JPS6037993A - フラクトシルトランスフェラーゼおよびその使用方法 - Google Patents
フラクトシルトランスフェラーゼおよびその使用方法Info
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- JPS6037993A JPS6037993A JP59128395A JP12839584A JPS6037993A JP S6037993 A JPS6037993 A JP S6037993A JP 59128395 A JP59128395 A JP 59128395A JP 12839584 A JP12839584 A JP 12839584A JP S6037993 A JPS6037993 A JP S6037993A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はフラクトシルジサッカライド、特にノ・ロスク
ロース甘味剤特に４． １’、６’−）リクロロ−４，
１’−６’−）リゾオキシ−ガラクトスクロース（ＴＧ
Ｓとして知られる）を酵素反応により製造する方法に関
する。
ロース甘味剤特に４． １’、６’−）リクロロ−４，
１’−６’−）リゾオキシ−ガラクトスクロース（ＴＧ
Ｓとして知られる）を酵素反応により製造する方法に関
する。
４、 １’、６’−トリクロロ−４，１’、６’−）リ
ゾオキ７−がラクトスクロースは英国特許第１５４６１
６７号明細書に他のクロロスクロース誘導体と共に１示
されている強力な甘味剤である。６−ヒドロキシ基がエ
ーテル化されているか存在しない類似化合物はＥ Ｐ
０１０３４７９ ｆｉ−および（）Ｂ２１２７８０６Ａ
に記述されている。その他のハロケゞン置換基を有する
類似化合物はＧＢ２１０４０６３Ａに記述されている。
ゾオキ７−がラクトスクロースは英国特許第１５４６１
６７号明細書に他のクロロスクロース誘導体と共に１示
されている強力な甘味剤である。６−ヒドロキシ基がエ
ーテル化されているか存在しない類似化合物はＥ Ｐ
０１０３４７９ ｆｉ−および（）Ｂ２１２７８０６Ａ
に記述されている。その他のハロケゞン置換基を有する
類似化合物はＧＢ２１０４０６３Ａに記述されている。
ＴＧＳの一製造法は（）Ｂ２０７９７４９Ａおよび米国
特許第４，３８０，４７６号明細書に記載されている。
特許第４，３８０，４７６号明細書に記載されている。
この方法はスクロースの６−エステル、又はスクロース
の６−エステルを主として含有する混合物を調製し、つ
いでこの６−置換化合物を選択的に塩素化するものであ
る。続いてこの６−位で脱エステル化するとＴＧＳが得
られる。実際、化学的手段を使う場合、特定の方法でス
クロース６−エステルを好収量で得るのは難しい。相当
する６−置換グルコースおよびフラクトシド糖から出発
して酵素反応を行ない、他の位置に置換基を有する他の
スクロースを含まない６−置換スクロースを得、ついで
出発物質とグルコースから容易に分離できる、６−置換
スクロース誘導体からＴＧＳを難なく製造することがで
きる。
の６−エステルを主として含有する混合物を調製し、つ
いでこの６−置換化合物を選択的に塩素化するものであ
る。続いてこの６−位で脱エステル化するとＴＧＳが得
られる。実際、化学的手段を使う場合、特定の方法でス
クロース６−エステルを好収量で得るのは難しい。相当
する６−置換グルコースおよびフラクトシド糖から出発
して酵素反応を行ない、他の位置に置換基を有する他の
スクロースを含まない６−置換スクロースを得、ついで
出発物質とグルコースから容易に分離できる、６−置換
スクロース誘導体からＴＧＳを難なく製造することがで
きる。
問題の酵素はフラクトシルトランフェラーゼ゛である。
これは周知の酵素である。代表的酵素は７５ＪｒＭ’Ａ
レバンスクラーゼであり、スクロース又はラフィノース
を分解してレバン、ボ゛リフラクトース誘導体を製造す
るものである。その通常の作用機作は、レバンスクラー
ゼはスクロース中のグルコーヌーフラクトース結合を分
解し、フラクトースをアクセプター糖例えばスクロース
自体に転換するものである。この方法は反復され、フラ
クトース鎖が完成される。スクロース以外に他の糖例え
ばＤ−キシロースが存在すると、レバンの生成が抑えら
れるかあるいは少なくとも減少し、その代りフラクトー
スは新規のフラクトシドを製造するためにアクセプター
として作用する他の拮抗糖（ｃｏｍｐθｔｉｎｇ ｓｕ
ｇａｒ ）に転換する。この新規フラクトシドはドナー
としても作用し、実際所望の方向で均衡を増すために、
過量のドナーが使われて来た。
レバンスクラーゼであり、スクロース又はラフィノース
を分解してレバン、ボ゛リフラクトース誘導体を製造す
るものである。その通常の作用機作は、レバンスクラー
ゼはスクロース中のグルコーヌーフラクトース結合を分
解し、フラクトースをアクセプター糖例えばスクロース
自体に転換するものである。この方法は反復され、フラ
クトース鎖が完成される。スクロース以外に他の糖例え
ばＤ−キシロースが存在すると、レバンの生成が抑えら
れるかあるいは少なくとも減少し、その代りフラクトー
スは新規のフラクトシドを製造するためにアクセプター
として作用する他の拮抗糖（ｃｏｍｐθｔｉｎｇ ｓｕ
ｇａｒ ）に転換する。この新規フラクトシドはドナー
としても作用し、実際所望の方向で均衡を増すために、
過量のドナーが使われて来た。
ある糖が良好なフラクトースーアクセゾターとして作用
し、レバンの生成を抑制する傾向にあることをＨｅ５ｔ
ｒｉｎとＡｕｉｇａｄ （Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 ６
９（１９５８）３８８〜６９８）は示した。第６番群は
明かに不活性であり、レバンの生成を抑制しなかった。
し、レバンの生成を抑制する傾向にあることをＨｅ５ｔ
ｒｉｎとＡｕｉｇａｄ （Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 ６
９（１９５８）３８８〜６９８）は示した。第６番群は
明かに不活性であり、レバンの生成を抑制しなかった。
Ｄ−グルコース６−リン酸塩は最後のカテゴリーにあっ
た。この論文で言及されている他のすべての糖は誘導化
されていない糖であった。
た。この論文で言及されている他のすべての糖は誘導化
されていない糖であった。
しかし、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ Ｍａｒ
ｂｕｒｇ株１６８の変異株由来の酵素の存在下でグルコ
ース６−リン酸塩とスクロースとの反応が記述されてい
る（ Ｋｕｎｓｔ等、Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ
、 ４２．６１１〜６２０（１９７４））。これらのお
よび他の著者（例えばＤｅｄｏｎｄｅｒ、 Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎ２７ｍｏ１． 、８．５ Ｑ Ｑ〜５０５）
は常にフラクトースドナー（例えばシュクロース）／ア
クセプターの高化、例えば５：１〜１０：１および工業
規模で実施不可能な低濃度を使用した。類似の反応は英
国特許出願第２０４６７５７Ａに記述され、各種アルド
ース出発物質をＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｕｉｅｃｏｓ
ｕｓとＢ、 ｓｕｂ、ｔｉｌｉｓ（株ＡＴＯＯ６０５１
、即ちＭａｒｂｕｒｇ株）を含むある微生物由来のレバ
ンスクラーゼの存在下スクロース又はラフィノースと反
応させる方法である。
ｂｕｒｇ株１６８の変異株由来の酵素の存在下でグルコ
ース６−リン酸塩とスクロースとの反応が記述されてい
る（ Ｋｕｎｓｔ等、Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ
、 ４２．６１１〜６２０（１９７４））。これらのお
よび他の著者（例えばＤｅｄｏｎｄｅｒ、 Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎ２７ｍｏ１． 、８．５ Ｑ Ｑ〜５０５）
は常にフラクトースドナー（例えばシュクロース）／ア
クセプターの高化、例えば５：１〜１０：１および工業
規模で実施不可能な低濃度を使用した。類似の反応は英
国特許出願第２０４６７５７Ａに記述され、各種アルド
ース出発物質をＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｕｉｅｃｏｓ
ｕｓとＢ、 ｓｕｂ、ｔｉｌｉｓ（株ＡＴＯＯ６０５１
、即ちＭａｒｂｕｒｇ株）を含むある微生物由来のレバ
ンスクラーゼの存在下スクロース又はラフィノースと反
応させる方法である。
しかし、この特許出願では、アルドース番末常に未誘導
の糖であり、多分鎖形成反応を最小にするプこめに、ド
ナ一対アクセプターのモル比は１：５である。
の糖であり、多分鎖形成反応を最小にするプこめに、ド
ナ一対アクセプターのモル比は１：５である。
６−置換スクロース誘導体は相当する６−置換グルコー
ス又はがラクトースとフラクトシルトランフェラーゼと
スクロース、ラフィノース又に−Ｌスタキオースの存在
下で反応させて製造できることを本発明者は見出した。
ス又はがラクトースとフラクトシルトランフェラーゼと
スクロース、ラフィノース又に−Ｌスタキオースの存在
下で反応させて製造できることを本発明者は見出した。
ついでこの生ｇ？＋を４゜１′および６′−位置でノ・
ロデン化し、必賛なら６−置換基を除いて、目的のノ・
四糖を得ることカーできる。最初の反応はレバンの生成
なしで良収量で進行する。
ロデン化し、必賛なら６−置換基を除いて、目的のノ・
四糖を得ることカーできる。最初の反応はレバンの生成
なしで良収量で進行する。
本発明によれば、一般式
（式中、Ａは水素原子又は基０Ｈ２Ｘ （但し、又は水
素原子、ヒドロキシ基又はアルコキシ基を示す）であり
、Ｙはハロゲン原子である）を有するクロロデオキマス
クロース又はがラクトスクロース誘導体の製造法を供し
、一般式 （式中、Ａは水素原子又は基０Ｈ２Ｘ （但り、Ｘは水
素原子、アルコキシ基又は保護されたヒドロキシ基を示
す）である）を有するアルドースをフラクトシルジー又
はオリゴサツカライドとフラクトシルトランスフェラー
ゼの存在下反応させて、一般式 （式中、Ａは弐…について記載した通りである）を有す
る化合物を得、ついで分離し、ハロゲン化し、そしてＡ
がａｎ２ｘでありかつＸがヒドロキシ基である式■の化
合物については、保護ヒドロキシ基を脱保護するもので
ある。
素原子、ヒドロキシ基又はアルコキシ基を示す）であり
、Ｙはハロゲン原子である）を有するクロロデオキマス
クロース又はがラクトスクロース誘導体の製造法を供し
、一般式 （式中、Ａは水素原子又は基０Ｈ２Ｘ （但り、Ｘは水
素原子、アルコキシ基又は保護されたヒドロキシ基を示
す）である）を有するアルドースをフラクトシルジー又
はオリゴサツカライドとフラクトシルトランスフェラー
ゼの存在下反応させて、一般式 （式中、Ａは弐…について記載した通りである）を有す
る化合物を得、ついで分離し、ハロゲン化し、そしてＡ
がａｎ２ｘでありかつＸがヒドロキシ基である式■の化
合物については、保護ヒドロキシ基を脱保護するもので
ある。
本発明に係る反応で使用するフラクトシルトランスフェ
ラーゼはＢ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ又は］ｌｃｒｗｉｎｉ
ａ ｓｐ。
ラーゼはＢ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ又は］ｌｃｒｗｉｎｉ
ａ ｓｐ。
（以前はＡｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｌｅｖａｎｉｃｕｍと
して知られていた）由来のものが望ましい。Ｂ、θｕｂ
ｔｉｌｉｓは特に望ましく、ある菌株は常法の発酵で大
規模によ（生育し、工業用酵素（例えばα−アミラーゼ
とβ−ラクタマーゼ）源として十分認容されている。
して知られていた）由来のものが望ましい。Ｂ、θｕｂ
ｔｉｌｉｓは特に望ましく、ある菌株は常法の発酵で大
規模によ（生育し、工業用酵素（例えばα−アミラーゼ
とβ−ラクタマーゼ）源として十分認容されている。
更に、フラクトシルトランスフェラーゼは主に更に、フ
ラクトシルトランスフェラーゼは主とじて細胞外酵素で
あるから、一層容易に得かつ精製−することができる。
ラクトシルトランスフェラーゼは主とじて細胞外酵素で
あるから、一層容易に得かつ精製−することができる。
使用酵素はインベルターゼ活性がないことが肝要である
。必要な場合、選択的インベルターゼインヒビター例え
ばｐ−ヒドロキシマーキュリベンゾエートを使用せねば
ならない。
。必要な場合、選択的インベルターゼインヒビター例え
ばｐ−ヒドロキシマーキュリベンゾエートを使用せねば
ならない。
Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ酵素は選択的沈澱又はその他の
簡便技術によりに３．５ｕｂｔｉｌｉｓ液体培養物から
採ることができる。例えば、この培養物を遠心芥離して
細胞や細胞片を除き、硫酸アンモニウムで約６５％にし
、再度遠心分離して、インベルターゼその他タン白系不
純物を除いてから、硫酸アンモニウムで約９５％にもっ
ていく。ついで粗レバンスクラーゼを沈澱させ、更にこ
れをリン酸塩バッファー中に再溶解し、透析して精製す
ることができる。
簡便技術によりに３．５ｕｂｔｉｌｉｓ液体培養物から
採ることができる。例えば、この培養物を遠心芥離して
細胞や細胞片を除き、硫酸アンモニウムで約６５％にし
、再度遠心分離して、インベルターゼその他タン白系不
純物を除いてから、硫酸アンモニウムで約９５％にもっ
ていく。ついで粗レバンスクラーゼを沈澱させ、更にこ
れをリン酸塩バッファー中に再溶解し、透析して精製す
ることができる。
重要な酵素はＢ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ Ｎｏより １１
８７１から得たフラクトシルトランスフェラーゼである
が、Ｎｏより １１８７２と１１８７３株も興味がある
。
８７１から得たフラクトシルトランスフェラーゼである
が、Ｎｏより １１８７２と１１８７３株も興味がある
。
これら菌株からの酵素も広い特異性を有するから、６−
置換銹導体に一層容易に使用できる。
置換銹導体に一層容易に使用できる。
本発明の別の特徴によれは、アクセプターアルドースの
不存在下で少なくとも０．１ ＭのｋＩｎ／スクロース
を有し、アクセプターアルドースの不存在下でフラクト
ースドナーから有意量のアルコール沈澱性物質を生成せ
ず、かつ界面活性剤に影響されず、約６０℃で最適の活
性を示し、４５℃までで少なくとも２０分間活性である
、フラクトシルトランスフェラーゼを供する。
不存在下で少なくとも０．１ ＭのｋＩｎ／スクロース
を有し、アクセプターアルドースの不存在下でフラクト
ースドナーから有意量のアルコール沈澱性物質を生成せ
ず、かつ界面活性剤に影響されず、約６０℃で最適の活
性を示し、４５℃までで少なくとも２０分間活性である
、フラクトシルトランスフェラーゼを供する。
これらの酵素に関し℃引用した２つの定数（Ｋ）ハ論、
ミカエリス−メントン定数であり、これは酵素反応の最
大率（レバン等を生成）の半分がおきる基質濃度であり
、そしてに１、インヒビタ一定数であり、これは酵素活
性の観察可能な最大阻害（レバン生成せず）の半分を生
成するインヒビター濃度である。
ミカエリス−メントン定数であり、これは酵素反応の最
大率（レバン等を生成）の半分がおきる基質濃度であり
、そしてに１、インヒビタ一定数であり、これは酵素活
性の観察可能な最大阻害（レバン生成せず）の半分を生
成するインヒビター濃度である。
株ＮＯより １１８７１酵素の艙はアクセプターの不存
在下でスクロースについて約０．２ Ｍであり、［Ｂ、
５ｕｂｔｉｌｉｓ Ｂ Ｓ ５ Ｊ （Ｂ、５ｕｂｔｉ
ｌｉｓ ｖａｒ。
在下でスクロースについて約０．２ Ｍであり、［Ｂ、
５ｕｂｔｉｌｉｓ Ｂ Ｓ ５ Ｊ （Ｂ、５ｕｂｔｉ
ｌｉｓ ｖａｒ。
ｎｉｇｒａからのクローン）からのＤｅｄｏｎｄｅｒの
レバンスクラーゼについて報告された勉はわずか０．０
２ Ｍであった。
レバンスクラーゼについて報告された勉はわずか０．０
２ Ｍであった。
Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉ８ｙａｘＢ１１８７１とｈａｘＢ
ｌ １８７２および１１８７３はＢ、 ５ｕｂｔ’１ｍ
１ｓの変種株テアル。
ｌ １８７２および１１８７３はＢ、 ５ｕｂｔ’１ｍ
１ｓの変種株テアル。
すなわち、分類試験（ＢａｒｋｌｅｙとσｏＯｄｆｅｌ
ｌｏｗ 。
ｌｏｗ 。
「Ｔｈｅ Ａｅｒｏｂｉｃ Ｅｎｄｏｓｐｏｒｅ −ｆ
ｏｒｍｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉａ：０１ａｅｅｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ａｎｃｌ工ｄｅｎｔｉｆｉｃａ、ｔｉｏｎ
Ｊ （１９８１）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、
ロンドン、０ｏｒｄｏｎ、 ＨａｙｎｅｓとＰａｎｇ
、［Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｊ 、Ａ
ｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＨａｎｄｂｏｏｋ １ｉ０．４
２７ （１９７６）、米国農務省、ワシントン州）およ
びＡＰＩ５ Ｑ ＯＨＢとＡＰＩ ２０にシステム（Ａ
ＰＰａｙｓｔｅｍ Ｓ、Ａ、 Ｌａ Ｂａｌｍｅ １ｅ
ｓＧｒｏ１ｔｅｓ −３８３９［Ｉ Ｍｏｎｔａｌｉｅ
ｕ Ｖｅｒｃｉｅｗ、 ＦｒａｎｃｅおよびＬｏｑａｎ
等、Ｊ 、 ＡＰＩ９１． Ｂａｃｔ、 １９７８．２
８〜２９）において、種間の殆んどすべての要件を満た
している。これらの試験では、多くのＢ。
ｏｒｍｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉａ：０１ａｅｅｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ａｎｃｌ工ｄｅｎｔｉｆｉｃａ、ｔｉｏｎ
Ｊ （１９８１）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、
ロンドン、０ｏｒｄｏｎ、 ＨａｙｎｅｓとＰａｎｇ
、［Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｊ 、Ａ
ｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＨａｎｄｂｏｏｋ １ｉ０．４
２７ （１９７６）、米国農務省、ワシントン州）およ
びＡＰＩ５ Ｑ ＯＨＢとＡＰＩ ２０にシステム（Ａ
ＰＰａｙｓｔｅｍ Ｓ、Ａ、 Ｌａ Ｂａｌｍｅ １ｅ
ｓＧｒｏ１ｔｅｓ −３８３９［Ｉ Ｍｏｎｔａｌｉｅ
ｕ Ｖｅｒｃｉｅｗ、 ＦｒａｎｃｅおよびＬｏｑａｎ
等、Ｊ 、 ＡＰＩ９１． Ｂａｃｔ、 １９７８．２
８〜２９）において、種間の殆んどすべての要件を満た
している。これらの試験では、多くのＢ。
５ｕｂｔｉｌｉｅ株との主な有怠な差は、１１ｃＩＢ１
１Ｂ７１株がラクトース陰性株で、キシロースから各種
酸生成を示すことである。Ｎｏより１１８７２株はラク
トース陰性で、Ｄ−マンノース、メルビオースおよびト
レハロース、および０ＮＰＧ反応において負の結果を示
す。Ｎ０ＩＢ １１ Ｂ ７３株はラフ） −ス陽性で
、Ｄ−マンノースやイヌリンで負の結果を与える。
１Ｂ７１株がラクトース陰性株で、キシロースから各種
酸生成を示すことである。Ｎｏより１１８７２株はラク
トース陰性で、Ｄ−マンノース、メルビオースおよびト
レハロース、および０ＮＰＧ反応において負の結果を示
す。Ｎ０ＩＢ １１ Ｂ ７３株はラフ） −ス陽性で
、Ｄ−マンノースやイヌリンで負の結果を与える。
Ｂ、 ５ｕｂｔｔ１ｉｓやＦｉｒＷｉｎａ ＳＦの多く
の菌株から誘導したフラクトシルトランスフェラーゼは
一般にレバンスクラーゼであると見なされている。すな
ワチ、スクロースの存在下で、この酵素はレバン、アル
コール沈澱性であるポリフラクトース物質を生成させる
。フラクトースジサッカライドの生成に使用する場合、
レバン生成拮抗反応は、任意の有用な物質が得られる時
に抑えられねばならないから、高割合のアクセプター分
子を含有する反応混合物にＧＢ２０４６７５７Ａ中のこ
れら酵素を限定する。しかし、ここで使用するＢ、 ［
１ｕｔ）ｔｉｌｉｌｌｌＮｏｌＢ １１８７１．１１８
７２および１１８７５酵素は余りレバンな生成しない。
の菌株から誘導したフラクトシルトランスフェラーゼは
一般にレバンスクラーゼであると見なされている。すな
ワチ、スクロースの存在下で、この酵素はレバン、アル
コール沈澱性であるポリフラクトース物質を生成させる
。フラクトースジサッカライドの生成に使用する場合、
レバン生成拮抗反応は、任意の有用な物質が得られる時
に抑えられねばならないから、高割合のアクセプター分
子を含有する反応混合物にＧＢ２０４６７５７Ａ中のこ
れら酵素を限定する。しかし、ここで使用するＢ、 ［
１ｕｔ）ｔｉｌｉｌｌｌＮｏｌＢ １１８７１．１１８
７２および１１８７５酵素は余りレバンな生成しない。
「レバン」生成についてスクロースの艙は約０．２Ｍで
ある。これはＤｅａｏｎｃＬｅｒ （ｌｏｃ、 ｃｉｔ
、 ） Ｍａｒｂｕｒｇ株酵素の約０．０２Ｍの−と匹
敵する。均等濃度のアクセプターとドナー分子を使用し
かつ田中Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉθ酵素による高分子量レ
バンの合成（すなわち、レバンゾライマーの添加、低イ
オン強度溶液の使用および低温度の反応（Ｊ、 Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ ９０．９２１．１９８１））を促進すること
が分った条件を使用する場合でも、非常にわずか高分子
量レバンが生成されるに過ぎない。ピーク収量のジサッ
カライドに達した後、中間分子量のポリマーが生成しｔ
も更に、他の真のレバンスクラーゼと違って、Ｂ。
ある。これはＤｅａｏｎｃＬｅｒ （ｌｏｃ、 ｃｉｔ
、 ） Ｍａｒｂｕｒｇ株酵素の約０．０２Ｍの−と匹
敵する。均等濃度のアクセプターとドナー分子を使用し
かつ田中Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉθ酵素による高分子量レ
バンの合成（すなわち、レバンゾライマーの添加、低イ
オン強度溶液の使用および低温度の反応（Ｊ、 Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ ９０．９２１．１９８１））を促進すること
が分った条件を使用する場合でも、非常にわずか高分子
量レバンが生成されるに過ぎない。ピーク収量のジサッ
カライドに達した後、中間分子量のポリマーが生成しｔ
も更に、他の真のレバンスクラーゼと違って、Ｂ。
５ｕｂｔｉｌｉｅ Ｎｏより １１８７１由来の酵呆は
不均合反応（すなわち、低分子量オリゴサツカライドを
高分子量レバンに転換しない）に触媒反応を示さないよ
うである。例えば、トリサツカライドが検出できるが、
酵素が不均合反応を行なう場合、存在させるべきでない
。Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｌｅｖａｎｉｃｕｍ（Ｓｉｇ
ｍａ ）から得た標準的レバンは高分子および中間分子
量物質に相当する２つのピークに分画することができる
。Ｄｅｄｏｎｄｅｒ （：ｔｏｃ、 ｃｉｔ、 ）酵素
は６７℃で約６．６ Ｘ １０−”の平衡定数（レバン
とグルコース／スクロース）を有し、ＤＰ４Ｑのレバン
が生成される。全く反対に、ｙａｘｎ １１８７１゜１
１８７２および１１８７３株はスクロース単独から実質
量のアルコール沈澱性ポリサッカライドを産生じない酵
素を生じ、１１８７１株の生育細胞でもレバンな生成し
ない。したがって、生成したフラクトシルトランスフェ
ラーゼは有効にルパンスクラーゼ」では全（ない。この
８Ａｌｌ誉では、フラクトシルトランスフェラーゼと呼
ぶ。
不均合反応（すなわち、低分子量オリゴサツカライドを
高分子量レバンに転換しない）に触媒反応を示さないよ
うである。例えば、トリサツカライドが検出できるが、
酵素が不均合反応を行なう場合、存在させるべきでない
。Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｌｅｖａｎｉｃｕｍ（Ｓｉｇ
ｍａ ）から得た標準的レバンは高分子および中間分子
量物質に相当する２つのピークに分画することができる
。Ｄｅｄｏｎｄｅｒ （：ｔｏｃ、 ｃｉｔ、 ）酵素
は６７℃で約６．６ Ｘ １０−”の平衡定数（レバン
とグルコース／スクロース）を有し、ＤＰ４Ｑのレバン
が生成される。全く反対に、ｙａｘｎ １１８７１゜１
１８７２および１１８７３株はスクロース単独から実質
量のアルコール沈澱性ポリサッカライドを産生じない酵
素を生じ、１１８７１株の生育細胞でもレバンな生成し
ない。したがって、生成したフラクトシルトランスフェ
ラーゼは有効にルパンスクラーゼ」では全（ない。この
８Ａｌｌ誉では、フラクトシルトランスフェラーゼと呼
ぶ。
反応のフラクトース源はスクロース（β−Ｄ−フラクト
フラノシルα−Ｄ−グルコピラノシド）、ラフィノース
（０−α−Ｄ−がラクトピラノシル−（１→６）−〇−
α−Ｄ−グルコぎラフシル−（１→２）β−Ｄ−フラク
トフラノシド）又はスタキオースのようにリンク（１→
２）によりアルドースのアノマー炭素に結合する望まし
くは不飽和β−フラクトシル環を含む任意のオリゴ−又
はジ−サツカライドでよい。
フラノシルα−Ｄ−グルコピラノシド）、ラフィノース
（０−α−Ｄ−がラクトピラノシル−（１→６）−〇−
α−Ｄ−グルコぎラフシル−（１→２）β−Ｄ−フラク
トフラノシド）又はスタキオースのようにリンク（１→
２）によりアルドースのアノマー炭素に結合する望まし
くは不飽和β−フラクトシル環を含む任意のオリゴ−又
はジ−サツカライドでよい。
式Ｈの６−置換アルドース出発物質は続く塩素化反応に
耐性でありかつ６−ヒドロキシ基を放出するのに除去で
きる６−位置の任意の置換基を保護ヒドロキシ基として
有してもよい。６−カルボン酸エステル例えば６−アセ
テート又はペンゾエ−トが望ましい。グルコース６−ア
セテートは各種方法（例えばＤｕｆｆ、 ；ｒ、 Ｏｈ
ｅｍ、 ｓｏａ、 ｐ ４７６０〜４．１９５７ ；
Ｒｅｅｖｅ ％、Ｊ、 Ａｍ、 Ｏｈｅｍ、 ｓｏａ、
。
耐性でありかつ６−ヒドロキシ基を放出するのに除去で
きる６−位置の任意の置換基を保護ヒドロキシ基として
有してもよい。６−カルボン酸エステル例えば６−アセ
テート又はペンゾエ−トが望ましい。グルコース６−ア
セテートは各種方法（例えばＤｕｆｆ、 ；ｒ、 Ｏｈ
ｅｍ、 ｓｏａ、 ｐ ４７６０〜４．１９５７ ；
Ｒｅｅｖｅ ％、Ｊ、 Ａｍ、 Ｏｈｅｍ、 ｓｏａ、
。
７９．６０４１〜３ ； Ｆｒｏｈｗｅｉｎ等Ｎａｔｕ
ｒｅ、ｐ１５６．１９６０ ； Ｄｕｆｆ等、Ｎａｔｕ
ｒｅ、 ｐ １０３．１９５７；同じく、Ｂｉｏｃｈ、
ｅｍ ：ｒ、 ５１５〜５２０１７０．１９り８）によ
り容易に製造することができる。
ｒｅ、ｐ１５６．１９６０ ； Ｄｕｆｆ等、Ｎａｔｕ
ｒｅ、 ｐ １０３．１９５７；同じく、Ｂｉｏｃｈ、
ｅｍ ：ｒ、 ５１５〜５２０１７０．１９り８）によ
り容易に製造することができる。
式■のアルドース出発物質の６−置換基は水素化により
容易に除去できるベンジルエーテルの如きエーテルある
いはＧＢ２１２７８０６Ａに記載される塩素化６−エー
テルをそのま〜供しうる脂肪族エーテルであってもよい
。この出発物質は例えば４−クロロ置換基を有して、既
に部分的に塩素化した４−クロロ−４−デオキシーガラ
クトース６−アセテートの如きジサッカライドを得るこ
とができる。
容易に除去できるベンジルエーテルの如きエーテルある
いはＧＢ２１２７８０６Ａに記載される塩素化６−エー
テルをそのま〜供しうる脂肪族エーテルであってもよい
。この出発物質は例えば４−クロロ置換基を有して、既
に部分的に塩素化した４−クロロ−４−デオキシーガラ
クトース６−アセテートの如きジサッカライドを得るこ
とができる。
フラクトースドナーとフラクトースアクセフタ−間の反
応は水性系望ましくは酵素の最適−すなわち約６０℃の
最適温度でＰＨ５，４〜６．０で緩衝化させて行なうべ
きである。この２棟の反応体は一般に水溶性で、酵素は
相互の溶液中で分散させることができ、あるいは不溶性
担体に固定化するのがよい。固定化は例えばＤＩＡＩセ
ルロースの如きイオン交換樹脂を使い、それに酵素を強
力に成層させることができる。その他多くの固定化担体
として例えば米国特許第４，４２１．８５０号明細書に
記載の骨炭を使うことができる。
応は水性系望ましくは酵素の最適−すなわち約６０℃の
最適温度でＰＨ５，４〜６．０で緩衝化させて行なうべ
きである。この２棟の反応体は一般に水溶性で、酵素は
相互の溶液中で分散させることができ、あるいは不溶性
担体に固定化するのがよい。固定化は例えばＤＩＡＩセ
ルロースの如きイオン交換樹脂を使い、それに酵素を強
力に成層させることができる。その他多くの固定化担体
として例えば米国特許第４，４２１．８５０号明細書に
記載の骨炭を使うことができる。
反応混合物中のフラクトースドナ一対フラクトースアク
セプター比は１要である。余り低いと、収量が減少する
。余り高いと、特に筒面形含量の基質を使う場合、可能
なレバン反応か抑制されな（なる。一般に、約２＝１０
モル比（ドナー−アクセプター）が最適である。この反
応は、溶解性又は粘度に問題はないので、高磯度で行な
うことができる。一般には、約４０１量％の反応体濃度
がうまくいくが、反応体の溶解性例えはグルコース６−
アセテートでは約７５％までにより丈に高濃度も使用で
きる。酵素濃度は当然活性に依るか、溶液ａ当りＢ、
５ｕｂｔｉｌｉｓ Ｎｏより １１８７１培養物３３ｍ
６から誘導した酵素を含む水溶液を使う場合、約５０ｍ
１／ｌｊの濃度がうまくいく。
セプター比は１要である。余り低いと、収量が減少する
。余り高いと、特に筒面形含量の基質を使う場合、可能
なレバン反応か抑制されな（なる。一般に、約２＝１０
モル比（ドナー−アクセプター）が最適である。この反
応は、溶解性又は粘度に問題はないので、高磯度で行な
うことができる。一般には、約４０１量％の反応体濃度
がうまくいくが、反応体の溶解性例えはグルコース６−
アセテートでは約７５％までにより丈に高濃度も使用で
きる。酵素濃度は当然活性に依るか、溶液ａ当りＢ、
５ｕｂｔｉｌｉｓ Ｎｏより １１８７１培養物３３ｍ
６から誘導した酵素を含む水溶液を使う場合、約５０ｍ
１／ｌｊの濃度がうまくいく。
式■の化合物の続（塩素化は、４，１′−および６′−
位置で選択的に塩素でヒドロキシを置換することができ
る試薬を使って行なうことができる。
位置で選択的に塩素でヒドロキシを置換することができ
る試薬を使って行なうことができる。
この試薬はビルスマイヤー試薬で、ジアルキルアミドと
塩素化試薬との反応例えばジメチルホルムアミドと五塩
化燐、ホスゲン又は塩化チオニルと反応させて得られる
。スクロース６−エステルの塩素化の詳細はＧＢ２０７
９７４９Ａおよび米国特許第４，３８０，４７６号明細
１″に記載されている。
塩素化試薬との反応例えばジメチルホルムアミドと五塩
化燐、ホスゲン又は塩化チオニルと反応させて得られる
。スクロース６−エステルの塩素化の詳細はＧＢ２０７
９７４９Ａおよび米国特許第４，３８０，４７６号明細
１″に記載されている。
同様に、６−エステルの脱保睦は同一刊行物に記述され
、例えばメタノール中ナトリウムメトキシドを使う。６
−ベンジルエーテル基は水素化により除くことができる
。
、例えばメタノール中ナトリウムメトキシドを使う。６
−ベンジルエーテル基は水素化により除くことができる
。
史に、フラクトース−アクセプターアルコール（％にア
ルドース）とフラクトシルジー又はオリゴ−サツカライ
ドとを、アクセプターアルドースの不存在下少な（とも
０．１Ｍの辷／スクロースを有し、アクセプターアルド
ースの不存在下フックドースドナーからアルコール沈澱
性物質の実質県を生成せず、界面活性剤の存在により影
響を受けず、約６０℃で最適活性を有しかつ４５℃まで
で少なくとも２０分間活性であるフラクトシルトランス
フェラーゼの存在下反応させてフラクトシドを製造する
方法が供される。フラクトースアクセゾターは一般に、
ピラノース、フラノース糖又は置換糖でよ（、フラクト
シルジサッカライドに加えるのが望ましい。例には６−
置換グルコース誘導体例えばグルコース６−エステルと
エーテルおよび６−ゾオキシーＤ−グルコース（ＴＧＥ
Ｉおよびその甘味類似物の製造上）、又は英国時計出願
ＧＢ２０４６７５７Ａ（下記参照）のレバンスクラーゼ
と併用するのに示唆された物質を含む。フラクトシルジ
ー又はオリゴ−サツカライドはスクロース、ラフィノー
ス又はスタキオースを含んでよい。
ルドース）とフラクトシルジー又はオリゴ−サツカライ
ドとを、アクセプターアルドースの不存在下少な（とも
０．１Ｍの辷／スクロースを有し、アクセプターアルド
ースの不存在下フックドースドナーからアルコール沈澱
性物質の実質県を生成せず、界面活性剤の存在により影
響を受けず、約６０℃で最適活性を有しかつ４５℃まで
で少なくとも２０分間活性であるフラクトシルトランス
フェラーゼの存在下反応させてフラクトシドを製造する
方法が供される。フラクトースアクセゾターは一般に、
ピラノース、フラノース糖又は置換糖でよ（、フラクト
シルジサッカライドに加えるのが望ましい。例には６−
置換グルコース誘導体例えばグルコース６−エステルと
エーテルおよび６−ゾオキシーＤ−グルコース（ＴＧＥ
Ｉおよびその甘味類似物の製造上）、又は英国時計出願
ＧＢ２０４６７５７Ａ（下記参照）のレバンスクラーゼ
と併用するのに示唆された物質を含む。フラクトシルジ
ー又はオリゴ−サツカライドはスクロース、ラフィノー
ス又はスタキオースを含んでよい。
Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉｅ １１８７１由来の酵素の基質
特異性を更に詳述する。初期の仙死の示すところでは、
Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ （Ｍａｒｂｕｒｇ ）のフラ
クトンルトランスフエラーゼ活性は、リン酸塩又はカル
ボン酸基の如き極性基がａ−６の位置で置換されない限
り、アルドースのｃ−６における変化傾より修復されな
い。％に、アクセプタ〜のｃ−６位置での次の変化はレ
バンスクラーゼ、還元（Ｌ−ガラクトースからＬ−フコ
ース）、ＯＨのＯ−グルコシルへの置換（Ｄ−グルコー
スからイソマルトース）およびＣ上のＨのヒドロキシア
ルキル（ｍ−が２クトーヌからＤ−グリセロ−Ｄ〜ガラ
クトヘプトース） （Ｈｅ５ｔｒｉｎ等、１９５Ｂ）を
抑制しない。スクロースのように同じグリコシド結合に
よりアルコシル基に結合した非置換フラクトース基を有
する唯一の分子はドナーとして働くから、スクロース６
−アセテートはスクロース又はラフィノースの代りにフ
ラクトースドナーとして作用しうる。
特異性を更に詳述する。初期の仙死の示すところでは、
Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ （Ｍａｒｂｕｒｇ ）のフラ
クトンルトランスフエラーゼ活性は、リン酸塩又はカル
ボン酸基の如き極性基がａ−６の位置で置換されない限
り、アルドースのｃ−６における変化傾より修復されな
い。％に、アクセプタ〜のｃ−６位置での次の変化はレ
バンスクラーゼ、還元（Ｌ−ガラクトースからＬ−フコ
ース）、ＯＨのＯ−グルコシルへの置換（Ｄ−グルコー
スからイソマルトース）およびＣ上のＨのヒドロキシア
ルキル（ｍ−が２クトーヌからＤ−グリセロ−Ｄ〜ガラ
クトヘプトース） （Ｈｅ５ｔｒｉｎ等、１９５Ｂ）を
抑制しない。スクロースのように同じグリコシド結合に
よりアルコシル基に結合した非置換フラクトース基を有
する唯一の分子はドナーとして働くから、スクロース６
−アセテートはスクロース又はラフィノースの代りにフ
ラクトースドナーとして作用しうる。
しかし、本発明の新規酵素の場合に、非常に広範囲の糖
類はスクロース又はラフィノースから７ラクトースのア
クセプターとしているいろ働く。
類はスクロース又はラフィノースから７ラクトースのア
クセプターとしているいろ働く。
アクセプターの多くは、ヘキソース又はペントース例え
ばリボース、ソルボース、リキソース、アラビノースお
よびキシロースである。反応しないことが分っている唯
一のペントースはキシロースである。反応性アクセプタ
ーの多くはピラノース環構造を応用しうるか、キシリト
ールとグルコン酸も反応するようである。環構造が存在
する時、酸素又は硫黄を含むに違いないから１．イノシ
トールは反応せず、５−チオグルコースが反応する。
ばリボース、ソルボース、リキソース、アラビノースお
よびキシロースである。反応しないことが分っている唯
一のペントースはキシロースである。反応性アクセプタ
ーの多くはピラノース環構造を応用しうるか、キシリト
ールとグルコン酸も反応するようである。環構造が存在
する時、酸素又は硫黄を含むに違いないから１．イノシ
トールは反応せず、５−チオグルコースが反応する。
炭素３および４の構造上、例えばグルコースの代りにガ
ラクトース、６−０−メチルグルコース、４−クロロガ
ラクトースおよびＤ−アラビノースのすべての態様は定
性的反応性に影響しない。炭素１例えばメチルα−Ｄ−
グルコピラノシド、１−チオグルコースおよびソルボー
スのような置換基は反応する。炭素２で、マンノースの
ように各椎変化に耐えるが、２−ジオキシグルコースや
グルコサミンは非反応性である。炭素６では多くの構造
上の変化は６−リン酸塩、クロライド、アセテート、６
−ジオキシグルコース、６−０−メチルグルコース、６
−０−メチルがラクトースおよびラムノースの６−Ｈの
ように耐えるが、グルコヘプトースのＯＨ，ＯＨ，０Ｈ
ＯＨ−基は反応性を抑制する。
ラクトース、６−０−メチルグルコース、４−クロロガ
ラクトースおよびＤ−アラビノースのすべての態様は定
性的反応性に影響しない。炭素１例えばメチルα−Ｄ−
グルコピラノシド、１−チオグルコースおよびソルボー
スのような置換基は反応する。炭素２で、マンノースの
ように各椎変化に耐えるが、２−ジオキシグルコースや
グルコサミンは非反応性である。炭素６では多くの構造
上の変化は６−リン酸塩、クロライド、アセテート、６
−ジオキシグルコース、６−０−メチルグルコース、６
−０−メチルがラクトースおよびラムノースの６−Ｈの
ように耐えるが、グルコヘプトースのＯＨ，ＯＨ，０Ｈ
ＯＨ−基は反応性を抑制する。
メリビオース、ラクトース、インマルトースおよびセロ
ビオースを含むジ−サツカライドの多くは反応性アクセ
プターであるが、２クチユロースやイソマルチュロース
の如きあるジサッカライドは非反応性である。オリゴサ
ツカライドアクセプターを使用する場合、アクセフ０タ
ー油桂は類似のマルトース、マルトトリオース、マルト
テトラオース等のように、大きさが増すにつれて減少す
る。
ビオースを含むジ−サツカライドの多くは反応性アクセ
プターであるが、２クチユロースやイソマルチュロース
の如きあるジサッカライドは非反応性である。オリゴサ
ツカライドアクセプターを使用する場合、アクセフ０タ
ー油桂は類似のマルトース、マルトトリオース、マルト
テトラオース等のように、大きさが増すにつれて減少す
る。
最後に、多（の場合、１炭素原子以上で構造上の変化（
グルコースの）は反応を抑制しない、例えばがラクトー
ス６−アセテート。反応性アクセプター分子の混合物が
例えば加水分解したホエイに使用されると、フラクトシ
ル化ジサッカライドの混合物が生成される。
グルコースの）は反応を抑制しない、例えばがラクトー
ス６−アセテート。反応性アクセプター分子の混合物が
例えば加水分解したホエイに使用されると、フラクトシ
ル化ジサッカライドの混合物が生成される。
次の糖類はアクセプターとして作用することが分った。
Ｄ−アラビノース、フコース、６−ゾオキシグルコーヌ
、６−ｏ−メチルガラクトース、ラクトース、がラクト
ース６−アセテート、マンノース、５−チオーＤ−グル
コース、マルトース、１−チオ−グルコース、マルトト
リオース、６−〇−メチルα−Ｄ−グルコース、マルト
ペンタオース、Ｄ（−）アラビノース、マルトトリオー
ス、６−クロロ−６−ジオキシグルコース、メリビオー
ス、ガラクトース、キンロース、イソマルトース、Ｌ−
アラビノース、ホエイ透過＊＜ラクトース）、４−クロ
ロがラクトース、リボース、リキソース、グルコース６
−アセテート、グルコン酸、グルコース６−リン酸塩、
Ｌ−ラムノース、６−〇−メチルグルコース、メチル−
〇−グルコシド、キシリトール、グリセロールおよびエ
タノール。
、６−ｏ−メチルガラクトース、ラクトース、がラクト
ース６−アセテート、マンノース、５−チオーＤ−グル
コース、マルトース、１−チオ−グルコース、マルトト
リオース、６−〇−メチルα−Ｄ−グルコース、マルト
ペンタオース、Ｄ（−）アラビノース、マルトトリオー
ス、６−クロロ−６−ジオキシグルコース、メリビオー
ス、ガラクトース、キンロース、イソマルトース、Ｌ−
アラビノース、ホエイ透過＊＜ラクトース）、４−クロ
ロがラクトース、リボース、リキソース、グルコース６
−アセテート、グルコン酸、グルコース６−リン酸塩、
Ｌ−ラムノース、６−〇−メチルグルコース、メチル−
〇−グルコシド、キシリトール、グリセロールおよびエ
タノール。
キシロースにおいて特に興味あるアクセプターは、キシ
ルスクロースとして知られるβ、Ｄ−フラクトフラノン
ラフ２→１）α−Ｄ−キンロビラノシラフ産生する。他
の興味あるアクセプターはガラクトースで、β−Ｄ−フ
ラクトフラノンラフ２→１）−Ｄ−ガラクトビラノンド
（ガラクトヌクロース）を産生する。このタイプの生成
物はフ蝕性低く、過剰の七味が問題となっている分野で
は、スクロースの代替品として興味がある。ガラクトス
クロースは糖蜜や加水分解ホエイ透過液から得ることか
でき、また容易に人手できることから、特に興味かもた
れる。これはほんの僅かの甘味を有するに過ぎない（ス
クロースの約１θ〜１５チ）。
ルスクロースとして知られるβ、Ｄ−フラクトフラノン
ラフ２→１）α−Ｄ−キンロビラノシラフ産生する。他
の興味あるアクセプターはガラクトースで、β−Ｄ−フ
ラクトフラノンラフ２→１）−Ｄ−ガラクトビラノンド
（ガラクトヌクロース）を産生する。このタイプの生成
物はフ蝕性低く、過剰の七味が問題となっている分野で
は、スクロースの代替品として興味がある。ガラクトス
クロースは糖蜜や加水分解ホエイ透過液から得ることか
でき、また容易に人手できることから、特に興味かもた
れる。これはほんの僅かの甘味を有するに過ぎない（ス
クロースの約１θ〜１５チ）。
ドナー％異性について、絶対的要件としてα（１→２）
結合をもったスクロースに基づ（糖は反応性で、活性は
分子の大きさにつれて減少する。
結合をもったスクロースに基づ（糖は反応性で、活性は
分子の大きさにつれて減少する。
酵素作用により生成する新規のジサッカライド例えはキ
フルスクロースはドナーとして作用する。
フルスクロースはドナーとして作用する。
酵素触媒反応の生成物に常法の物理化学的手段例えばク
ロマトグラフィ特に尚圧液体クロマトグラフィ（Ｉ（Ｐ
ＬＯ）およびイオン交換樹脂クロマトグラフィにより副
生物と出発物質から分離できる。
ロマトグラフィ特に尚圧液体クロマトグラフィ（Ｉ（Ｐ
ＬＯ）およびイオン交換樹脂クロマトグラフィにより副
生物と出発物質から分離できる。
特に、アルドース環に６−ヒドロキシ基をもたなイ生成
物、例えばスクロース６−エステルやエーテル、キシロ
ース銹４体および６−デオキシスクロースは驚く程低い
極性を有し７、これがイオン交換樹脂クロマトグラフィ
な容易かつ効果的分離方法ニスる。ジビニルベンゼンで
架橋したポリスチレン樹脂例えはアンバーライ） ＸＡ
Ｄ樹脂は特に適している。この分離は、スクロース６−
誘導体を化学的方法により製造する時に必要な各柚置換
したスクロース誘導体の分離よりはるかに容易である。
物、例えばスクロース６−エステルやエーテル、キシロ
ース銹４体および６−デオキシスクロースは驚く程低い
極性を有し７、これがイオン交換樹脂クロマトグラフィ
な容易かつ効果的分離方法ニスる。ジビニルベンゼンで
架橋したポリスチレン樹脂例えはアンバーライ） ＸＡ
Ｄ樹脂は特に適している。この分離は、スクロース６−
誘導体を化学的方法により製造する時に必要な各柚置換
したスクロース誘導体の分離よりはるかに容易である。
スクロースの如きグルコシルフラクンドを使うフラクト
ース転換反応の副生物はグルコース自体である。グルコ
ースは勿論有力なアクセプターであり、望ましいアクセ
プターと拮抗し、出発物質を改質する。したがって、フ
ラクトースに転換することによりグルコースを除くのは
望ましい。これはグルコースイソメラーゼを添加して達
成することができる。
ース転換反応の副生物はグルコース自体である。グルコ
ースは勿論有力なアクセプターであり、望ましいアクセ
プターと拮抗し、出発物質を改質する。したがって、フ
ラクトースに転換することによりグルコースを除くのは
望ましい。これはグルコースイソメラーゼを添加して達
成することができる。
次の例により本発明を説明する。
例 Ｉ ＴＧｓの製造
ａ）酵素の調製
β−フラクトンルトランスフエラーゼをＢａｃｉｌｌｕ
、ｓ ５ｕｂｔｉｌｉｅ Ｎｏより １１８７１株から
得た最小スクロース培地（１００１ｆｆＡ／フラスコ）
を含む振盪フラスコ（２５０Ｉｎ／（容、４個のフラス
コ）に細胞が生育中酵素をスクロースにより誘導した。
、ｓ ５ｕｂｔｉｌｉｅ Ｎｏより １１８７１株から
得た最小スクロース培地（１００１ｆｆＡ／フラスコ）
を含む振盪フラスコ（２５０Ｉｎ／（容、４個のフラス
コ）に細胞が生育中酵素をスクロースにより誘導した。
培養物は指数期まで培養し、６０℃で振盪し、ついで４
つの振盪フラスコの中味を・−緒にし、生育培地を遠心
分離（５０００ｇ１５分間）により細胞から分離した。
つの振盪フラスコの中味を・−緒にし、生育培地を遠心
分離（５０００ｇ１５分間）により細胞から分離した。
全酸素の２０〜３０％は細胞に結合したま〜であった。
生成した清澄液に固形硫酸アンモニウムを加えて６５％
の飽和ｒｔｒ−シ、ｏ℃で４５分間放置した。この操作
により望ましくないインベルターゼと他のタン白不純物
の殆んどが沈澱したか、多くの酵素は溶液中に残った。
の飽和ｒｔｒ−シ、ｏ℃で４５分間放置した。この操作
により望ましくないインベルターゼと他のタン白不純物
の殆んどが沈澱したか、多くの酵素は溶液中に残った。
ついでこの試料を再遠心分ＰｆＩ（２０，０００５’／
３０分間）し、インベルターゼ活性を含む沈澱物を除い
た。更に硫酸アンモニウムをこの溶液に加え、９５％飽
和度にし、０℃で４５分間史に放置した。
３０分間）し、インベルターゼ活性を含む沈澱物を除い
た。更に硫酸アンモニウムをこの溶液に加え、９５％飽
和度にし、０℃で４５分間史に放置した。
主としてフラクトシルトランスフェラーゼである２番目
の沈澱物が生成し、遠心分離（４０，０００＆／４５分
間）により集取し、５０ ｍＭ ＩＪン酸塩バッファー
、ｐＨ６に再溶解した。２回の沈澱の正味効果と２番目
の沈澱物の再溶解により実質的精製と酵素の濃縮をし、
タン白帯だけがポリアクリルアミド／ｌ’Ａ／電気泳動
により検出できた。最後に、残渣のＪａ酸アンモニウム
を５３ ｍＭリン酸塩バッファーに対し透析（０°Ｃ／
４時間）して、醇累調製物から除いた。
の沈澱物が生成し、遠心分離（４０，０００＆／４５分
間）により集取し、５０ ｍＭ ＩＪン酸塩バッファー
、ｐＨ６に再溶解した。２回の沈澱の正味効果と２番目
の沈澱物の再溶解により実質的精製と酵素の濃縮をし、
タン白帯だけがポリアクリルアミド／ｌ’Ａ／電気泳動
により検出できた。最後に、残渣のＪａ酸アンモニウム
を５３ ｍＭリン酸塩バッファーに対し透析（０°Ｃ／
４時間）して、醇累調製物から除いた。
透析した酵素はｐ−ヒドロキシマーキュリベンゾエート
（インベルターゼを阻害するが、フラクトシルトランス
フェラーゼ活性に惑影伽を及はさない）の添加前後に試
験した。この方法により、フラクトシルトランスフェラ
ーゼｉＡ！！品は通常インベルターゼを含まないことが
分った。調製品のタン白含量は２８０ ｎｍの吸収度を
測定して０．４５ ｍ９／ ｍｌであった。Ｎ製した酵
素磨製品にもしばしば黒い色素が見られたが、調製品の
活性に悪影響はない。
（インベルターゼを阻害するが、フラクトシルトランス
フェラーゼ活性に惑影伽を及はさない）の添加前後に試
験した。この方法により、フラクトシルトランスフェラ
ーゼｉＡ！！品は通常インベルターゼを含まないことが
分った。調製品のタン白含量は２８０ ｎｍの吸収度を
測定して０．４５ ｍ９／ ｍｌであった。Ｎ製した酵
素磨製品にもしばしば黒い色素が見られたが、調製品の
活性に悪影響はない。
ｂ）スクロース６−アセテート
グルコース６−アセテート（真空乾燥恒［８０５１）と
粒化スクロース（１６０，？ ）なｐｉ（５，４、マキ
ルベンバッファ−１ｏｏｍｅに室温で浴解し、脱イオン
水６００ｍｅ（４０％ｗ／ｖ）で稀釈した。ついでこの
溶液を十分濾過し、酵素溶液２８幅を加えた。
粒化スクロース（１６０，？ ）なｐｉ（５，４、マキ
ルベンバッファ−１ｏｏｍｅに室温で浴解し、脱イオン
水６００ｍｅ（４０％ｗ／ｖ）で稀釈した。ついでこの
溶液を十分濾過し、酵素溶液２８幅を加えた。
ついで反応混合物を６０℃で培養し、ＨＰＬＯ分析によ
りスクロース６−アセテートがそれ以上生成されなくな
ることが認められるまで、一定間隔でサンプリングし、
スクロース６−アセテートの最大濃度は約１２０９１−
１であった。酵素を吸着するＤ］ＬｉＡＥセルロースカ
ラムに通して反応混合物を濾過して酵素を取った。別法
には、６５℃／１時間加熱して変性させることもできる
。酵素はスクロース６−アセテートをゆっくり加水分解
してフラクトースを遊離するように作用するので、酵素
を除くことは重要である。
りスクロース６−アセテートがそれ以上生成されなくな
ることが認められるまで、一定間隔でサンプリングし、
スクロース６−アセテートの最大濃度は約１２０９１−
１であった。酵素を吸着するＤ］ＬｉＡＥセルロースカ
ラムに通して反応混合物を濾過して酵素を取った。別法
には、６５℃／１時間加熱して変性させることもできる
。酵素はスクロース６−アセテートをゆっくり加水分解
してフラクトースを遊離するように作用するので、酵素
を除くことは重要である。
ついで、生成物を分取ＨＰＬＯにより単離して、少なく
とも８５チ純度のスクロース６−アセテートを得、全体
の約５０％の収率であった。酵素反応の初期速度は２４
４．５１１１＆スクロース６−アセテート／り酵素／時
間を生成することであった。酵素工程の収率はグルコー
ス６−アセテート消費で５８％、スクロース６−アセテ
ート生成で４８％であった。
とも８５チ純度のスクロース６−アセテートを得、全体
の約５０％の収率であった。酵素反応の初期速度は２４
４．５１１１＆スクロース６−アセテート／り酵素／時
間を生成することであった。酵素工程の収率はグルコー
ス６−アセテート消費で５８％、スクロース６−アセテ
ート生成で４８％であった。
Ｃ）スクロース６−アセテートの塩素化１）ビルスマイ
ヤー試薬の調製 五塩化燐（１４０ｇ）を激しく攪拌しながらビーカー中
無水ジメチルホルムアミｌ’（２５０ｍｌに加え、温度
は７０〜８０℃に保ち、攪拌しま１時間続け、反応混合
物を冷却、濾過した。結晶生成物をａｍｆ（２Ｘ２０ｍ
ｌ）とジエチルエーテル（４０ｍｌ ）で洗い、デシケ
ータ−中で乾燥し、白色結晶としてビルスマイヤー試薬
（９３Ｆ）を得た。
ヤー試薬の調製 五塩化燐（１４０ｇ）を激しく攪拌しながらビーカー中
無水ジメチルホルムアミｌ’（２５０ｍｌに加え、温度
は７０〜８０℃に保ち、攪拌しま１時間続け、反応混合
物を冷却、濾過した。結晶生成物をａｍｆ（２Ｘ２０ｍ
ｌ）とジエチルエーテル（４０ｍｌ ）で洗い、デシケ
ータ−中で乾燥し、白色結晶としてビルスマイヤー試薬
（９３Ｆ）を得た。
（１１） スクロース６−アセテート溶液の調製スクロ
ース６−アセテードシラツデ（４１，！ｉ’。
ース６−アセテードシラツデ（４１，！ｉ’。
実際のスクロース６−アセテート含量２８ｇ１ｄｍｆに
溶解し稀釈して８６１Ｒ１３とした。この溶液を分子フ
ルイで脱水し濾過した。
溶解し稀釈して８６１Ｒ１３とした。この溶液を分子フ
ルイで脱水し濾過した。
（ｌｌｉｌ 塩素化
ビルスマイヤー試薬（ろ１／）をｄｍｆ （８０ｍ１）
に加え、混合物を０℃に冷却した。スクロース６−アセ
テート浴液（２１ｍｇ、スクロース６−アセテ−）７１
）をゆっくり加え、温度を２０°Ｃ以１に維持した。反
応混合物を０℃で１５分間攪拌してから、６０℃の油浴
に６０分移した。この浴を１２０℃６０分加熱し、この
温度で２時間維持した。ついで反応混合物を２０℃に冷
却し、メタノール−８８０アンモニア（２：１．８ＯＮ
）を添加して中和し、５０℃以下に保持した。混合物を
シラツブ状に濃縮し、ピリジン（１００７＋１１と無水
酢酸（１００ｍｌを加えてアセチル化した。
に加え、混合物を０℃に冷却した。スクロース６−アセ
テート浴液（２１ｍｇ、スクロース６−アセテ−）７１
）をゆっくり加え、温度を２０°Ｃ以１に維持した。反
応混合物を０℃で１５分間攪拌してから、６０℃の油浴
に６０分移した。この浴を１２０℃６０分加熱し、この
温度で２時間維持した。ついで反応混合物を２０℃に冷
却し、メタノール−８８０アンモニア（２：１．８ＯＮ
）を添加して中和し、５０℃以下に保持した。混合物を
シラツブ状に濃縮し、ピリジン（１００７＋１１と無水
酢酸（１００ｍｌを加えてアセチル化した。
５０℃／２時間攪拌後、混合物を２０℃に冷却し、温度
を６０℃以下に保ちながらメタノール（８０ｍｌ８）を
加えた。ついで混合物をシラツブ状に濃縮し、熱トルエ
ン（４Ｘ １０ Ｑ ｍｅ ）で抽出した。トルエン抽
出液をシラツブ状に濃縮し、エチルアセテ−）（１００
ｍ＃）に溶解した。エチルアセテート溶液を水（５Ｘ１
００ｍｌ）で洗い、その水はエチルアセテート（２Ｘ５
０ｍ／ｌ：）で逆抽出した。−緒にしたこのエチルアセ
テート抽出液を硫酸マグネシウムで脱水し、活性炭で脱
色し、シラツブ状に濃縮し、工業用メチル化スピリット
より結晶化して、４、 １’、６’−）リクロロ−４，
１’、６’−）リゾオキシガラクトスクロースペンタア
セテ−）（４，４２，６９％）を得た。
を６０℃以下に保ちながらメタノール（８０ｍｌ８）を
加えた。ついで混合物をシラツブ状に濃縮し、熱トルエ
ン（４Ｘ １０ Ｑ ｍｅ ）で抽出した。トルエン抽
出液をシラツブ状に濃縮し、エチルアセテ−）（１００
ｍ＃）に溶解した。エチルアセテート溶液を水（５Ｘ１
００ｍｌ）で洗い、その水はエチルアセテート（２Ｘ５
０ｍ／ｌ：）で逆抽出した。−緒にしたこのエチルアセ
テート抽出液を硫酸マグネシウムで脱水し、活性炭で脱
色し、シラツブ状に濃縮し、工業用メチル化スピリット
より結晶化して、４、 １’、６’−）リクロロ−４，
１’、６’−）リゾオキシガラクトスクロースペンタア
セテ−）（４，４２，６９％）を得た。
（１ｖ）脱エステル化
ペンタアセテートを無水メタノールに溶解し、室温で５
時間触媒量のす） ＩＪウムメトキシドで処理した。つ
いでこの溶液を脱イオン化し蒸発させて、４． １’、
６’−）リクロロ−４，１’、６’−）リゾオキシが
ラクトスクロース（９０％）を得た。
時間触媒量のす） ＩＪウムメトキシドで処理した。つ
いでこの溶液を脱イオン化し蒸発させて、４． １’、
６’−）リクロロ−４，１’、６’−）リゾオキシが
ラクトスクロース（９０％）を得た。
例 ２
４、 １’、６’−トリクロロ−４，６，１’、６’−
テトラデオキシがラクトスクロース（６−ジオキシ−Ｔ
ＧＳ ） （類似の甘味度を有するＴＧＳの関連体）の
製造。
テトラデオキシがラクトスクロース（６−ジオキシ−Ｔ
ＧＳ ） （類似の甘味度を有するＴＧＳの関連体）の
製造。
（１）６−ジオキシスクロース
単離、精製および結晶化
６−ゾオキシーＤ−グルコース（Ｄ−キノボース、２０
ｇ）とスクロースを、例１と同じ反応条件に供し、６−
ジオキシスクロース、Ｄ−キノボース、スクロースおよ
びグルコースの混合物、全容ｆｃ １４０ ｍｔ、を得
た。６−ジオキシスクロースを１、Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒ
ｅｐａｋ ５００ Ｃ１８（逆相カラム）と水を溶離剤
として使って、分取ＨＰＬＯにより混合物から分別した
。混合物中の６−ジオキシスクロースと他の成分間に篤
（程保持時間に大きな差異がみられた。Ｄ−キノボース
、スクロースおよびＤ−グルコースを注入後４〜９分間
で溶離され、６−ジオキシスクロースにわずか２９分（
極大ピーク）であった。大きな分離は材料の分別を一層
可能にした。、６−ジオキシスクロースを含む溶離剤を
減圧不蒸発乾固（給温度５０℃）して、きれいなシラツ
ブ（１６，７，？、４２％）を得、室温で放置して結晶
化させた。この生成物をエタノールから再結し、融点は
１８０〜１８１℃、〔α〕９十５７．６°（旦２．５、
水）、マススペクトル、ｍ／θ２９３（Ｍ″−０Ｈ３−
Ｈ２Ｏ）、１３０−ＮＭＲスペクトル（Ｏｐｐｍで内部
ＤＳＳについてのＤ２０溶液）炭素原子 化学シフト、
ｐｐｍ ２’ １０６．３２ １ ９４．７０ ５’ ８４．０１ ３′７９．０４ ５ ７７．７４ ４’ ７６．７３ ３ ７４．９３ ２ ７３．９５ ４ ７１ 、ｏソ ロ’ ６５．［）２ １’ ６５．７７ ６ １９．５６ （２）６−ジオキシスクロースの選択的塩素化６−ジオ
キシスクロース（２，８，？）をＤＭＦ（１０ｍｌに溶
解し、その溶液なりＭＦ （ろＱｍＡ）中ビルスマイヤ
ー試薬（１５，＠）のサスヘンジョンに松加し、温度を
１０℃以下に保った。混合物を室温で１０分間攪拌し、
ついで攪拌しながら１２０℃で２時間加熱した。混合物
を室温に冷却し、メタタール−水酸化アンモニウム浴液
（１：１．２０” ）を加えた。混合物を７０℃で濃縮
し、トルエン（２Ｘ ２ Ｄ ｍ／ｉ ）を残渣から蒸
発させ、ビリジｙ（５０ｍｊｎ中無水自゛「酸で６００
Ｃ／ろ時間アセチル化した。メタノール（５０廐）を加
え、混合物を蒸発濃縮して、攪拌と傾潟によりトルエン
（４Ｘ５０ｍｇ）で６０℃抽出した。−緒にしたトルエ
ン抽出液を蒸発乾固し、残渣をシリカゲル（石油エーテ
ル−エーテル、２：１、ついで１：１）でクロマトグラ
フにかけ、溶媒蒸発後淡黄色ンラツプとして中間の４．
１’、６’−トリクロロ−４゜６、 １’、６’−テ
トラデオキシガラクトスクローステトラアセテート（ろ
ｉ、？、６４％）を得た。
ｇ）とスクロースを、例１と同じ反応条件に供し、６−
ジオキシスクロース、Ｄ−キノボース、スクロースおよ
びグルコースの混合物、全容ｆｃ １４０ ｍｔ、を得
た。６−ジオキシスクロースを１、Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒ
ｅｐａｋ ５００ Ｃ１８（逆相カラム）と水を溶離剤
として使って、分取ＨＰＬＯにより混合物から分別した
。混合物中の６−ジオキシスクロースと他の成分間に篤
（程保持時間に大きな差異がみられた。Ｄ−キノボース
、スクロースおよびＤ−グルコースを注入後４〜９分間
で溶離され、６−ジオキシスクロースにわずか２９分（
極大ピーク）であった。大きな分離は材料の分別を一層
可能にした。、６−ジオキシスクロースを含む溶離剤を
減圧不蒸発乾固（給温度５０℃）して、きれいなシラツ
ブ（１６，７，？、４２％）を得、室温で放置して結晶
化させた。この生成物をエタノールから再結し、融点は
１８０〜１８１℃、〔α〕９十５７．６°（旦２．５、
水）、マススペクトル、ｍ／θ２９３（Ｍ″−０Ｈ３−
Ｈ２Ｏ）、１３０−ＮＭＲスペクトル（Ｏｐｐｍで内部
ＤＳＳについてのＤ２０溶液）炭素原子 化学シフト、
ｐｐｍ ２’ １０６．３２ １ ９４．７０ ５’ ８４．０１ ３′７９．０４ ５ ７７．７４ ４’ ７６．７３ ３ ７４．９３ ２ ７３．９５ ４ ７１ 、ｏソ ロ’ ６５．［）２ １’ ６５．７７ ６ １９．５６ （２）６−ジオキシスクロースの選択的塩素化６−ジオ
キシスクロース（２，８，？）をＤＭＦ（１０ｍｌに溶
解し、その溶液なりＭＦ （ろＱｍＡ）中ビルスマイヤ
ー試薬（１５，＠）のサスヘンジョンに松加し、温度を
１０℃以下に保った。混合物を室温で１０分間攪拌し、
ついで攪拌しながら１２０℃で２時間加熱した。混合物
を室温に冷却し、メタタール−水酸化アンモニウム浴液
（１：１．２０” ）を加えた。混合物を７０℃で濃縮
し、トルエン（２Ｘ ２ Ｄ ｍ／ｉ ）を残渣から蒸
発させ、ビリジｙ（５０ｍｊｎ中無水自゛「酸で６００
Ｃ／ろ時間アセチル化した。メタノール（５０廐）を加
え、混合物を蒸発濃縮して、攪拌と傾潟によりトルエン
（４Ｘ５０ｍｇ）で６０℃抽出した。−緒にしたトルエ
ン抽出液を蒸発乾固し、残渣をシリカゲル（石油エーテ
ル−エーテル、２：１、ついで１：１）でクロマトグラ
フにかけ、溶媒蒸発後淡黄色ンラツプとして中間の４．
１’、６’−トリクロロ−４゜６、 １’、６’−テ
トラデオキシガラクトスクローステトラアセテート（ろ
ｉ、？、６４％）を得た。
ＭＢＸｍ／ｅ ２８３．２８５．２８７（ソ：６：１、
ジクロロ−ジー〇−アセチルフラクトース残渣）および
継続ロスに相当するビーク６ Ｄ （０Ｒ３Ｃ’０２Ｈ
）、４２ （Ｃ！Ｈ２＝Ｏ＝０）および３６ （Ｍｏｌ
） ； ２４９．２５１ （０Ｈ２０ロスでろ：１、
−モノクロロージデオキシ−ジー〇−アセチルガラクト
ース残渣）および６０と４２の継続ロスに相当するピー
ク。
ジクロロ−ジー〇−アセチルフラクトース残渣）および
継続ロスに相当するビーク６ Ｄ （０Ｒ３Ｃ’０２Ｈ
）、４２ （Ｃ！Ｈ２＝Ｏ＝０）および３６ （Ｍｏｌ
） ； ２４９．２５１ （０Ｈ２０ロスでろ：１、
−モノクロロージデオキシ−ジー〇−アセチルガラクト
ース残渣）および６０と４２の継続ロスに相当するピー
ク。
テトラアセテートをメタノール（３０ｍｌに溶解し、室
温でナトリウムメトキサイド（ｉ Ｍ、 ｐｉ−１９）
により脱アセチル化した。溶液をＡＢｂｅｒｌｙｓｔ
１５（Ｈ＋）カチオン交換樹脂で中和し、泗過し、蒸発
乾固した。白色固体の生成物が得られた。
温でナトリウムメトキサイド（ｉ Ｍ、 ｐｉ−１９）
により脱アセチル化した。溶液をＡＢｂｅｒｌｙｓｔ
１５（Ｈ＋）カチオン交換樹脂で中和し、泗過し、蒸発
乾固した。白色固体の生成物が得られた。
〔α）９＋８７．１°（、（！１．０、アセトン）：
１３０−ＮＭＲスペクトル（Ｏｐｐｍの内部ＤＳＳにつ
いてＤ２０溶液） ２’ １０６．０２ １ ９５．４１ ５’ ８３．７５ ３’ ７８．８９ ４’ ７８．０４ ５ ７［］、９５ ４ ７０、［］３ ２ ６９ 、７８ ３ ６９．２８ １ ’ ４７．４６ ６’ ７１５．９９ ６ １９．６１ ４、 １’、６’−）ジクロロ−４，６，１’、６’−
テトラデオキシガラクトスクロースはスクロースの４０
０倍の甘味があることが分った（８ｑｂ溶液）。
１３０−ＮＭＲスペクトル（Ｏｐｐｍの内部ＤＳＳにつ
いてＤ２０溶液） ２’ １０６．０２ １ ９５．４１ ５’ ８３．７５ ３’ ７８．８９ ４’ ７８．０４ ５ ７［］、９５ ４ ７０、［］３ ２ ６９ 、７８ ３ ６９．２８ １ ’ ４７．４６ ６’ ７１５．９９ ６ １９．６１ ４、 １’、６’−）ジクロロ−４，６，１’、６’−
テトラデオキシガラクトスクロースはスクロースの４０
０倍の甘味があることが分った（８ｑｂ溶液）。
例 ６
例１の方法を繰り返えしたが、ｂ）段階で６−アセテー
トの代りにグルコース６−ベンゾエートを用いた。類似
の結果が得られた３、段階Ｃ）は前のように行なって、
類似の収率でＴＧＳを得た。
トの代りにグルコース６−ベンゾエートを用いた。類似
の結果が得られた３、段階Ｃ）は前のように行なって、
類似の収率でＴＧＳを得た。
例 ４
Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ Ｍａｒｂｕｒｇ 株 １６ Ｂ
、Ｎ０ＩＢ １１８７２株又はＮ０ＩＢ１１８７３株か
ら誘導した酵素を段階ｂ）で使って、例１の方法を改変
することかできる。反応は同じように進行したが、反応
速度は低かった。
、Ｎ０ＩＢ １１８７２株又はＮ０ＩＢ１１８７３株か
ら誘導した酵素を段階ｂ）で使って、例１の方法を改変
することかできる。反応は同じように進行したが、反応
速度は低かった。
例 ５
ＤＢＡＥイオン交換セルロースを使ってＢ、 ５ｕｂｔ
ｉｌ土θＮ０ＩＥ １１８７１由来の７ラクトンルトラ
ンスフエシーゼの固定化と精製おＪ−ひキシルスクロー
スの製造。
ｉｌ土θＮ０ＩＥ １１８７１由来の７ラクトンルトラ
ンスフエシーゼの固定化と精製おＪ−ひキシルスクロー
スの製造。
ＤＥＡＲイオン交換セルロース（ＤＥ５２）を５０ｍＭ
マキルベンバッファーｐＨ５，４で完全Ｋ Ａい、つい
でＭ 術化した基質（スクロース−キシロース２：１．
４０％ｗ／■、全糖）で洗った。ブフナーフィルターで
殆んど乾燥するまで濾過した後、例１のようにＢ、 ５
ｕｂｔｉｌｉｓ由来の７ラクトンルトランスフエ２−ゼ
標品８ｕとＤＥＡＥ−１＝ルロ−ス（１０，Ｖ ）を攪
拌下６０℃７１５分出１混合した。ＤＥＡＦｉセルロー
スと酵素の混合物をＩＱｍＡジャケット伺きカラム（１
９Ｘ１ｃｍ）に詰め、チャーチルサーモザーキュＬ’−
タ−テ３０℃ニ保った。ＤＥＡＥセルロースを落下流出
させ、落下物を果めた。基質を約１．０ｍ１ｈ−”の流
速で、ワトソンーマーロウポンフ０を使いカラムまで送
り、溶離剤を−ｉ＋）Ｊ隔で集め、フラクトシルトラン
スフェラーゼ活性について試験した。２８０ｎｍの吸光
ｍ（ＯＤ２８０ ）も沖１足した。試料を試験するため
に、Ｑ、ｉｍ＃の液体試料又は０．１ ｇの固定化酵素
（ＤＥ５２に）を基質２ ｍｌ、！：ＡＫ３０℃／４時
間培養した。「キシルスクロース」製造用キシロース／
スクロース基質を使って、固定化処理後に残っている清
濁溶液のタン白濃度と活性を最初の酵素調製物りタン白
濃度と活性とを比較した。細胞抽出液に最初に存在する
酵素の６８．５ ％は最初に存在するタン白質の８６襲
と共に固定化されたことが分った。この固定化酵素は遊
離酵素の均等量と比較して８０．２％の初期活性を示し
た。２つの調製物の活性は夫々０．３８＆キシルスクロ
一ス／Ｉ固定化酵素／時間および０．８６５ 、？キシ
ルスクロース／縦酵素抽出液／時間であった。
マキルベンバッファーｐＨ５，４で完全Ｋ Ａい、つい
でＭ 術化した基質（スクロース−キシロース２：１．
４０％ｗ／■、全糖）で洗った。ブフナーフィルターで
殆んど乾燥するまで濾過した後、例１のようにＢ、 ５
ｕｂｔｉｌｉｓ由来の７ラクトンルトランスフエ２−ゼ
標品８ｕとＤＥＡＥ−１＝ルロ−ス（１０，Ｖ ）を攪
拌下６０℃７１５分出１混合した。ＤＥＡＦｉセルロー
スと酵素の混合物をＩＱｍＡジャケット伺きカラム（１
９Ｘ１ｃｍ）に詰め、チャーチルサーモザーキュＬ’−
タ−テ３０℃ニ保った。ＤＥＡＥセルロースを落下流出
させ、落下物を果めた。基質を約１．０ｍ１ｈ−”の流
速で、ワトソンーマーロウポンフ０を使いカラムまで送
り、溶離剤を−ｉ＋）Ｊ隔で集め、フラクトシルトラン
スフェラーゼ活性について試験した。２８０ｎｍの吸光
ｍ（ＯＤ２８０ ）も沖１足した。試料を試験するため
に、Ｑ、ｉｍ＃の液体試料又は０．１ ｇの固定化酵素
（ＤＥ５２に）を基質２ ｍｌ、！：ＡＫ３０℃／４時
間培養した。「キシルスクロース」製造用キシロース／
スクロース基質を使って、固定化処理後に残っている清
濁溶液のタン白濃度と活性を最初の酵素調製物りタン白
濃度と活性とを比較した。細胞抽出液に最初に存在する
酵素の６８．５ ％は最初に存在するタン白質の８６襲
と共に固定化されたことが分った。この固定化酵素は遊
離酵素の均等量と比較して８０．２％の初期活性を示し
た。２つの調製物の活性は夫々０．３８＆キシルスクロ
一ス／Ｉ固定化酵素／時間および０．８６５ 、？キシ
ルスクロース／縦酵素抽出液／時間であった。
固定化酵素（１０ｇｗ／ｗ ）をカラムに詰め、３０℃
で約２週間連続して作用させ、溶離液のｐｉ（の変化又
は微生物のコンタミの徴候はみられなかった。少しのタ
ン白質と酵素が最初の操作６日で脱着し、最初に吸着し
たクン白質の２４％および最初に吸着した酵素活性の２
６６％となった。固定化酵素活性は処理半減ル１９５時
間で駄目になり、基質を生成物に転換する程度とカラム
を通る流速間の通常の逆関係を示した。使用した最低の
流速では、ｏ、ｏ ８６ｑカラム容蓋（ｅｃｖ ）ｈ
”、８０Ｔ。
で約２週間連続して作用させ、溶離液のｐｉ（の変化又
は微生物のコンタミの徴候はみられなかった。少しのタ
ン白質と酵素が最初の操作６日で脱着し、最初に吸着し
たクン白質の２４％および最初に吸着した酵素活性の２
６６％となった。固定化酵素活性は処理半減ル１９５時
間で駄目になり、基質を生成物に転換する程度とカラム
を通る流速間の通常の逆関係を示した。使用した最低の
流速では、ｏ、ｏ ８６ｑカラム容蓋（ｅｃｖ ）ｈ
”、８０Ｔ。
キシルスクロースへの転換率が達成され、カラム溶離散
には２１ ＆ ｌ−’キシルスクロースを含有スる。こ
の収率はバッチ反応で得られたものより尚く、生成物は
）！１続的にカラムがら取り出され、蓄積せずかつ生成
物の阻害を来たさないから、カラムのプラグφフローは
キシルスクロースの生成には有利である。全体にこれら
の操作中、２０〜２５ｇのキシルスクロースがそこで生
成され、純粋のキシルスクロースは容易に得られる。
には２１ ＆ ｌ−’キシルスクロースを含有スる。こ
の収率はバッチ反応で得られたものより尚く、生成物は
）！１続的にカラムがら取り出され、蓄積せずかつ生成
物の阻害を来たさないから、カラムのプラグφフローは
キシルスクロースの生成には有利である。全体にこれら
の操作中、２０〜２５ｇのキシルスクロースがそこで生
成され、純粋のキシルスクロースは容易に得られる。
最初に使用した易溶性酵素と違って、固定化酵素は若干
の副産物を導き、反応中に生成される。
の副産物を導き、反応中に生成される。
フラクトースは少し生成されるか、固定化に使った最初
の酵素抽出液により生成されるより少ない。
の酵素抽出液により生成されるより少ない。
多分抽出液を汚染するインベルターゼ活性がＤＥ５２に
ほんの一部吸着されたからであろう。１６〜２０分の保
持時間でＨＰＬＯカラムから非常に遅く溶離された少量
の化合物は固定化酵素から溶離液中に見られるが、可溶
性酵素反応の分析中気が付かなかった。これらは多分酵
素により反応体分子のホールド・アップは酵素との接触
時ＩＢＪを増すから、重合化の可能性がおきる。
ほんの一部吸着されたからであろう。１６〜２０分の保
持時間でＨＰＬＯカラムから非常に遅く溶離された少量
の化合物は固定化酵素から溶離液中に見られるが、可溶
性酵素反応の分析中気が付かなかった。これらは多分酵
素により反応体分子のホールド・アップは酵素との接触
時ＩＢＪを増すから、重合化の可能性がおきる。
基質のキクローヌ含量は１３３１１！−” であるから
、最大可能キシルスクロース濃度は２６６１１１！−’
であった。０．０８６ ｅｃｖｈ−”で観察された最大
調度はこれの８０チ、すなわち２１０ Ｍｌ−’であっ
たか、反応中に消費されたキシロースを基準にして計算
して、６９．５％の反応を示した。収率はバッチ反応よ
り高（、本方法の「フロー・スルー」性がコンスタント
に生成物が除かれた原因となりかつ生成物が基質と比較
して非４か性だから、正荷電した固定化担体がら離れて
分配される。両方の効果はキシルスクロースの生成に有
利そあろう。
、最大可能キシルスクロース濃度は２６６１１１！−’
であった。０．０８６ ｅｃｖｈ−”で観察された最大
調度はこれの８０チ、すなわち２１０ Ｍｌ−’であっ
たか、反応中に消費されたキシロースを基準にして計算
して、６９．５％の反応を示した。収率はバッチ反応よ
り高（、本方法の「フロー・スルー」性がコンスタント
に生成物が除かれた原因となりかつ生成物が基質と比較
して非４か性だから、正荷電した固定化担体がら離れて
分配される。両方の効果はキシルスクロースの生成に有
利そあろう。
グルコース６−アセテートからスクロース６−アセテー
ト、６−ｏ−メチルグルコースから６−〇−メチルスク
ロース、および６−０−ベンジルグルコースかう６−０
−ベンジルスクロースを製造するのに同一方法を使用し
た。
ト、６−ｏ−メチルグルコースから６−〇−メチルスク
ロース、および６−０−ベンジルグルコースかう６−０
−ベンジルスクロースを製造するのに同一方法を使用し
た。
例１にしたがって調製した酵素（０，１ｍｉ ）をスク
ロースとギンロース（１：１）の４％ｗ／ｖ溶Ｍ２ ｍ
ｌｊと混合し、ｐＨ５で５０℃で緩衝化した。キシルス
クロースなＨＰＬＯにより確認した。レバン生成をプ゛
Ｃ学的に確認した。谷線酵素による比較結果は次の通り
である。
ロースとギンロース（１：１）の４％ｗ／ｖ溶Ｍ２ ｍ
ｌｊと混合し、ｐＨ５で５０℃で緩衝化した。キシルス
クロースなＨＰＬＯにより確認した。レバン生成をプ゛
Ｃ学的に確認した。谷線酵素による比較結果は次の通り
である。
Ｎｏより １１８７１ ８．６ ０
Ｎｏ１Ｂ １１８７２ ２．９ 検出可能１［３より１
１８７５１．４ ＋ ハービカラー ０．８７ 廿 したがって、本発明の酵素はＭａｒｂｕｒｇ株酵素より
少なくとも１０倍のキシルスクロースを生成した。Ｎｏ
より １１８７１酵素の場合には少なくとも１００倍で
ある。レバンの拮抗的産生は少ない。
１８７５１．４ ＋ ハービカラー ０．８７ 廿 したがって、本発明の酵素はＭａｒｂｕｒｇ株酵素より
少なくとも１０倍のキシルスクロースを生成した。Ｎｏ
より １１８７１酵素の場合には少なくとも１００倍で
ある。レバンの拮抗的産生は少ない。
例 ６ ガラクトスクロースの製造。
リン酸塩、クエン酸塩バッファー（ｐＨ５，９）に溶解
した等重量のスクロースとがラクトースを含む基質４０
％（ｗ／ｖ ） １５ ｍｌは、酵素を９５％硫酸アン
モニウム飽和浴液で沈澱させ、この沈澱物を再溶解しつ
いで不純物を６５％硫酸アンモニウム飽和浴液で沈澱さ
せて一部精製した少容量のＳ。
した等重量のスクロースとがラクトースを含む基質４０
％（ｗ／ｖ ） １５ ｍｌは、酵素を９５％硫酸アン
モニウム飽和浴液で沈澱させ、この沈澱物を再溶解しつ
いで不純物を６５％硫酸アンモニウム飽和浴液で沈澱さ
せて一部精製した少容量のＳ。
５ｕｂｔｉｌｉｓ Ｎ０ＩＢ １１８７１フラクトンル
トランスフエラーゼと共に６０℃で培養した。
トランスフエラーゼと共に６０℃で培養した。
約２４時間の培養後、生成物は逆相カラム（多孔性黒鉛
炭素、５μ直径、溶離剤５ｑｂ水性アセトニトリル）で
ＨＰＬＯクロマトグラフィにより分離した。がラクトス
クロースの収率では丈に増加は、それ以上培養を続けて
もあるいは新しい酵素を加えても得られなかった。ガラ
クトスクロースの最大収率は約０．３５＆／９がラクト
ースと約０．４５Ｖｊｌ消費スクロースであった。
炭素、５μ直径、溶離剤５ｑｂ水性アセトニトリル）で
ＨＰＬＯクロマトグラフィにより分離した。がラクトス
クロースの収率では丈に増加は、それ以上培養を続けて
もあるいは新しい酵素を加えても得られなかった。ガラ
クトスクロースの最大収率は約０．３５＆／９がラクト
ースと約０．４５Ｖｊｌ消費スクロースであった。
例 ７
４、Ｉ’、６’−トリブロモ−４，１’、６’−トリデ
オキシガラクトスクロース。
オキシガラクトスクロース。
（ａｌ ビスマイヤー試系の調製
臭化チオニル（２８０ｍｌ）を激しく憤拌しながら、無
水冷ジメチルホルムアミド＜２６０ｍ１）に加えた。混
合物を７０〜ｂ 史に１時間攪拌し、周囲温度に冷却した。混合物をｊし
過し、残渣をジメチルホルムアミド（２Ｘ５０ｍｅ）と
ジエチルエーテル（１００ｍｉで洗い、デシケータ−中
で脱水し、３２０１１の試楽を得た。
水冷ジメチルホルムアミド＜２６０ｍ１）に加えた。混
合物を７０〜ｂ 史に１時間攪拌し、周囲温度に冷却した。混合物をｊし
過し、残渣をジメチルホルムアミド（２Ｘ５０ｍｅ）と
ジエチルエーテル（１００ｍｉで洗い、デシケータ−中
で脱水し、３２０１１の試楽を得た。
（ｂ） スクロースアセテートのブロム化ＤＭＦ （２
０ｍｌ ）中スクロース６−アセテート（５ｙ）の溶液
を例１のように調製し、攪拌１温度を２０℃以下／ ３
０分間保ちながら、ＤＭＦ（５０７１１１）中ビスマイ
ヤー試薬（２５１）の冷サスペンションで処理した。つ
いで、攪拌混合物を周囲温度７６０分間攪拌し、１１０
℃に加熱しついで更に１．７５時間攪拌した。それを２
０℃に冷却し、メタノールと濃アンモニア（０，８８０
）の２：１混合物を添加して中和し、そして４０℃以下
に保った。混合物をシラツブに濃縮し、ピリジン（１０
０ｍＡ）中無水酢酸（１００７ｄ）で５０℃／２時間ア
セチル化した。生成物はＧＢ２１０１９８９Ａと同じト
リブロムガラクトスクロースペンタアセテート（４，２
１１）として例１のように回収した。
０ｍｌ ）中スクロース６−アセテート（５ｙ）の溶液
を例１のように調製し、攪拌１温度を２０℃以下／ ３
０分間保ちながら、ＤＭＦ（５０７１１１）中ビスマイ
ヤー試薬（２５１）の冷サスペンションで処理した。つ
いで、攪拌混合物を周囲温度７６０分間攪拌し、１１０
℃に加熱しついで更に１．７５時間攪拌した。それを２
０℃に冷却し、メタノールと濃アンモニア（０，８８０
）の２：１混合物を添加して中和し、そして４０℃以下
に保った。混合物をシラツブに濃縮し、ピリジン（１０
０ｍＡ）中無水酢酸（１００７ｄ）で５０℃／２時間ア
セチル化した。生成物はＧＢ２１０１９８９Ａと同じト
リブロムガラクトスクロースペンタアセテート（４，２
１１）として例１のように回収した。
これを周囲温度で５時間ナトリウムメトキサイド（メタ
ノール９１モル、ｐＨ９）で脱アセチル化し、ついでＡ
ｍｂｅｒｌｙｓｔ １５ （Ｈ” ）イオン交換樹脂で
脱イオン化した。上澄液を蒸発乾固し、ＧＢ２１０１９
８９Ａと同じ純粋のトリブロム糖を得た。
ノール９１モル、ｐＨ９）で脱アセチル化し、ついでＡ
ｍｂｅｒｌｙｓｔ １５ （Ｈ” ）イオン交換樹脂で
脱イオン化した。上澄液を蒸発乾固し、ＧＢ２１０１９
８９Ａと同じ純粋のトリブロム糖を得た。
例 ８ キシルスクロースの塩素化
キシルスクロース（例５がら）Ｃ５ｆｌ）を１０℃でＤ
ＭＦに溶解し、攪拌下１０℃以下に維持したＤＭＦ （
２５Ｎ）中側１のビルスマイヤー試薬（１３＆）の冷サ
スペンションに加えた。混合物を室温に６０分かけて加
温し、ついで１２０℃にし、攪拌下３時間保った。混合
物を冷却し、メタノール／濃（０，８８０）アンモニア
１：１′で中和し、７０℃で濃縮した。続いてトルエン
を蒸発させて水分を除き、残渣をピリジン（３０ｍＪ）
中無水酢酸（３０ｍｌ ）で６０℃／６時間アセチル化
した。混合物をメタノール（５０７ｆｆｌで処理し、蒸
発乾固した。残液を熱トルエン（６０℃、４Ｘ５Ｑ＋ｎ
Ａ）で抽出し、傾瀉した抽出液を一緒にして蒸発した。
ＭＦに溶解し、攪拌下１０℃以下に維持したＤＭＦ （
２５Ｎ）中側１のビルスマイヤー試薬（１３＆）の冷サ
スペンションに加えた。混合物を室温に６０分かけて加
温し、ついで１２０℃にし、攪拌下３時間保った。混合
物を冷却し、メタノール／濃（０，８８０）アンモニア
１：１′で中和し、７０℃で濃縮した。続いてトルエン
を蒸発させて水分を除き、残渣をピリジン（３０ｍＪ）
中無水酢酸（３０ｍｌ ）で６０℃／６時間アセチル化
した。混合物をメタノール（５０７ｆｆｌで処理し、蒸
発乾固した。残液を熱トルエン（６０℃、４Ｘ５Ｑ＋ｎ
Ａ）で抽出し、傾瀉した抽出液を一緒にして蒸発した。
残渣をシリカゲル（石油エーテルニジメチルエーテル２
：１、ついで１：１）でクロマトグラフにかけ、ンラツ
デとしてトリクロロアラビノスクローステトラアセテ−
）（２，６，？）を得た。
：１、ついで１：１）でクロマトグラフにかけ、ンラツ
デとしてトリクロロアラビノスクローステトラアセテ−
）（２，６，？）を得た。
ＭＳｗ／Ｃ２８３，２８５，２８７（９：６：１、ジク
ロロ−ジーＯ−アセチルフラクトース残俄）：６０ （
ＯＨ３００２Ｈ）、４２ （ｃＨ２＝ｃ＝ｏ ）および
３６ （）１０１ ）の継続ロスに相当するピーク。
ロロ−ジーＯ−アセチルフラクトース残俄）：６０ （
ＯＨ３００２Ｈ）、４２ （ｃＨ２＝ｃ＝ｏ ）および
３６ （）１０１ ）の継続ロスに相当するピーク。
２６５．２３７（３：１、モノクロロージー〇−アセチ
ルアラビノ残渣）および６０と４２の継続ロスに相当す
るピーク。
ルアラビノ残渣）および６０と４２の継続ロスに相当す
るピーク。
テトラアセテートをメタノール（３０ｍｇ）に溶解し、
周囲温度ｐＨ９でメタノール中１モルナトリウムメトキ
サイドで脱アセチル化した。
周囲温度ｐＨ９でメタノール中１モルナトリウムメトキ
サイドで脱アセチル化した。
混合物をＡｍｂｅｒｌｙｓｔ １５ （、Ｈ” ）樹脂
で脱イオン化し、濾過、蒸発させた。生成物固形フオー
ムとして単離した。ＤＸｌｏｌ、９°（９０済液、ｏ
ｐｐｍで内部ＤＳＳについて）。
で脱イオン化し、濾過、蒸発させた。生成物固形フオー
ムとして単離した。ＤＸｌｏｌ、９°（９０済液、ｏ
ｐｐｍで内部ＤＳＳについて）。
２’ １０６．０
１ ９５．８
５’ ８３．９
５’ ７８．８
４’７７．９
２ ７０．６
３ ７０．４
５ ６６．４
４ ６３．９
１’ ４７．３
６’ ４５．９
この化合物は２ｑｂ溶液でスクロースめ甘味の２５倍で
あることが分った。
あることが分った。
代理人 浅 村 皓
手続補正占（自発）
昭和５９年８月／／１１
特許庁長官殿
１゜事件の表示
昭和５９年特ｉｒ１願第１２８３９５号３、補正をする
者 事１′１との関係 持３′「出願人 住 所 ４、代理人 昭和 年 月 口 ８、補正の内容 別紙のとおり 明細書の浄書（内容に変更なし）
者 事１′１との関係 持３′「出願人 住 所 ４、代理人 昭和 年 月 口 ８、補正の内容 別紙のとおり 明細書の浄書（内容に変更なし）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）一般式 （式中、Ａは水素原子又は基０Ｈ２Ｘ （但しＸは水素
原子、ヒドロキシ基又はアルコキシ基である）であり、
Ｙはハロゲン原子である）を有するクロロデオキシスク
ロース又はガラクトスクロース銹導体の製造において、
一般式 （式中、Ａは水素原子又は基０Ｈ２Ｘ （但し、Ｘは水
素原子、アルコキシ基又は保護されたヒドロキシ基であ
る）である）を有するアルドースを、フラクトシルトラ
ンスフェラーゼの存在下、フラクトシルジ−サツカライ
ド又はオリゴサツカライドと反応させて、一般式 （式中、Ａは式Ｈについて記載した通りである）を有す
る化合物を得、式■の化合物を分離し、ついでこの化合
物を塩素化し、式１（Ａが０Ｈ２Ｘを示し、Ｘがヒドロ
キシ基である）の化合物の場合、保護されたヒドロキシ
基を脱保護することを特徴とする、上記製造方法。 （２） フラクトシルトランスフェラーゼがバチルス・
サチルス（Ｂ、 ｅｕｂｔｉｌｉθ）又はエルウィニア
棟（Ｊｌ！ｒｗｉｎｉａ ｓｐ、 ）由来のものである
、特許請求の範囲第１項記載の方法。 （３） フラクトシルトランスフェラーゼはバチルス・
サチルス（Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ ）株、Ｎｏより
１１８７１、Ｎ０ＩＢ１１８７２又はＮＯより１１１７
１由来のものである、特許請求の範囲第２項記載の方法
。 （４） フラクトシルトランスフェラーゼはアクセプタ
ーアルドースの不存在下で少なくとも０．１Ｍの軸対ス
クロース比を有し、アクセプターアルドースの不存在下
でフラクトースドナーから有意量のアルコール沈澱可能
な物質を形成せず、界面活性剤の存在に影響されず、約
６０℃で最適活性を有しかつ４５℃までで少なくとも２
０分間活性である、特許請求の範囲第２項、第６項又は
第４項記載の方法。 （５） フラクトクルサツカライドはスクロース、ラフ
ィノース又はスタキオースである、特許請求の範囲第１
項記載の方法。 （６） ビルスマイヤー試薬を使って塩素化を行なう、
特許請求の範囲第１項記載の方法。 （７） 保護されたヒドロキシ基は脂肪族又は芳香族カ
ルボニルオキシ基であり、加水分解により脱保護される
か、あるいはアリールブルコキシ基であり、還元開裂に
より脱保護する、特許請求の範囲第１項記載の方法。 （８） アクセプターアルドースの不存在下で少なくと
も０．１Ｍの辷対シュクロース比を有し、アクセプター
アルドースの不存在下でフラクトースドナーから有意蓋
のアルコール沈澱可能な物質を形成せず、界面活性剤の
存在により影響されず、約６０℃で最適活性を有しかつ
４５℃までで少なくとも２０分間活性である、フラクト
クルトランスフェラーゼ。 （９） バチルス・サチルス（、Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉ
ｓ ）由来の、特許請求の範囲第８項記載のフラクトシ
ルトランスフェラーゼ。 Ｏｎ バチルス・サチルス（Ｂ、 ｓｕ’ｂｔｉｌｉｅ
）株Ｎｏより１１８７１．１１８７２又は１１８７５由
来の、特許請求の範囲第９項記載のフラクトシルトラン
スフェラーゼ。 αＪ アルコール、フラクトシルジサッカライド又はオ
リゴザツカライドの水溶液を特許請求の範囲第８項記載
のフラクトシルトランスフェラーゼにより処理し、つい
で反応混合物からフラクトシドを分離することを特徴と
する、アルコールからフラクトシドを製造する方法。 （１２酵素は固定化している、特許請求の範囲第１項又
は第１１項記載の方法。 （１３１フルコールはＤ−７ラビノース、Ｌ−フコース
、６〜デオキシグルコース、６−ｏニメチルガラクトー
ス、ラクトース、がラクトース６−アセテート、マンノ
ース、５−チオ−シーグルコース、マルトース、１−チ
オ−グルコース、マルトトリオース、６−０−メチルα
−シーグルコース、マルトペンタオース、Ｄ−アラビノ
ース、マルトヘキサオース、６−クロロ−６−ジオキシ
グルコース、メリビオース、ガラクトース、キシロース
、インマルトース、Ｌ−アラビノース、ホエイ透過′ｒ
ｉ、（ラクトース）、４−クロロがラクトース、リボー
ス、リキソース、グルコース６−アセテート、グルコン
酸、グルコース６−リン酸塩、Ｌ−ラムノース、６−０
−メチルグルコース、メチルα−Ｄ−グルコシド、キシ
リトール、グリセロールおよびエタノールから選択する
、特許請求の範囲第１１項記載の方法。 ■ フラクトフルジー又はオリゴサツカライドはスクロ
ース、ラフィノース又はスタキオースから選ぶ、特許請
求の範囲第１１項又は第１２項記載の方法。 （２） ４−クロロ−４−デオキシ−Ｌ−アラビノピラ
ノンルー１，６−ジクロロ−１，６−ジヂオキシフラク
トフラノシド（４，１’、 ６’−トリクロロ−４，１
’、６’−トリデオキシ）アラビノスクロース。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB838316790A GB8316790D0 (en) | 1983-06-21 | 1983-06-21 | Chemical process |
| GB8316790 | 1983-06-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6037993A true JPS6037993A (ja) | 1985-02-27 |
| JPH0777559B2 JPH0777559B2 (ja) | 1995-08-23 |
Family
ID=10544535
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59128395A Expired - Lifetime JPH0777559B2 (ja) | 1983-06-21 | 1984-06-21 | フラクトシルトランスフェラーゼおよびその使用方法 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4617269A (ja) |
| EP (1) | EP0130054B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0777559B2 (ja) |
| KR (1) | KR850000434A (ja) |
| AT (1) | ATE50774T1 (ja) |
| AU (1) | AU578418B2 (ja) |
| CA (1) | CA1225348A (ja) |
| DE (1) | DE3481514D1 (ja) |
| DK (1) | DK172955B1 (ja) |
| ES (1) | ES533607A0 (ja) |
| FI (1) | FI85160C (ja) |
| GB (2) | GB8316790D0 (ja) |
| IE (1) | IE58153B1 (ja) |
| IL (1) | IL72176A (ja) |
| MX (1) | MX7714E (ja) |
| NO (1) | NO162080C (ja) |
| NZ (1) | NZ208606A (ja) |
| PH (1) | PH20732A (ja) |
| PT (1) | PT78770B (ja) |
| SU (1) | SU1630617A3 (ja) |
| ZA (1) | ZA844655B (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| GB8622345D0 (en) * | 1986-09-17 | 1986-10-22 | Tate & Lyle Plc | Sucrose derivatives |
| NL8701616A (nl) * | 1987-07-09 | 1989-02-01 | Stamicarbon | Fructosyltransferase en bereiding van fructose-oligomeren daarmee. |
| FR2629985B1 (fr) * | 1988-04-14 | 1994-01-21 | Roussel Uclaf | Application comme produits sucrants faiblement caloriques d'oligosaccharides fructosyles et les aliments, produits dietetiques et boissons les renfermant |
| US5874261A (en) * | 1988-09-02 | 1999-02-23 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for the purification of glycosyltransferases |
| US5476924A (en) * | 1989-01-27 | 1995-12-19 | Duke University | Protecting group for acetals and methods of using the same in the activation of saccharides |
| US4980463A (en) * | 1989-07-18 | 1990-12-25 | Noramco, Inc. | Sucrose-6-ester chlorination |
| US5215905A (en) * | 1989-12-29 | 1993-06-01 | Miwon Co., Ltd. | Immobilization of fructosyltransferase on a basic, porous anion-exchange resin |
| KR0161531B1 (ko) * | 1990-03-08 | 1998-11-16 | 하야시바라 겐 | 락토수크로오스 고함유 분말의 제조방법과 그 분말의 용도 |
| US5180674A (en) * | 1990-04-16 | 1993-01-19 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Saccharide compositions, methods and apparatus for their synthesis |
| BR9106345A (pt) | 1990-04-16 | 1993-04-20 | Univ Pennsylvania | Composicoes de sacarideos,processos e aparelhos para sua sintese |
| US6518051B1 (en) | 1991-04-11 | 2003-02-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Saccharide compositions, methods and apparatus for their synthesis |
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| JPH07274990A (ja) * | 1994-04-15 | 1995-10-24 | Mitsubishi Kasei Eng Co | 環状イヌロオリゴ糖の精製方法 |
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