JPS6029473B2 - ザルコシン・オキシダ−ゼの製法 - Google Patents
ザルコシン・オキシダ−ゼの製法Info
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- JPS6029473B2 JPS6029473B2 JP52119776A JP11977677A JPS6029473B2 JP S6029473 B2 JPS6029473 B2 JP S6029473B2 JP 52119776 A JP52119776 A JP 52119776A JP 11977677 A JP11977677 A JP 11977677A JP S6029473 B2 JPS6029473 B2 JP S6029473B2
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- oxidase
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
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- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0026—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5)
- C12N9/0032—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5) with oxygen as acceptor (1.5.3)
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ザルコシン・オキシダーゼの製法に関する。
ザルコシン・オキシダーゼ（Ｓａｒｃｏｓｌｎｅｏｘｉ
ｄａｓｅ）は、酵素番号１．５．３．１へ ザルコシン
：オキシゲン・オキシドレダクターゼ（デメチレイテイ
ング）（Ｓａｒｃｏｓｌ肥：ｏ刈袋ｎ ｏｘｉｄｏｒｅ
ｄｕｃｔａｓｅ（ｄｅｍｅ比ｙｌａｔｉｎｇ））として
、ザルコシン十日２０★○２こグリシン十日ＣＨＯ十比
０２の反応を触媒すると推定されている酸素であり、従
来ネズミの肝臓、腎臓またはコリネバクテリウム（Ｃｏ
ひｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属菌などの微生物から得ら
れていたにすぎなかった。
ｄａｓｅ）は、酵素番号１．５．３．１へ ザルコシン
：オキシゲン・オキシドレダクターゼ（デメチレイテイ
ング）（Ｓａｒｃｏｓｌ肥：ｏ刈袋ｎ ｏｘｉｄｏｒｅ
ｄｕｃｔａｓｅ（ｄｅｍｅ比ｙｌａｔｉｎｇ））として
、ザルコシン十日２０★○２こグリシン十日ＣＨＯ十比
０２の反応を触媒すると推定されている酸素であり、従
来ネズミの肝臓、腎臓またはコリネバクテリウム（Ｃｏ
ひｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属菌などの微生物から得ら
れていたにすぎなかった。
本発明者らは、京都府福知山市下佐々木のなす畑の±穣
より分離したバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｅ）属に属する
細菌Ｂ−０６１８菌株が、その菌体内に、上記の反応を
触媒するザルコシン・オキシダーゼを生産することを見
し、出し、該酵素を得た。
より分離したバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｅ）属に属する
細菌Ｂ−０６１８菌株が、その菌体内に、上記の反応を
触媒するザルコシン・オキシダーゼを生産することを見
し、出し、該酵素を得た。
上記の細菌Ｂ−０６１８菌株の肉眼的および顕微鏡的観
察に基く各種培地上における培養の特徴は、次に記載す
る通りである。
察に基く各種培地上における培養の特徴は、次に記載す
る通りである。
Ａ 肉眼的観察
３０℃ １８〜２４時間培養の結果、次の通りである。
■ 肉汁寒天斜面培地生育は良好で、線状に生育する。
灰白色〜淡褐色を呈する。
可溶性色素は殆んど産生しない。■ グリコース肉汁寒
天斜面培地 生育は良好で、線状に生育する。
天斜面培地 生育は良好で、線状に生育する。
灰白色〜淡褐色を呈する。
可溶性色素はあまり産生しない。■ 肉汁液体培地
一様に混濁する。
菌膜は形成しない。沈澱も生じる。
■ リトマスミルク培地
１〜２週間後アルカリ性となる。
■ 肉汁ゼラチン高層塔地
上部のみ生育し、液化は弱いがロート状に液化する。
Ｂ 顕微鏡的観察
■ 細胞の形、大きさ
大きく、直すぐな樺菌で、大きさは１．０〜１．５×２
．０〜５山ｍで、端は丸い。
．０〜５山ｍで、端は丸い。
単独または２蓮で、たまに短連鎖する。■ 細胞の多形
性 なし。
性 なし。
■ 運動性
周鞭毛で運動する（肉汁寒天斜面塔地で、２６００、１
錨寺間培養）。
錨寺間培養）。
■ 胞子
菌体（細胞）の中央または端に近い所に、円柱状または
卵形（楕円形）の胞子を形成する。
卵形（楕円形）の胞子を形成する。
胞子によって菌体（細胞）は膨隆しない。
胞子の大きさは０．８〜１．０×１．２×１．６一ｍで
ある。■ グラム染色 腸性 ■ 抗酸性染色 陰性 Ｃ 生理学的性質 硝酸塩の還元 陰性脱窒反応
陰性Ｍ収テスト
陰性ＶＰテスト
陰性インドールの生成
陰性硫化水素の生成 腸性
スターチの加水分解 陰性ゼラチン
の加水分解 陽‘性カゼインの加水分
解 陰性ェスクリンの加水分解
陰性セルロースの加水分解
陰性クエン酸の利用シモンズ（Ｓｉｍｏｎｓ）塔地
陰性クリステンゼン（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓ
ｅｎ）塔地 腸性硝酸塩の利用
陽性アンモニウム塩の利用 陰性硝酸塩
よりアンモニアの生成 陽性生育ｐＨ範囲 ｐ
Ｈ６．４〜９．６で生育する。
ある。■ グラム染色 腸性 ■ 抗酸性染色 陰性 Ｃ 生理学的性質 硝酸塩の還元 陰性脱窒反応
陰性Ｍ収テスト
陰性ＶＰテスト
陰性インドールの生成
陰性硫化水素の生成 腸性
スターチの加水分解 陰性ゼラチン
の加水分解 陽‘性カゼインの加水分
解 陰性ェスクリンの加水分解
陰性セルロースの加水分解
陰性クエン酸の利用シモンズ（Ｓｉｍｏｎｓ）塔地
陰性クリステンゼン（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓ
ｅｎ）塔地 腸性硝酸塩の利用
陽性アンモニウム塩の利用 陰性硝酸塩
よりアンモニアの生成 陽性生育ｐＨ範囲 ｐ
Ｈ６．４〜９．６で生育する。
生育温度範囲 １０〜４が０で生育する。耐塩性 Ｎ
ａｃ１６．０％まで生育する。
ａｃ１６．０％まで生育する。
酸素に対する態度 好気性。○−Ｆテスト（Ｈｕ餌Ｌｅ
ｉ＄ｏｎ塔地） ＮＴＯ−Ｆテスト（本菌株はグルコ
ースより酸を産生せず、また他の糠 類も酸を産生しないか酸を産生し ても弱いため、糖類としてグリセ リンを用い、Ｎ 日４日２Ｐ０４ １．０夕、ＫＣＬＯ
．２夕、ＭｇＳ ０４７日２００．２夕、イーストエキ
ス粉末１．０夕、細菌用寒天末３．０夕、ＢＴＢ （１０％水溶液）１０の‘、蒸留水１０００の‘、ＰＨ
７．２〜７．４の基礎培地を用いた）
○（酸化）糖より酸およびガスの産生Ｌーア
ラビノース セロビオース ヅルシトール エリスリトール フラクトース ＋（酸）ガラクトース グルコース グリセリン 十（酸） イノシトール ラクトース マルトース マンニトール ＋（酸）マンノース メレジトース メリビオース ラフイノース Ｌ−ラムノース サリシン Ｌーソルボース ソノレビトー／し スターチ ー シユクロース トレノ・ロース キシロース （ガスは産生しない） なお、上記方法においては、基礎培地として、Ｎ 日
４日２Ｐ ０４ １．０ 夕 、Ｋｃｌｏ．２ 夕 、
ＭｇＳ０４７日２００．２夕、イーストエキス粉末１．
０夕、細菌用寒天末３．０夕、ＢＴＢ（１０％水溶液）
１０のと、蒸留水１０００奴、ｐＨ７．２〜７．４を用
い、これに糖を１０タ添加して行なったものである。
ｉ＄ｏｎ塔地） ＮＴＯ−Ｆテスト（本菌株はグルコ
ースより酸を産生せず、また他の糠 類も酸を産生しないか酸を産生し ても弱いため、糖類としてグリセ リンを用い、Ｎ 日４日２Ｐ０４ １．０夕、ＫＣＬＯ
．２夕、ＭｇＳ ０４７日２００．２夕、イーストエキ
ス粉末１．０夕、細菌用寒天末３．０夕、ＢＴＢ （１０％水溶液）１０の‘、蒸留水１０００の‘、ＰＨ
７．２〜７．４の基礎培地を用いた）
○（酸化）糖より酸およびガスの産生Ｌーア
ラビノース セロビオース ヅルシトール エリスリトール フラクトース ＋（酸）ガラクトース グルコース グリセリン 十（酸） イノシトール ラクトース マルトース マンニトール ＋（酸）マンノース メレジトース メリビオース ラフイノース Ｌ−ラムノース サリシン Ｌーソルボース ソノレビトー／し スターチ ー シユクロース トレノ・ロース キシロース （ガスは産生しない） なお、上記方法においては、基礎培地として、Ｎ 日
４日２Ｐ ０４ １．０ 夕 、Ｋｃｌｏ．２ 夕 、
ＭｇＳ０４７日２００．２夕、イーストエキス粉末１．
０夕、細菌用寒天末３．０夕、ＢＴＢ（１０％水溶液）
１０のと、蒸留水１０００奴、ｐＨ７．２〜７．４を用
い、これに糖を１０タ添加して行なったものである。
以上の性状において、本菌Ｂ−０６１８が、グラム陽性
の芽胞を形成する大きな樺菌で、周毛で運動する好気的
な細菌で、グルコースより酸を産生しない点を、パージ
ーズ・マェュアル・オブ・ディタミネィティブ・バクテ
リオロジィー伍ｅｒｇｅｒ′ｓＭａｎ雌ｌ ｏｆ Ｄｅ
にｒｍｉｎａｔｉｒｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）８
版（１９７４）により対比すればバチルス（Ｂａｄｌｌ
ｕｓ）属に属する細菌であると認められ、さらに本菌Ｂ
−０６１８と、性状がよく一致していると認められるバ
チルス・バデイウス（脇ｃｉｌｌ瓜舷ｄｉ肥）バチルス
・フレウデンレイチイ（Ｂａｃｍｕｓｆｒｅｕｄｅｎｒ
ｅｉｃｈｉｉ）およびバチルス・マクロイデス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓｍａｃｍｉｄｅｓ）との比較を行なうため、
次の菌株との比較を行なった。
の芽胞を形成する大きな樺菌で、周毛で運動する好気的
な細菌で、グルコースより酸を産生しない点を、パージ
ーズ・マェュアル・オブ・ディタミネィティブ・バクテ
リオロジィー伍ｅｒｇｅｒ′ｓＭａｎ雌ｌ ｏｆ Ｄｅ
にｒｍｉｎａｔｉｒｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）８
版（１９７４）により対比すればバチルス（Ｂａｄｌｌ
ｕｓ）属に属する細菌であると認められ、さらに本菌Ｂ
−０６１８と、性状がよく一致していると認められるバ
チルス・バデイウス（脇ｃｉｌｌ瓜舷ｄｉ肥）バチルス
・フレウデンレイチイ（Ｂａｃｍｕｓｆｒｅｕｄｅｎｒ
ｅｉｃｈｉｉ）およびバチルス・マクロイデス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓｍａｃｍｉｄｅｓ）との比較を行なうため、
次の菌株との比較を行なった。
バチルス・バディウスＡＴＣＣ−１４５７４（本菌は、
ＡＴＣＣにおけるタイプ・カルチャーである）（以下１
４５７４と略す）バチルス・フレウデレィチィＡＴＣＣ
−７０５３（本菌は、ＡＴＣＣにおけるタイプ・カルチ
ャーでもなく、オリジナル・ストレインでもない）（以
下７０５３と略す）バチルス・マクロイデスＡＴＣＣ−
１２９０５（本菌は、ＡＴＣＣにおけるタイプカルチャ
ーである）（以下１２９０５と略す）なお、ＡＴＣＣと
はザ・アメリカン・タイプ・カルチヤー・コレクション
（ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣ山ｔｕｒｅＣｏｌ
ｌｅｃｔｉｏｎ）の略号である。
ＡＴＣＣにおけるタイプ・カルチャーである）（以下１
４５７４と略す）バチルス・フレウデレィチィＡＴＣＣ
−７０５３（本菌は、ＡＴＣＣにおけるタイプ・カルチ
ャーでもなく、オリジナル・ストレインでもない）（以
下７０５３と略す）バチルス・マクロイデスＡＴＣＣ−
１２９０５（本菌は、ＡＴＣＣにおけるタイプカルチャ
ーである）（以下１２９０５と略す）なお、ＡＴＣＣと
はザ・アメリカン・タイプ・カルチヤー・コレクション
（ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣ山ｔｕｒｅＣｏｌ
ｌｅｃｔｉｏｎ）の略号である。
なお、１）においては、ＨｕｇｈＬｅｊ＄ｏｎ培地を用
いたことを示す。２）においては、上述した○−Ｆテス
トに使用した培地を用いたことを示す。
いたことを示す。２）においては、上述した○−Ｆテス
トに使用した培地を用いたことを示す。
※においては、酸の産生において、酸を産生するが、後
にアルカリ性となることを示す。
にアルカリ性となることを示す。
また、ブイョン培地での生産性は次の通りである。
本菌Ｂ−０６１８
生育弱く、柔毛状沈澱を生ずる。
１４５７４
一様に混濁、一部沈澱を生ずる。
７０５３
生育弱く、柔毛状沈澱を生ずる。
１２９０５
生育弱く、一様に混濁、一部沈澱を生ずる。
以上の比較実験の結果、本菌Ｂ−０６１８は、バチルス
・バデイウスＡＴＣＣ山１４５７４とはウレアーゼ・グ
リセリンより酸の産生（酸を産生するが、後にアルカリ
性となる点）、マンニトールより酸の産生の点が多少異
なり、バチルス・フレウデンレィチィＡＴＣＣ−７０５
３とは液体培地での生育様子やウレアーゼ産生の点から
、より類似しているが、ェスクリン加水分解、フラクト
ース、グリセリン、マンニトールなどの糖より酸の産生
の点で多少異なり、さらに該菌はタイプ・カルチャでな
く、さらにオリジナル・ストレインでもないことにより
、本菌Ｂ−０６１８は同定困難であり、また新種とする
にも不適当であり、よって本菌Ｂ−０６１８をバチルス
・ヱス・ピー（Ｂａｄｌｌｕｓｓｐ）Ｂ−０６１８と命
名し、本菌は工業技術院微生物工業技術研究所に微生物
受託番号微工研菌寄第４０４９号（ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ
．４０４９）として寄合もされている。本発明は、上記
の知見に基いて完成されたもので、バチルス属に属する
ザルコシン・オキシダ−ゼ生産菌を培地に培養し、その
培養物からザルコシン・オキシダーゼを採取することを
特徴とするザルコシン・オキシダーゼの製法である。
・バデイウスＡＴＣＣ山１４５７４とはウレアーゼ・グ
リセリンより酸の産生（酸を産生するが、後にアルカリ
性となる点）、マンニトールより酸の産生の点が多少異
なり、バチルス・フレウデンレィチィＡＴＣＣ−７０５
３とは液体培地での生育様子やウレアーゼ産生の点から
、より類似しているが、ェスクリン加水分解、フラクト
ース、グリセリン、マンニトールなどの糖より酸の産生
の点で多少異なり、さらに該菌はタイプ・カルチャでな
く、さらにオリジナル・ストレインでもないことにより
、本菌Ｂ−０６１８は同定困難であり、また新種とする
にも不適当であり、よって本菌Ｂ−０６１８をバチルス
・ヱス・ピー（Ｂａｄｌｌｕｓｓｐ）Ｂ−０６１８と命
名し、本菌は工業技術院微生物工業技術研究所に微生物
受託番号微工研菌寄第４０４９号（ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ
．４０４９）として寄合もされている。本発明は、上記
の知見に基いて完成されたもので、バチルス属に属する
ザルコシン・オキシダ−ゼ生産菌を培地に培養し、その
培養物からザルコシン・オキシダーゼを採取することを
特徴とするザルコシン・オキシダーゼの製法である。
本発明における使用菌としては、上言己のバチルス・ェ
ス・ピーＢ−０６１８はその一例であって、この菌だけ
でなくバチルス属に属する菌でザルコシン・オキシダー
ゼを生産する菌は、すべて本発明において使用できる。
ス・ピーＢ−０６１８はその一例であって、この菌だけ
でなくバチルス属に属する菌でザルコシン・オキシダー
ゼを生産する菌は、すべて本発明において使用できる。
もちろん、微生物は、自然的、人工的に変異を起こし易
く、本菌も例外ではないが、これらの変異株であっても
ザルコシン・オキシダーゼの生産能力を失わない限り、
本発明に使用し得るものである。本発明を実施するに当
って、まずバチルス属に属するザルコシン・オキシダー
ゼ生産菌を、抗生物質、酵素などを生産する通常の方法
で培養する。
く、本菌も例外ではないが、これらの変異株であっても
ザルコシン・オキシダーゼの生産能力を失わない限り、
本発明に使用し得るものである。本発明を実施するに当
って、まずバチルス属に属するザルコシン・オキシダー
ゼ生産菌を、抗生物質、酵素などを生産する通常の方法
で培養する。
培養の形態は液体培養でも固体培養でもよいが、工業的
にはザルコシン・オキシダーゼ生産菌の細胞をその生産
用培地に接種し、深部通気櫨梓培養を行なうのが有利で
ある。培地の栄養源としては、微生物の培養に通常用い
られるものが広く使用される。
にはザルコシン・オキシダーゼ生産菌の細胞をその生産
用培地に接種し、深部通気櫨梓培養を行なうのが有利で
ある。培地の栄養源としては、微生物の培養に通常用い
られるものが広く使用される。
窒素源としては利用可能な窒素化合物であればよく、例
えばコーン・スチーブ・リカー、大豆粉、ベプトン、種
々の肉エキス、酵母エキス、硫安、塩化アンモニウムな
どが使用される。炭素源としては、同化可能な炭素化合
物であればよく、グルコース、健蜜、グリセリン、スタ
ーチ加水分解物などが使用される。その他、食塩、塩化
カリウム、硫酸マグネシウム、リン酸第一カリウム、リ
ン酸第二カリウムなどの塩類が必要に応じて使用される
。また培地中にクレアチンを添加せしめて、培養時ザル
コシン・オキシダーゼの生産能を上昇せしめることが好
ましく、好ましくは０．５〜１％程度添加される。培養
温度は菌が発育し、ザルコシン・オキシダ−ゼを生産す
る範囲内で適宜変更し得るが、特に好ましくは２６〜３
３００である。
えばコーン・スチーブ・リカー、大豆粉、ベプトン、種
々の肉エキス、酵母エキス、硫安、塩化アンモニウムな
どが使用される。炭素源としては、同化可能な炭素化合
物であればよく、グルコース、健蜜、グリセリン、スタ
ーチ加水分解物などが使用される。その他、食塩、塩化
カリウム、硫酸マグネシウム、リン酸第一カリウム、リ
ン酸第二カリウムなどの塩類が必要に応じて使用される
。また培地中にクレアチンを添加せしめて、培養時ザル
コシン・オキシダーゼの生産能を上昇せしめることが好
ましく、好ましくは０．５〜１％程度添加される。培養
温度は菌が発育し、ザルコシン・オキシダ−ゼを生産す
る範囲内で適宜変更し得るが、特に好ましくは２６〜３
３００である。
培養時間は条件によって多少異なるが、通常１５〜２曲
時間程度であって、ザルコシン・オキシダーゼが最高力
価に達する時期をみはからつて適当な時期に培養を終了
すればよい。かくして得られた培養物中において、ザル
コシン。オキシダーゼはその菌体内に含有、蓄積されて
いる。この様にして得られた培養物中よりザルコシン・
オキシダーゼを抽出し、粗製のザルコシン・オキシダー
ゼ含有液を得るために、例示すれば、まず培養物を固液
分離し、得られる湿菌体を、必要に応じてリン酸綾術液
やトリスー塩酸綾術液などに懸濁せしめ、次いでリゾチ
ーム処理、超音波処理やフレンチプレス処理などの菌体
処理手段を適宜選択組合せて、菌体内よりザルコシン・
オキシダーゼを抽出し、粗製のザルコシン・オキシダー
ゼ含有液を得る。
時間程度であって、ザルコシン・オキシダーゼが最高力
価に達する時期をみはからつて適当な時期に培養を終了
すればよい。かくして得られた培養物中において、ザル
コシン。オキシダーゼはその菌体内に含有、蓄積されて
いる。この様にして得られた培養物中よりザルコシン・
オキシダーゼを抽出し、粗製のザルコシン・オキシダー
ゼ含有液を得るために、例示すれば、まず培養物を固液
分離し、得られる湿菌体を、必要に応じてリン酸綾術液
やトリスー塩酸綾術液などに懸濁せしめ、次いでリゾチ
ーム処理、超音波処理やフレンチプレス処理などの菌体
処理手段を適宜選択組合せて、菌体内よりザルコシン・
オキシダーゼを抽出し、粗製のザルコシン・オキシダー
ゼ含有液を得る。
次いでこの粗製のザルコシン・オキシダーゼ含有液を、
さらに公知の、蛋白質、酵素などの単離、精製手段を用
いて処理することにより精製されたザルコシン・オキシ
ダーゼを得ることができる。
さらに公知の、蛋白質、酵素などの単離、精製手段を用
いて処理することにより精製されたザルコシン・オキシ
ダーゼを得ることができる。
例えば、粗製のザルコシン・オキシダーゼ含有液に、必
要に応じて硫酸プロタシン水溶液を加えて核酸などを除
去し、これに、アセトン、メタノール、エタノール、ィ
ソブロパノールなどの有機溶媒を加えて分別沈澱せしめ
るが、硫安などを加えて塩機せしめるかして水溶液から
沈澱せしめ、回収すればよい。さらにこの沈澱物を精製
するに際し、例えば電気泳動法などにて単一のスポット
を示までに精製すればよく、その精製手段としては目的
とするザルコシン・オキシダーゼの性質を利用した手段
を用いればよく、例えば上記の沈澱物をトリスー塩酸緩
衝液などの媒体に溶解し、ジエチルアシノエチルーセル
ロースやジエチルァミノェチルーデキストランゲル架橋
体などの陰イオン交換体、デキストランゲル、ポリアク
リルアマィドゲルなどのゲル炉過剤によるクロマトグラ
フ法を行えばよい。またこれらの手段を適宜組合せて精
製すればよく、次いでこれを真空凍結乾燥手段などによ
り乾燥してザルコシン・オキシダーゼの精製粉末を得る
。本発明によって得られるザルコシン・オキシダーゼは
、以下に述べる理化学的性質を有するものである。
要に応じて硫酸プロタシン水溶液を加えて核酸などを除
去し、これに、アセトン、メタノール、エタノール、ィ
ソブロパノールなどの有機溶媒を加えて分別沈澱せしめ
るが、硫安などを加えて塩機せしめるかして水溶液から
沈澱せしめ、回収すればよい。さらにこの沈澱物を精製
するに際し、例えば電気泳動法などにて単一のスポット
を示までに精製すればよく、その精製手段としては目的
とするザルコシン・オキシダーゼの性質を利用した手段
を用いればよく、例えば上記の沈澱物をトリスー塩酸緩
衝液などの媒体に溶解し、ジエチルアシノエチルーセル
ロースやジエチルァミノェチルーデキストランゲル架橋
体などの陰イオン交換体、デキストランゲル、ポリアク
リルアマィドゲルなどのゲル炉過剤によるクロマトグラ
フ法を行えばよい。またこれらの手段を適宜組合せて精
製すればよく、次いでこれを真空凍結乾燥手段などによ
り乾燥してザルコシン・オキシダーゼの精製粉末を得る
。本発明によって得られるザルコシン・オキシダーゼは
、以下に述べる理化学的性質を有するものである。
（１ｌ作用
１モルのザルコシンより、１モルの水、１モルの酸素を
消費して、１モルのグリシン、１モルのホルムアルデヒ
ドおよび１モルの過酸化水素を生成する。
消費して、１モルのグリシン、１モルのホルムアルデヒ
ドおよび１モルの過酸化水素を生成する。
ザルコシンを酸化してグリシン、ホルムァルデヒドとす
る反応を触媒する作用を有する。ＣＨ３ＮＨＣＨ２ＣＯ
ＯＨ＋０２十日２０→日２ＮＣＨ２ＣＯＯ日十ＨＣＨＯ
十比０２‘２） 力価の測定法０．２Ｍトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ８．０）０．０５の‘、３の９／奴の４−ア
ミノアンチピリン０．０５のＺ０．２％フエノール０．
０５の上、０．５の９／の【のベルオキシダーゼ０．０
５の‘、ＩＭザルコシンの０．１私、蒸留水０．２の｛
よりなる反応液０．５の【に酵素液１０仏そを添加し、
３７０、５分間反応せしめた後エタノールを加えて反応
を止める。
る反応を触媒する作用を有する。ＣＨ３ＮＨＣＨ２ＣＯ
ＯＨ＋０２十日２０→日２ＮＣＨ２ＣＯＯ日十ＨＣＨＯ
十比０２‘２） 力価の測定法０．２Ｍトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ８．０）０．０５の‘、３の９／奴の４−ア
ミノアンチピリン０．０５のＺ０．２％フエノール０．
０５の上、０．５の９／の【のベルオキシダーゼ０．０
５の‘、ＩＭザルコシンの０．１私、蒸留水０．２の｛
よりなる反応液０．５の【に酵素液１０仏そを添加し、
３７０、５分間反応せしめた後エタノールを加えて反応
を止める。
比色は、４８０脚の吸取を測定し、生成する過酸化水素
量を求める。酵素活性は、１分間に１一ｍｏｌｅの過酸
水素を生成する活性を１単位（１皿ｉＬ１ｕ）とする。
｛３｝ 基質特異性０．２Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
８．０）０．０５私、０．２％フェノール０．０５の【
、０．５の９／泌のベルオキシダーゼ０．０５地、蒸留
水０．２の‘および下記化合物を基質とする０．９Ｍ基
質溶液０．２０の（よりなる反応液０．５机に、ザルコ
シン・オキシダーゼ０．５ｕを添加し、３７００、５分
間反応せしめ、次いで２．５机上エタノールを加えて反
応を停止せしめた後４８Ｍｍにて比色した。基 質
相対活性（％）ザルコシン
１００．０コリン
○べタイン ０．
０３ジメチルグリシン ０
．０１グリシン ０
．０６セリン ０スレオニン
Ｏ アラニン ０ バリン ○ リジン ０．０９
Ｎ−メチルエタノールアミン ＯＮ−ジメチル
エタノールアミン ０‘４｝ 至適ｐＨ ４−アミノアンチピリンーフェノールーベリオキシダー
ゼの発色系に及ぼす影響を避けるため、アセチルアセト
ン法にて、生成するホルムァルデヒドを定量した結果、
第１図に示す通りであり、ザルコシン・オキシダーゼの
至極ｐＨは８．０〜９．５付近と認められる。
量を求める。酵素活性は、１分間に１一ｍｏｌｅの過酸
水素を生成する活性を１単位（１皿ｉＬ１ｕ）とする。
｛３｝ 基質特異性０．２Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
８．０）０．０５私、０．２％フェノール０．０５の【
、０．５の９／泌のベルオキシダーゼ０．０５地、蒸留
水０．２の‘および下記化合物を基質とする０．９Ｍ基
質溶液０．２０の（よりなる反応液０．５机に、ザルコ
シン・オキシダーゼ０．５ｕを添加し、３７００、５分
間反応せしめ、次いで２．５机上エタノールを加えて反
応を停止せしめた後４８Ｍｍにて比色した。基 質
相対活性（％）ザルコシン
１００．０コリン
○べタイン ０．
０３ジメチルグリシン ０
．０１グリシン ０
．０６セリン ０スレオニン
Ｏ アラニン ０ バリン ○ リジン ０．０９
Ｎ−メチルエタノールアミン ＯＮ−ジメチル
エタノールアミン ０‘４｝ 至適ｐＨ ４−アミノアンチピリンーフェノールーベリオキシダー
ゼの発色系に及ぼす影響を避けるため、アセチルアセト
ン法にて、生成するホルムァルデヒドを定量した結果、
第１図に示す通りであり、ザルコシン・オキシダーゼの
至極ｐＨは８．０〜９．５付近と認められる。
用いた緩衝液としては、ＰＨ４〜７：ジメチルダルタル
酸緩衝液、ｐＨ６〜８：リン酸緩衝液、ｐｆ１７．５〜
９：トリスー塩酸緩衝液、ｐＨ９〜１０：グリシン−水
酸化ナトリウム緩衝液、ｐＨＩＯ〜１１：炭酸ナトリウ
ム−ホウ酸ナトリウム緩衝液である。（５｝ 至適温度 上記の力価の測定法における測定法を利用して、その温
度条件を変えて酵素反応を行ない、ザルコシン・オキシ
ダーゼのザルコシンに対する酵素活性を測定した結果、
第２図に示す通りであって、その至極温度は５０００付
近と認められる。
酸緩衝液、ｐＨ６〜８：リン酸緩衝液、ｐｆ１７．５〜
９：トリスー塩酸緩衝液、ｐＨ９〜１０：グリシン−水
酸化ナトリウム緩衝液、ｐＨＩＯ〜１１：炭酸ナトリウ
ム−ホウ酸ナトリウム緩衝液である。（５｝ 至適温度 上記の力価の測定法における測定法を利用して、その温
度条件を変えて酵素反応を行ない、ザルコシン・オキシ
ダーゼのザルコシンに対する酵素活性を測定した結果、
第２図に示す通りであって、その至極温度は５０００付
近と認められる。
■ ＰＨ安定性
ＰＨ５〜７としてジメチルグルタル酸緩衝液、ｐＨ６〜
８としてリン酸緩衝液、ｐＨ７．５〜９としてトリス−
塩酸緩衝液、ｐＨ９〜１０としてグリシン−水酸化ナト
リウム緩衝液、ｐＨ１０〜１１として炭酸ナトリウムー
ホウ酸ナトリウム緩衝液を用い、各ｐＨの緩衝液０．１
磁に、酵素溶液（酵素蛋白質濃度１００ムタ／の「‘）
１００仏そを加え、３７００６０分間放置し、次いでこ
れに１．０Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）０．３
の‘を加えてｐＨを調節した後２０〃夕を分取し、反応
液に加え、上記の力価の測定法に従って、ザルコシン・
オキシダーゼのザルコシンに対する酵素活性を測定した
結果第３図に示す通りであって、そのｐＨ安定性は６．
０〜１０．の寸近を認められる。
８としてリン酸緩衝液、ｐＨ７．５〜９としてトリス−
塩酸緩衝液、ｐＨ９〜１０としてグリシン−水酸化ナト
リウム緩衝液、ｐＨ１０〜１１として炭酸ナトリウムー
ホウ酸ナトリウム緩衝液を用い、各ｐＨの緩衝液０．１
磁に、酵素溶液（酵素蛋白質濃度１００ムタ／の「‘）
１００仏そを加え、３７００６０分間放置し、次いでこ
れに１．０Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）０．３
の‘を加えてｐＨを調節した後２０〃夕を分取し、反応
液に加え、上記の力価の測定法に従って、ザルコシン・
オキシダーゼのザルコシンに対する酵素活性を測定した
結果第３図に示す通りであって、そのｐＨ安定性は６．
０〜１０．の寸近を認められる。
｛７｝ 熱安定性
酵素蛋白質２０仏夕／泌を含有してなる１仇ｈＭトリス
ー塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）０．５の‘を各温度にて１
び分間放置し、次いで上記の力価の測定法に従って、ザ
ルコシン・オキシダーゼのザルコシンに対する酵素活性
を測定した結果、第４図に示す通りであって、その熱安
定性は４０ｏＣ付近以下であると認められる。
ー塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）０．５の‘を各温度にて１
び分間放置し、次いで上記の力価の測定法に従って、ザ
ルコシン・オキシダーゼのザルコシンに対する酵素活性
を測定した結果、第４図に示す通りであって、その熱安
定性は４０ｏＣ付近以下であると認められる。
職 分子量
約４０００（ゲル炉過法により測定）
‘９｝ 等電点
４．７付近（キャリアアンホライトを用いる等霞点分画
法）｛ＩＱ 反応生成物の同定または定量 ｉ グリシンの同定 反応液 ０．２Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ８．０） １．
０ＭｌｍＭザ、ルコシン
１．０の（カタラーゼ
２００ ｕザルコシン．オキシダーゼ ５ｕ
蒸留水 ８．０の【１０
．０の‘上記反応液１物上を３７ｏ０、６Ｍ分間放置し
、１００℃、６分間加熱処理して反応を停止した。
法）｛ＩＱ 反応生成物の同定または定量 ｉ グリシンの同定 反応液 ０．２Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ８．０） １．
０ＭｌｍＭザ、ルコシン
１．０の（カタラーゼ
２００ ｕザルコシン．オキシダーゼ ５ｕ
蒸留水 ８．０の【１０
．０の‘上記反応液１物上を３７ｏ０、６Ｍ分間放置し
、１００℃、６分間加熱処理して反応を停止した。
生じた沈澱物を遠心除去し、その上清をＩＭ音‘こ濃縮
し、口紙上にスポットし、水飽和フェノールを展開溶媒
として一晩展開し、ニンヒドリン溶液を口紙上にスプレ
ーし、加熱して発色せしめた結果、そのスポットのＲｆ
値は０．２６であった。また別に調整したザルコシンの
Ｒｆ値は０．６６であり、グリシンのＲｆ値は０．２６
であることより、上記のスポットのＲｆ値０．２６はグ
リシンと同定された。ｉｉ ホルムアルデヒドの定量 アセチルアセトン法にて定量した。
し、口紙上にスポットし、水飽和フェノールを展開溶媒
として一晩展開し、ニンヒドリン溶液を口紙上にスプレ
ーし、加熱して発色せしめた結果、そのスポットのＲｆ
値は０．２６であった。また別に調整したザルコシンの
Ｒｆ値は０．６６であり、グリシンのＲｆ値は０．２６
であることより、上記のスポットのＲｆ値０．２６はグ
リシンと同定された。ｉｉ ホルムアルデヒドの定量 アセチルアセトン法にて定量した。
反応液
０．２Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０） ０．０
５机上各濃度のザルコシン ０．１０の
【カタラーゼ ２００
ｕザルコシン・オキシダーゼ ３．０ ｕ
蒸留水 ０．３５汎‘〇
．５０叫上記反応液を３７００、２庇ふ間放置した後、
５分間熱処理して反応を停止し、冷却後酢酸緩衝液（Ｐ
Ｈ５．５）を１．５の（加え、さらに下記発色液２．０
叫加えて３７０、５０分間放置後４１かｍにて比色した
結果、第５図に示す通り、ザルコシンの各濃度に対応し
たホルムアルデヒドの生成を確認した。
５机上各濃度のザルコシン ０．１０の
【カタラーゼ ２００
ｕザルコシン・オキシダーゼ ３．０ ｕ
蒸留水 ０．３５汎‘〇
．５０叫上記反応液を３７００、２庇ふ間放置した後、
５分間熱処理して反応を停止し、冷却後酢酸緩衝液（Ｐ
Ｈ５．５）を１．５の（加え、さらに下記発色液２．０
叫加えて３７０、５０分間放置後４１かｍにて比色した
結果、第５図に示す通り、ザルコシンの各濃度に対応し
たホルムアルデヒドの生成を確認した。
発色液
酢酸アンモニウム １５ 多酢酸
０．３の‘アセチルア
セトン ０．２の上水を加え
て１００の‘とする。
０．３の‘アセチルア
セトン ０．２の上水を加え
て１００の‘とする。
ｉｉｉ 過酸化水素の定量
４ーアミノアンチピリンーフエノール−ベルオキシダー
ゼ系で発色せしめて定量した。
ゼ系で発色せしめて定量した。
反応液０．刻４トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）
０．０５羽３の９／机上４−アミノアンチピリン
０．０５地０．２％フエノール
０．０５舷ｏ．５の９／の【ベルオキシダーゼ
０．０５のと各濃度のザルコシン
０．１０の【ザルコシン・オキシダーゼ
３．０ ｕ蒸留水
０．２ぬ【〇．５のＺ上記反応液を３７０、２０分間
放置した後、２．５叫エタノールを加えて４８皿ｍにて
比色した結果、第６図に示す通り、ザルコシンの各濃度
に対応した過酸化水素の生成を確認した。
０．０５羽３の９／机上４−アミノアンチピリン
０．０５地０．２％フエノール
０．０５舷ｏ．５の９／の【ベルオキシダーゼ
０．０５のと各濃度のザルコシン
０．１０の【ザルコシン・オキシダーゼ
３．０ ｕ蒸留水
０．２ぬ【〇．５のＺ上記反応液を３７０、２０分間
放置した後、２．５叫エタノールを加えて４８皿ｍにて
比色した結果、第６図に示す通り、ザルコシンの各濃度
に対応した過酸化水素の生成を確認した。
以上の通り、本発明の酵素ザルコシン・オキシダーゼは
、ザルコシンに作用して酸化せしめる際に酵素と反応し
（なおこの際１モルのザルコシンに対し１モルの水を消
費を伴う）、グリシン、ホルムアルデヒドおよび過酸化
水素を生成せしめることにより、酵素番号１．５．３．
１へ ザルコシン：オキシゲン・オキシドレダクタ−ゼ
（デメチレンイテイング）として公知の酵素に分類され
る酵素と認められる。
、ザルコシンに作用して酸化せしめる際に酵素と反応し
（なおこの際１モルのザルコシンに対し１モルの水を消
費を伴う）、グリシン、ホルムアルデヒドおよび過酸化
水素を生成せしめることにより、酵素番号１．５．３．
１へ ザルコシン：オキシゲン・オキシドレダクタ−ゼ
（デメチレンイテイング）として公知の酵素に分類され
る酵素と認められる。
本発明のザルコシン・オキシダーゼは酵素的臨床診断剤
、例えばクレアチナーゼと組合せて血清や尿中のクレア
チニンの測定に利用され、またクレアチニナーゼの活性
測定などへの利用などの種々の有用性を有しているもの
である。
、例えばクレアチナーゼと組合せて血清や尿中のクレア
チニンの測定に利用され、またクレアチニナーゼの活性
測定などへの利用などの種々の有用性を有しているもの
である。
次に実施例を挙げて本発明を具体的に述べるが、本発明
は何んらこれらにより限定されるものではない。
は何んらこれらにより限定されるものではない。
実施例 １
クレアチン０．５％、魚肉エキス０．５％、酵母エキス
０．２％、ＫＣＩＯ．３％、Ｋ２日 Ｐ 。
０．２％、ＫＣＩＯ．３％、Ｋ２日 Ｐ 。
４０．１％、ＭｇＳ０４７日２００．０５％よりなる培
地ｌｏｏ似（ｐＨ７．０）を５００の‘客三角フラスコ
に加え、１２０ｑ○、２び分間滅菌処理し、次いでこれ
にバチルス・ェス・ピーＢ−０６１８（斑ｃｉｌｌｕｓ
ｓｐＢ−０６１８）を接種し、３０００ 日間培養して
種菌を得た。
地ｌｏｏ似（ｐＨ７．０）を５００の‘客三角フラスコ
に加え、１２０ｑ○、２び分間滅菌処理し、次いでこれ
にバチルス・ェス・ピーＢ−０６１８（斑ｃｉｌｌｕｓ
ｓｐＢ−０６１８）を接種し、３０００ 日間培養して
種菌を得た。
次いでこの種菌を、上記と同一組成を有する培養液２０
夕を有してなる滅菌後の３０そ客ジャーフアメンターに
移植し、３０ｏｏ、２餌時間、２０仇ｐｍ、２０夕／ｍ
ｉｎの滅菌空気の条件下通気燈梓培養し、得られる培養
液を遠心分離して集菌し、その湿菌体１２夕を分取し、
この菌体を１肌Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．０）で洗浄後
、同一緩衝液に懸濁せしめ、これにリゾチーム（最終濃
度０．２の９／の‘）を加え、３７ｏ０、３び分間処理
し、次いでこの溶液を５００仇ｐｍ、１５分間遠心分離
して上清液を回収した（ザルコシン・オキシダーゼの酵
素活性１４０肌）。得られた上清液に、２％硫酸プロ夕
ミン水溶液２．５肌を加えて遠心して核醸成分を除去し
た後、これに飽和硫安を加えて、硫安濃度５０％〜７０
％の画分にて沈澱する沈澱物を回収し、この沈澱物を１
倣Ｍトリス‐塩酸緩衝液（ＰＨ８．０）２０の‘に溶解
し、この溶液をセフアデックスＧ−２５（ファルマシア
社製）を充填したカラム（径３．５肌／３０肌）にて脱
塩し、次いで１仇ｈＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０
）で平衡化したＤＥＡＥ−セルロース（ブラウン社製）
を充填したカラム（径２０ｃの×１８ｃの）にチャージ
せしめ、０．１ＭＫＣＩ含有の同一緩衝液にて洗浄後、
ＫＣＩＯ．ＩＭ〜０．５Ｍの濃度勾配で溶出せしめ、そ
のＫＣＩＯ．３柵による溶出の活性画分を回収し、次い
でこの活性画分は透析膜（ビスキング社製）を用いて１
皿Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に対して、１０
時間透析せしめ、この溶液を凍結乾燥してザルコシン・
オキシダーゼの粉末（全活性５４血、蛋白量４３の９、
比活性１２．７ｕ／の９、回収率３８．６％）を得た。
夕を有してなる滅菌後の３０そ客ジャーフアメンターに
移植し、３０ｏｏ、２餌時間、２０仇ｐｍ、２０夕／ｍ
ｉｎの滅菌空気の条件下通気燈梓培養し、得られる培養
液を遠心分離して集菌し、その湿菌体１２夕を分取し、
この菌体を１肌Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．０）で洗浄後
、同一緩衝液に懸濁せしめ、これにリゾチーム（最終濃
度０．２の９／の‘）を加え、３７ｏ０、３び分間処理
し、次いでこの溶液を５００仇ｐｍ、１５分間遠心分離
して上清液を回収した（ザルコシン・オキシダーゼの酵
素活性１４０肌）。得られた上清液に、２％硫酸プロ夕
ミン水溶液２．５肌を加えて遠心して核醸成分を除去し
た後、これに飽和硫安を加えて、硫安濃度５０％〜７０
％の画分にて沈澱する沈澱物を回収し、この沈澱物を１
倣Ｍトリス‐塩酸緩衝液（ＰＨ８．０）２０の‘に溶解
し、この溶液をセフアデックスＧ−２５（ファルマシア
社製）を充填したカラム（径３．５肌／３０肌）にて脱
塩し、次いで１仇ｈＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０
）で平衡化したＤＥＡＥ−セルロース（ブラウン社製）
を充填したカラム（径２０ｃの×１８ｃの）にチャージ
せしめ、０．１ＭＫＣＩ含有の同一緩衝液にて洗浄後、
ＫＣＩＯ．ＩＭ〜０．５Ｍの濃度勾配で溶出せしめ、そ
のＫＣＩＯ．３柵による溶出の活性画分を回収し、次い
でこの活性画分は透析膜（ビスキング社製）を用いて１
皿Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に対して、１０
時間透析せしめ、この溶液を凍結乾燥してザルコシン・
オキシダーゼの粉末（全活性５４血、蛋白量４３の９、
比活性１２．７ｕ／の９、回収率３８．６％）を得た。
第１図は、ザルコシン・オキシダーゼの至造ｐＨを示し
、第２図はザルコシン・オキシダーゼの至適温度を示し
、第３図はザルコシン・オキシダーゼのｐＨ安定性を示
し、第４図はザルコシン・オキシダーゼの熱安定性を示
し、第５図は各濃度のザルコシンにザルコシン・オキシ
ダーゼを作用せしめて生成されるホルムアルデヒドの定
量曲線を示し、第６図は各濃度のザルコシンにザルコシ
ン・オキシダーゼを作用せしめて生成される過酸化水素
の定量曲線を止す。 第１図 第２図 第３図 第４図 第５図 第６図
、第２図はザルコシン・オキシダーゼの至適温度を示し
、第３図はザルコシン・オキシダーゼのｐＨ安定性を示
し、第４図はザルコシン・オキシダーゼの熱安定性を示
し、第５図は各濃度のザルコシンにザルコシン・オキシ
ダーゼを作用せしめて生成されるホルムアルデヒドの定
量曲線を示し、第６図は各濃度のザルコシンにザルコシ
ン・オキシダーゼを作用せしめて生成される過酸化水素
の定量曲線を止す。 第１図 第２図 第３図 第４図 第５図 第６図
Claims (1)
- １ バチルス属に属するザルコシン・オキシダーゼ生産
菌を培地に培養し、その培養物からザルコシン・オキシ
ダーゼを採取することを特徴とするザルコシン・オキシ
ダーゼの製法。
Priority Applications (12)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52119776A JPS6029473B2 (ja) | 1977-10-04 | 1977-10-04 | ザルコシン・オキシダ−ゼの製法 |
| US05/946,402 US4216292A (en) | 1977-10-04 | 1978-09-27 | Process for the production of sarcosine oxidase |
| DE2842940A DE2842940C2 (de) | 1977-10-04 | 1978-10-02 | Verfahren zur Gewinnung von Sarcosin-Oxidase |
| NL7809943A NL7809943A (nl) | 1977-10-04 | 1978-10-02 | Werkwijze voor de bereiding van sarcosine-oxydase. |
| FR7828107A FR2405299A1 (fr) | 1977-10-04 | 1978-10-02 | Procede de production de sarcosine oxydase |
| AT0712778A AT364878B (de) | 1977-10-04 | 1978-10-03 | Verfahren zur herstellung von sarkosinoxidase |
| GB7839155A GB2005689B (en) | 1977-10-04 | 1978-10-03 | Process for the prperation of sarcosine oxidase |
| DK436978A DK146224C (da) | 1977-10-04 | 1978-10-03 | Fremgangsmaade til fremstilling af sarcosinoxidase |
| SE7810355A SE432265B (sv) | 1977-10-04 | 1978-10-03 | Sett att framstella sarkosinoxidas genom odling av bacillus sp. nrrl b-11380 |
| CA312,555A CA1112192A (en) | 1977-10-04 | 1978-10-03 | Process for production of sarcosine oxidase |
| HU78TO1087A HU180306B (en) | 1977-10-04 | 1978-10-03 | Process for preparing sarcosine oxydase |
| CH1031278A CH645668A5 (de) | 1977-10-04 | 1978-10-04 | Verfahren zur herstellung von sarcosinoxidase. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52119776A JPS6029473B2 (ja) | 1977-10-04 | 1977-10-04 | ザルコシン・オキシダ−ゼの製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5452789A JPS5452789A (en) | 1979-04-25 |
| JPS6029473B2 true JPS6029473B2 (ja) | 1985-07-10 |
Family
ID=14769924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52119776A Expired JPS6029473B2 (ja) | 1977-10-04 | 1977-10-04 | ザルコシン・オキシダ−ゼの製法 |
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