JPS60186295A - デンプンの糖化法 - Google Patents
デンプンの糖化法Info
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- JPS60186295A JPS60186295A JP59043369A JP4336984A JPS60186295A JP S60186295 A JPS60186295 A JP S60186295A JP 59043369 A JP59043369 A JP 59043369A JP 4336984 A JP4336984 A JP 4336984A JP S60186295 A JPS60186295 A JP S60186295A
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、広い最適作用ｐＨ域をもつ新規なプルラナー
ゼによるデンプンの糖化方法に関するものである。
ゼによるデンプンの糖化方法に関するものである。
プルラナーゼは、Ｂｅｎｄｅｒらにより、プルラリヤ・
プルランの生産する多糖類プルランを加水分解する酵駐
として、エーロバクター・エーロゲ不ス（ｌ＼ｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）に、はじめて見出さ
れた［１３ｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔ
ａ、３６． ３０９（Ｊ ９５９）、特公昭４６−７５
５９などコ。その後、この＋”ｉＶ素は、アミロペクチ
ンのα−１，６−グルコシトイ占合を加水分解し、β−
アミラーゼとの併用により、デンプンからマルトースを
収ｒ改よく生産できることから注１−１され、現在まで
に同４：、ｉ’、の曲系か柚々の微生物により生産され
ることが知られている。この種の酵素はプルラナーゼ、
イソアミラーセなと（屯々の名称で呼ばれているが、聡
称してα−１，（５−グルコシダーゼとにわれでいる。
プルランの生産する多糖類プルランを加水分解する酵駐
として、エーロバクター・エーロゲ不ス（ｌ＼ｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）に、はじめて見出さ
れた［１３ｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔ
ａ、３６． ３０９（Ｊ ９５９）、特公昭４６−７５
５９などコ。その後、この＋”ｉＶ素は、アミロペクチ
ンのα−１，６−グルコシトイ占合を加水分解し、β−
アミラーゼとの併用により、デンプンからマルトースを
収ｒ改よく生産できることから注１−１され、現在まで
に同４：、ｉ’、の曲系か柚々の微生物により生産され
ることが知られている。この種の酵素はプルラナーゼ、
イソアミラーセなと（屯々の名称で呼ばれているが、聡
称してα−１，（５−グルコシダーゼとにわれでいる。
たとえば、エラ七すシア・インターメディアのイソアミ
ラーセ［Ｅｓｃｈｅｒｉｃｂｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉ
ａ、 Ａｐｐｌｉｅｄ、 ＆１ｉｃｒｏｂｉｏ１．．
上５゜４９２（１９６７）］、ストレプトコッカス・ミ
ゾイスのプルラナーゼ［５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｍ１ｔｉｓ、 Ｂｉｃｃｂｅ＋ｎ、 Ｊ。
ラーセ［Ｅｓｃｈｅｒｉｃｂｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉ
ａ、 Ａｐｐｌｉｅｄ、 ＆１ｉｃｒｏｂｉｏ１．．
上５゜４９２（１９６７）］、ストレプトコッカス・ミ
ゾイスのプルラナーゼ［５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｍ１ｔｉｓ、 Ｂｉｃｃｂｅ＋ｎ、 Ｊ。
１０８．３３、（１９６８）］、ストレブ川用マイセス
・ｓｐ、 ＮＯ，２８のイソアミラーゼ［Ｊ、 Ｆｅｒ
ｍｅｎＬ ’ｒｅｃｂ、。
・ｓｐ、 ＮＯ，２８のイソアミラーゼ［Ｊ、 Ｆｅｒ
ｍｅｎＬ ’ｒｅｃｂ、。
４９．５５２（１９７１）コ、バシルス属のプルラナー
ゼ［Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、４０．１５１
５（１９７６）、５ｔａｒｃｈ、 ’３４． ３４０（
１９７２）なと］などかある。
ゼ［Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、４０．１５１
５（１９７６）、５ｔａｒｃｈ、 ’３４． ３４０（
１９７２）なと］などかある。
最近、プルラナーゼやイソアミラーゼ、Ｓとのび−１，
６−９−ルコシグーセハ、・デンプンからクルコースに
）’ＩＪ造ヤ、−ＩＦ’ンブンからマルトース、マノ叱
トトリオース、マルトヘキサオース、マルトペンタオー
ス、マルトヘキサオースなどのマルトオリゴ糖の生産に
おいても、これら傭の増収にＮＪ’効であることか廓σ
゛ンられている。
６−９−ルコシグーセハ、・デンプンからクルコースに
）’ＩＪ造ヤ、−ＩＦ’ンブンからマルトース、マノ叱
トトリオース、マルトヘキサオース、マルトペンタオー
ス、マルトヘキサオースなどのマルトオリゴ糖の生産に
おいても、これら傭の増収にＮＪ’効であることか廓σ
゛ンられている。
しかるに、従来、知られているプルラナーゼやイソアミ
ラーゼなとα−１，６−グルコノダーゼは、一般に熱安
定１生に劣り（Ｃくは最３’Ａ ｌ！、ｆ’を度４５〜
５０℃）、また、作用ｐＨ範団が狭いため、グルコアミ
ラーゼのように酸性側で作用し、熱安定性に唆れたＩ）
イ索（最１βｊ作用ｐＴ（４，５イ・ｊ近、最適；１ミ
用温度６０℃）や、中性〜弱アルカリ性に最這１作用ｐ
ｌ（をも一つ微生物起源のマルトオリゴ糖生成酵素の、
全てのアミラーゼにｌ−ｊ シて使用するには技４１ｉ
ｆ的および経済的に問題かあった。
ラーゼなとα−１，６−グルコノダーゼは、一般に熱安
定１生に劣り（Ｃくは最３’Ａ ｌ！、ｆ’を度４５〜
５０℃）、また、作用ｐＨ範団が狭いため、グルコアミ
ラーゼのように酸性側で作用し、熱安定性に唆れたＩ）
イ索（最１βｊ作用ｐＴ（４，５イ・ｊ近、最適；１ミ
用温度６０℃）や、中性〜弱アルカリ性に最這１作用ｐ
ｌ（をも一つ微生物起源のマルトオリゴ糖生成酵素の、
全てのアミラーゼにｌ−ｊ シて使用するには技４１ｉ
ｆ的および経済的に問題かあった。
そこで、本発明１′ｒらは、グルコアミラーゼ、β−ア
ミラーゼやマルトトリオース以上のマルトオリゴ糖を／
１”成するアミラーゼの、いずれのアミラー士とも１ル
Ｉｌｌできる。最）１＆作用ｐＨ範囲が広く、且つ熱安
定１−１．に優れたα−１，６−ゲルコジダーセを産す
るプルラナーゼか０１規な１制熱性プルラナーセからな
る新規な耐熱性プルラナーゼである。
ミラーゼやマルトトリオース以上のマルトオリゴ糖を／
１”成するアミラーゼの、いずれのアミラー士とも１ル
Ｉｌｌできる。最）１＆作用ｐＨ範囲が広く、且つ熱安
定１−１．に優れたα−１，６−ゲルコジダーセを産す
るプルラナーゼか０１規な１制熱性プルラナーセからな
る新規な耐熱性プルラナーゼである。
以下、本酵素を新規な１０１・１熱性プルラナーセ八と
いう。
いう。
そして、本発明は、このような、ｉ′１１規な１１ｉｊ
熱゛ｌｉプルラナーゼＡとグルコアミラーゼ、β一つ′
ミラーゼやマルト−ス以」−のマルトオリゴ糖を生成す
るエクソ型またはエンド型アミラーセを９１−用するこ
とからなるデンプンの糖’（’Ｉ：ｒ方法に関するもの
である。
熱゛ｌｉプルラナーゼＡとグルコアミラーゼ、β一つ′
ミラーゼやマルト−ス以」−のマルトオリゴ糖を生成す
るエクソ型またはエンド型アミラーセを９１−用するこ
とからなるデンプンの糖’（’Ｉ：ｒ方法に関するもの
である。
以下に、本発明の内容を史に具体的に説明Ｊる。
本発明において使用される、クレブシラ・ニューモニア
（１（ｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕ＋ｎｏｎｉａｅ）
は、Ｂｅｇｅｙのｉｌ’川ｉ用Ｌ！同定冴（Ｂｅｒｇｅ
ｙｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｆ）ｅｔｅｒｍｉｎａｔｉ
ｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ。
（１（ｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕ＋ｎｏｎｉａｅ）
は、Ｂｅｇｅｙのｉｌ’川ｉ用Ｌ！同定冴（Ｂｅｒｇｅ
ｙｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｆ）ｅｔｅｒｍｉｎａｔｉ
ｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ。
Ｔｈｅ Ｗｉｌｌｉａ＋ｎｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｑ
）、）において、以ｉｉ＋は円−ロバフタ−＠ １−０
ゲネス（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）
と１７号１１されていたか、ｉ７’、 ８ ｉ数に４６
いて、エーロバクター・コーーロゲネスはクレフシラ・
ニューモニアにｉ・ｌ含されている。エーロバクター属
やクレブンラＩＨ４ｇ （１１１４：Ｉがプルラナーゼ
を生産づ−ることについては、すでに本発明以１）ｉｊ
に公知である。たとえば、Ｂｉｏｃｌｌａｍ、 Ｚ、、
３３４ 、７９ （１９６１）、ＭｅｔＪ＋ｏｄ ｉ
ｎｐ、、ｚｙｔｎｏｌｏｇ３’＼ｉｌ＋、 ５５５（１
９６６）、特公昭４（５−７５５９、Ａｇｒｌｃ、 Ｂ
ｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、、 ３ユ、 ２１３２１ （１９
７３）などには、エーロバクター・エーロゲネスの生産
するプルラナーゼの記載があり、また、持分・（ｆｊ
５１−５０７２４＋’−５’公昭５８−２２１９７など
には、クレブシラ・ニューモニアなどクレブシラ＋、＋
ｉの生＋ｌ？ｊするα−１，６−９−ルーｙシタ゛−ゼ
についての記載〈バある。しかし、これら’ｔ： ：：
ｊｌ：や′（￥許公＋ＩＪに記載さイ１ている酵素は、
いずれも熱安定性に劣っている。すなわち、Ｂｉｏｃｈ
ｅｕｌ、 Ｚ。
）、）において、以ｉｉ＋は円−ロバフタ−＠ １−０
ゲネス（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）
と１７号１１されていたか、ｉ７’、 ８ ｉ数に４６
いて、エーロバクター・コーーロゲネスはクレフシラ・
ニューモニアにｉ・ｌ含されている。エーロバクター属
やクレブンラＩＨ４ｇ （１１１４：Ｉがプルラナーゼ
を生産づ−ることについては、すでに本発明以１）ｉｊ
に公知である。たとえば、Ｂｉｏｃｌｌａｍ、 Ｚ、、
３３４ 、７９ （１９６１）、ＭｅｔＪ＋ｏｄ ｉ
ｎｐ、、ｚｙｔｎｏｌｏｇ３’＼ｉｌ＋、 ５５５（１
９６６）、特公昭４（５−７５５９、Ａｇｒｌｃ、 Ｂ
ｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、、 ３ユ、 ２１３２１ （１９
７３）などには、エーロバクター・エーロゲネスの生産
するプルラナーゼの記載があり、また、持分・（ｆｊ
５１−５０７２４＋’−５’公昭５８−２２１９７など
には、クレブシラ・ニューモニアなどクレブシラ＋、＋
ｉの生＋ｌ？ｊするα−１，６−９−ルーｙシタ゛−ゼ
についての記載〈バある。しかし、これら’ｔ： ：：
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いずれも熱安定性に劣っている。すなわち、Ｂｉｏｃｈ
ｅｕｌ、 Ｚ。
３：’１１．７９（］ ９６１）と！ｖ１ｅｌｈｏｄ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ差＋ ５５５ （１９６６
）にはエーロバクター・工−ロゲネスのプルラナーゼの
最適作用、盟度は４７．５℃とあり、Ａｇｒｉｃ、 Ｂ
ｉｏｌ、 ＣＩ＋ｅｍ、、 ３７ 、２８２１ （１９
７３）には、ｉｉ＋ｊしくエーロバクター・エーロゲネ
スのプルラナーゼの１Ｉｋｄ作用温度は５０℃でＬＪ）
ると記載されている。
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ差＋ ５５５ （１９６６
）にはエーロバクター・工−ロゲネスのプルラナーゼの
最適作用、盟度は４７．５℃とあり、Ａｇｒｉｃ、 Ｂ
ｉｏｌ、 ＣＩ＋ｅｍ、、 ３７ 、２８２１ （１９
７３）には、ｉｉ＋ｊしくエーロバクター・エーロゲネ
スのプルラナーゼの１Ｉｋｄ作用温度は５０℃でＬＪ）
ると記載されている。
そして、特公昭５１−５０７２には、クレフシラ・ニュ
ーモニアの最適作用温度は４５〜５０Ｃに、ｂす、基質
の不在下では、５０℃で１時間加熱処理すると殆んど失
活すると記載されている。
ーモニアの最適作用温度は４５〜５０Ｃに、ｂす、基質
の不在下では、５０℃で１時間加熱処理すると殆んど失
活すると記載されている。
このように、従来、′ＪＪ］られているエーロバクター
属やクレブシラ属のプルラナーゼやα−１６−グルコシ
ダーゼのｆｅｚ適作適温用温度５〜５０℃株度であると
考えらねるのに刻し、本発明の新規な耐熱１生ゾルラナ
ーゼＡの最適作用温度は６０〜６３℃の前記側にあり、
基質の不在ドで５０℃で１ ＋ｖ４間加熱加熱〇も殆ん
ど活性の低下は１．忍められない（第１〆１及び第２図
）など、熱安定性に偵れた酵素である。本酵素は基質の
存在下では当然熱安定性化され、またカルシウムなどの
金属塩の存在下でも熱安定化されるので、実用的な反応
条件においても、最低６０゛Ｃ０）ｒノ。１度で反応を
行なうことができる。
属やクレブシラ属のプルラナーゼやα−１６−グルコシ
ダーゼのｆｅｚ適作適温用温度５〜５０℃株度であると
考えらねるのに刻し、本発明の新規な耐熱１生ゾルラナ
ーゼＡの最適作用温度は６０〜６３℃の前記側にあり、
基質の不在ドで５０℃で１ ＋ｖ４間加熱加熱〇も殆ん
ど活性の低下は１．忍められない（第１〆１及び第２図
）など、熱安定性に偵れた酵素である。本酵素は基質の
存在下では当然熱安定性化され、またカルシウムなどの
金属塩の存在下でも熱安定化されるので、実用的な反応
条件においても、最低６０゛Ｃ０）ｒノ。１度で反応を
行なうことができる。
一方、最適作用ｐＨについてみてみると、エーロバクタ
ー・エーロゲネスやクレブシラ属のプルラナーセやα−
１６−グルコシダーゼの最適作用ｐｋｉ ｌ；ｊ５０付
近［Ｍｅｔｎｏｄ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ｖｍ
、５５５ Ｃ１９６６＞、４ｒ、ｌ、公明５１−５０７
２など）、または、ｐｒ■６１；Ｊ近（Ａｇｒｉｃ、Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、 ３７．２８２１ （１９７３）
］にあり、いずれの場合も、１．ｆに、Ｉ）Ｈ６以にに
おいては著しく活性が低下することが知られている。
ー・エーロゲネスやクレブシラ属のプルラナーセやα−
１６−グルコシダーゼの最適作用ｐｋｉ ｌ；ｊ５０付
近［Ｍｅｔｎｏｄ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ｖｍ
、５５５ Ｃ１９６６＞、４ｒ、ｌ、公明５１−５０７
２など）、または、ｐｒ■６１；Ｊ近（Ａｇｒｉｃ、Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、 ３７．２８２１ （１９７３）
］にあり、いずれの場合も、１．ｆに、Ｉ）Ｈ６以にに
おいては著しく活性が低下することが知られている。
本発明以前に、比較的熱安定性に優れたα−１６−グル
コシダーゼを生産する微生物として、たとえば、バシル
ス）・ハのプルラナーゼ（’Ｆ、Ｓ°開昭５７−１７４
０８９、５ｔａｒｃｈ、３４．３４０ （１９８２））
およびストレプトマイセス属のイソアミラーゼ（Ｊ。
コシダーゼを生産する微生物として、たとえば、バシル
ス）・ハのプルラナーゼ（’Ｆ、Ｓ°開昭５７−１７４
０８９、５ｔａｒｃｈ、３４．３４０ （１９８２））
およびストレプトマイセス属のイソアミラーゼ（Ｊ。
Ｆｅｒｒｎｅｎｔ、Ｔｅｃｈｎｏｌ、、 旦、 ５５２
（１９７１）） がノＪ１られている。これらの微生物
の生産するブルラナ−Ｖやイソアミラーゼの最適作用温
度は約６０℃にｃ１５るが、いずれも最適ｆド用ｐＨは
５０にあり、ｐｒ１５以ト、では著しく活性が低下する
。
（１９７１）） がノＪ１られている。これらの微生物
の生産するブルラナ−Ｖやイソアミラーゼの最適作用温
度は約６０℃にｃ１５るが、いずれも最適ｆド用ｐＨは
５０にあり、ｐｒ１５以ト、では著しく活性が低下する
。
以に、説明したように、本発明以前に知られていたエー
ロバクター属やクレブシラ属の酵讃は熱安定性に′Ｊ′
Ｊす、最適作用温Ｌｖは５０“Ｃ前後にあり、また、最
適作用ｐ■１も５．０または６．０の狭い範囲にある。
ロバクター属やクレブシラ属の酵讃は熱安定性に′Ｊ′
Ｊす、最適作用温Ｌｖは５０“Ｃ前後にあり、また、最
適作用ｐ■１も５．０または６．０の狭い範囲にある。
これに刻し、本発明により生産されるクレブシラ・ニュ
ーモニアの新規なｉｊ！Ｊ熱ｉ生プルラナーゼＡは、最
適作用ｐＨが約４．５〜釣７．５の祠拉）で広い範囲に
あり、そして液層作用温度（１６０〜６３℃と極めて熱
安定性に優れた酵素であり、隨未、知られていたニーロ
バフタ属やクレブシラｊ（’ｉ５の酵素とは違った新規
な酵素と認められるものである。
ーモニアの新規なｉｊ！Ｊ熱ｉ生プルラナーゼＡは、最
適作用ｐＨが約４．５〜釣７．５の祠拉）で広い範囲に
あり、そして液層作用温度（１６０〜６３℃と極めて熱
安定性に優れた酵素であり、隨未、知られていたニーロ
バフタ属やクレブシラｊ（’ｉ５の酵素とは違った新規
な酵素と認められるものである。
以下に、本発明の新規な１制熱性プルラナーゼＡの酵素
的性質についてより訂、≦４１；に記載する。
的性質についてより訂、≦４１；に記載する。
（１）作用； プルランのα−１，６−グルコシドＪｉ
！ｉ合を分解してマルトトリオースを生成する。
！ｉ合を分解してマルトトリオースを生成する。
また、澱粉、アミロペクチン、グリコーゲンまたはこれ
らの派生°吻のび−１，６−グルコシド結合を分解する
。
らの派生°吻のび−１，６−グルコシド結合を分解する
。
（２）作用ｐＨ範囲及び最、・１＆作用ｐＨ； ｐＨ約
２５〜イｌ’ｙ １０の極めて広いｐ、Ｅ−１範囲で作
・１ｊシ、最・、凶作用温度はｐＨ約４．５４勺７．５
の広い・旭１ノ１１に認められた（２９６プルラン、０
．０５Ｍ１・１ｌＦｎ’２緩衝ン＋ｋ （ｐＨ３〜５．
５）、トリス緩ｉ４１欽（ｐ；−１５，５〜７．５）お
よびトリシン結石、Ｊ？Ｉ’＝二（ｐｌ（７〜８．５）
のもとて５０℃で３０分間反応、第１図（ａ）） （３）作用温度範囲及び最適作用温度；約７５℃まで作
用し、最適作用温度は約６３℃に認められた（２９６プ
ルラン、０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐｌ−１５，０）又は
０．０５Ｍ）リス緩ｉ！ＩＩ丁、？祝（ｐＨ７，０）の
もとて３０分間反応、第１図（ｂ））。
２５〜イｌ’ｙ １０の極めて広いｐ、Ｅ−１範囲で作
・１ｊシ、最・、凶作用温度はｐＨ約４．５４勺７．５
の広い・旭１ノ１１に認められた（２９６プルラン、０
．０５Ｍ１・１ｌＦｎ’２緩衝ン＋ｋ （ｐＨ３〜５．
５）、トリス緩ｉ４１欽（ｐ；−１５，５〜７．５）お
よびトリシン結石、Ｊ？Ｉ’＝二（ｐｌ（７〜８．５）
のもとて５０℃で３０分間反応、第１図（ａ）） （３）作用温度範囲及び最適作用温度；約７５℃まで作
用し、最適作用温度は約６３℃に認められた（２９６プ
ルラン、０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐｌ−１５，０）又は
０．０５Ｍ）リス緩ｉ！ＩＩ丁、？祝（ｐＨ７，０）の
もとて３０分間反応、第１図（ｂ））。
（４）熱安定性；酵素水溶液を５０℃、５５℃と６０℃
で加熱処理してのち、残存活性をｏｌｌｉ定した。その
結果、５０℃では１時間の加熱後も失活は殆んど認めら
れなかった。
で加熱処理してのち、残存活性をｏｌｌｉ定した。その
結果、５０℃では１時間の加熱後も失活は殆んど認めら
れなかった。
５５℃の加熱では２０分の加熱で約２０％失活し、１時
間の加熱で約６０％失活した。そして、６０℃の加熱で
は３０分間の加熱で約８０９６失活した（第２図（に）
）ｆ５） ｐＨ安定性； ｐｉ−Ｉ約４〜約１０の範囲
で安定であった（０．１Ｍ酢酸緩衝液、リン酸緩衝故ま
たはトリス緩衝液のもと、室温（２５℃）で３峙間放１
δ後、残存活性を測定した（第２図（ｂ））。
間の加熱で約６０％失活した。そして、６０℃の加熱で
は３０分間の加熱で約８０９６失活した（第２図（に）
）ｆ５） ｐＨ安定性； ｐｉ−Ｉ約４〜約１０の範囲
で安定であった（０．１Ｍ酢酸緩衝液、リン酸緩衝故ま
たはトリス緩衝液のもと、室温（２５℃）で３峙間放１
δ後、残存活性を測定した（第２図（ｂ））。
（６）阻害剤；本酵素はＩ Ｘ １０””３ＭのＣｕ５
Ｏ，、Ｈｇ Ｃ１２、ＺｎＳＯ４、Ｆｅ ８０ｓにより
、それぞれ約９３％、約８９％、約８６％、約２９％阻
害された。同濃度ＡｇＮＯ３によっては殆んどＩ！Ｉｆ
害されなかった。
Ｏ，、Ｈｇ Ｃ１２、ＺｎＳＯ４、Ｆｅ ８０ｓにより
、それぞれ約９３％、約８９％、約８６％、約２９％阻
害された。同濃度ＡｇＮＯ３によっては殆んどＩ！Ｉｆ
害されなかった。
（７）精製方法；本酵素は培養上澄漱からｆｌＩｆ安分
口（４０〜７０％飽和）、ＤＥＡＥ−セファロースカラ
ムクロマトグラフィー（ＫＣＩＯ〜０．５Ｍでリニヤ−
グラジエンｈｉ容出）とセファデックスＧ−２００カラ
ムクロマトグラフイーにより、クロマト的、電気泳動的
に均一まで精製することができる。
口（４０〜７０％飽和）、ＤＥＡＥ−セファロースカラ
ムクロマトグラフィー（ＫＣＩＯ〜０．５Ｍでリニヤ−
グラジエンｈｉ容出）とセファデックスＧ−２００カラ
ムクロマトグラフイーにより、クロマト的、電気泳動的
に均一まで精製することができる。
（８）分子猷；セファデックスＧ−２００ゲル濾ノー法
により測定した分子量は約１２万であった。
により測定した分子量は約１２万であった。
（９）力価測定法；０．ＩＭ）！Ｉス緩衝液に溶解させ
た１％プルラン液（ｐＨ７，０） ０．５瓜りに適値の
酵素を加え、水で金融１耐とし４０℃で反応させる。こ
の条件で１時間に１ｍ９のグルコースに４・１１当する
遠冗力を生成する酵素４６：を１単位とした。
た１％プルラン液（ｐＨ７，０） ０．５瓜りに適値の
酵素を加え、水で金融１耐とし４０℃で反応させる。こ
の条件で１時間に１ｍ９のグルコースに４・１１当する
遠冗力を生成する酵素４６：を１単位とした。
また、本発明において使用される新規な耐熱ＩＴｌ。
プルラナーゼＡ生産ｉ’ｔ′、ｉの菌学的性質は下記に
示す通りである。
示す通りである。
（１）形態的性質；約０，８×約１．３μの桿菌、通π
へ単桿菌あるいは２連状に連なり生育する運動性はな（
、また胞Ｆ形成は認められない。
へ単桿菌あるいは２連状に連なり生育する運動性はな（
、また胞Ｆ形成は認められない。
（２）培養的性質：肉汁寒天では、白色で光沢のある円
形状の集落を形成する。集落の周縁は金縁で、表面隆起
は鎖状を示す。肉汁液体培ｉ１１では、培地全体に混濁
を生成する。
形状の集落を形成する。集落の周縁は金縁で、表面隆起
は鎖状を示す。肉汁液体培ｉ１１では、培地全体に混濁
を生成する。
穿刺培養では、寒天高層の上層、中部、深部ともに糸犬
に生育が認められ、寒天表面にも集落の形成が認められ
る。
に生育が認められ、寒天表面にも集落の形成が認められ
る。
（３）生理的性質
生育温度：約５０℃の温度まで生育するが、最適生ａ温
度は約４３゛Ｃ０ 生育ｐＨ；ｐＨ約５〜約９の範１１６で生ｆ３する。
度は約４３゛Ｃ０ 生育ｐＨ；ｐＨ約５〜約９の範１１６で生ｆ３する。
最適生育ｐＨは７ｆ１１近。
ダラム染色；陰性。
酸素に対する態度；通性嫌気性。
ノｌタラーセ：陽性。
オキシダーゼ；陰性
β−ガラクトシダーゼ；陽性
硝酸塩の還元；陽性
炭水化物の利用； グルコース、アドニトール、Ｌ−ア
ラビノース、エクスリン、イノン 。
ラビノース、エクスリン、イノン 。
トール、マンニトール、Ｌ−ラムノースなどを利用し酸
を生成する。
を生成する。
クエン酸の利用；陽性
マロン酸の利用；陽性
メチルレッド反応：陰１１：
■Ｐ反応；陽性
アルギニンの加水分解；陽性
ゼラチンの液化；陰性
硫化水素の生成；陽性
インドール反応；陰性
リジンの脱炭酸：陽性
オルニチンの脱炭酸；賜１生
ウレアーゼ反応；陽性
フェニールアラニンからのフェニルピルビン酸の生成；
陰性 以！二の菌学的性質について、ｆ３ｅｒｇｅｙ’ｓ １
ｖｌａｎｕａｌ ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙの第１１１ｉ７７（Ｔｈｅ Ｗ
ｉｌｌｉａｔｎｓ ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ ＣＯ，１９７４
年）を参照し、本菌をクレブシ９− ニュー モ＝ ｙ
（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の−
１貞珠と１１；！定力するのが適当と考えた。本１イ）
１は工朶技術院微生物工業技術ωト究所において、ＩΩ
ｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｆ Ｅ ＲＭ
Ｐ ７３８７として寄託されている。
陰性 以！二の菌学的性質について、ｆ３ｅｒｇｅｙ’ｓ １
ｖｌａｎｕａｌ ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙの第１１１ｉ７７（Ｔｈｅ Ｗ
ｉｌｌｉａｔｎｓ ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ ＣＯ，１９７４
年）を参照し、本菌をクレブシ９− ニュー モ＝ ｙ
（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の−
１貞珠と１１；！定力するのが適当と考えた。本１イ）
１は工朶技術院微生物工業技術ωト究所において、ＩΩ
ｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｆ Ｅ ＲＭ
Ｐ ７３８７として寄託されている。
本＋？ｉによる新規な耐熱性プルラナーゼＡを生産する
ためには、窒素源として、ペプトン、肉エキス、カゼイ
ン、コーンステイープ・リカーのような（１゛機窒素源
あるいはし；こ素、硫酸アンモニウム、６１°ｊ酸塩な
どの１１１Ｌ機窒素ｆヒ合物と、炭素源とし′Ｃ、デン
プン、アミロペクチン、デキストリン、マルトース、グ
ルコース、乳糖などを一種または一往以上、そしてこれ
に＋＋ｌｉ足する栄１Ｊ）ｒ’として、リノ盾塩、マグ
ネシウム塩、塩化カリウムと、マンガン塩、カルシウム
塩、鉄塩などの金属塩を含む培地が使用される。
ためには、窒素源として、ペプトン、肉エキス、カゼイ
ン、コーンステイープ・リカーのような（１゛機窒素源
あるいはし；こ素、硫酸アンモニウム、６１°ｊ酸塩な
どの１１１Ｌ機窒素ｆヒ合物と、炭素源とし′Ｃ、デン
プン、アミロペクチン、デキストリン、マルトース、グ
ルコース、乳糖などを一種または一往以上、そしてこれ
に＋＋ｌｉ足する栄１Ｊ）ｒ’として、リノ盾塩、マグ
ネシウム塩、塩化カリウムと、マンガン塩、カルシウム
塩、鉄塩などの金属塩を含む培地が使用される。
培養はｐＨ５〜９、温度２０〜４５°Ｃで、通゛、＋；
買好気的に行われる。
買好気的に行われる。
ン、イソプロパツール、エタノール、メタノールなどの
６機溶剤を加えて酵素を沈にΩ物として収ｆ！Ｊするな
どの手段により、容易に培養物から１１７素を回収する
ことができる。
６機溶剤を加えて酵素を沈にΩ物として収ｆ！Ｊするな
どの手段により、容易に培養物から１１７素を回収する
ことができる。
本発明以前に知られているＡｅｒｏｂａｃｔｅｒ属や１
（ｌｅｂｓｉｅｌｌａ；１の生産するプルラナーゼやイ
ンアミラービなどα−１６−グルコシダーゼは、菌ト（
ζ内に多鼠の酵な而・１熱性プルラナーゼＡは、殆んど
すべて菌体外に生産されるため、培養物からの亥酵素の
回収は容易であり、ニに業的に同酵素を製造する際に商
業的に白゛刊に実施することができる４、Ｍ＆をもつも
のである。また新規な耐熱性プルラナーゼＡは６ｉｊＪ
！Ｌの如く、最適作用ｐＨが約４５〜約７５の広い範囲
にあり、また熱安定性に優れた酵湘であるため、現在、
つ、１１られているデンプンからグルコースを生産する
グルコアミラーゼ、デンプンからマルトースを生産する
植物や細１￥１のβ−アミラーゼなどのエクソ型アミラ
ーゼはもとより、マルトトリオースを４１′、１戊する
バシルス１萬のエンド型またはエクソをのアミラーゼ（
Ｊ清適作用ｐＨ６，０〜６．５、発酵と−Ｅ業、４１巻
、４７７頁（１９８３））、マルトテトラオースを生成
するシュードモナス属のエクソ型α−アミラーゼ（ｊ＆
適佳作用ｐＨ６，５〜８．０ 、Ａｒｃｈ。
（ｌｅｂｓｉｅｌｌａ；１の生産するプルラナーゼやイ
ンアミラービなどα−１６−グルコシダーゼは、菌ト（
ζ内に多鼠の酵な而・１熱性プルラナーゼＡは、殆んど
すべて菌体外に生産されるため、培養物からの亥酵素の
回収は容易であり、ニに業的に同酵素を製造する際に商
業的に白゛刊に実施することができる４、Ｍ＆をもつも
のである。また新規な耐熱性プルラナーゼＡは６ｉｊＪ
！Ｌの如く、最適作用ｐＨが約４５〜約７５の広い範囲
にあり、また熱安定性に優れた酵湘であるため、現在、
つ、１１られているデンプンからグルコースを生産する
グルコアミラーゼ、デンプンからマルトースを生産する
植物や細１￥１のβ−アミラーゼなどのエクソ型アミラ
ーゼはもとより、マルトトリオースを４１′、１戊する
バシルス１萬のエンド型またはエクソをのアミラーゼ（
Ｊ清適作用ｐＨ６，０〜６．５、発酵と−Ｅ業、４１巻
、４７７頁（１９８３））、マルトテトラオースを生成
するシュードモナス属のエクソ型α−アミラーゼ（ｊ＆
適佳作用ｐＨ６，５〜８．０ 、Ａｒｃｈ。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、、１ ４５＋ １
０５ （１９’７ １） など）、マルトテトラオース
ヲ生成するバシルスｌ１Ｊｒｉエンド型α−アミラーゼ
（最適作用ｐ）１５〜８、ＡｒｃｆｔＢｉｏｃｈｅｍ、
Ｂｉｏｐｈｙａ＋ １５５＋ ２９０ （１９７３）ｌ
、マルトヘキサオースを生成するエクゾ型とエン１ｑ型
のα−アミラーゼ（最適１）Ｈ６−８またはＳ、ＯｌＢ
ｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ ４ユ０
． ３３３ （１９７５）及びＡｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、
Ｃｂｅｍ、、 ４６＋ １５３９（１９８２））など、
いずれのアミラーゼとも、それぞれのアミラーゼの最適
条件下で反応をおこなうことかできく・ 更に、新規な耐熱性プルラナーゼＡと各陣エクソ型また
はエンド型アミラーセとの４ｊトｊ旧こよるデンプンの
糖化において、本発明のｆｉ−規な面１熱性プルラナー
ゼＡ 、ｔｌｉ 独でも１分効果を示すが、この酵素の
他に他の倣牛物の生産するα−１，６−グルコシダーゼ
と併用して用いると、−ｂ東顕著な効果を示す。たとえ
ば、本発明の発明者により先に弁明されたバシルス属の
び−１，６−グルコシダーゼ（Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、、 ４０＋ １５１５（１９７６））などの
バンルス属の生ｌ徹するα−１，６−グルコシダーゼと
・ド元明の新規な１副熱性ゾルラナーゼＡをβ−アミラ
ーゼと共にン佼化デンプンに作用させると、バソルス属
α−１，６−ゲルコジダーセや本発明の側熱ｌ生プルラ
ナーゼＡ１それぞれ単独の場合よりもマルトースの収量
を２％前後増収することができる。このことは、本発明
の新規な耐熱性プルラナーゼＡとバシルス属α−１，６
−グルコシダーゼの作用ｌ［５゛異性に差かあることに
よるものと考えられる。
０５ （１９’７ １） など）、マルトテトラオース
ヲ生成するバシルスｌ１Ｊｒｉエンド型α−アミラーゼ
（最適作用ｐ）１５〜８、ＡｒｃｆｔＢｉｏｃｈｅｍ、
Ｂｉｏｐｈｙａ＋ １５５＋ ２９０ （１９７３）ｌ
、マルトヘキサオースを生成するエクゾ型とエン１ｑ型
のα−アミラーゼ（最適１）Ｈ６−８またはＳ、ＯｌＢ
ｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ ４ユ０
． ３３３ （１９７５）及びＡｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、
Ｃｂｅｍ、、 ４６＋ １５３９（１９８２））など、
いずれのアミラーゼとも、それぞれのアミラーゼの最適
条件下で反応をおこなうことかできく・ 更に、新規な耐熱性プルラナーゼＡと各陣エクソ型また
はエンド型アミラーセとの４ｊトｊ旧こよるデンプンの
糖化において、本発明のｆｉ−規な面１熱性プルラナー
ゼＡ 、ｔｌｉ 独でも１分効果を示すが、この酵素の
他に他の倣牛物の生産するα−１，６−グルコシダーゼ
と併用して用いると、−ｂ東顕著な効果を示す。たとえ
ば、本発明の発明者により先に弁明されたバシルス属の
び−１，６−グルコシダーゼ（Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、、 ４０＋ １５１５（１９７６））などの
バンルス属の生ｌ徹するα−１，６−グルコシダーゼと
・ド元明の新規な１副熱性ゾルラナーゼＡをβ−アミラ
ーゼと共にン佼化デンプンに作用させると、バソルス属
α−１，６−ゲルコジダーセや本発明の側熱ｌ生プルラ
ナーゼＡ１それぞれ単独の場合よりもマルトースの収量
を２％前後増収することができる。このことは、本発明
の新規な耐熱性プルラナーゼＡとバシルス属α−１，６
−グルコシダーゼの作用ｌ［５゛異性に差かあることに
よるものと考えられる。
以下に、実施例により本発明の詳細な説明する。
実施例 １
よりｆＱ’ １２Ｍ 後、クレブシラ・ニューモニア（
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） Ｆ Ｅ
ＲＭ Ｐ −７３８７を接種し、３０℃で２１Ｊ間撮
、＾４培去した。培亘後、退心分離機により除菌し、１
；Ｊられた」−澄ｖ１ｋについて生産された打１五見な
イｉ１１・１梨５″ｉ生プルラナーゼＡｊ古１４（、を
ｂ夷ノビしＩこｌ＋’ｉ二１−、培地ｍｌ当り５．６単
位であった。
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） Ｆ Ｅ
ＲＭ Ｐ −７３８７を接種し、３０℃で２１Ｊ間撮
、＾４培去した。培亘後、退心分離機により除菌し、１
；Ｊられた」−澄ｖ１ｋについて生産された打１五見な
イｉ１１・１梨５″ｉ生プルラナーゼＡｊ古１４（、を
ｂ夷ノビしＩこｌ＋’ｉ二１−、培地ｍｌ当り５．６単
位であった。
実施例 ２
実施例１で使用したとｉに ｅ；１１ｆ成の縞）１尼３
１そ５を容ジャーファーメンタ−に入れ、′ｔｌｌ＋法
により設＋ＶＪ ｆ＆ 、クレブシン・ニューモニア１
？ＥＲＭＰ −７３８７を液イ１ｉｉＬ、通気’ｔｋ、
１１７１ｍ１．回ｋ ｉ ２５０ｒｐｎｌで培養した
。Ｊ７′’Ｊｋ区、遠心ｌｌＪ扉桟により除菌し、いて
、アミラーゼと尋υ：・月１してデンプンのＪ、ＩＢ
ｆ巳を行った。 し ＤＥ１．４の液化デンプン液（固形１４！Ｉとして【９
）に、市販の大（ｉ、β−アミラーゼ３００１４’１位
（Ａｇｒｉｃ。
１そ５を容ジャーファーメンタ−に入れ、′ｔｌｌ＋法
により設＋ＶＪ ｆ＆ 、クレブシン・ニューモニア１
？ＥＲＭＰ −７３８７を液イ１ｉｉＬ、通気’ｔｋ、
１１７１ｍ１．回ｋ ｉ ２５０ｒｐｎｌで培養した
。Ｊ７′’Ｊｋ区、遠心ｌｌＪ扉桟により除菌し、いて
、アミラーゼと尋υ：・月１してデンプンのＪ、ＩＢ
ｆ巳を行った。 し ＤＥ１．４の液化デンプン液（固形１４！Ｉとして【９
）に、市販の大（ｉ、β−アミラーゼ３００１４’１位
（Ａｇｒｉｃ。
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、 ４０． １５１５ （１９７
６）の＋＋ｉ’Ｊ ｋ ；、１：によった）と上記方法
により１．Ｈたクレフシラ・ニューモニアのノＪ７ ｉ
３２な１ＡＩＪ熱１生ブルラナー−ビをＩまたは２単位
を加え、ｐＨ５，０，５５℃で反応させた。
６）の＋＋ｉ’Ｊ ｋ ；、１：によった）と上記方法
により１．Ｈたクレフシラ・ニューモニアのノＪ７ ｉ
３２な１ＡＩＪ熱１生ブルラナー−ビをＩまたは２単位
を加え、ｐＨ５，０，５５℃で反応させた。
得られた糖化物の糖は高速液体クロマトグラフを去によ
りｒ’（７ｉ＋ｊ Ｌ／た。晧果は第１衣に示す通りで
あった。
りｒ’（７ｉ＋ｊ Ｌ／た。晧果は第１衣に示す通りで
あった。
実施例 ３
Ｄ Ｅ ７．７の液化デンプン）夜に、市販のグルコア
ミラーゼと実施例２で調製したｆＪｉ規な耐熱性プルラ
ナーゼｌ ｉｉｉ位加え、固形分濃度３０５＋５、全容
１１１１０ａＬとして、ｐＨ５，Ｑ、ｉｌ！ｌｉ’Ｌ度
６０℃で糖化した。
ミラーゼと実施例２で調製したｆＪｉ規な耐熱性プルラ
ナーゼｌ ｉｉｉ位加え、固形分濃度３０５＋５、全容
１１１１０ａＬとして、ｐＨ５，Ｑ、ｉｌ！ｌｉ’Ｌ度
６０℃で糖化した。
扛：口１′、液の糖４Ｘ１１成の分析は高速液体クロマ
トグラフ；−１：によった。得られた１、４４ 、ＩＪ
Ｊを第２表に示す。
トグラフ；−１：によった。得られた１、４４ 、ＩＪ
Ｊを第２表に示す。
＜’ｖ：／ｌ）ら明らかなように、ｔＲ規な耐熱性プル
ラナーゼＡの添加によりグルコースの収１１ｆｌが増加
した。
ラナーゼＡの添加によりグルコースの収１１ｆｌが増加
した。
ここで０２、Ｇ３はそれぞれグルコースの２耽体、３叩
：（本を示す。
：（本を示す。
実ｊイ１例 ４
た新規なｄ１ｉ１熱性プルラナーゼＡ１．５単位を加え
、／１（で全ｆａ： １０ ｍｌとし、ｐＨ７，０、ｉ
Ｌｉ ［：５０℃で糖化した。わ１１１仕？ｆ＋ｊ！７
）、１１，１１組成を分析した結果は第３直に示す通り
であった。
、／１（で全ｆａ： １０ ｍｌとし、ｐＨ７，０、ｉ
Ｌｉ ［：５０℃で糖化した。わ１１１仕？ｆ＋ｊ！７
）、１１，１１組成を分析した結果は第３直に示す通り
であった。
ノくから明らかなように、新列６なｌ１ｌｌｆ？Ｉシ１
生ブ”ルラナーゼＡを添加ｖることにより、マルトト１
）Ａ−−スの収量が杆しく増加した。
生ブ”ルラナーゼＡを添加ｖることにより、マルトト１
）Ａ−−スの収量が杆しく増加した。
実施例 ５
：４＋ｊ公昭５３ ５７４９）そ４ｔぞｔＬ ３００
ＪｇＱと３０Ｉｔ ｌ’４ （、Ｌｉｔ 位）定ｊＭ
ハ１ｊｉｊ 記Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
、±シ１５１５ （１９７６））及びこ４ｔ＋こ実１Ｊ
也俳１２て１Ａ製したＷｂ現な耐熱性プルラナーゼＡ
；ｃ ０．５また（ま１【１１位加え、ｐＨ６〜６．５
、温度５０”Ｃ−ｒ４４１寺１昌ＩＨＮ！化した。ｔｌ
Ｍ ！を液の糠層【成を分析したｘ譜果（よ５昏４表に
示す通りであった。
ＪｇＱと３０Ｉｔ ｌ’４ （、Ｌｉｔ 位）定ｊＭ
ハ１ｊｉｊ 記Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、
、±シ１５１５ （１９７６））及びこ４ｔ＋こ実１Ｊ
也俳１２て１Ａ製したＷｂ現な耐熱性プルラナーゼＡ
；ｃ ０．５また（ま１【１１位加え、ｐＨ６〜６．５
、温度５０”Ｃ−ｒ４４１寺１昌ＩＨＮ！化した。ｔｌ
Ｍ ！を液の糠層【成を分析したｘ譜果（よ５昏４表に
示す通りであった。
表から明ら力）なように、ノくシルレス属のプルラナー
ゼに加えて、本発明の４熱・江ゾルラナーービＡを１単
位追加して加えることにより、その他の成分が少なくな
り、マルトースの取量は２９％増加した。
ゼに加えて、本発明の４熱・江ゾルラナーービＡを１単
位追加して加えることにより、その他の成分が少なくな
り、マルトースの取量は２９％増加した。
第１図（ａ）と（ｂ）、第２図（ａ）と（ｂ）は、それ
ぞれクレブシラ・ニユーモニアの生産する新規な耐熱性
プルラナーゼの最適作用ｐＨ、最適作用温度、熱安定性
をｐＨ安定性を示している。 特許出ｊ頭人 」二朶技術院長 川 １１１ 缶 ＤＩ
Ｓ實１１働ＣＬ） ５６７８ ？）（ 庭た湿層（“Ｃ）
ぞれクレブシラ・ニユーモニアの生産する新規な耐熱性
プルラナーゼの最適作用ｐＨ、最適作用温度、熱安定性
をｐＨ安定性を示している。 特許出ｊ頭人 」二朶技術院長 川 １１１ 缶 ＤＩ
Ｓ實１１働ＣＬ） ５６７８ ？）（ 庭た湿層（“Ｃ）
Claims (1)
- クレブシラ・ニユーモニアの生産する新規な耐熱性プル
ラナーセＡをエクソ型またはエンド型のアミラーゼと併
用してデンプンまたはその派生物に作用させることを特
徴とするデンプンの糖化法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59043369A JPS60186295A (ja) | 1984-03-07 | 1984-03-07 | デンプンの糖化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59043369A JPS60186295A (ja) | 1984-03-07 | 1984-03-07 | デンプンの糖化法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60186295A true JPS60186295A (ja) | 1985-09-21 |
| JPH0429355B2 JPH0429355B2 (ja) | 1992-05-18 |
Family
ID=12661925
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59043369A Granted JPS60186295A (ja) | 1984-03-07 | 1984-03-07 | デンプンの糖化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60186295A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0554497B2 (ja) * | 1985-03-11 | 1993-08-12 | Mitsubishi Chem Ind |
-
1984
- 1984-03-07 JP JP59043369A patent/JPS60186295A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0554497B2 (ja) * | 1985-03-11 | 1993-08-12 | Mitsubishi Chem Ind |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0429355B2 (ja) | 1992-05-18 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |