JPS60237363A - 免疫グロブリンの定量方法 - Google Patents
免疫グロブリンの定量方法Info
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- JPS60237363A JPS60237363A JP59094117A JP9411784A JPS60237363A JP S60237363 A JPS60237363 A JP S60237363A JP 59094117 A JP59094117 A JP 59094117A JP 9411784 A JP9411784 A JP 9411784A JP S60237363 A JPS60237363 A JP S60237363A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヒト免疫グロブリンに対する単クローン性抗
体を単独又は２種類以上用いてヒト免疫グロブリンを光
学的に測定する方法に関する。
体を単独又は２種類以上用いてヒト免疫グロブリンを光
学的に測定する方法に関する。
免疫グロブリンは、形質細胞、あるいはリンパ節で産生
される抗体蛋白で、細菌、ウィルス、毒素等から生体を
防禦する重要な働きを持つ蛋白質であり、体液中の免疫
グロブリン量を測定する事は各種疾患の診断、予防、予
後の経過を調べる上で重要な手段である。
される抗体蛋白で、細菌、ウィルス、毒素等から生体を
防禦する重要な働きを持つ蛋白質であり、体液中の免疫
グロブリン量を測定する事は各種疾患の診断、予防、予
後の経過を調べる上で重要な手段である。
体液中の免疫グロブリンを測定する方法に関しては、近
年その進歩にめざましいものがあり、測定方法も５ＲＩ
Ｄ法、レーザー比朧法、比濁法、ＲＩＡ法、ＥＩＡ法、
ラテックス凝集法等多くの方法が開発されてきている。
年その進歩にめざましいものがあり、測定方法も５ＲＩ
Ｄ法、レーザー比朧法、比濁法、ＲＩＡ法、ＥＩＡ法、
ラテックス凝集法等多くの方法が開発されてきている。
特に最近では、免疫グロブリンの測定ヲ、レーザーネフ
ェロメーターや、多項目の生化学的測定を対象に開発さ
れた自動分析装置で短時間に行なう方法が、開発され普
及しつつある。
ェロメーターや、多項目の生化学的測定を対象に開発さ
れた自動分析装置で短時間に行なう方法が、開発され普
及しつつある。
しかしながらこれらの測定に使用する抗体は通常動物に
免疫をして得たポリクローナル抗体である為、抗原抗体
反応による凝集度が高く、濁りの度合が強すぎるので、
測定時に検体血清全希釈して用いなげればならず、操作
が煩雑となり又、希釈による誤差なども生じ易いという
欠点があった。
免疫をして得たポリクローナル抗体である為、抗原抗体
反応による凝集度が高く、濁りの度合が強すぎるので、
測定時に検体血清全希釈して用いなげればならず、操作
が煩雑となり又、希釈による誤差なども生じ易いという
欠点があった。
史に、自動分析装置に於ては、通常、試料の希釈は行な
わずに測定する事が前提となっているので、同一試料に
ついて、糖、脂質、酵素等の生化学的検査と一緒に免疫
グロブリンの測定を行うことは実際上不可能であった。
わずに測定する事が前提となっているので、同一試料に
ついて、糖、脂質、酵素等の生化学的検査と一緒に免疫
グロブリンの測定を行うことは実際上不可能であった。
又、免疫グロブリンの中でもＩｇＧ Ｈ殊にその含有量
が高く、通常血清中に５００〜３，０００ｍＬ；／／ｄ
ｌ存在し、動物に免疫をして得たポリクローナル抗体ケ
用いた比濁法あるいは比朧法の如き光学的測定法におい
ては、血清を希釈せずに測定する場合は多量の抗体が必
要となシ、又、その結果極めて強い濁りが生じてしまう
為、血清を希釈しないで測定することは到底不可能と考
えられていた。従って測定に際しては血清をあらかじめ
１０〜３０倍、又場合によっては１００〜３００倍（比
朧法）に希釈したものを抗原抗体反応に使用して、光学
的に測定することが必要であった。
が高く、通常血清中に５００〜３，０００ｍＬ；／／ｄ
ｌ存在し、動物に免疫をして得たポリクローナル抗体ケ
用いた比濁法あるいは比朧法の如き光学的測定法におい
ては、血清を希釈せずに測定する場合は多量の抗体が必
要となシ、又、その結果極めて強い濁りが生じてしまう
為、血清を希釈しないで測定することは到底不可能と考
えられていた。従って測定に際しては血清をあらかじめ
１０〜３０倍、又場合によっては１００〜３００倍（比
朧法）に希釈したものを抗原抗体反応に使用して、光学
的に測定することが必要であった。
本発明者らは、かかる問題点を解決すべく鋭意研究を重
ねた結果、単クローン性抗体を単独、あるいは２種炉以
上組み合せて用いることによシ、血清等生体試料の希釈
を行なわずに、適度な且つ充分測定可能な濁度が得られ
、容易に且つ効率的に免疫グロブリンの比朧法或−は比
濁法による測定を行うことができる本発明を完成するに
到った。
ねた結果、単クローン性抗体を単独、あるいは２種炉以
上組み合せて用いることによシ、血清等生体試料の希釈
を行なわずに、適度な且つ充分測定可能な濁度が得られ
、容易に且つ効率的に免疫グロブリンの比朧法或−は比
濁法による測定を行うことができる本発明を完成するに
到った。
即ち、本発明は、生木試料を希釈せずにそのまま使用し
、単クローン性抗ヒト免疫グロブリン抗体を単独又は２
種以上組み合せて用いてこれと抗原抗体反応を行わせ、
生成する抗原抗体複合物に □光を照射し光学的変化量
を測定する、免疫グロブリンの定量方法である。
、単クローン性抗ヒト免疫グロブリン抗体を単独又は２
種以上組み合せて用いてこれと抗原抗体反応を行わせ、
生成する抗原抗体複合物に □光を照射し光学的変化量
を測定する、免疫グロブリンの定量方法である。
抗原抗体反応を利用した臨床化学分析に於てモノクロー
ナル抗体を用いる方法としては、放射免疫測定法（ＲＩ
Ａ ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、蛍光免疫測定ｍ（
Ｆ’ＩＡ）等、抗体抗原反応後の抗原又は抗体に標識し
た同位元素、酵素、蛍光物質等を測定することによシ、
間接的に試料中の測定対象抗原又は抗体の量をめる方法
に於て、より精度の高い測定を行う目的で行われている
例はこり、までに数例あるが、本発明の如く抗原抗体反
応による凝集の程度を直接光学的に測定する方法に於て
、これを効果的に利用して層る例はこれまでに皆無であ
る。
ナル抗体を用いる方法としては、放射免疫測定法（ＲＩ
Ａ ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、蛍光免疫測定ｍ（
Ｆ’ＩＡ）等、抗体抗原反応後の抗原又は抗体に標識し
た同位元素、酵素、蛍光物質等を測定することによシ、
間接的に試料中の測定対象抗原又は抗体の量をめる方法
に於て、より精度の高い測定を行う目的で行われている
例はこり、までに数例あるが、本発明の如く抗原抗体反
応による凝集の程度を直接光学的に測定する方法に於て
、これを効果的に利用して層る例はこれまでに皆無であ
る。
その理由は、一般に、単クローン性抗体を用いた場合に
は、例えば抗原が本発明に於ける免疫グロブリンの一つ
であるＩ （ｔ Ｇの場合について云えば、ＩｇＧ１分
子当シ抗体と反応する抗原決定基は２個しか存在せず、
従って単クローン性抗体とは２個所でしか結合できない
ので。
は、例えば抗原が本発明に於ける免疫グロブリンの一つ
であるＩ （ｔ Ｇの場合について云えば、ＩｇＧ１分
子当シ抗体と反応する抗原決定基は２個しか存在せず、
従って単クローン性抗体とは２個所でしか結合できない
ので。
動物由来のポリクローナル抗体の場合のようにＩｇＧ１
分子に対し不特定多数の抗体が結合してポリマー化が進
行し抗原抗体複合物の粒子が粗大化して濁度が高くなる
のに比べ、単クローン性抗体では抗原抗体複合体の粒子
の成長が少なく、結果として一定抗原量に対する濁シの
度合が小さくなるので、光学的にこれを測定するのは不
可能であると考えら力、ていたからである。
分子に対し不特定多数の抗体が結合してポリマー化が進
行し抗原抗体複合物の粒子が粗大化して濁度が高くなる
のに比べ、単クローン性抗体では抗原抗体複合体の粒子
の成長が少なく、結果として一定抗原量に対する濁シの
度合が小さくなるので、光学的にこれを測定するのは不
可能であると考えら力、ていたからである。
公知文献であるクリニカル ケミストリー ２７巻 ２
０４４−２０４７頁（１９８１年）には、単クローン性
抗体を使用した免疫グロブリンの定量法に関する記載が
あるが、ことで述べられていることは要約ずわ、ば、単
クローン性抗体は単独で用いた場合には抗原抗体反応に
よる濁りが認められず、複数の単クローン性抗体を組み
合せて用層ることにより始めて測定に適用できるという
ものであり、酢にポリクローナル抗体と置き換え得るも
のとして単クローン性抗体の使用を検耐しているに過ぎ
ず、とｆ′Ｌ全積極的に用いることによシ新たな効果を
引き出そうとしているものではない。
０４４−２０４７頁（１９８１年）には、単クローン性
抗体を使用した免疫グロブリンの定量法に関する記載が
あるが、ことで述べられていることは要約ずわ、ば、単
クローン性抗体は単独で用いた場合には抗原抗体反応に
よる濁りが認められず、複数の単クローン性抗体を組み
合せて用層ることにより始めて測定に適用できるという
ものであり、酢にポリクローナル抗体と置き換え得るも
のとして単クローン性抗体の使用を検耐しているに過ぎ
ず、とｆ′Ｌ全積極的に用いることによシ新たな効果を
引き出そうとしているものではない。
従って、当然のことながら、この場合の険体は従来通り
希釈したものが用いられている。
希釈したものが用いられている。
本発明者らは、単クローン性抗体と濁度との関係につい
て研究を進めるうちに、単クローン性抗体を単独で抗原
と反応せしめた場合に前記文献中に記載の如く濁りが認
められないのは、単に濁シの度合が少なく感度が低いに
過ぎないこと、又、その感度即ち濁りの度合は単クロー
ン性抗体を適宜組み合せて用いることによシ調節可能で
あること、更には血清等の生体試料を希釈せずにその捷
ま用いた場合には単クローン性抗体を単独又は２種類匂
上組み合せて用いることにより、極めて適切な感度が得
られることを見出し本発明に到達１〜たのである。即ち
、単クローン性抗体を用いた場合にはポリクローナル抗
体を用いた場合と測定濃度域が異なシ、ポリクローナル
抗体の場合と比べるとかなり低濃度域での測定となるが
、血清等の生体試料を希釈せずにその一１１用いた場合
には免疫グロブリンにとってそれが極めて適切な濃度域
になっておシ、従って充分測定可能な濁度（感度）が得
られるということを本発明者らは見出したのである。
て研究を進めるうちに、単クローン性抗体を単独で抗原
と反応せしめた場合に前記文献中に記載の如く濁りが認
められないのは、単に濁シの度合が少なく感度が低いに
過ぎないこと、又、その感度即ち濁りの度合は単クロー
ン性抗体を適宜組み合せて用いることによシ調節可能で
あること、更には血清等の生体試料を希釈せずにその捷
ま用いた場合には単クローン性抗体を単独又は２種類匂
上組み合せて用いることにより、極めて適切な感度が得
られることを見出し本発明に到達１〜たのである。即ち
、単クローン性抗体を用いた場合にはポリクローナル抗
体を用いた場合と測定濃度域が異なシ、ポリクローナル
抗体の場合と比べるとかなり低濃度域での測定となるが
、血清等の生体試料を希釈せずにその一１１用いた場合
には免疫グロブリンにとってそれが極めて適切な濃度域
になっておシ、従って充分測定可能な濁度（感度）が得
られるということを本発明者らは見出したのである。
本発明の方法によれば、血清等の生体試料を希釈すると
となくそのまま測定することが可能であｐ、その結果、
希釈操作に伴う煩雑さ及び誤差を排除でき、正確性が向
」ニする古共に、同一試料につ（／′１て糖、脂質、酵
素等多狛目の生化学的検査ケー緒に行う自動分析装置へ
の適用が極めて容易さなり、応用範囲が飛躍的に拡大さ
れる。
となくそのまま測定することが可能であｐ、その結果、
希釈操作に伴う煩雑さ及び誤差を排除でき、正確性が向
」ニする古共に、同一試料につ（／′１て糖、脂質、酵
素等多狛目の生化学的検査ケー緒に行う自動分析装置へ
の適用が極めて容易さなり、応用範囲が飛躍的に拡大さ
れる。
本発明の目的を達成するだめの第１段階は、抗体全産生
する単クローンハイブリドーマを作製することであるが
、このハイブリトーマの作製方法は簡単には次の３工程
から成る。
する単クローンハイブリドーマを作製することであるが
、このハイブリトーマの作製方法は簡単には次の３工程
から成る。
１、免疫
２６ 細胞融合
３、ハイブリドーマの選択と単クローン化以下、これに
ついて順を追って説明する。
ついて順を追って説明する。
免疫抗原はヒト血清よシ精製分離した各種免疫グロブリ
ンを使用する。
ンを使用する。
各免疫グロブリンは生理食塩水、或いは緩衝液などに溶
解し、マウス又はう・ノド１匹あたり１回に１μＩから
３００μｇｋ投与するのが好ましい。
解し、マウス又はう・ノド１匹あたり１回に１μＩから
３００μｇｋ投与するのが好ましい。
免疫は数回に分けておこなうが、初回免疫はアジュバン
トと共におこなうことが一般的である。アジュバントと
してはフロインドアジュバント、ミョウバンなどが使用
さり、る。免疫は２〜４週間の間隔でおこない、最終免
疫はアジュバントを使用せず、生理食塩水などに溶解し
、腹腔内或いは静脈内に投与する。免疫動物としては、
一般にはラット、マウスが汎用される。これは細胞融合
に使用する腫瘍細胞株にＪ：って決められる為で、マウ
スの中でも免疫グロブリンを産生じない腫瘍細胞株の確
立されてｂるＢ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃがよく用いられる
。最終免疫陵２〜４日後に、リンパ節、或いは肺臓を摘
出し、得られるリンパ球を細胞融合に供する。
トと共におこなうことが一般的である。アジュバントと
してはフロインドアジュバント、ミョウバンなどが使用
さり、る。免疫は２〜４週間の間隔でおこない、最終免
疫はアジュバントを使用せず、生理食塩水などに溶解し
、腹腔内或いは静脈内に投与する。免疫動物としては、
一般にはラット、マウスが汎用される。これは細胞融合
に使用する腫瘍細胞株にＪ：って決められる為で、マウ
スの中でも免疫グロブリンを産生じない腫瘍細胞株の確
立されてｂるＢ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃがよく用いられる
。最終免疫陵２〜４日後に、リンパ節、或いは肺臓を摘
出し、得られるリンパ球を細胞融合に供する。
一方細胞融合りで使用される腫瘍細胞株としては、免疫
グロブリンを産生しな込Ｐ３〜Ｘ６３−８ＡＺ二Ｕ１や
Ｐ ３− Ｎ Ｓ １−１などが使用される。細胞融合
時にはリンパ球を腫瘍細胞の５〜２０ａ量多く用いる。
グロブリンを産生しな込Ｐ３〜Ｘ６３−８ＡＺ二Ｕ１や
Ｐ ３− Ｎ Ｓ １−１などが使用される。細胞融合
時にはリンパ球を腫瘍細胞の５〜２０ａ量多く用いる。
Ｍ Ｅ Ｍ培地％ＭｃＣｏｙ培地、ＲＰＭ１１６４０培
地或いは等張培地液等で洗浄後、リンパ球と腫瘍細胞を
遠心操作でベレット状態にする。
地或いは等張培地液等で洗浄後、リンパ球と腫瘍細胞を
遠心操作でベレット状態にする。
ペレットをほぐした後、ＨｖＪ（センタ゛イビールス）
或いはＰＥＧ（ポリエチレングリコール）ヲ加え細胞融
合をおこなうが、通常は、取扱いの容易なＰ、ＥＧの平
均分子邦−１，，０００〜ｓ、ｏ ｏ ｏの４０〜６０
チ溶液を０．５〜２ｍｌ使用する。融合促進剤として、
ＰＥＧ添加時にジメチルスルオキシドＰ Ｅ Ｇ溶液を
細胞に添加し，融合反応、を１〜１０分間程度おこなっ
た後、Ｍ Ｅ Ｍ培地或いはＲ Ｐ ＩＶＩ １１６４
０培地などを１０〜５０ｍｌ徐々に加え反応を停止する
。融合反応停止後、直ちに遠心し上清を除去する。牛胎
児血清（ＦＣＳ）’．ｒ５〜２０係含むＭＥＭ培地或い
はＲ Ｐ Ｍ． Ｉ ］、 ６ ４ ０培地に細胞を懸
濁し、２４穴培養プレートにリン・く球７５：１穴あた
りＩ Ｘ １ ０５〜５ Ｘ １ ０６個となるようｉ
ｍｌ。
或いはＰＥＧ（ポリエチレングリコール）ヲ加え細胞融
合をおこなうが、通常は、取扱いの容易なＰ、ＥＧの平
均分子邦−１，，０００〜ｓ、ｏ ｏ ｏの４０〜６０
チ溶液を０．５〜２ｍｌ使用する。融合促進剤として、
ＰＥＧ添加時にジメチルスルオキシドＰ Ｅ Ｇ溶液を
細胞に添加し，融合反応、を１〜１０分間程度おこなっ
た後、Ｍ Ｅ Ｍ培地或いはＲ Ｐ ＩＶＩ １１６４
０培地などを１０〜５０ｍｌ徐々に加え反応を停止する
。融合反応停止後、直ちに遠心し上清を除去する。牛胎
児血清（ＦＣＳ）’．ｒ５〜２０係含むＭＥＭ培地或い
はＲ Ｐ Ｍ． Ｉ ］、 ６ ４ ０培地に細胞を懸
濁し、２４穴培養プレートにリン・く球７５：１穴あた
りＩ Ｘ １ ０５〜５ Ｘ １ ０６個となるようｉ
ｍｌ。
ずつ分注する。何れに於いても，フィーダー細胞は添加
する方，が好−ま、し１い）。フィーダー細胞としては
，同系のラット或いはマウスの胸［腺，Ｙ．ｆｌｌ胞、
牌細ｊ泡等が用いられ、濃度としては０，５〜２ Ｘ
］、 ０６／ｍｌとなるように添加する。次にヒボキサ
ンチン１×１．０−’Ｍ、アミノブチ−１ノン４ Ｘ
１０−７Ｍ、チミジン］、、６ Ｘ １０−５Ｍを含む
ＲＰＭ１１６４０培地（或いはＭＥＭ培地）即ちＨＡＴ
培地に換えていく。
する方，が好−ま、し１い）。フィーダー細胞としては
，同系のラット或いはマウスの胸［腺，Ｙ．ｆｌｌ胞、
牌細ｊ泡等が用いられ、濃度としては０，５〜２ Ｘ
］、 ０６／ｍｌとなるように添加する。次にヒボキサ
ンチン１×１．０−’Ｍ、アミノブチ−１ノン４ Ｘ
１０−７Ｍ、チミジン］、、６ Ｘ １０−５Ｍを含む
ＲＰＭ１１６４０培地（或いはＭＥＭ培地）即ちＨＡＴ
培地に換えていく。
ＨＡＴ培地交換の方法は一般には翌日培養プレートに融
合後分注した容量と等容量加え、更に翌日その半量をＨ
ＡＴ培地と交換する。その後２〜３日毎ＨＡＴ培地で半
量づつ交換する。融合後１０〜１４日目にアミノプテリ
ンを除いたＨＴ培地で半量交換し、更にその１〜３日毎
に培地の半量をＨＡＴｋ含まない通常の培地に交換する
。融合細胞（ハイブリドーマ）の増殖の盛んな穴の培養
上清を種々の分析法、例えばＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ等で目
的の抗体産生ハイブリドーマを選択する。ノ・イブリド
ーマを得たならクローニングを行うが、その方法として
はＦ Ａ ＣＳ （ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＡｃｔｉｖ
ａｔｅｄ Ｃｅ１ｌ ５ｏｒｔｅｒ ） ｋ用いる方法
、Ｓ、ΩｆｔＡｇａｒ よシコロニーを拾いあげる方法
、一般によく用いられる限界希釈法などがある−０どの
方法を用いてもクローニングは２回以上繰返し、完全に
単一クローンとする。
合後分注した容量と等容量加え、更に翌日その半量をＨ
ＡＴ培地と交換する。その後２〜３日毎ＨＡＴ培地で半
量づつ交換する。融合後１０〜１４日目にアミノプテリ
ンを除いたＨＴ培地で半量交換し、更にその１〜３日毎
に培地の半量をＨＡＴｋ含まない通常の培地に交換する
。融合細胞（ハイブリドーマ）の増殖の盛んな穴の培養
上清を種々の分析法、例えばＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ等で目
的の抗体産生ハイブリドーマを選択する。ノ・イブリド
ーマを得たならクローニングを行うが、その方法として
はＦ Ａ ＣＳ （ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＡｃｔｉｖ
ａｔｅｄ Ｃｅ１ｌ ５ｏｒｔｅｒ ） ｋ用いる方法
、Ｓ、ΩｆｔＡｇａｒ よシコロニーを拾いあげる方法
、一般によく用いられる限界希釈法などがある−０どの
方法を用いてもクローニングは２回以上繰返し、完全に
単一クローンとする。
クローンを確立したならば、その細胞を１ｎｎｖｉｂｒ
。
。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ法、ｉｎ ｖｉｖｏ 法のいす力、で
もよいが、ｉｎ ｖｉｖｏ法の方が抗体価がはるかに高
いので望捷しい。
もよいが、ｉｎ ｖｉｖｏ法の方が抗体価がはるかに高
いので望捷しい。
単クローン性抗体を用いた免疫グロブリンの測定法とし
、ては比濁法、比朧法等がある。比濁法で測定する場合
は、既存の自動分析装置や分光光度計が使用でき、波長
としては好ましくは３４０〜８００ ｎｍの範囲である
が特に限定されるものではない。又、比朧法で測定する
場合は、現在普及して因るレーザー光源を使用したもの
等が利用できるが、光源及び検出方法は特に本発明を限
定するものではない。
、ては比濁法、比朧法等がある。比濁法で測定する場合
は、既存の自動分析装置や分光光度計が使用でき、波長
としては好ましくは３４０〜８００ ｎｍの範囲である
が特に限定されるものではない。又、比朧法で測定する
場合は、現在普及して因るレーザー光源を使用したもの
等が利用できるが、光源及び検出方法は特に本発明を限
定するものではない。
測定に使用する緩衝液としては、トリス緩衝液、リン酸
緩衝液、ベロナール緩衝液等通常用いられて因る緩衝液
は全て使用でき、ｐＨけ好捷しくけ、６．０〜９．０の
範囲であるが特に限定されるものではない。
緩衝液、ベロナール緩衝液等通常用いられて因る緩衝液
は全て使用でき、ｐＨけ好捷しくけ、６．０〜９．０の
範囲であるが特に限定されるものではない。
又、測定に使用する蛍クローン性抗体の種類、及び数は
限定されるものではなく、必要な感度に合せて１種類で
も、又２種類以上を組み合せて使用してもよい。単クロ
ーン性抗体の使用量については特に限定されるものでは
ないが、通常抗体溶液ｌ ｍｌ中当り単クローン性抗体
０．０２ ｍ９−２ ｍｙ（Ｄ濃度範囲で用いられる。
限定されるものではなく、必要な感度に合せて１種類で
も、又２種類以上を組み合せて使用してもよい。単クロ
ーン性抗体の使用量については特に限定されるものでは
ないが、通常抗体溶液ｌ ｍｌ中当り単クローン性抗体
０．０２ ｍ９−２ ｍｙ（Ｄ濃度範囲で用いられる。
本発明の方法により測定可能な免疫グロブリンとしては
、免疫グロブリンの中でも含有量の高いヒトＩｇＧ、ヒ
トＩｇＡ、及びヒトＩｇＭが挙げられる。
、免疫グロブリンの中でも含有量の高いヒトＩｇＧ、ヒ
トＩｇＡ、及びヒトＩｇＭが挙げられる。
本発明は、抗原抗体反応による凝集の程度を光学的に測
定することによシ体液中の免疫グロブリンを測定する方
法に於て、血清等の生体試料を希釈せずにそのまま測定
に供することを可能としたものであシ、その結果、希釈
操作に伴う煩雑さ及び誤差を排除でき、正確性が向上す
ると共に、同一試料について多項目の測定を行う自動分
析装置への適用を極めて容易ならしめた点に於て斯業に
貢献するところ極めて大なるものである。
定することによシ体液中の免疫グロブリンを測定する方
法に於て、血清等の生体試料を希釈せずにそのまま測定
に供することを可能としたものであシ、その結果、希釈
操作に伴う煩雑さ及び誤差を排除でき、正確性が向上す
ると共に、同一試料について多項目の測定を行う自動分
析装置への適用を極めて容易ならしめた点に於て斯業に
貢献するところ極めて大なるものである。
以下に参考例及び実施例をあげて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
参考例１ 単クローン性抗ＩｇＧ抗体及びこれを産生ず
るハイブリドーマの作製 （１）免疫 ヒトＩｇＧ １００ ｔｉｉを溶解した０、１５Ｍ埴化
ナトリウムＱ、１ｍｌトフロイントコンブリートアジュ
バント０．１ｍ１ｆ混合し、エマルジョン抗ｉ液トｔ、
、その０．２ｍ１．ｙｆ、ＢＡＬＢ／Ｃマウス（雌、６
週齢）の腹腔内に投与した。４週後、ヒト■ｇ０１００
μｇ’ｅ ０．１５ Ｍ塩化ナト１ノウム０．２ｍｌに
溶解し、尾静脈に注射した。
るハイブリドーマの作製 （１）免疫 ヒトＩｇＧ １００ ｔｉｉを溶解した０、１５Ｍ埴化
ナトリウムＱ、１ｍｌトフロイントコンブリートアジュ
バント０．１ｍ１ｆ混合し、エマルジョン抗ｉ液トｔ、
、その０．２ｍ１．ｙｆ、ＢＡＬＢ／Ｃマウス（雌、６
週齢）の腹腔内に投与した。４週後、ヒト■ｇ０１００
μｇ’ｅ ０．１５ Ｍ塩化ナト１ノウム０．２ｍｌに
溶解し、尾静脈に注射した。
（２）細胞融合
最終免疫より３日後、免疫マウスの肺臓を摘出し、１０
ｍｐ！のＲＰＭ１１６４０培地を入れたプラスチックシ
ャーレ中で、牌リンパ球ヶはぐす。牌リンパ球を遠Ｉシ
・操作（１０００回転、１０分）を繰返しＲＰＭ’１１
６４０培地で３回洗浄した。牌リンパ球Ｉ Ｘ １０８
個とマウス骨髄腫細胞Ｐ３−Ｎ５Ｉ−１１Ｘ］、０７個
を試験管中で混合し２゜遠心操作で沈殿とした。上清を
吸引除去した後洗Ｍｌかるくほぐす。５０俸ポリエチレ
ングリコール（平均分子量６，０００）１ｍｌをほぐし
た沈殿に加え、試験管ｉｔわＵ７ながら室温で１分間融
合反応をおこなった。その後３０秒後、ＲＰ Ｍ １】
６４０培地１解を５分間加え反応を停止した。
ｍｐ！のＲＰＭ１１６４０培地を入れたプラスチックシ
ャーレ中で、牌リンパ球ヶはぐす。牌リンパ球を遠Ｉシ
・操作（１０００回転、１０分）を繰返しＲＰＭ’１１
６４０培地で３回洗浄した。牌リンパ球Ｉ Ｘ １０８
個とマウス骨髄腫細胞Ｐ３−Ｎ５Ｉ−１１Ｘ］、０７個
を試験管中で混合し２゜遠心操作で沈殿とした。上清を
吸引除去した後洗Ｍｌかるくほぐす。５０俸ポリエチレ
ングリコール（平均分子量６，０００）１ｍｌをほぐし
た沈殿に加え、試験管ｉｔわＵ７ながら室温で１分間融
合反応をおこなった。その後３０秒後、ＲＰ Ｍ １】
６４０培地１解を５分間加え反応を停止した。
直ちに遠心分離し、（ｌＯ００回転、５分）上滑地５Ｑ
ｍｉ中に細胞を懸濁した。２４穴プレ一ト２枚に細胞懸
濁液を１穴あたり１ｍ１分注しＣＯ２インキュベーター
内で培養する。
ｍｉ中に細胞を懸濁した。２４穴プレ一ト２枚に細胞懸
濁液を１穴あたり１ｍ１分注しＣＯ２インキュベーター
内で培養する。
２４時間後、ＨＡＴ培地（ヒポキサンチン１×１０−’
Ｍ、アミツブゾリン４Ｘ］０−７Ｍ、チミジン１．．６
Ｘ Ｉ Ｆ５Ｍ會含全２０％ＦＣ８添加’ＲＰＭ１１
６４０培地）を１穴あたり、１．ｍｌずつ加える。
Ｍ、アミツブゾリン４Ｘ］０−７Ｍ、チミジン１．．６
Ｘ Ｉ Ｆ５Ｍ會含全２０％ＦＣ８添加’ＲＰＭ１１
６４０培地）を１穴あたり、１．ｍｌずつ加える。
２日目、３日目さらに２日毎に培地の半量’ｋ ＨＡＴ
培地に交換した。１００日目培地の半量を上記のＨＡＴ
培地よりアミツブゾリンを除いたＨＴ培地で交換した。
培地に交換した。１００日目培地の半量を上記のＨＡＴ
培地よりアミツブゾリンを除いたＨＴ培地で交換した。
翌日から２日毎に通常の培地即ち。
２０係ＦＣ８添加ＲＰＭ１１６４０培地に半量ずつ交換
し、１８８日目培養上清を抗ＩｇＧ 抗体産生の検定に
供した。
し、１８８日目培養上清を抗ＩｇＧ 抗体産生の検定に
供した。
（３） バイブ１１ドーマの選択
抗ＩｇＧ抗体産生ハイブリトーマ選択のために４８穴の
各細胞培養上清をＥＬＩＳＡにて分析した。まずＥＬＩ
ＳＡ用９６穴プレートにブタインシュリンを１０μ９
／ ｍｌの濃度で０．１．ｍｌずつ分注し、４°Ｃ１６
Ｒ間静置してヒトＩｇＧ ’ｔプレートに固定化した。
各細胞培養上清をＥＬＩＳＡにて分析した。まずＥＬＩ
ＳＡ用９６穴プレートにブタインシュリンを１０μ９
／ ｍｌの濃度で０．１．ｍｌずつ分注し、４°Ｃ１６
Ｒ間静置してヒトＩｇＧ ’ｔプレートに固定化した。
Ｔｗｅｅｎ２０ （ノニオン系界面活性剤、アトラス社
商品名） ｋ ０．０５％含む１０７７１Ｍ リン酸緩
衝ｇＩｊｐＨ７，４（洗浄液）で３回洗浄した後、培養
上清中の蛋白質の非特異的吸着を避けるために、１％牛
血清アルブミン溶液を０．２廐ずつ分注し、３７℃２時
間静置した。次に洗浄液で３回洗浄後細胞培米上ａを帆
１ｍｅ分注し、３７℃２時間静置した。陰性対照′とし
て２０％ＦＣ８添加ＲＰＭ１１６４０培地に０．１ｍ、
１分注しり。更に洗浄液で３回洗浄後、ベルオギシダー
ゼ標識抗マウス免疫グロブリン抗体溶液０．１ｍｌを分
注し３７’Ｃ２時間静置した。洗浄液で３回洗浄後０．
４チオルトフエニレンジアミン溶液Ｑ、１ｍ１分注し、
室温で２分反応後６Ｎ硫酸０．０５蛯を加え反応全停止
させ、０．Ｄ、 ４９０ ｎｍ ｆ測定した。陰性対照
の２倍以上の０．Ｄ、 ’＋！：示す培養上清中で増殖
しているノ・イブリドーマを抗ＩｇＧ抗体ｉ生ノ・イフ
゛１）ドーマとして選択した。４８穴中３穴に抗ＬｇＧ
抗体産生を認めた。
商品名） ｋ ０．０５％含む１０７７１Ｍ リン酸緩
衝ｇＩｊｐＨ７，４（洗浄液）で３回洗浄した後、培養
上清中の蛋白質の非特異的吸着を避けるために、１％牛
血清アルブミン溶液を０．２廐ずつ分注し、３７℃２時
間静置した。次に洗浄液で３回洗浄後細胞培米上ａを帆
１ｍｅ分注し、３７℃２時間静置した。陰性対照′とし
て２０％ＦＣ８添加ＲＰＭ１１６４０培地に０．１ｍ、
１分注しり。更に洗浄液で３回洗浄後、ベルオギシダー
ゼ標識抗マウス免疫グロブリン抗体溶液０．１ｍｌを分
注し３７’Ｃ２時間静置した。洗浄液で３回洗浄後０．
４チオルトフエニレンジアミン溶液Ｑ、１ｍ１分注し、
室温で２分反応後６Ｎ硫酸０．０５蛯を加え反応全停止
させ、０．Ｄ、 ４９０ ｎｍ ｆ測定した。陰性対照
の２倍以上の０．Ｄ、 ’＋！：示す培養上清中で増殖
しているノ・イブリドーマを抗ＩｇＧ抗体ｉ生ノ・イフ
゛１）ドーマとして選択した。４８穴中３穴に抗ＬｇＧ
抗体産生を認めた。
（４） 単クローン化
Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃマウス（雌、６週齢）の胸腺を
摘出し、１０ｍｅのＲＰＭＩ］６．４０培地ケいれたフ
゛ラスナックシャーレ中で胸腺リンノ（球をほぐす。
摘出し、１０ｍｅのＲＰＭＩ］６．４０培地ケいれたフ
゛ラスナックシャーレ中で胸腺リンノ（球をほぐす。
胸腺リンパ球を遠心操作（１０００回転、１０分）を繰
返しＲＰＭ１１６４０培地で３回洗浄した。
返しＲＰＭ１１６４０培地で３回洗浄した。
胸腺リンパ球を２０チＦＣ８添加、ＲＰＭＩ １６４０
を加え、よく混合後、９６穴培養プレートに１穴あたり
０．２ｍｌずつ分注し１０分間、ＣＯ２インキュベータ
ー内で培養した。細胞増殖の認められる培養上清を′Ｆ
ｊＬＩＳＡにて分析の結果、抗ＩｇＧ抗体産生ハイブリ
ドーマ７クローンを得た。このうちの１クローンを史に
同上操作をおこない抗ＩｇＧ抗体産生ハイブリドーマ６
クローンヲ得、＃≠士五平１＃≠単クローン化を完全な
ものとした。
を加え、よく混合後、９６穴培養プレートに１穴あたり
０．２ｍｌずつ分注し１０分間、ＣＯ２インキュベータ
ー内で培養した。細胞増殖の認められる培養上清を′Ｆ
ｊＬＩＳＡにて分析の結果、抗ＩｇＧ抗体産生ハイブリ
ドーマ７クローンを得た。このうちの１クローンを史に
同上操作をおこない抗ＩｇＧ抗体産生ハイブリドーマ６
クローンヲ得、＃≠士五平１＃≠単クローン化を完全な
ものとした。
（５）単クローン性抗体の作製
（４）までの操作で得られたクローンＧ−２−３２Ｘ
１０’個ｋ ＲＰ ＩＶｆ Ｉ １６４０培地Ｑ、２ｍ
１３に浮遊させ、Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃマウス（雄、
６週齢）の腹腔内に投与し、腹水を回収した。腹水４
ｍｌに飽和硫！？ｉ：溶液を徐々に加え、Ｒ終値安飽和
濃度を５０係とし、室温で２時間撹拌した後、遠心操作
（３０００回帖１０分）で沈殿を回収し性、−生理食塩
水５ ｍｌを加え溶解した。これ全生理食塩水で１０倍
ずつ段階希釈してゆきＥＬＩＳＡにて分析し、抗体活性
の認められる希釈倍数をめたところ、１０６であった。
１０’個ｋ ＲＰ ＩＶｆ Ｉ １６４０培地Ｑ、２ｍ
１３に浮遊させ、Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃマウス（雄、
６週齢）の腹腔内に投与し、腹水を回収した。腹水４
ｍｌに飽和硫！？ｉ：溶液を徐々に加え、Ｒ終値安飽和
濃度を５０係とし、室温で２時間撹拌した後、遠心操作
（３０００回帖１０分）で沈殿を回収し性、−生理食塩
水５ ｍｌを加え溶解した。これ全生理食塩水で１０倍
ずつ段階希釈してゆきＥＬＩＳＡにて分析し、抗体活性
の認められる希釈倍数をめたところ、１０６であった。
なおマウスＩｇＧ含量（抗体の力価の目安）を抗マウス
ＩｇＧのウサギ血清全含有するアガロースプレートによ
り測定（ＳＲＩＤ法）したところ２３ｍ？／ｍｌであっ
た。
ＩｇＧのウサギ血清全含有するアガロースプレートによ
り測定（ＳＲＩＤ法）したところ２３ｍ？／ｍｌであっ
た。
（６＋ （４１才での操作で得られたクローンＧ−３に
會得た。又、（５）と同様の方法で抗体活性及びマウス
ＩｇＧ含量をめたところ、抗体活性は１０６、マウスＩ
ｇＧ含故ｎ ２２ ｔｎｙ ／ ｌｎｅであった。
會得た。又、（５）と同様の方法で抗体活性及びマウス
ＩｇＧ含量をめたところ、抗体活性は１０６、マウスＩ
ｇＧ含故ｎ ２２ ｔｎｙ ／ ｌｎｅであった。
（７） （４）’１ｆノ操作ｆ ４ら１ｌ−ｆｃりａ−
ｙＧ−５に全行た。又、（５）と同様の方法で抗体活性
及びマウスＩｇＧ含量をめたところ、抗体活性は１０５
、マウス１ｇＧ含量は２０ダ／ ｍｌであった。
ｙＧ−５に全行た。又、（５）と同様の方法で抗体活性
及びマウスＩｇＧ含量をめたところ、抗体活性は１０５
、マウス１ｇＧ含量は２０ダ／ ｍｌであった。
参考例２ 単クローン性抗ＩｇＡ抗体及びこれを産生ず
るハイプリドーマの作製 ヒトＩｇＡ２００μｇを溶解した０、１５Ｍ塩化ナトリ
ウムＱ、１ｒｎｌとフロイントコンプリートアジュバン
ト０．１ｉ／＋ｉ混合し、エマルジョン抗原液とし、そ
のＱ、２ｍ１ｆ、Ｂ Ａ ｉ、 Ｆ３ ／ ｃ−＝ｒラ
ウス雌、５週齢）の腹腔内に投与した。４週後、ヒト
ＩｇＡ明細書の浄書（内容に変更なし） １００μｆｋ０．１５Ｍ塩化ナトリウム０２−に溶解し
、尾静脈に注射した。以後参考例１の（２）〜（４）の
操作を行ない抗１ｇＡ抗体産生ハイブリドーマ５クロー
ンを得た。さらに参考例１の（５）の操作を行ない抗１
ｇＡ単りローン性抗体５種類（Ａ〜２゜Ａ−３、Ａ−５
、Ａ−８、Ａ−９）を得た。各クローンの抗体活性及び
マウスＩｇＧ量（抗体の力価の目安）Ｈ表１の通りであ
った。
るハイプリドーマの作製 ヒトＩｇＡ２００μｇを溶解した０、１５Ｍ塩化ナトリ
ウムＱ、１ｒｎｌとフロイントコンプリートアジュバン
ト０．１ｉ／＋ｉ混合し、エマルジョン抗原液とし、そ
のＱ、２ｍ１ｆ、Ｂ Ａ ｉ、 Ｆ３ ／ ｃ−＝ｒラ
ウス雌、５週齢）の腹腔内に投与した。４週後、ヒト
ＩｇＡ明細書の浄書（内容に変更なし） １００μｆｋ０．１５Ｍ塩化ナトリウム０２−に溶解し
、尾静脈に注射した。以後参考例１の（２）〜（４）の
操作を行ない抗１ｇＡ抗体産生ハイブリドーマ５クロー
ンを得た。さらに参考例１の（５）の操作を行ない抗１
ｇＡ単りローン性抗体５種類（Ａ〜２゜Ａ−３、Ａ−５
、Ａ−８、Ａ−９）を得た。各クローンの抗体活性及び
マウスＩｇＧ量（抗体の力価の目安）Ｈ表１の通りであ
った。
表 １
参考例３ 単りローン性抗ｉｇＭ抗体及びこれを産生ず
るハイプリドーマの作製 ヒトＩｇＭ１００１ｔＰを溶解した０１５Ｍ塩化笈ナト
リウム０．１−と７０イントコンブリートアジユバン）
０．１ｍｌ：混合し、エマルジョン抗原液とし、その０
．２−をＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢）の腹腔内に
投与した。３週後ヒトＩｇＭ１００μｆ’に０．１５Ｍ
塩化す） ＩＪウムに溶解し、尾静脈に注射した。
るハイプリドーマの作製 ヒトＩｇＭ１００１ｔＰを溶解した０１５Ｍ塩化笈ナト
リウム０．１−と７０イントコンブリートアジユバン）
０．１ｍｌ：混合し、エマルジョン抗原液とし、その０
．２−をＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、６週齢）の腹腔内に
投与した。３週後ヒトＩｇＭ１００μｆ’に０．１５Ｍ
塩化す） ＩＪウムに溶解し、尾静脈に注射した。
以後参考例１の（２）〜（４）の操作全行ない、抗Ｉｇ
Ｍ抗体産生ハイブリドーマ４クローンを得た。さらに参
考例１の（５）の操作を行ない抗ＩｇＭ単りローン性抗
体４種類ＣＭ−１、Ｍ−２、Ｍ−３、Ｍ −５）を得た
。各クローンの抗体活性及びマウスＩｇＧ量（抗体の力
価の目安）は表２の通りであ表 ２ 抗体活性とマウス
ＩｇＧ量 実施例１ 単クローン性抗体を用いたヒト血清ＩｇＧの測定試薬二
次の各試薬を調製した。
Ｍ抗体産生ハイブリドーマ４クローンを得た。さらに参
考例１の（５）の操作を行ない抗ＩｇＭ単りローン性抗
体４種類ＣＭ−１、Ｍ−２、Ｍ−３、Ｍ −５）を得た
。各クローンの抗体活性及びマウスＩｇＧ量（抗体の力
価の目安）は表２の通りであ表 ２ 抗体活性とマウス
ＩｇＧ量 実施例１ 単クローン性抗体を用いたヒト血清ＩｇＧの測定試薬二
次の各試薬を調製した。
１、緩衝液
ポリエチレングリコール６０００ ５９０１Ｍトリス塩
酸緩衝ｉ１．ｐＨ７，４１００ｍｇ２、抗体溶液 参考例１で得た単りローン性抗体Ｇ−３１ｍｌｌ緩衝液
５０ｍ１ 試料二次の各ヒト血ｉｔ使用した。
酸緩衝ｉ１．ｐＨ７，４１００ｍｇ２、抗体溶液 参考例１で得た単りローン性抗体Ｇ−３１ｍｌｌ緩衝液
５０ｍ１ 試料二次の各ヒト血ｉｔ使用した。
ＩｇＧ含量 ５００，１０００．１５００゜２０００．
３０００１ψ／ｄｌのヒト血清操作法：試験管に５つの
試料皿ａ１０μｌ’ｒとり、これに抗体溶液２ｍ１ｆ添
加して３７°ＣＩＯ分間反応させた後１分光光度計（日
立６２４形）で、層長ＩＱｍｍ、波長５０５ｎｍに於け
る吸光度を測定した。副定結果會第１図１に示す。
３０００１ψ／ｄｌのヒト血清操作法：試験管に５つの
試料皿ａ１０μｌ’ｒとり、これに抗体溶液２ｍ１ｆ添
加して３７°ＣＩＯ分間反応させた後１分光光度計（日
立６２４形）で、層長ＩＱｍｍ、波長５０５ｎｍに於け
る吸光度を測定した。副定結果會第１図１に示す。
実施例２
単クローン性抗体を用いたヒト血清ＩｇＡ のｌ１１１
定 試薬：次の各試薬全調製した。
定 試薬：次の各試薬全調製した。
１．緩衝液
ポリエチレングリコール ６０００ ４．５９塩化ナト
リウム ０．９９ ０．０１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，０１００ｍ１２、抗
体溶液 参考例、２で得た止りローン性抗体Ａ−２０，２ｒｎｌ
参考例２で得た単クローン性抗体Ａ ３ ０．２ｍｌ緩
衝液 １００ｍ１ ３、標準血清 ＩｇＡ含量 ５６０〜／ ｄｌの標準血清試料：ヒト血
清 操作法：試験管に標準血清及びヒト血清をそのま捷１０
μｌとり、これに抗体溶液３ ｍｌを添加して３７℃、
１０分間反応させた後、分光光度計で３７５ｎｍの吸光
度會測定する。別に、標準血清及びヒト血清１０μｌに
抗体を含捷ない緩衝液３ｍｌ ｆ添加して３７℃１０分
間加温後、分光光度計（日立６２４形）で層長ｌＱｒｏ
ｍ、波長３７５ｎｍの吸光度を同様に迎１定する。
リウム ０．９９ ０．０１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，０１００ｍ１２、抗
体溶液 参考例、２で得た止りローン性抗体Ａ−２０，２ｒｎｌ
参考例２で得た単クローン性抗体Ａ ３ ０．２ｍｌ緩
衝液 １００ｍ１ ３、標準血清 ＩｇＡ含量 ５６０〜／ ｄｌの標準血清試料：ヒト血
清 操作法：試験管に標準血清及びヒト血清をそのま捷１０
μｌとり、これに抗体溶液３ ｍｌを添加して３７℃、
１０分間反応させた後、分光光度計で３７５ｎｍの吸光
度會測定する。別に、標準血清及びヒト血清１０μｌに
抗体を含捷ない緩衝液３ｍｌ ｆ添加して３７℃１０分
間加温後、分光光度計（日立６２４形）で層長ｌＱｒｏ
ｍ、波長３７５ｎｍの吸光度を同様に迎１定する。
計算法：
×５６０
ＥＳ ；ヒト血清と抗体溶液會反応させたとき゛・ の
吸光度 ＥＳ’−Ｂ；ヒト血清士緩衝液の吸光度Ｅｓｔｄ ；標
準血清と抗体溶液を反応させたときの吸光度 Ｅｓｔｄ−Ｂ ；標準血清＋緩衝液の吸光度ＥＢ ；抗
体溶液の吸光度 上記計算式によりめたヒト血清ＩｇＡ量、及び本実施例
で用いたヒト血清試料’１ｓＲＩＤ法によγ＝０．９９
８ ｙ＝０．９９ｘ＋０．５３ 表３より、本測定方法は５ＲＩＤ法によるそれとよい相
関を示していることが判る。
吸光度 ＥＳ’−Ｂ；ヒト血清士緩衝液の吸光度Ｅｓｔｄ ；標
準血清と抗体溶液を反応させたときの吸光度 Ｅｓｔｄ−Ｂ ；標準血清＋緩衝液の吸光度ＥＢ ；抗
体溶液の吸光度 上記計算式によりめたヒト血清ＩｇＡ量、及び本実施例
で用いたヒト血清試料’１ｓＲＩＤ法によγ＝０．９９
８ ｙ＝０．９９ｘ＋０．５３ 表３より、本測定方法は５ＲＩＤ法によるそれとよい相
関を示していることが判る。
実施例３
単クローン性抗体を用いたヒト血清ＩｇＭの測定試薬二
次の各試薬を調製した。
次の各試薬を調製した。
１、緩衝液
ポリエチレングリコール６０００ ４ ｇ塩化ナナトリ
ウム ０．９９ ０．０１ Ｍベロナール緩衝液、 Ｉ）Ｈ７，５１００
ｍ１２、抗体溶液 参考例３で得た単クローン性抗体Ｍ−１０，１ｍｌ参考
例３で得た単クローン性抗体Ｍ −３０，１ｒｎｌ参考
例３で得た単りローン性抗体Ｍ−４０，１ｇ緩衝液 １
００ｍ１ 試料二次の各ヒト血清を使用した。
ウム ０．９９ ０．０１ Ｍベロナール緩衝液、 Ｉ）Ｈ７，５１００
ｍ１２、抗体溶液 参考例３で得た単クローン性抗体Ｍ−１０，１ｍｌ参考
例３で得た単クローン性抗体Ｍ −３０，１ｒｎｌ参考
例３で得た単りローン性抗体Ｍ−４０，１ｇ緩衝液 １
００ｍ１ 試料二次の各ヒト血清を使用した。
ＩｇＭ含量７５．１５０．３００．５００ 。
７００ｍ９／ｄｌのヒト血清
操作法：試験管にヒト血清１０μｌをとり、抗体溶液２
ｍ１ｆ添加して３７°Ｃで５分間反応させた後、分光光
度計（島津ＵＶ−２００”）で、層長１０ｍｍ、波長５
０５ ｎｍに於ける吸光度を測定する。別にヒト血清１
０ｕｌを試験管にとり、緩衝液２μを加えて３７℃１０
分間加温後、分光光度計で５０５ｎｍの吸光度を同様に
測定する。
ｍ１ｆ添加して３７°Ｃで５分間反応させた後、分光光
度計（島津ＵＶ−２００”）で、層長１０ｍｍ、波長５
０５ ｎｍに於ける吸光度を測定する。別にヒト血清１
０ｕｌを試験管にとり、緩衝液２μを加えて３７℃１０
分間加温後、分光光度計で５０５ｎｍの吸光度を同様に
測定する。
計方法：
血清ＩｇＭと抗体さの反応による吸光度（Ｅｓ）は
Ｅｓ＝Ｅｓ−Ａ−Ｅｓ −Ｂ
Ｅ Ｓ−Ａ ＋ヒト血清と抗体浴液を反応させたときの
吸光度 Ｅ Ｓ−Ｂ ；ヒト面ｍ」−緩衝液の吸光度測定結果ケ
第２図に示す。
吸光度 Ｅ Ｓ−Ｂ ；ヒト面ｍ」−緩衝液の吸光度測定結果ケ
第２図に示す。
実施例４
単りローン性抗体ケ用いたヒト血清ｆｇＧの測定試薬：
次の各試薬を調製した。
次の各試薬を調製した。
］、緩衝液
ポリエチレングリコール６０００ ５９塩化ナトリウム
０．９ｇ Ｏ，Ｉ Ｍトリス塩酸緩衝液、ｐｎ ７．５ １００ｍ
１緩衝液 ５０ｍｇ ３、標準血清 ＩｇＧ含量５００ 、］、０００．２０００．４．００
０ｍ９ ／ ｄｌの標準血清 試料：ヒト血清 操作法：キュベツトに標準血清及びヒト血清をその１才
１０μｌをと９、抗体浴液５００μｅを添加して室温で
１５分間反応させた後、レーザーネフｘｏメーター（Ｚ
Ｄ−８０１）で波長６３３ｎｍに於ける散乱光量を測定
する。別に抗体溶液の代、！７に緩衝液をＪイイ込で同
様のホ１ｊ定ケする。
０．９ｇ Ｏ，Ｉ Ｍトリス塩酸緩衝液、ｐｎ ７．５ １００ｍ
１緩衝液 ５０ｍｇ ３、標準血清 ＩｇＧ含量５００ 、］、０００．２０００．４．００
０ｍ９ ／ ｄｌの標準血清 試料：ヒト血清 操作法：キュベツトに標準血清及びヒト血清をその１才
１０μｌをと９、抗体浴液５００μｅを添加して室温で
１５分間反応させた後、レーザーネフｘｏメーター（Ｚ
Ｄ−８０１）で波長６３３ｎｍに於ける散乱光量を測定
する。別に抗体溶液の代、！７に緩衝液をＪイイ込で同
様のホ１ｊ定ケする。
ヒ） ＩｇＧと抗体の反応による散乱光１（Ｄｓ）は次
の式で計算づれる。
の式で計算づれる。
Ｄｓ ＝ Ｄｓ、Ａ−ＤｓＢ
標準血清による検量線を第３図に示す。又第３図よ請求
めた本実施例に於けるヒト血清試料のＩｇＧ量、及びＳ
ＲＩ Ｄ法によりめた本実施例に於けるヒト血清試料
のＩｇＧ量を表４に示す。
めた本実施例に於けるヒト血清試料のＩｇＧ量、及びＳ
ＲＩ Ｄ法によりめた本実施例に於けるヒト血清試料
のＩｇＧ量を表４に示す。
明細鳶−の汀Ｉゴ（内容に変更なし）
表 ４
γ二０．９９９
ｙ−１，０１ｘ−１５，４８
表４より、本測定方法は５ＲＩＤ法によるそれとよい相
関を示していることが判る。
関を示していることが判る。
第１図は、実施例］に於て得られた試料血清中のＩｇＧ
量の測定結果を表わし、横軸の各ＩｇＧ量（ｍｇｌｄｌ
）について得られまた吸光度（ＯＤ）を縦軸に沿ってプ
ロ・ノドした点（！ｌ−結んだものである。 第２図は、実施例３に於て試ら力、た試料血清中のｉｇ
Ｍ量の測定結果を表わし、横＠１の各ＩｇＭ量（ｍｙ
／ ｄｌ ）について得ら力、た吸光度（ＯＤ）を縦軸
に沿ってプロワ）ｌ−た点を結んだものである。 第３図は、実施例４に於ける標準血清によるＩｇＧ量の
・演量線ケ表わし、横軸の各ＩｇＧ量（ｒｒ１９／ｄｌ
）について得られた光散乱強度（ｍＶ）を縦軸に清って
プロットした点を結んだものである。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 第１図 ０ １０００ ２０００ ３０００ ＩｇＧ量（グ／ｄ／、） 第２図 ０ ２００ ４００ ６００ ８００ ＩｇＭ量（グ／ｄＡ） 第３図 ０ ５００１０００ ２０００ ４０００ＩｇＧ量（ツ
／ｄＡ） 手続補正書（文民）− １事件の表示 ）ｌＪｕ ｌ； ＣＩ ＋Ｈ１夫’ｊｇ ｑ ４−１１
’（千２ 発明の名称 ３ 補正をする者 事件どの関係 特許出願人 郵便番号 ５４１ 連絡装置 ０３−２７０−８５７１ 師和５’１４−Ｖ７１３１０ ５ 補正の対象 明細書２０頁、２１頁、２５頁及び２９頁。 ６ 補正の内容 明細書２０頁、２１頁、２５頁及び２９頁の浄書。別紙
のとおり（内容に変更なし）。 ）ム上 手続補正書 昭和４０年 ぷ月Ｚ♂日 １ 事件の表示 胃剰５９年材許神膚霞’１４１１’１子２ 発明の名称 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 連絡装置 ０３−２７０−８５７１ ４ 補正命令の日付 竜 沁 ５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、補正の内容 （１）明細書１６頁２行目に記載のｒ２０％ＦＣ３Ｊを
ｒｌＯ％ＦＣ３Ｊと補正する。 （２）明細書１６頁８行目から同頁９行目にかけて記載
の「ブタインシュリン」を「ヒ） ＩｇＧ Ｊ と補正
する。 （３）明細書１７頁２０行目に記載のｒｌＯ分間」をｒ
ｌ。 日間」と補正する。 （４）明細書２６頁８行目に記載の「参考例３で得た単
クローン性抗体Ｍ−４」を「参考例３で得た単クローン
性抗体Ｍ−５」と補正する。 （５）明細書２６頁１４行目に記載の「５分間」をＮ０
分間」と補正する。 （６）明細書２６頁１７行目に記載の「ヒト血清１０ｕ
ＪＬＪ を「ヒト血清１０ｐ文Ｊと補正する。 （７）明細書２６頁１７行目に記載の「緩衝液２ｐＬｕ
Ｊを「緩衝液２１」と補正する。 （８）明細書２８頁１１行目に記載の「散乱光量（ＤＳ
）Ｊを「散乱光量（Ｄｓ）Ｊと補正する。 （３）明細書３０頁６行目に記載の「試られた」を「得
られたｊと補正する。 以 上 手続補正書 昭和６θ年 に月 ／ｙ８ １ 事件の表示 ２ 発明の名称 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５４１ 連絡装置 ０３−２７０−１１５７１ ら４ 燻工のパ象、 】牌１Ｆのヌラ絹グｉＩも木田九′省妃ロバｎａ。 ら 精ユの仏者、 ｔＬ）リル細ｌｚ５貢の東３中１１減されている本人（
１）’） ｅ４Ａ。’ （””／ｒｎ１ ）Ｊ ｌ ’
（田’／ｄｉ ）Ｊ ’ｔｆｉＭｌ−する・ メ上
量の測定結果を表わし、横軸の各ＩｇＧ量（ｍｇｌｄｌ
）について得られまた吸光度（ＯＤ）を縦軸に沿ってプ
ロ・ノドした点（！ｌ−結んだものである。 第２図は、実施例３に於て試ら力、た試料血清中のｉｇ
Ｍ量の測定結果を表わし、横＠１の各ＩｇＭ量（ｍｙ
／ ｄｌ ）について得ら力、た吸光度（ＯＤ）を縦軸
に沿ってプロワ）ｌ−た点を結んだものである。 第３図は、実施例４に於ける標準血清によるＩｇＧ量の
・演量線ケ表わし、横軸の各ＩｇＧ量（ｒｒ１９／ｄｌ
）について得られた光散乱強度（ｍＶ）を縦軸に清って
プロットした点を結んだものである。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 第１図 ０ １０００ ２０００ ３０００ ＩｇＧ量（グ／ｄ／、） 第２図 ０ ２００ ４００ ６００ ８００ ＩｇＭ量（グ／ｄＡ） 第３図 ０ ５００１０００ ２０００ ４０００ＩｇＧ量（ツ
／ｄＡ） 手続補正書（文民）− １事件の表示 ）ｌＪｕ ｌ； ＣＩ ＋Ｈ１夫’ｊｇ ｑ ４−１１
’（千２ 発明の名称 ３ 補正をする者 事件どの関係 特許出願人 郵便番号 ５４１ 連絡装置 ０３−２７０−８５７１ 師和５’１４−Ｖ７１３１０ ５ 補正の対象 明細書２０頁、２１頁、２５頁及び２９頁。 ６ 補正の内容 明細書２０頁、２１頁、２５頁及び２９頁の浄書。別紙
のとおり（内容に変更なし）。 ）ム上 手続補正書 昭和４０年 ぷ月Ｚ♂日 １ 事件の表示 胃剰５９年材許神膚霞’１４１１’１子２ 発明の名称 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 連絡装置 ０３−２７０−８５７１ ４ 補正命令の日付 竜 沁 ５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、補正の内容 （１）明細書１６頁２行目に記載のｒ２０％ＦＣ３Ｊを
ｒｌＯ％ＦＣ３Ｊと補正する。 （２）明細書１６頁８行目から同頁９行目にかけて記載
の「ブタインシュリン」を「ヒ） ＩｇＧ Ｊ と補正
する。 （３）明細書１７頁２０行目に記載のｒｌＯ分間」をｒ
ｌ。 日間」と補正する。 （４）明細書２６頁８行目に記載の「参考例３で得た単
クローン性抗体Ｍ−４」を「参考例３で得た単クローン
性抗体Ｍ−５」と補正する。 （５）明細書２６頁１４行目に記載の「５分間」をＮ０
分間」と補正する。 （６）明細書２６頁１７行目に記載の「ヒト血清１０ｕ
ＪＬＪ を「ヒト血清１０ｐ文Ｊと補正する。 （７）明細書２６頁１７行目に記載の「緩衝液２ｐＬｕ
Ｊを「緩衝液２１」と補正する。 （８）明細書２８頁１１行目に記載の「散乱光量（ＤＳ
）Ｊを「散乱光量（Ｄｓ）Ｊと補正する。 （３）明細書３０頁６行目に記載の「試られた」を「得
られたｊと補正する。 以 上 手続補正書 昭和６θ年 に月 ／ｙ８ １ 事件の表示 ２ 発明の名称 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５４１ 連絡装置 ０３−２７０−１１５７１ ら４ 燻工のパ象、 】牌１Ｆのヌラ絹グｉＩも木田九′省妃ロバｎａ。 ら 精ユの仏者、 ｔＬ）リル細ｌｚ５貢の東３中１１減されている本人（
１）’） ｅ４Ａ。’ （””／ｒｎ１ ）Ｊ ｌ ’
（田’／ｄｉ ）Ｊ ’ｔｆｉＭｌ−する・ メ上
Claims (5)
- （１）生体試料を希釈せずにそのまま使用し、単クロー
ン性抗ヒト免疫グロブリン抗体を単独又は２種以上組み
合せて用いてこれと抗原抗体反応を行わせ、生成する抗
原抗体複合物に光を照射し光学的変化量を測定する。免
疫グロブリンの定量方法。 - （２）単クローン性抗ヒト免疫グロブリン抗体が、マウ
スの腫瘍ラインからの細胞とヒト免疫グロブリンで予め
免疫されたマウスの肺細胞との融合によ多形成されたハ
イブリドーマよシ産生される単クローン性抗ヒト免疫グ
ロブリン抗体である、特許請求の範囲第１項に記載の免
疫グロブリンの定量方法、 - （３）光学的変化量が光散乱強度の変化量である。 特許請求の範囲第１項又は第２項に記載の免疫グロブリ
ンの定量方法。 - （４）光学的変化量が透過光量の変化量である、特許請
求の範囲第１項又は第２項に記載の免疫グロブリンの定
量方法。 - （５） 免疫グロブリンがヒトＩｇＧ、ヒトＩｇＭ 又
はヒｈＩｇＡである、特許請求の範囲第１項〜第４項い
ずれかに記載の免疫グロブリンの定量方法。
Priority Applications (4)
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|---|---|---|---|
| JP59094117A JPH0736016B2 (ja) | 1984-05-11 | 1984-05-11 | 免疫グロブリンの定量方法 |
| AT85105712T ATE62273T1 (de) | 1984-05-11 | 1985-05-09 | Monoklonaler antikoerper und verfahren zur quantitativen bestimmung von immunoglobulinen mittels dieses antikoerpers. |
| DE8585105712T DE3582358D1 (de) | 1984-05-11 | 1985-05-09 | Monoklonaler antikoerper und verfahren zur quantitativen bestimmung von immunoglobulinen mittels dieses antikoerpers. |
| EP85105712A EP0161638B1 (en) | 1984-05-11 | 1985-05-09 | Monoclonal antibody and method for quantitation of immoglobulins using the same |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59094117A JPH0736016B2 (ja) | 1984-05-11 | 1984-05-11 | 免疫グロブリンの定量方法 |
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|---|---|
| JPS60237363A true JPS60237363A (ja) | 1985-11-26 |
| JPH0736016B2 JPH0736016B2 (ja) | 1995-04-19 |
Family
ID=14101482
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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|---|---|
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| JP (1) | JPH0736016B2 (ja) |
| AT (1) | ATE62273T1 (ja) |
| DE (1) | DE3582358D1 (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62192661A (ja) * | 1986-02-20 | 1987-08-24 | Nitsusui Seiyaku Kk | 免疫比濁法によるｃｒｐの測定法 |
| JPS62239056A (ja) * | 1986-04-11 | 1987-10-19 | Wako Pure Chem Ind Ltd | トランスフエリンの定量方法 |
| JPS63206657A (ja) * | 1987-02-23 | 1988-08-25 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 蛋白の定量方法 |
| JPS6438654A (en) * | 1987-08-04 | 1989-02-08 | Denka Seiken Kk | Immunoassay |
| JPH01301165A (ja) * | 1988-05-30 | 1989-12-05 | Sekisui Chem Co Ltd | 免疫測定法 |
| JPH0264457A (ja) * | 1988-08-31 | 1990-03-05 | Nippon Shoji Kk | 血清アポａ−ｉの定量法 |
| JPH0264458A (ja) * | 1988-08-31 | 1990-03-05 | Nippon Shoji Kk | 血清アポｂの定量法 |
| JP2009534630A (ja) * | 2006-03-30 | 2009-09-24 | ギロス パテント アーべー | Ｉｇアッセイ |
| WO2010026758A1 (ja) | 2008-09-05 | 2010-03-11 | 積水メディカル株式会社 | モノクローナル抗体及びこれを用いた免疫学的測定方法 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU6032786A (en) * | 1985-07-25 | 1987-01-29 | University Of Minnesota | Detection, imaging and therapy of renal cell carcinoma with monoclonal antibodies in vivo |
| JPH07119762B2 (ja) * | 1986-04-09 | 1995-12-20 | 和光純薬工業株式会社 | 補体の定量方法 |
| US4954617A (en) * | 1986-07-07 | 1990-09-04 | Trustees Of Dartmouth College | Monoclonal antibodies to FC receptors for immunoglobulin G on human mononuclear phagocytes |
| IT1237809B (it) * | 1989-12-22 | 1993-06-17 | Diesse Diagnostica | Metodo per la determinazione qualitativa e quantitativa di anticorpi diretti contro antigeni batterici attraverso la misurazione fotometrica dell'agglutinazione. |
| US5371021A (en) * | 1992-07-17 | 1994-12-06 | Beckman Instruments, Inc. | Initial rate photometric method for immunoassay |
| EP1340978A4 (en) * | 2000-12-04 | 2006-02-15 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | METHOD FOR DETERMINING THE CONCENTRATION OF A SOLUTION AND METHOD FOR ANALYZING THE URINE |
| JP2004045384A (ja) * | 2002-05-22 | 2004-02-12 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫学的測定方法、免疫学的測定装置、生体成分測定用トイレ、抗アルブミンモノクローナル抗体、それを産生する細胞株、およびアルブミン検出キット |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5344623A (en) * | 1976-09-30 | 1978-04-21 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Novel immunoassay |
| JPS5786051A (en) * | 1980-07-28 | 1982-05-28 | Akzo Nv | Determination of antigen employing two or more monochronal antibodies |
| JPS58127167A (ja) * | 1982-01-26 | 1983-07-28 | Green Cross Corp:The | 逆受身モノクロ−ナル抗体赤血球凝集反応用抗原検出試薬 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0044219A1 (en) * | 1980-07-16 | 1982-01-20 | Unilever Plc | Methods of immuno analysis using monoclonal antibodies |
-
1984
- 1984-05-11 JP JP59094117A patent/JPH0736016B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-05-09 DE DE8585105712T patent/DE3582358D1/de not_active Revoked
- 1985-05-09 EP EP85105712A patent/EP0161638B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-05-09 AT AT85105712T patent/ATE62273T1/de not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5344623A (en) * | 1976-09-30 | 1978-04-21 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Novel immunoassay |
| JPS5786051A (en) * | 1980-07-28 | 1982-05-28 | Akzo Nv | Determination of antigen employing two or more monochronal antibodies |
| JPS58127167A (ja) * | 1982-01-26 | 1983-07-28 | Green Cross Corp:The | 逆受身モノクロ−ナル抗体赤血球凝集反応用抗原検出試薬 |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62192661A (ja) * | 1986-02-20 | 1987-08-24 | Nitsusui Seiyaku Kk | 免疫比濁法によるｃｒｐの測定法 |
| JPS62239056A (ja) * | 1986-04-11 | 1987-10-19 | Wako Pure Chem Ind Ltd | トランスフエリンの定量方法 |
| JPS63206657A (ja) * | 1987-02-23 | 1988-08-25 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 蛋白の定量方法 |
| JPS6438654A (en) * | 1987-08-04 | 1989-02-08 | Denka Seiken Kk | Immunoassay |
| JPH01301165A (ja) * | 1988-05-30 | 1989-12-05 | Sekisui Chem Co Ltd | 免疫測定法 |
| JPH0264457A (ja) * | 1988-08-31 | 1990-03-05 | Nippon Shoji Kk | 血清アポａ−ｉの定量法 |
| JPH0264458A (ja) * | 1988-08-31 | 1990-03-05 | Nippon Shoji Kk | 血清アポｂの定量法 |
| JP2009534630A (ja) * | 2006-03-30 | 2009-09-24 | ギロス パテント アーべー | Ｉｇアッセイ |
| WO2010026758A1 (ja) | 2008-09-05 | 2010-03-11 | 積水メディカル株式会社 | モノクローナル抗体及びこれを用いた免疫学的測定方法 |
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| EP3056517A1 (en) | 2008-09-05 | 2016-08-17 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Monoclonal antibody and immunoassay using the same |
Also Published As
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|---|---|
| ATE62273T1 (de) | 1991-04-15 |
| EP0161638A3 (en) | 1987-12-02 |
| EP0161638A2 (en) | 1985-11-21 |
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