성 종양 "Meth-A 피브로사르코마"에 대해 항종양 작용이 강하다. 이는 BALB/C 생쥐에 있어서의 선천성 종양 "Meth-A 피브로사르코마:에 대한 항종양 작용이 강한 β-1, 3-글루칸이 지금까지는 보고되지 않음을 나타내는 것이다. 더우기, 본 발명의 β-1, 3-글루칸은 또한, 면역반응이 낮은 것으로 알려진 C3H/He 생쥐에 있어서의 변태성 종양 사르코마-180"에 대한 항종양 작용이 강하다.
본 발명의 β-1, 3-글루칸은 시험관에서의 직접 세포독소나 종래의 약품을 사용할 때 일반적으로 나타나는 부작용(백혈구 수의 감소, 간 및 기타 기관의 빈혈, 비장의 쇠퇴, 체중손실 및 식용감퇴)이 없다. 본 β-1, 3-글루칸의 급성 독성(LD50)은, 복강내 투여될 때, 1000mg/kg 이상하다.
본 발명의 신규 다당류 또는 β-1, 3-글루칸은 항종양성 β-1, 3-글루칸을 생성할 수 있고, 아스코미코티니아 아부, 디스코미세테스 강, 페지잘레스 목, 사르코스시피니애 아목, 사르코마타세애 과, 사르코마테애 족, 슈도플렉타니아 속에 속하는 균주의 균사체 및/또는 자실체의 추출액으로부터, 또는 상기 균주가 배양된 배지로부터 얻어질 수 있다.
본 발명에 따라서 상기 속에 포함되고 항종양성 다당류를 생성할 수 있는 종의 어떠한 균주라도 사용할 수 있다.
그러나, 하기에 설명되는 본 발명의 양호한 실시예에서는 균주 슈도플렉타니아 니그렐라(Pers.) 퍽켈 K-1426을 사용하였는데, 상기 균주는 1969년 5월 일본, 호까이도, 사뽀로 교외에서 수집된 균종의 자실체(조직)을 배양함으로서 얻어졌다.
상기 균주는 다음 문헌에 의해 확인되었다:
"일본 균학 회보(Transactions of The Mycological Society of Japan)" 21, 149-179, 1980.
상기 균주의 특성은 다음과 같다:
상기 유기체는 침엽수림의 이끼에서 수집되었고 그 자실체는 슈도플렉타니아 속의 전형적인 특성을 갖는다. 이와같이 상기 유기체의 색은 검정색이며, 그 캡의 직경은 1cm이고 줄기를 갖지 않는다. 이 자실체의 외부는 벨벳같은 털로 덮혀있으며 그 외피(外皮)는 각상조직(角狀組織)과 100~150㎛의 깊이를 갖는다. 고갱이 조직은 각상조직으로 구성되어 있으며 깊이는 250~400㎛이다. 서로 꼬여지고 깊이가 150㎛인 외피 외부에 암갈색의 길고 가지달린 털이 있다. 자낭은 경막조직으로 구성되어 있으며 모양은 원통형이고 직경은 11~14㎛이다. 균사체는 필라멘트질이고 직경이 2~3㎛이다. 그 필라멘트의 상측은 약간 확장되어 있다.
이들 특징과 상기 문헌을 참고로 하여, 상기 균주는 슈도플렉타니아 니그렐라(Pres.) 픽켈로 확인되었다. 이 균주는 일본 공업과학 기술청, 발효 연구소(산업 과학 및 기술 취급소)에 FERM-P 5803으로 기탁되어 있고, 아울러, 미국 표준 배양균 수집소에 ATCC 20609으로 기탁되어 있다. 또한 이 균주는 한국 종균협회로부터 KFCC 70000이라는 번호하에 입수가능하다.
본 발명에 따라서, 디스코미세테스 강의 슈도플렉타니아 속에 속하고 항종양성 다당류를 생성할 수 있는 어떠한 균주라도 사용할 수 있다.
본 발명의 다당류는 디스코미세테스 강의 슈도플렉타니아 속에 속하는 균주의 자실체 및/또는 균사체의 추출물, 또는 상기 균주가 배양된 배지로 부터 얻어질 수 있다.
그러나, 자연에서 그렇게 많은 양의 자실체를 얻기가 쉽지 않다. 그러므로, 배양된 균사체를 사용하는 것이 유리하다. 본 발명에서 사용되는 균사체는 고체 또는 액체 배양과 같은 종래의 배양법에 의해서 얻어질 수 있다. 예를들면, 고체 배양에서, 한천, 젤라틴, 전분, 톱밥, 맥아, 쌀겨, 대두분과 기타 종래의 고체 배지 또는 그들의 혼합물을 사용할 수 있다. 액체 배양에서는, 미생물 배양기술에서 잘 알려진 여러가지 영양분을 함유하는 액체 배지를 사용할 수 있다. 이와같이, 액체 배지는 탄소공급원(예, 글루코스, 말토스, 락토스, 자당, 전분, 기름, 당밀등), 무기 및 유기 질소 공급원(예: 펩톤, 효소 추출물, 옥수수 액체, 암모늄염, 요소등)과 하나 또는 그 이상의 유기 및 무기염(예, 인산염, 마그네슘염등)을 함유할 수 있다. 바람직하다면, 비타민과 같이 증식에 필요한 기타물질을 첨가할 수 있다.
고체 및 액체 배지에 대한 이들 물질은 균 배양기술에서 잘 알려져 있으며 더 자세한 설명이 필요없다. 경제적 및 조작면에 있어서, 폭기 및 교반을 겸한 액체 배양이 고체 배양보다 훨씬 더 유리하다.
액체 배양은 정치 배양, 교반 배양 또는 심부배양과, 같은 종래의 방법으로 실시될 수 있다. 경제적 및 조작면에서, 폭기 및 교반을 겸한 액체 배양이 고체배양보다 더 유리하다.
액체 배양을 실시하는데 있어, 다음 조건을 이용할 수 있다.
초기 pH 2~9
배양온도 15~35℃
배양기간 3~30일
심부 배양의 경우에, 30~500r.p.m의 속도로 교반하면서 0.1~2.0L/min의 속도로 배지를 폭기한다.
고체 또는 액체 배양에 의해 증식된 균사체는 종래 방법으로 수집되며 본 발명의 출발물질로서 사용된다.
예를들면, 액체 배양의 경우에, 균사체는, 형성된 액체 배지를 종래의 분리방법(예, 원심분리, 여과등)에 도입시킴으로서 수집될 수 있다. 상기 분리 방법에 의해 얻어진 여액은 여과된 육즙이라 일컬어지는데 이는 또한 본 발명의 출발물질로서 사용될 수 있다.
본 발명에 따라서, 상기 방법에서 수집된 균사체 및/또는 자실체는 수성 용매로 추출된다. 이 경우에, 자실체 및/또는 균사체는 직접 추출될 수 있다. 바람직하다면, 자실체 및/또는 균사체를 추출하기 전에, 수세, 공기건조, 분쇄 또는 비극성용매로의 추출과 같이 예비처리할 수 있다.
추출에 사용되는 수성 용매는 물 또는 물과 적어도 하나의 수용성물질(예, 산, 염기, 염 또는 유기용매)의 혼합물이다.
추출시, 예비처리되거나 예비처리되지 않은 자실체 또는 균사체는 수성 용매와 혼합된다. 용매의 온도는 120℃이상으로 유지되지 않는다면, 중요하지 않다. 양호한 온도는 경제성을 고려하여 선택할 수 있다. 추출 반응 시간은 바람직하게 추출하기에 충분한 시간동안 실시된다. 일반적으로, 온도가 높으면 추출시간은 더 짧아진다. 상기 양호한 온도 범위내에서, 30분~10시간동안 양호하게 추출반응이 실시된다. 추출은 유리, 유리-라인, 에나멜 또는 스텐레스강으로 만들어질 용기에서 교반하에 양호하게 실시된다. 용매량은 광범위하게 변할 수 있지만, 일반적으로 자실체 및/또는 균사체의 10~100배(건조중량기준)이다. 추출하는데 있어 분쇄된 자실체 또는 균사체를 사용하는 것이 양호하다. 추출후, 종래방법(예, 여과 또는 원심분리)에 의해 추출액으로부터 균사체 또는 자실체와 기타 고체물질을 제거한다. 추출액은 진공증발등에 의해 농축된다. 일반적으로, 수성 추출액은 초기부피의 1/3~1/10까지 농축된다.
상기와 같이 얻어진 추출액을 하기와 같이 정제하여 침전물을 형성시킨 다음 의도된 다당류를 회수한다 본 명세서에서 "추출액"이란 용어는 추출물로 부터 균사체 및/또는 자실체외 기타 고체물질을 제거할 때 형성되는 여액 또는 원심분리액을 뜻한다.
여과된 육즙은 하기와 같이 정제를 위해 사용되며, 침전을 유발시켜 의도된 다당류를 회수할 수 있다.
본 명세서에 "여과된 육즙"이란 용어는 활성 성분(즉, 다당류)을 함유하고 배양된 육즙(즉, 배양매체)으로 부터 균사체와 기타 고체물질을 제거함으로서 얻어진 여액을 뜻한다. 상기 여과 매체에서, 균주는 상기 액체 배양에 의해 배양되었다. 여과된 육즙은, 더처리하기 위해, 진공 증발에 의해 농축된다. 일반적으로, 여과된 육즙은 초기 부피의 1/3~1/10까지 농축된다. 농축 여과된 육즙은 다시 정제된다.
추출액과 여과된 육즙은 별도로 정제되거나 함께 혼합되어 정제될 수 있다.
정제는 다음 어느 방법으로도 실시될 수 있다.
(A) 극성이 높은 유기 용매(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 아세톤 등과 같은 저급알콜 및 케톤)를 첨가하거나 염석함으로서(황산 암모늄, 염화나트륨, 염화칼륨 등과 같은 수용성 무기염을 첨가함으로서)원하는 물질을 침전함.
(B) 바람직한 활성물질이 회수되는 순수 용액을 생성하기 위해서, 투석, 선삼투, 겔 여과(세파텍스, 비오-겔 등과 같은 폴리아크릴아마이드 겔 또는 덱스트란을 사용함으로서), 이온교환수지 처리(앰버라이트, 다우엑스, 듀오라이트 등과 같은 여러가지 시중 상품의 음이온 및 양이온 교환수지를 사용함으로서), 한외여과 및 그들의 혼용에 의한 산, 이온 및 저분자량 물질을 제거함.
(C) 세박(Sevag)법, 트리플루오로트리클로로메탄 법, 단백효소 처리법 등에 의해 유리 단백질을 제거함.
상기 방법들은 본 기술에서 알려져 있다. 그들중 바람직한 2 또는 그 이상의 방법을 혼용할 수 있다. 그러나, 일반적으로, 추출액 또는 여과된 육즙은 농축후, 이온교환수지처리, 투석, 역삼투, 겔여과, 한외여과에 도입되어 탈색, 산제거 및 저분자량 물질의 제거가 발생한다. 상기 정제된 용액으로부터, 바람직한 활성물질은 냉동건조와 같은 적당한 방법에 의해 제거될 수 있다. 바람직하다면, 바람직하게 정제하기 위해서 상기 방법을 반복할 수 있다.
이와같이 해서 얻어진 물질은 하기의 특성을 갖는다.
본 발명은, 본 발명에 따른 다당류의 적외선 스펙트럼을 나타내는 제1도를 참고로 다음 실시예에서 더 상세히 설명한다.
[실시예 1]
슈도플렉타니아 니그렐라(Pers.) 퍽켈 K-1426의 균주(FERM-P5803, ATCC 20609)는 다음 배지에서 배양되었다:
글루코스 20g
옥수수 스팁 리커(steep liquor) 5g
대두분 1g
효소 추출물 1g
인산칼륨(1차) 1g
황산마그네슘(7H2O) 0.5g
물 1ℓ
초기 pH 5.6
상기 배지 100ml를 각각의 500ml 에르렌메이어 플라스크에 넣음으로서 배양을 실시했다. 플라스크를 솜으로 막고 120℃에서 20분동안 살균하였다. 냉각후, 2% 글루코스, 0.5% 에비오스(Ebios)와 1.5% 한천을 함유하는 배지에서 별도로 배양된 상기 균주로 종래 방법대로 접종하였다. 27℃에서 접종한지 10일후, 플라스크의 내용물을 그 다음의 배양에 사용하였다. 30ℓ 스텐레스강 병 발효용기에서의 상기 액체 배지 20ℓ를 120℃에서 20분동안 살균한다음 냉각하였다. 그다음, 상기 플라스크내의 내용물을 상기 병 발효용기에서 배지로 배양하였다. 배지를 270℃에서 12일동안교반(200rpm)하면서 0.5ℓ/ℓ/min의 폭기속도로 폭기배양하였다, 이와같이해서 얻어진 배양된 육즙을 여과하여 균사체(건조) 130g과 여과된 육즙 17ℓ를 얻었다. 본 명세서에서 "여과된 육즙"이란 용어는 활성성분(즉, 다당류)을 함유하고 배양된 육즙(즉, 균주가 상기 액체 배양법으로 배양된 배지)으로부터 균사체와 기타 고체 물질을 제거함으로서 얻어진 여액을 뜻한다.
[실시예 2]
실시예 1에서 얻어진 균사체(130g)을 물 1ℓ로 세척하였으며 세척액을 여과된 육즙과 혼합하였다. 세척된 균사체를 물 15ℓ와 혼합한 다음 혼합물을 120℃에서 30분동안 밀폐된 용기에서 가열하였다. 그다음 혼합물을 실온까지 냉각한 다음 여과하였다. 이 과정을 두번 반복하여 추출액 43ℓ를 얻었다. 상기 추출액을 초기 부피의 1/10까지 농축하였다. 농축된 추출액을 똑같은 부피의 에탄올에 첨가하여 침전된 다당류를 분리하였다. 그다음, 이 침전물을 물에 용해시킨 후 투석하였다. 투석물을 DEAE-세파덱스 이온 교환 크로마토그라피 처리하고, DEAE-세파덱스 이온 교환 크로마토그라피의 비흡수부분은 또한 SP-세파덱스 이온 교환 크로마토그라피로 처리되었다. 상기 SP-세파덱스 이온 교환 크로마토그라피의 비흡수 부분을 다시 투석한 다음 냉동 건조하여 백색분말 8.6g을 얻었다. 이 물질은 상기 실험(A)-(E)에 의해 구조식(I)의 반복된 단위체를 갖는 β-1, 3-글루칸으로 확인되었다. 이 β-1, 3-글루칸의 평균분자량은 약 1×106(겔-여과방법).
상기 물질의 적외선 스펙트럼은 제1도에 나타냈다.
[실시예 3]
실시예 1에서 얻어지고 여과된 육즙 17ℓ를 실시예 2에서와 똑같은 방법으로 처리하여 백색분말 13.2g을 얻었다. 이 물질은 상기 실험(A)-(E)에 의해 구조식(I)의 반복된 단위체를 갖는 β-1, 3-글루칸으로 확인되었다. 이 β-1, 3-글루칸의 평균 분자량은 약 1×106(겔-여과방법)이었다.
이 물질의 적외선 스펙트럼은 제1도에 나타냈다.

Claims (2)

  1. 디스코미세테스 강의 슈도플렉타니아 속에 속하는 균주의 균사체 또는 자실체의 추출액 또는 배지로부터 여과된 육즙을 형성한 다음, 정제된 형태로 여과된 육즙 또는 추출액으로부터 β-1, 3-글루칸을 회수하는 것으로 구성되는, 하기 구조식을 갖는 글루코피라노스 단위체가 반복된 고분자 β-1, 3-글루칸을 제조하는 방법:
    Figure kpo00024
  2. 제1항에 있어서, 균주가 슈도플렉타니아 니그렐라(Pers.) 퍽켈 K-1426(FERM-P 5803, ATCC 20609)인 것을 특징으로 하는 방법.
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