JPH03251173A - マルトトリオース生成アミラーゼ、その製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は澱粉からマルトトリオースを主成分として生成
する新規なマルトトリオース生成アミラーゼ、その製造
法及びこれを用いたマルトトリオース含有糖液の製造法
に関するものである。

〔従来技術１ マルトトリオースは澱粉を酵素又は酸で部分分解するこ
とにより得られるグルコース３分子がα−１，４−グル
コシド結合で結合した糖である。マルトトリオースの甘
味の強さは砂糖の１７％程度であるが、まろやかな甘味
があるため、食品の低甘味剤として利用される。又、吸
湿性、保水性が大きいことから、食品の水分を保持し、
乾燥の防止、砂糖の結晶析出防止、澱粉の老化防止剤と
しての利用ができる。さらに、マルトトリオースはグル
コースやマルトースより熱安定性に優れているなど、食
品加工上の多くの優れた特性のあることが、最近明らか
になった。

しかしながら、未だ工業的に確立されたマルトトリオー
ス製造技術がないため、現在、マルトース製造時の副産
物（澱粉をβ−アミラーゼとプルラナーゼで糖化したマ
ルトース液をイオン交換樹脂等でマルトースを分離した
残りのマルトトリオースを約４５％含む糖液）が市販さ
れているにすぎず、この方法ではマルトトリオースの供
給に限りがある。

澱粉からマルトトリオースを生成する酵素としては、こ
れまでストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）の生産するＮ−Ａ４６
８酵素〔特公昭５７−６９１５．　　澱粉科学、２３巻
３号、１７５〜１８１頁（１９７９）　］及びバシルス
・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）
のアミラーゼＧ３　（特公昭５９−３７９５７、特公昭
６Ｏ−１５３１５）が知られている。　しかし、これら
の酵素は微生物による酵素の生産性が低く、又酵素が工
業的使用に耐える性質を有していないなどの理由から、
未だ工業的には製造されていない。

〔問題を解決するための手段〕

本発明者らは、工業的に澱粉又はその派生物からマルト
トリオースを製造する技術を確立することを目的として
、微生物の探索を行ってきた結果、土壌中から分離し、
ミクロバクテリウム属と同定した細菌が特殊なアミラー
ゼを著量生産することを認めた。この特殊なアミラーゼ
は澱粉を加水分解して、５０〜７０％のマルトトリオー
スを生成することが認められた。このように著量のマル
トトリオースを生成するアミラーゼはこれまで知られて
おらず、又ミクロバクテリウム属菌からマルトトリオー
ス生成アミラーゼを生産することについても、これまで
知られていない０本発明はこのような知見に基づいてな
されたものであり、本発明者らは、マルトトリオース生
成アミラーゼを製造、精製し、更にその用途を確立して
本発明を完成した。

以下、本発明のマルトトリオース生成アミラーゼの理化
学的性質について述べる。

（ａ）作用及び基質特異性 アミロース、アミロペクチン、　グリコーゲン、澱粉及
びこれらの派生物のα−１，４−グルコシド結合からな
るグルカンをエンド型で分解してマルトトリオースを主
成分とする糖液を生成する。液化澱粉からのマルトトリ
オースの生成率は糖化条件即ち、基質濃度、澱粉液化度
（ＤＥ）、枝切り酵素の有無、ｐＨ１温度などによって
も異なるが、５０〜７０％に達する９本酵素はプルラン
には実質的に作用しない。

（ｂ）作用ｐＨ及び至適ｐＨ ｐＨ５〜９の広い範囲で作用する。至適ｐＨは６．５付
近に認められた（０．０５Ｍリン酸緩衝液又は酢酸緩衝
液の下で、４０℃で３０分反応）、その結果を第１図に
示す。

（ｃ）作用温度及び至適温度 約６０℃まで作用する。至適温度は約５０℃に認められ
た［１％可溶性澱粉、０．０５Ｍ　トリス緩衝液（ｐＨ
７，０）で３０分間反応］、その結果を第２図に示す。

（ｄ）熱安定性 ０．０５Ｍ　）リス緩衝液（ｐＨ７，０）で、５０℃、
　１０分間加熱したとき約１０％失活し、６０℃、１０
分間の加熱で殆ど失活した。但し、カルシウムイオンの
存在下では安定性が向上する。その結果を第３図に示す
。

（ｅ）　ｐＨ安定性 ０．１Ｍ緩衝液（酢酸又はリン酸緩衝液）の下で、２５
℃で３時間放置後、残存活性を測定した。その結果、ｐ
Ｈ６〜９の範囲で安定であった。その結果を第４図に示
す。

（ｆ）安定化 カルシウムイオンの存在で熱安定性の増加が認められた
（第３図を参照）。

（ｇ）阻害剖 ５　Ｘ　１０−３ＭのＭｎＳＯ４，Ｃｕ５Ｏ，、ＨｇＣ
ｌ２．　　ＦｅＣｌ３゜Ｚ口Ｓｏ４．　　ＡｌＣｌ３で
それぞれ約８７％、約９７％、約９８％。

約１００％、約ｉｏｏ％、約１００％阻害された。又、
ｌＸｌ０−”Ｍ及び２　Ｘ　１０−３Ｍのモノヨード酢
酸により、それぞれ８％と１９％阻害された。

（ｈ）分子量 ゲルろ過法により測定した分子量は、約４０，０００で
あった。

以上の理化学的性質のうち、その主な性質について、特
公昭５７−６９１５に報告されているＮ−Ａ４６８酵素
（以下Ｎ−Ａ４６８と示す、）及び特公昭６０−１５３
１５に報告されているアミラーゼＧ３　（以下、Ａ−Ｇ
３と示す、）の性質を比較し、その結果を第１表に示す
。

尚、活性測定は下記の方法で行った。

０、１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解した２％可
溶性澱粉０．５ｍ　ｌに、適量の酵素を加え、全量１．
０ｍｌで、４０℃で反応させ、生成するマルトトリオー
ス及びその他の還元糖をソモギー・ネルラン法で定量す
る。この条件で、　１分間に１マイクロモルのグルコー
スに相当する還元糖を生成する酵素量を１単位とする。

（以下余白） 第 表 Ｎ−Ａ４６８は、β−アミラーゼと同様に澱粉をマルト
トリオース単位でエキソ型で分解するアミラーゼであり
、Ａ−Ｇ３及び本発明の酵素は分解生成糖がα−糖であ
ることからα−アミラーゼの一種であり、澱粉を最終的
にはヨード反応が殆ど消失するまで、主としてマルトト
リオースを含む分解物に分解するアミラーゼである。さ
らにＮ−Ａ４６８はカルシウムイオンの存在で安定化に
影響されないが、Ａ−Ｇ３及び本発明の酵素は熱安定性
が向上する。また、Ａ−Ｇ３と本発明の酵素を比較した
とき、至適ｐＨ１安定ｐＨ及び至適温度等は類似してい
るが、安定温度が多少異なり、分子量においてはＡ−Ｇ
３が約２５，０００に対して本発明の酵素は約４０．０
００と全く異なっている０以上により、本発明の酵素は
従来知られている酵素とは全く異なる新規なマルトオリ
オース生成アミラーゼである。

本発明のマルトトリオース生成アミラーゼを生産する微
生物としては、以下に例示するミクロバクテリウム・エ
スピーＡＭ−９５８１（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｓｐ、　ＡＭ−９５８１）または、その変異株などが本
発明に有利に用いることができる。

ミクロバクテリウム・エスピーＡＭ−９５８１（Ｍｉｃ
ｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｐ、　ＡＭ−９５８１）は
新たに土壌から発見、分離されたものであり、その菌学
的性質は下記の通りである。尚１本菌は微工研菌寄第１
１３１５号として、工業技術院微生物工業技術研究所所
に寄託されている。

（１）形態： （２）ダラム染色： （３）胞子二 （４）運動性： （５）鞭毛： （６）オキシダーゼ： （７）カタラーゼ； （８）ＯＦテスト： （９）色素： （ｌＯ）遊離酸素の要求性＝ （１１）全菌体の加水分 解物中のｍｅｓｏ　− ジアミノピメリン酸＝ （１２）細胞壁のジアミノ酸＝ （１３）Ｖ　Ｐ反応： （１４）クエン酸塩利用 （シモンズ）： 細く長 （約ｌＯμ×４０μ） →短稈−球菌 陽性 ＋ 周毛 ＋ ＋ ０　（ｗｅａｋ） 黄色（不溶性） 偏性好気性 リジン （１５）硝酸塩還元： （１６）澱粉分解： （１７）ゼラチン分解： （１８）リドマスミルク反応・ （１９）ウレアーゼ： （２０）ホスファターゼ： （２１）硫化水素産生： （２２）アルギニン分解： （２３）耐熱性 ６３℃、３０分間・ ７２℃、　　１５分間： （２４）食塩の耐性 ４％ニ ア％： １０％： （２５）至適温度（℃）： （２６）発育温度（℃）： （２７）ｐＨ９，２液体培地の発育性：（２８）ｐＨ５
，０液体培地の発育性＝（２９）インドール産生： ＋ ３５〜４１ １１〜４６ ＋ （３０）エスクリン分解 （３１）フェニルアラニン 脱アミノ反応・ （３２）メチルレッド反応： （３３）チロシン分解： （３４）レシチナーゼ反応： （３５）ｓａｂｏｕｒａｕｄ−ｄｅｘｔｒｏｓｅ発育：
（３６）クエン酸培地における アルカリ産生： （３７）アルカリ性嫌気下での 硝酸塩からのガス： （３８）Ｖ　Ｐ培地の最終ｐＨ：　　　　５．２（３９
）細胞直径：０，４〜０．８μ （４０）芽胞： （４１）ブドウ糖からのガス： （４２）発育 ＭａｃＣｏｎｋｅｙ： Ｓ　Ｓ： ＴＳＩ（酸、斜面／高層）　：　　＋　（ｗｅａｋ）／
−（４３）ジオキシアセトン産生： （４４）糖から酸の産生 イヌリン： シュークロス：　　　　　＋ トレハロース：　　　　　＋ グリセロール：　　　　　＋ ラフィノース： グルコース：　　　　　　＋ フラクトース：　　　　　＋ ガラクトース：　　　　　＋ マンノース：　　　　　　＋ マルトース：　　　　　　＋ セロビオース：　　　　　＋ イノシトール： ソルボース： ラムノースＨ＋（ｗｅａｋ） ラクトース：　　　　　　　＋　（ｓｌｏｗ）マンニト
ール： 以上の菌学的性質にライて、Ｂｅｒｇｅｙ　ｓ　Ｍａｎ
ｎｕａｌｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ、第２巻（１９８６）を参照し、その性状を
比較したところ、細胞壁にリジン、グリシンを認め、メ
ソジアミノピメリン酸は認めないことから、本菌をミク
ロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に
属する菌と認めた６本菌はその諸性状から最もミクロバ
クテリウム・インペリアレに近いが、下記の点で当該菌
と一致しない （１）黄色素（不溶性）を産生ずる。

（２）グリセロール、ラムノースから酸を産生する。

（３）硝酸塩を還元する。

（４）アルギニンを分解しない。

本菌株は最適発育温度が３５〜４１℃にあり、かつ最高
発育温度が４５〜４６℃を示すことは最新の上記のＢｅ
ｒｇｅｙ　ｓ　Ｍａｎｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａ
ｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、第２巻（１９８６）
をはじめ、それ以降現在に至るまでのＩＪＳＢリスト上
のミクロバクテリウム属菌には記載されていない。

以上により、本菌株を新菌株と判定し、ミクロバクテリ
ウム・エスピーＡＭ−９５８１（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ　ｓｐ、　ＡＭ−９５８１）　　と命名した。

本菌を培養して、マルトトリオース生成アミラーゼを生
産するには、窒素源として、肉エキ入　ペプトン、コー
ンステイープリカー、カゼインなど、通常、微生物の培
養に使用される有機窒素源、及び塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウムなどの無機窒素源が使用される。又、炭
素源としては、澱粉、液化澱粉、デキストリン、マルト
−人　グルコ−人　シュークロースなどが使用される。

そしてこれに補足する培地成分としてリン酸塩、マグネ
シウム塩、銅塩など各種金属塩が使用される。

培養は、ｐＨ５〜９、好ましくはｐＨ６〜８、温度２５
〜５０℃、好ましくは３０℃で２〜６日程度培養される
。

マルトトリオース生成アミラーゼは菌体外に生産される
酵素であるので、培養後、ろ過又は遠心分離により除菌
し、上澄液を回収し、濃縮する。

必要により、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウムなどに
よる塩析によるか、又はアセトン、イソプロパツール、
エタノールなどの有機溶媒を加え酵素を沈澱物として回
収し、乾燥保存する。

本酵素は通常の酵素の精製方法により、電気泳動的に単
一まで精製できる。例えば、培養上澄から、硫酸アンモ
ニウム塩析（〜４０％飽和）、ＤＥＡＥ＝セファロ−人
　ＤＥＡＥ−セファデックス　ＤＥＡＥ−トヨバール等
のイオン交換クロマトグラフィーおよびバイオゲル、セ
ファデックス、ＴＳＫゲル等によるゲルろ過により精製
することができる。

本酵素を用い澱粉からのマルトトリオースの製造は以下
のようにして行う。

澱粉としては、通常、　トウモロコシ澱粉、バレイショ
澱粉などが使用され、これをバシルス属細菌の生産する
澱粉液化酵素（α−アミラーゼ）を用い、常法により液
化する（ＤＥ　２〜１日程度）、該液化澱粉を、通常２
０〜４０％濃度、ｐＨ６〜８、温度５０〜６０℃で、該
マルトトリオース生成アミラーゼを用いて糖化する６本
酵素による糖化において、プルラナーゼやイソアミラー
ゼなどの枝切り酵素を存在させると、糖化が促進され、
かつマルトトリオースの収量が増加する。

以下、実施例により本発明の詳細な説明する。

実施例１ コーンステイープリカー１０％、可溶性澱粉２％、Ｋ２
ＨＰＯ４０，２％、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，１％、Ｃ
ａＣｌ、、　０．０１％、ＮａＮ０．０．１％、ツイー
ン４００．１％からなる培地（ｐＨ７，０）　４０ｍ１
を２００ｍ　ｌ容三角フラスコニ入れ、常法により殺菌
後、　ミクロバクテリウム・エスピーＡＭ−９５８１（
微工研菌寄託第１１３１５号）を接種し、３０℃で３日
間振盪培養した。培養後、遠心分離機で除菌し、得られ
た上澄液について、生産されたマルトトリオース生成ア
ミラーゼを測定した結果、培地１ｍｌ当り５単位であっ
た。

実施例２ 実施例１において、培地として、魚肉エキス３％、Ｋ、
ＨＰｏ、　０．３％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，１％、
ＣａＣ１２０，０１％を含む培地を使用し、　ミクロバ
クテリウム・エスピーＡＭ−９５８１（微工研菌寄託第
１１３１５号）を接種し、３０℃で３日間振盪培養した
。培養後、遠心分離した上澄液について、生産されたマ
ルトトリオース生成アミラーゼを測定した結果、培地１
１当り８単位であった。この上澄液５９を限外７５ｇを
加えて溶かし、５℃で一夜放置した。遠心分離して沈澱
物を得た。得られた沈澱物に少量の水を加え遠心分離し
て、上澄液を約５０ｍ１得た。これをＴＳＫ−ＧＥＬ　
トヨバールＨＷ−４０Ｅのカラム（直径２．４ｃｍＸ長
さ１１０ｃｍ）に負荷し、ゲルろ過で脱塩した。活性化
区分をＤＥＡＥ−）ヨバールカラム（直径２．３ｃｍＸ
長さ２１ｃｍ）に吸着させて、０．０２Ｍ　トリス・塩
酸緩衝液（ｐＨ７，０）で洗浄し、同緩衝液を含む塩化
カリウム溶液でＯ→０．５Ｍまでリニヤグラジェントに
より溶出した。このＤＥＡＥ−トヨバールクロマトグラ
フィーの活性画分を濃縮して５ｍｌにし、ＴＳＫＧＥＬ
トヨバールＨＷ６５Ｆのカラム（直径２．４ｃｍ　Ｘ長
さ１１０ｃｍ）にてゲルろ過クロマトグラフィーを行い
、ディスク電気泳動的にも、ＨＰＬＣでも単一な酵素を
得ることができた。この酵素をＧ２０００ＳＷＸＬカラ
ム（ＴＯＳＯ製）を用いてＨＰＬＣで分子量を推定する
と約４０、０００であった。精製過程の液量、活性及び
回収率等を第２表に示す。

（以下余白） 第２表 実施例３ 実施例２で得られた酵素を用いてアミロース（ＤＰ＝約
１７）、アミロペクチン、可溶性澱粉等を基質として反
応させ、分解物の糖組成をＨＰＬＣで調べた０反応条件
は基質濃度　２．５％、酵素量２単位／ｇ基質、反応温
度５５℃、反応ｐＨ７，０（５ｍＭＣａＣ１２を含む５
ｍＭ−トリス・塩酸緩衝液）とした。

その結果、アミロースは２４時間でほぼ完全に分解され
て６４以上のオリゴ糖やリミットデキストリンはなく、
その糖組成はＧ１が５．５％、Ｇ２が２６．２％、Ｇ３
が６８．３％であり、反応時間を４８−９６時間として
もその糖組成に変化はなかった。

アミロペクチン（トウモロコシ・シグマ製）や可溶性澱
粉（和光紬薬製）ではリミットデキストリンが残り、完
全には分解できなかった。アミロペクチンの４８時間後
の糖組成はＧ１が１．７％、Ｇ２が９．９％、Ｇ３が３
６．２％、可溶性澱粉の４８時間後の糖組成はＧ１が２
．２％、Ｇ２が１１．６％、Ｇ３が４０．８％であった
。また、これらの糖化反応のときにプルラナーゼ（人好
製薬製）を５　ｕ／ｇ添加して反応させると、２４時間
でアミロースの場合と同様にほぼ完全に基質は分解され
た。このときの糖組成はアミロペクチンではＧｌが５．
６％、Ｇ２が２６．４％、Ｇ３が６８．０％、可溶性澱
粉ではＧ１が５．３％、Ｇ２が２５．５％、Ｇ３が６９
．２％であった。

この結果より、マルトトリオース生成アミラーゼはアミ
ロース、アミロペクチン、澱粉などのα−１，４−グル
コシド結合を分解するがα−１，６−グルコシド結合は
分解できない、従って、α−１，６−グルコシド結合を
分解できるプルラナーゼや枝切り酵素を添加して糖化す
れば澱粉はほぼ完全に分解されてＧ３含量が６０〜７０
％でがつりミツトデキストリンを含まない糖化液が得ら
れる。

実施例４ ポテト澱粉をバシルス・ズブチリスのα−アミラーゼを
用いて液化した。ＤＥ４．２の液化澱粉を使用し、糖化
試験を行った。

実施例１で調製したマルトトリオース生成アミラーゼを
、上記の液化澱粉に固形分当り１、２又は５単位を添加
し、　ＩＸＩ叶２ＭのＣａＣｌ２の存在下、２０％濃度
（ｗ／ｗ％）、ｐ）１７、温度５０”Ｃで反応を行った
０反応後４８時間目及び７２時間目の糖化液の糖組成を
高速液体クロマトグラフィーにより定量した結果は第３
表に示す通りであった。

（以下余白） 第　　３　　表 表から明らかなように、液化澱粉固形分１ｇ当り５単位
を使用したとき、糖化７２時間目において、マルトトリ
オース約５０．６％、マルトース約１４．８％、グルコ
ース約３．６％、Ｇ４およびその他の糖３１．０％を含
む糖化液が得られた。

実施例５ ＤＥ４．２５の液化澱粉１ｇ当り５単位の酵素を用い、
実施例３と同様にして、反応温度をそれぞれ（資）。

５．６０℃で糖化した。得られた結果を第４表に示第４
表 第５表 表から明らかなように、５０℃よりも５５℃で反応する
方が、速くマルトトリオースを生成し、約５２％のマル
トトリオースを含む糖液を得ることができた。

実施例６ 実施例４において、基質としてＤＥ　４．２５の液化澱
粉を、それぞれ５．　１０．　１５．　２０及び３０％
の濃度（ｗ／ｗ％）の下、酵素を液化澱粉固形分当り５
単位を加え、ｐＨ７、温度５０℃で７２時間糖化した。

得られた糖組成を第５表に示す。

表から明らかなように、高い基質濃度で反応させるほど
、グルコース含量の少ない、又マルトース含量の少ない
糖化液が得られた。そして３０％のような高い基質濃度
の下でもマルトトリオース含量の高い糖化液が得られた
。

実施例７ 本実施例においては、本酵素による液化澱粉糖化におい
て、プルラナーゼを存在させて糖化したときの結果につ
いて示す。

実施例４において、基質としてＤＥ　２．３８．　４．
２５゜５．８１．　８．０５及び１２．６の液化澱粉を
使用し、各基質濃度２０％の下、酵素を各基質１ｇ当り
５単位加え。

ｐＨ７、温度５０℃で、４８時間糖化した。得られた結
果を第６表に示す。

第６表 マルトトリオース生成アミラーゼ１単位（基質１ｇ当り
５単位）、市販バシルス属プルラナーゼ（人好製薬製）
を基質１ｇ当り、　■又は５単位加え、全量を水で１ｍ
ｌとし、ｐＨ７、温度５０℃で４８時間糖化した。糖化
物の糖組成を第７表に示す。

第７表 表から明らかなように、ＤＥ２．３８〜１２．６の範囲
のいずれの液化澱粉を使用した場合も、約５０％の高い
含量のマルトトリオース糖液が得られた。

実施例７ 本実施例においては、本酵素による液化澱粉糖化におい
て、プルラナーゼを存在させて糖化した結果について記
載する。

実施例４で使用したＤＥ　　４．２５の液化澱粉各２０
０■、プルラナーゼを存在させると糖化反応が促進され
、表から明らかなように、プルラナーゼを澱粉１ｇ当り
５単位添加したとき、無添加に比べ約１２％高い、マル
トトリオース含量が６３％の糖化液が得られた。

なお、プルラナーゼ活性は、　１％プルランの下、ｐＨ
５，０、温度４０℃で反応を行い、　１分間に１マイク
ロモルのグルコースに相当する還元力を生成する酵素を
１単位とした。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図、第３図及び第４図は、各々本発明のマ
ルトトリオース生成アミラーゼの至適ｐＨ１至適温度、
熱安定性及び［）Ｈ安定性を示すものである。尚、第３
図において、−・−はＣａＣｌ２存在下での安定性を示
すものである。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有するマルトトリオース生
   成アミラーゼ。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトトリオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよび澱粉
   に作用し、プルランには実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、３０分反応でｐＨ６．５付近 （ｄ）至適温度 ｐＨ７．０、３０分反応で５０℃付近 （ｅ）熱安定性 ｐＨ７．０、１０分間で、４０℃付近まで、但しカルシ
   ウムイオンの存在下では、５０℃で９０％の活性が残存
   する。 （ｆ）ｐＨ安定性 ２５℃、３時間でｐＨ６乃至９付近 （ｇ）安定・阻害 カルシウムイオンで熱安定性が向上する。 マンガンイオン、銅イオン、水銀イオン、鉄イオン、亜
   鉛イオン及びアルミニウムイオンで実質的に阻害される
   。 （ｈ）分子量 ゲルろ過法により、約４０，０００。
2. （２）ミクロバクテリウム属に属し、マルトトリオース
   生成アミラーゼを生産する微生物を培養し、マルトトリ
   オース生成アミラーゼを産生せしめ、これを採取するこ
   と特徴とするマルトトリオース生成アミラーゼの製造法
   。
3. （３）澱粉又はその派生物に下記の理化学的性質を有す
   るマルトトリオース生成アミラーゼを作用せしめ、得ら
   れるマルトトリオース含有糖液を採取することを特徴と
   するマルトトリオース含有糖液の製造法。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトトリオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよび澱粉
   に作用し、プルランには実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、３０分反応でｐＨ６．５付近 （ｄ）至適温度 ｐＨ７．０、３０分反応で５０℃付近 （ｅ）熱安定性 ｐＨ７．０、１０分間で、４０℃付近まで、但しカルシ
   ウムイオンの存在下では、５０℃で９０％の活性が残存
   する。 （ｆ）ｐＨ安定性 ２５℃、３時間でｐＨ６乃至９付近 （ｇ）安定・阻害 カルシウムイオンで熱安定性が向上する。 マンガンイオン、銅イオン、水銀イオン、鉄イオン、亜
   鉛イオン及びアルミニウムイオンで実質的に阻害される
   。 （ｈ）分子量 ゲルろ過法により、約４０，０００。
4. （４）澱粉又はその派生物に少なくとも下記の理化学的
   性質を有するマルトトリオース生成アミラーゼおよび枝
   切り酵素を作用せしめ、得られるマルトトリオース含有
   糖液を採取することを特徴とするマルトトリオース含有
   糖液の製造法。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトトリオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよび澱粉
   に作用し、プルランには実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、３０分反応でｐＨ６．５付近 （ｄ）至適温度 ｐＨ７．０、３０分反応で５０℃付近 （ｅ）熱安定性 ｐＨ７．０、１０分間で、４０℃付近まで、但しカルシ
   ウムイオンの存在下では、５０℃で９０％の活性が残存
   する。 （ｆ）ｐＨ安定性 ２５℃、３時間でｐＨ６乃至９付近 （ｇ）安定・阻害 カルシウムイオンで熱安定性が向上する。 マンガンイオン、銅イオン、水銀イオン、鉄イオン、亜
   鉛イオン及びアルミニウムイオンで実質的に阻害される
   。 （ｈ）分子量 ゲルろ過法により、約４０，０００。