JP2003004735A - モルヒネの免疫測定法および測定キット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】麻薬取締法に規制されることのない、モルヒネ
の免疫測定法及び測定キットを提供すること。 【解決手段】ノルモルヒネブチルフタルイミド（ＮＭ−
ＢＰＩ）を標準物質として使用し、全ての抗原抗体反応
を一定の温度条件下で行わせ、且つ、得られる標準曲線
を前記温度条件に特有の補正係数により補正することを
特徴とするモルヒネの免疫測定法および本測定法におい
て使用するモルヒネの免疫測定キット。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は麻薬取締法の規制を
受けることのないモルヒネの免疫測定法および免疫測定
キットに関する。

【０００２】

【従来の技術】モルヒネは癌患者等の疼痛の軽減に優れ
た効果を発揮する麻薬性鎮痛薬である。癌医療の場にお
いて、患者の生活の質の向上のためにその処方量は年々
増加している。その一方で、本薬物の副作用として、嘔
吐、便秘および呼吸抑制等が問題となっている。

【０００３】モルヒネの投与量から、患者の血中モルヒ
ネ濃度を正確に予測することは、薬物の代謝・吸収・排
泄等に個人差があるため困難である。また、鎮痛作用発
現に要する血中濃度は、患者ごとに異なっている。

【０００４】従って、癌患者の疼痛を充分にコントロー
ルし、副作用を軽減させるためには直接血液中のモルヒ
ネ濃度を測定し、個々の患者に応じて最適の血液濃度を
維持する必要がある。

【０００５】一方、モルヒネは麻薬取締法により厳重に
管理・規制された薬物である。このため、標準物質とし
てモルヒネを含むモルヒネの測定キットも本法律の適用
を受けることになり、本キットを扱う臨床の場では厳重
な管理が必要である。また、この様なキットは市場では
規制なく自由に流通させることができない。

【０００６】例えば、特開平２−１９３０７０号公報、
特開平６−７１９０号公報及び臨床検査機器・試薬 第
１８巻 第４号 ６７５−６８１頁（１９９５年）に
は、モルヒネの免疫測定法及び測定キットが開示されて
いる。しかしながら、これらの方法及び測定キットは、
標準物質としてモルヒネを使用しているため、麻薬取締
法の規制を受ける。

【０００７】このような状況の下、麻薬取締法に規制さ
れることのない、モルヒネの免疫測定法及び測定キット
の開発が望まれていた。

【０００８】そこで、非麻薬性物質である下記式［化
１］で表されるノルモルヒネブチルフタルイミド（以
下、ＮＭ−ＢＰＩという）を標準物質として使用するモ
ルヒネの免疫測定について種々検討した。

【０００９】

【化１】

【００１０】一般に、免疫測定法において、測定対象と
は異なる物質を標準物質として使用する場合には、両物
質に対する抗体の反応性が異なるために、予め設定して
おいた係数で補正した標準曲線を使用することにより測
定が行われる。

【００１１】しかしながら、常法に従い補正係数を求
め、ＮＭ−ＢＰＩで得られた標準曲線を前記補正係数で
補正して、モルヒネの測定を試みたが、測定ごとに測定
値がばらつき、モルヒネ濃度を正確に測定することはで
きなかった。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】このような状況におい
て、本発明の課題は、非麻薬性物質ＮＭ−ＢＰＩを標準
物質として使用する定量性に優れたモルヒネの免疫測定
法及び測定キットを提供することにある。

【００１３】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明者らは、モルヒネの免疫測定においてＮＭ−
ＢＰＩを標準物質として使用する場合には、全ての抗原
抗体反応温度を一定温度に制御し、且つ、得られる標準
曲線を前記一定温度に特有の補正係数で補正しなけれ
ば、測定値が測定ごとに大きく変動すること、及び、こ
の変動は、反応温度の変化が、抗モルヒネ抗体に対する
モルヒネ及びＮＭ−ＢＰＩの相対的反応性に影響を及ぼ
すことに起因することを見いだし本発明を完成した。

【００１４】本発明は、標準物質としてＮＭ−ＢＰＩを
使用し、全ての抗原抗体反応を一定の温度条件下で行わ
せ、且つ、得られる標準曲線を前記温度条件に特有の補
正係数により補正することを特徴とするモルヒネの免疫
測定法に関する。

【００１５】また本発明は、上記モルヒネの免疫測定法
において使用するモルヒネの免疫測定キットに関するも
のである。

【００１６】このような本発明によれば、ヒトから分離
された血液、尿などの体液中のモルヒネ濃度を正確に測
定することができる。

【００１７】

【発明の実施の形態】本発明の免疫測定法は、抗体の有
する特異性を利用する方法であれば何れでもよく、特に
限定されるものではない。

【００１８】モルヒネの測定は、例えば、抗モルヒネ抗
体に対して、検体中のモルヒネ及び標識抗原を競合的に
抗原抗体反応せしめた後、前記抗体と結合している標識
抗原と遊離の抗原とを分離（Ｂ／Ｆ分離）し、そのいず
れかの標識活性を測定することにより実施できる。Ｂ／
Ｆ分離はマイクロプレートウェル等に結合させた固相化
抗体や抗体作製に使用した動物のイムノグロブリンに対
する抗体（第二抗体）等を用いることにより有利に行う
ことができる。

【００１９】また、例えば、標識抗モルヒネ抗体に対し
て、検体中のモルヒネ及び抗原を競合的に抗原抗体反応
せしめる方法によってもモルヒネを測定することができ
る。この場合に、抗原として抗モルヒネ抗体の抗イディ
オタイプ抗体を用いるのが好ましい。

【００２０】このような方法は、用いる標識の種類によ
り、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、放射免疫測定法（Ｒ
ＩＡ法）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）、ルミネッセン
ス免疫測定法又はスピン免疫測定法などに分類され、何
れも使用可能である。そのなかでも、ＥＩＡ法が操作の
簡便性および迅速性の点において優れている。

【００２１】本発明は、モルヒネの免疫測定法におい
て、標準物質としてＮＭ−ＢＰＩを使用し、測定に係わ
る全ての抗原抗体反応を一定の温度条件下で行わせ、且
つ、得られる標準曲線を前記温度条件に特有の補正係数
により補正することを特徴とするものである。

【００２２】本発明において標準物質として使用される
ＮＭ−ＢＰＩは、それ自体既知の化合物であり、例え
ば、特開平１１−１１６５７５号公報に記載の方法又は
これに準ずる方法により製造することができる。

【００２３】標準溶液は、ＮＭ−ＢＰＩを通常の緩衝液
で適宜希釈することにより製造することができる。ＮＭ
−ＢＰＩ標準溶液の濃度（以下、本明細書においてＮＭ
−ＢＰＩの濃度に言及する場合にはモルヒネ換算濃度に
よる）は、測定対象の検体中モルヒネ濃度により適宜変
更される。例えば、患者血中のモルヒネ濃度を測定する
場合は、５、１０、２５、５０、１００ｎｇ／ｍＬとす
ることが推奨される。

【００２４】本発明方法において、「全ての抗原抗体反
応」とは、（標識）抗モルヒネ抗体が係わる抗原との反
応全てを含むものであり、免疫測定法の種類によって異
なるが、例えば、標準物質ＮＭ−ＢＰＩ、検体中モルヒ
ネまたは抗モルヒネイディオタイプ抗体と（標識）抗モ
ルヒネ抗体との反応などが挙げられる。

【００２５】一定の温度条件としては任意の温度を選択
することができる。例えば、２０℃〜３０℃、好ましく
は２２．５℃〜２７．５℃の範囲内の何れか一点の温
度、その中でも特に、２５℃前後の温度条件が好まし
い。温度は、抗原抗体反応期間中をとおして一定に保つ
ことが、モルヒネをより正確に測定できる点において望
ましいが、選択した温度の±２．５℃、好ましくは±
１．０℃、特に好ましくは±０．５℃の範囲で変動して
もよい。

【００２６】このような反応温度の制御は、例えばイン
キュベーター中又は温浴中にマイクロプレートを設置
し、そのウェル中で抗原抗体反応を行わせることにより
実施できる。この場合、通常、反応期間中の温度を、選
択した温度の±０．５℃の範囲内で制御可能であり、モ
ルヒネ量を正確に測定することができる。

【００２７】各温度条件に特有の補正係数は例えば、次
のようにして設定することができる。

【００２８】標準物質がモルヒネである点を除き、本発
明の測定キットと同一の構成をとるモルヒネの測定キッ
ト（例えば、臨床検査機器・試薬第１８巻第４号６７５
−６８１頁に記載のキット）を使用して、本発明におけ
る標準物質である各ＮＭ−ＢＰＩ標準溶液のモルヒネ濃
度を、本発明において任意に選択する抗原抗体反応の温
度条件下で測定する。そして、縦軸にその測定値を、横
軸にＮＭ−ＢＰＩ標準溶液の各濃度をプロットして作成
した回帰直線（図２参照）の傾きの値を、その温度条件
における補正係数として設定することができる。

【００２９】なお、これらの補正係数は特定の温度条件
に唯一のものが決定されるのではなく、測定キットを構
成する試薬の種類などにより変動することもあるので、
試薬の構成などを変えた場合にはその都度新たに設定す
る必要がある。

【００３０】このようにして設定された補正係数は、本
発明の測定方法において、ＮＭ−ＢＰＩ標準溶液を用い
て求めた標準曲線を、モルヒネの正確な測定を可能にせ
しめる標準曲線（以下、補正後標準曲線という）（図３
参照）へ変換するために使用される。補正後標準曲線へ
の変換は、ＮＭ−ＢＰＩ標準溶液を用いて求めた標準曲
線における横軸のＮＭ−ＢＰＩ濃度の値を、次式［数
１］によって得られる補正後ＮＭ−ＢＰＩ濃度へ変換す
ることにより実施することができる。

【００３１】

【数１】

【００３２】なお、キット中に含まれるＮＭ−ＢＰＩの
標準溶液の各濃度の表示自体を、補正係数でもってあら
かじめ補正後ＮＭ−ＢＰＩ濃度の表示へ変換しておき、
この表示に基づいて標準曲線を作成することによって
も、補正後標準曲線を得ることができる。

【００３３】このようにして作成される補正後標準曲線
を使用して、以下常法に従い検体中のモルヒネ濃度を測
定することができる。

【００３４】本発明のモルヒネの免疫測定キットはＮＭ
−ＢＰＩ（標準物質）を含むものであるが、抗モルヒネ
抗体または標識抗モルヒネ抗体を含んでいてもよい。

【００３５】抗モルヒネ抗体は、モルヒネ及びＮＭ−Ｂ
ＰＩに対して特異的な免疫反応性を有するものであれば
ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の何れでも
よい。特異性および均一性が高いという点でモノクロー
ナル抗体が好ましい。

【００３６】ポリクローナル抗体はモルヒネと例えばウ
シ血清アルブミンやＫＬＨ（Keyhole Limpet Hemocyani
n）などの免疫原性蛋白との結合物を適当なアジュバン
トと混合してウサギ、モルモット、羊、山羊等のヒト以
外の動物に、非経口的に投与（免疫）し、血清を採取し
て、公知の処理をなすことによって製造することができ
る。

【００３７】モノクローナル抗体はこのように免疫され
た動物の抗体産生細胞を脾臓より採取し、以下常法に従
って、ミエローマ細胞との融合、クローン性細胞のスク
リーニングなどの操作をへて製造することができる。

【００３８】なお、モノクローナル抗体として特開平２
−８６７９４号に記載のＭＯ−５株（微工研条寄１９１
２号）が産生するモノクローナル抗体を使用することも
できる。

【００３９】標識抗モルヒネ抗体は、上記のようにして
製造された抗体と標識物質とを公知の方法に従い結合さ
せることによって製造できる。標識物質としては免疫測
定法の種類によって、酵素、蛍光性物質、放射性物質等
が挙げられる。

【００４０】標識酵素としては、パーオキシダーゼ、β
−Ｄ−ガラクトシダーゼ、リパーゼ、アルカリホスファ
ターゼ、グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナー
ゼ等が挙げられる。この中で好ましいのは、パーオキシ
ダーゼである。

【００４１】また、好ましい実施形態としての本発明の
モルヒネ免疫測定キットは、抗モルヒネイディオタイプ
抗体を構成試薬として含むものである。

【００４２】抗モルヒネイディオタイプ抗体は、モルヒ
ネの代わりに抗モルヒネ抗体を使用する以外は前記抗モ
ルヒネ抗体の場合と同様にして製造することができる。

【００４３】抗モルヒネイディオタイプ抗体は、抗モル
ヒネ抗体の可変部位との免疫反応性を有し、抗モルヒネ
抗体と複合体を形成することができるものである。

【００４４】なお、抗モルヒネイディオタイプ抗体とし
て特開平６−７１９０に記載のｉＭＯ−３−Ｘ１株（微
工研条寄１１９３３号）が産生する抗イディオタイプ抗
体を使用することもできる。

【００４５】抗モルヒネイディオタイプ抗体は固相化さ
れた形をとるのが、ＢＦ分離操作が簡便になる点におい
て、好ましい。抗モルヒネイディオタイプ抗体の固相化
は前述のようにして得られた抗モルヒネイディオタイプ
抗体を固相、例えばマイクロプレートウェルやプラスチ
ックビーズなどに結合させることにより実施することが
できる。

【００４６】固相への結合は通常、抗モルヒネイディオ
タイプ抗体をクエン酸緩衝液等の適当な緩衝液に溶解
し、固相表面と抗体溶液を適当な時間（１〜２日）接触
させることにより、行うことができる。そして、牛血清
アルブミン（ＢＳＡ）のリン酸緩衝溶液を固相と接触さ
せることにより、抗体によってコートされなかった固相
表面部分をＢＳＡでコートすることが一般的に行われ
る。

【００４７】ＥＩＡ法では、これら以外に必要に応じ
て、酵素基質、洗浄液、反応停止液、基質溶解液などが
使用され、これら試薬も本発明のキットを構成するもの
である。

【００４８】

【実施例】以下に参考例及び実施例を挙げて本発明を更
に具体的に説明する。

【００４９】参考例：標準物質にモルヒネを使用したモ
ルヒネの測定法

【００５０】参考例１：試薬の作製

【００５１】（ａ）モルヒネ標準試薬の調製 塩酸モルヒネ（大日本製薬社製）を蒸留水で希釈し、モ
ルヒネ濃度が５ｍｇ／ｍＬであるモルヒネ標準原液を調
製した。モルヒネ標準原液を、希釈液（１％ゼラチン、
０．９％ＮａＣｌ、０．１％プロクリン１５０［防腐
剤；ローム・アンド・ハース社製］、２０ｍｍｏｌ／Ｌ
リン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）を用いて、順次希釈を
繰り返し、モルヒネ濃度が５、１０、２５、５０および
１００ｎｇ／ｍＬ溶液を調製した。これらは、０．５ｍ
Ｌずつ２ｍＬ容茶バイアルに分注し、凍結乾燥を行っ
た。本標準試薬は４℃に保存し、使用時に０．５ｍＬの
ヒト血清（大日本製薬社製）で再溶解した。

【００５２】（ｂ）酵素標識抗モルヒネ抗体の作製 酵素標識抗モルヒネ抗体はＭＯ−５株（微工研条寄１９
１２号）が産生した精製抗体ＭＯ−５を用いて、次に示
すような過ヨウ素酸酸化法によって作製した。まず、こ
の抗体を２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）で希釈し、１０ｍｇ／ｍＬのＭＯ−５溶液を
調製した。

【００５３】一方、西洋ワサビパーオキシダーゼ４ｍｇ
を蒸留水１ｍＬに溶解し、その８００μＬに０．１ｍｏ
ｌ／Ｌ過ヨウ素酸ナトリウム溶液２００μＬを加えて、
室温で１０分間撹拌して反応させた。この溶液を１ｍｍ
ｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．４）に対して
一夜透析し、過ヨウ素酸酸化パーオキシダーゼ溶液を得
た。

【００５４】以上のようにして得られた１０ｍｇ／ｍＬ
のＭＯ−５溶液１３５μＬと過ヨウ素酸酸化パーオキシ
ダーゼ溶液４００μＬを混合し、さらに１ｍｏｌ／Ｌ炭
酸ナトリウム緩衝液１５μＬ（ｐＨ９．５）を加え、撹
拌後、室温遮光下で２時間静置して反応させた。この反
応液に、４ｍｇ／ｍＬ水素化ホウ素ナトリウム溶液４０
μＬを加え、４℃遮光下で２時間静置して反応させた。
この反応液をオメガセル（分画分子量５０ｋＤａ；フィ
ルトロン社製）で次に示すように限外濾過を行った。反
応液を全量オメガセルに移し、洗浄液７ｍＬ（２０ｍｍ
ｏｌ／Ｌリン酸緩衝液 ｐＨ７．０）加え、約１ｍＬま
で濃縮した。この工程を７回繰り返し、限外濾過を行っ
た。モルヒネを測定する際には、この原液を標識抗体用
希釈液（１０％ブロックエース［ブロッキング剤；大日
本製薬社製］、０．５％チラミン塩酸塩および０．１％
プロクリン１５０を含む溶液）で適当に希釈して用い
た。

【００５５】（ｃ）抗モルヒネイディオタイプ抗体固相
化プレートの作製 抗モルヒネイディオタイプ抗体固相化プレートの作製
は、ｉＭＯ−３−Ｘ１株（微工研条寄１１９３３号）が
産生した精製抗体ｉＭＯ−３−Ｘ１を用いて、次に示す
ように行った。この抗体を５０ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸緩
衝液（ｐＨ５．０）で希釈し、２０μｇ／ｍＬのｉＭＯ
−３−Ｘ１溶液を調製した。この２０μｇ／ｍＬのｉＭ
Ｏ−３−Ｘ１溶液をマイクロプレート（ブレーカブルコ
ンビプレートＥＢ,ＲＥ；ラボシステム社製）の各ウェ
ルに２００μＬずつ分注し、４℃で７２時間静置した。
次に、洗浄液（０．１％ウシ血清アルブミン、０．２％
プロクリン１５０を含む４０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝生
理食塩水）で２回洗浄後、マイクロプレートへの酵素標
識抗モルヒネ抗体の非特異的吸着を防ぐために、洗浄液
を各ウェルに３００μＬずつ分注し、２５℃で３時間静
置した。次に、洗浄液を吸引除去し、一夜真空乾燥を行
った。このようにして作製されたプレートは、乾燥剤と
ともに密封し、使用まで４℃で保存した。

【００５６】参考例２：モルヒネの測定

【００５７】抗モルヒネイディオタイプ抗体固相化プレ
ート（ｃ）の各ウェルに２０μＬずつモルヒネ標準試薬
（ａ）又は既知濃度のモルヒネ検体（７．５、３０、６
０ｎｇ／ｍＬ）を加え、さらに１００μＬずつ酵素標識
抗モルヒネ抗体液（ｂ）を入れ、一定温度（２０．０±
０．５℃、２２．５±０．５℃、２５．０±０．５℃、
２７．５±０．５℃、３０．０±０．５℃）に設定され
たインキュベーター（ＭＩＲ−１５３；三洋電機社製）
中で３０分間静置した。続いて、各ウェルを洗浄液
（０．１５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ、０．０５％ ポリソ
ルベート８０、０．０３％ Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）
Ｘ−４０５、５ｍｍｏｌ／Ｌ リン酸ナトリウム、０．
０１％プロクリン１５０、ｐＨ７．０）で３回洗浄後、
基質液（５０ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸、０．１ｍｏｌ／
Ｌ リン酸ナトリウム ｐＨ５．０、０．８７ｍｇ／ｍ
Ｌ ｏ−フェニレンジアミン、０．０３％ Ｈ₂Ｏ₂）を
１００μＬずつ分注した。さらに、上記インキュベータ
ー中で３０分間静置し、１００μＬの反応停止液（０．
９ｍｏｌ／Ｌ Ｈ₂ＳＯ₄）を加えマイクロプレート光度
計（マルチスキャンバイクロマティック；大日本製薬社
製）を用いて吸光度（主波長：４９２ｎｍ、副波長：６
２０ｎｍ）を測定した。得られたモルヒネの標準曲線か
ら、既知濃度のモルヒネ検体の測定値を求めた。

【００５８】図１に一例として２５．０±０．５℃にお
ける標準曲線を、また各温度条件における標準曲線から
求めた既知濃度モルヒネ検体の測定値を以下の表１に示
す。

【００５９】

【表１】

【００６０】上記表１に示すとおり、モルヒネを標準物
質として使用する本方法では各反応温度条件下で、正確
にモルヒネを測定することができた。

【００６１】実施例：標準物質にＮＭ−ＢＰＩを使用し
たモルヒネの測定法

【００６２】実施例１：試薬の作製

【００６３】（ａ’）ＮＭ−ＢＰＩ標準試薬の作製 ＮＭ−ＢＰＩ（分子量：４７２．３４；ウルトラファイ
ンケミカル社製）をジメチルスルホキシド(和光純薬社
製)で希釈し、ＮＭ−ＢＰＩモル濃度が０．０１７６ｍ
ｍｏｌ／ｍＬとなるように調製した。モルヒネの分子量
は２８５．３４であるので、この溶液中のＮＭ−ＢＰＩ
モル数を等モル数のモルヒネに換算した場合、モルヒネ
重量濃度は５ｍｇ／ｍＬとなる。この５ｍｇ／ｍＬのＮ
Ｍ−ＢＰＩ溶液をヒト血清(大日本製薬社製)を用いて、
順次希釈を繰り返し、モルヒネ換算濃度で２．５、５、
１０、２５、５０及び１００ｎｇ／ｍＬの各溶液を調製
した。

【００６４】なお、酵素標識抗モルヒネ抗体、および抗
モルヒネイディオタイプ抗体固相化プレートは参考例１
の（ｂ）および（ｃ）に記載の方法と同様にして作製し
た。

【００６５】実施例２：モルヒネの測定（温度条件が２
５．０±０．５℃の場合）

【００６６】２−１：任意の温度における補正係数の設
定

【００６７】参考例に記載のモルヒネを標準物質として
使用する測定方法と同様にして、実施例１で作製したＮ
Ｍ−ＢＰＩ標準溶液（２．５、５．０、１０、２５、５
０ｎｇ／ｍＬ）中のモルヒネ濃度を測定した。なお、任
意の温度条件として、参考例と同じく、２０．０±０．
５℃、２２．５±０．５℃、２５．０±０．５℃、２
７．５±０．５℃、３０．０±０．５℃を選択した。測
定結果を次表２に示す。

【００６８】

【表２】

【００６９】上記表２に示すとおり、各温度条件により
ＮＭ−ＢＰＩ標準溶液のモルヒネ測定値は大きく変動す
るものであった。

【００７０】表２のＮＭ−ＢＰＩ標準溶液濃度を横軸
に、各測定値を縦軸にプロットして各温度条件における
回帰直線を作成した（図２参照）。

【００７１】図２に示す各直線の回帰式は、次表３のと
おりであり、これらの式における傾き（下線部）を各温
度条件における補正係数として設定した。

【００７２】

【表３】

【００７３】２−２：モルヒネの測定

【００７４】前項２−１で求めた２５．０±０．５℃に
おける補正係数１．０９３をＮＭ−ＢＰＩ標準溶液の各
濃度に乗じて、補正後ＮＭ−ＢＰＩ濃度表示へと変換し
た。すなわち、ＮＭ−ＢＰＩ標準溶液の２．５、５、１
０、２５、５０及び１００ｎｇ／ｍＬの各濃度を補正後
ＮＭ−ＢＰＩ濃度である２．７３、５．４７、１０．９
３、２７．３３、５４．６５及び１０９．３ｎｇ／ｍＬ
の表示へと変換した。この補正後の濃度表示を、ＮＭ−
ＢＰＩ標準溶液の各濃度として、以降の操作を行った。

【００７５】インキュベーターの温度を２５．０±０．
５℃に設定し、モルヒネ標準試薬の代わりにＮＭ−ＢＰ
Ｉ標準試薬を使用する以外は、参考例２と同様の操作を
した。得られた補正後標準曲線を基にして、既知濃度の
モルヒネ検体の濃度を求めた。この場合の補正後標準曲
線を図３に、そして、測定値を次表４に示す。

【００７６】

【表４】

【００７７】表４に示すとおり、既知濃度モルヒネ検体
の濃度と測定値はほぼ一致している。このように、本発
明のモルヒネの免疫測定法によれば、正確にモルヒネを
測定することができた。

【００７８】実施例３〜６：モルヒネの測定（温度条件
が２０．０±０．５℃、２２．５±０．５℃、２７．５
±０．５℃、３０．０±０．５℃の場合）

【００７９】実施例２−１において求めた各温度条件に
おける補正係数を使用し、実施例２−２に記載の方法に
準じて既知濃度モルヒネ検体の濃度を測定した。下記表
５に示すとおり、各温度条件下で正確にモルヒネ濃度を
測定することができた。

【００８０】

【表５】

【００８１】

【発明の効果】本発明により、モルヒネの厳重な管理が
求められる麻薬取締法の規制を受けることなく自由にモ
ルヒネの測定を実施することができ、また、前記測定に
使用する測定キットを本法の非規制下で自由に流通させ
ることを可能にする。さらに、本発明によれば、生物試
料等に存在するモルヒネの濃度を正確に測定することが
できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】標準物質としてモルヒネを使用し、温度条件が
２５．０±０．５℃の場合の標準曲線を表す図である。

【図２】表２のＮＭ−ＢＰＩ標準溶液濃度を横軸に、各
モルヒネ測定値を縦軸にプロットして作成した各温度条
件における回帰直線を表す図である。

【図３】標準物質としてＮＭ−ＢＰＩを使用し、温度条
件が２５．０±０．５℃の場合の補正後標準曲線を表す
図である。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 モルヒネの免疫測定法において、標準物
   質としてノルモルヒネブチルフタルイミド（ＮＭ−ＢＰ
   Ｉ）を使用し、全ての抗原抗体反応を一定の温度条件下
   で行わせ、且つ、得られる標準曲線を前記温度条件に特
   有の補正係数により補正することを特徴とするモルヒネ
   の免疫測定法。
2. 【請求項２】 一定の温度条件が２０℃〜３０℃の範囲
   中の何れか一点の温度である請求項１記載のモルヒネの
   免疫測定法。
3. 【請求項３】 一定の温度条件が２２．５℃〜２７．５
   ℃の範囲中の何れか一点の温度である請求項２記載のモ
   ルヒネの免疫測定法。
4. 【請求項４】 一定の温度条件が２５℃前後である請求
   項３記載のモルヒネの免疫測定法。
5. 【請求項５】 抗モルヒネイディオタイプ抗体を使用す
   ることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載
   のモルヒネの免疫測定法。
6. 【請求項６】 請求項１〜５のいずれか一項に記載のモ
   ルヒネの免疫測定法において使用するモルヒネの免疫測
   定キット。
7. 【請求項７】 ノルモルヒネブチルフタルイミド（ＮＭ
   −ＢＰＩ）を標準物質として含むことを特徴とする請求
   項６記載のモルヒネの免疫測定キット。
8. 【請求項８】 さらに、抗モルヒネイディオタイプ抗体
   を構成試薬として含むことを特徴とする請求項７記載の
   モルヒネの免疫測定キット。