JPH0155877B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0155877B2 JPH0155877B2 JP60143518A JP14351885A JPH0155877B2 JP H0155877 B2 JPH0155877 B2 JP H0155877B2 JP 60143518 A JP60143518 A JP 60143518A JP 14351885 A JP14351885 A JP 14351885A JP H0155877 B2 JPH0155877 B2 JP H0155877B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amylase
- starch
- enzyme
- maltotetraose
- produced
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims description 20
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims description 20
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims description 20
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 19
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 24
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 24
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 22
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 22
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 22
- LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N maltotetraose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N 0.000 description 14
- LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N UNPD55895 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N malto-tetraose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 6
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 4
- 241000589614 Pseudomonas stutzeri Species 0.000 description 4
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 4
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 4
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000310 Alpha glucan Polymers 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 2
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical class OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBBFYZOJHSYQMW-LGDQNDJISA-N (2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O BBBFYZOJHSYQMW-LGDQNDJISA-N 0.000 description 1
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710134784 Agnoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241001037822 Bacillus bacterium Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010028688 Isoamylase Proteins 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N UNPD130147 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(OC4C(OC(O)C(O)C4O)CO)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N alpha-maltohexaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 150000004688 heptahydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N malto-hexaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N malto-pentaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N maltopentaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- KELXKDDAALYTDI-BTVCFUMJSA-N nitric acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound O[N+]([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O KELXKDDAALYTDI-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002926 oxygen Chemical class 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
〔技術分野〕
本発明はバジルス属細菌の生産する新規なアミ
ラーゼに関するものである。 〔従来技術〕 澱粉をグルコースあるいはマルトースに分解す
るグルコアミラーゼ、β−アミラーゼやαーアミ
ラーゼは自然界に広く存在することが知られてい
るが、より分子量の大きい、例えば、マルトトリ
オースG3、マルトテトラオースG4、マルトペン
タオースG5、マルトヘキサオースG6などのオリ
ゴ糖単位で切断するアミラーゼについての報告は
少ない。 これらオリゴ糖は、食品の増量剤、賦形剤ある
いは甘味調整剤として注目されいる。特に、G4
〜G7の各オリゴ糖は、診断用アミラーゼの活性
測定用基質としても注目されている。 〔目的及び効果〕 本発明者は、これらオリゴ糖の製法を確立する
ことを目的として、広く自然界より微生物の検索
を行つてきた結果、アミロース、アミロペクチ
ン、澱粉などのα−グルカンを特異的にマルトテ
トラオースG4に加水分解する新規なアミラーゼ
がバシルス・サーキユランス(Bacillus
circulans)と同定した細菌により生産されるこ
とを認めた。 澱粉からマルトテトラオースを生成するアミラ
ーゼとしては、シユードモナス スツツエリ
(Pseudomonas stuzeri)の生産するアミラーゼ
が、アミロースやアミロペクチンの非還元性末端
からマルトテトラオース単位で加水分解すること
が知られている。 しかし、この酸素はアミロペクチンやグリコー
ゲンからは高分子量のリミツトデキストリンを残
すと報告されている。〔アーカイブ バイオケミ
ストリー アンド バイオフイジクス(Archive
Biochemistry and Biophysics)145巻105頁
(1971)〕。そして、この酵素による澱粉からのマ
ルトテトラオースの収量は約55%、アミロペクチ
ンからの収量は52%、と報告されている〔アメリ
カ合衆国特許USP3654082(1972)、アミラーゼ
シンポジウム、6巻、31頁(1971)〕。 しかるに、本発明のバシルス属細菌の生産する
アミラーゼは、澱粉から約65%〜75%の極めて高
い収量でマルトテトラオースを生成することが認
められた。マルトテトラオースの収量は、使用す
る澱粉の種類、液化度DE、酵素量などにより影
響されるが、通常、グルコース1〜5%、マルト
ース5〜15%
ラーゼに関するものである。 〔従来技術〕 澱粉をグルコースあるいはマルトースに分解す
るグルコアミラーゼ、β−アミラーゼやαーアミ
ラーゼは自然界に広く存在することが知られてい
るが、より分子量の大きい、例えば、マルトトリ
オースG3、マルトテトラオースG4、マルトペン
タオースG5、マルトヘキサオースG6などのオリ
ゴ糖単位で切断するアミラーゼについての報告は
少ない。 これらオリゴ糖は、食品の増量剤、賦形剤ある
いは甘味調整剤として注目されいる。特に、G4
〜G7の各オリゴ糖は、診断用アミラーゼの活性
測定用基質としても注目されている。 〔目的及び効果〕 本発明者は、これらオリゴ糖の製法を確立する
ことを目的として、広く自然界より微生物の検索
を行つてきた結果、アミロース、アミロペクチ
ン、澱粉などのα−グルカンを特異的にマルトテ
トラオースG4に加水分解する新規なアミラーゼ
がバシルス・サーキユランス(Bacillus
circulans)と同定した細菌により生産されるこ
とを認めた。 澱粉からマルトテトラオースを生成するアミラ
ーゼとしては、シユードモナス スツツエリ
(Pseudomonas stuzeri)の生産するアミラーゼ
が、アミロースやアミロペクチンの非還元性末端
からマルトテトラオース単位で加水分解すること
が知られている。 しかし、この酸素はアミロペクチンやグリコー
ゲンからは高分子量のリミツトデキストリンを残
すと報告されている。〔アーカイブ バイオケミ
ストリー アンド バイオフイジクス(Archive
Biochemistry and Biophysics)145巻105頁
(1971)〕。そして、この酵素による澱粉からのマ
ルトテトラオースの収量は約55%、アミロペクチ
ンからの収量は52%、と報告されている〔アメリ
カ合衆国特許USP3654082(1972)、アミラーゼ
シンポジウム、6巻、31頁(1971)〕。 しかるに、本発明のバシルス属細菌の生産する
アミラーゼは、澱粉から約65%〜75%の極めて高
い収量でマルトテトラオースを生成することが認
められた。マルトテトラオースの収量は、使用す
る澱粉の種類、液化度DE、酵素量などにより影
響されるが、通常、グルコース1〜5%、マルト
ース5〜15%
本発明は、澱粉から主成分としてマルトテトラ
オースを約65〜75%の収量で生成する新規なアミ
ラーゼG4に関するものである。 以下に、本発明の内容を、更に具体的に説明す
る。 本発明により生産される酵素は、下記の酵素的
性質を有する。 (1) 作用;アミロース、アミロペクチン、グリコ
ーゲンなどのα−グルカンをマルトテトラオー
スを主成分とする分解物に分解する。本酵素は
エンド型の分解様式を持つα−アミラーゼの一
種であり、液化澱粉に作用させるとき、約65〜
75%の収量でマルトテトラオースが得られる。 (2) 作用温度範囲及び最適作用温度;1%可溶性
澱粉、0.05Mリン酸緩衝液の下で作用させたと
き約75℃まで作用し、最適作用温度は約50℃で
ある。(第1図a)。 (3) 作用PH範囲及び最適作用PH;約4〜約12の広
い範囲に作用する。第2表及び第1図bから明
らかなように、本酵素の最適作用PHは6.5〜7.5
であることが認められる。
オースを約65〜75%の収量で生成する新規なアミ
ラーゼG4に関するものである。 以下に、本発明の内容を、更に具体的に説明す
る。 本発明により生産される酵素は、下記の酵素的
性質を有する。 (1) 作用;アミロース、アミロペクチン、グリコ
ーゲンなどのα−グルカンをマルトテトラオー
スを主成分とする分解物に分解する。本酵素は
エンド型の分解様式を持つα−アミラーゼの一
種であり、液化澱粉に作用させるとき、約65〜
75%の収量でマルトテトラオースが得られる。 (2) 作用温度範囲及び最適作用温度;1%可溶性
澱粉、0.05Mリン酸緩衝液の下で作用させたと
き約75℃まで作用し、最適作用温度は約50℃で
ある。(第1図a)。 (3) 作用PH範囲及び最適作用PH;約4〜約12の広
い範囲に作用する。第2表及び第1図bから明
らかなように、本酵素の最適作用PHは6.5〜7.5
であることが認められる。
【表】
(0.05M酢酸またはリン酸緩衝液、1%可溶性
澱粉下で作用、)。 (4) 熱安定性;0.1Mトリス緩衝液(PH7.0)の下
で加熱した場合、50℃、10分間の加熱で約40%
失活し、55℃、10分間の加熱で約85%失活した
〔第1図c〕。 (5) PH安定性;0.1M緩衝液の下で、室温(25℃)
で3時間放置後、残存活性を測定した。その結
果、PH6〜9範囲ので安定であつた〔第1図
d〕。 (6) 安定化;カルシウムイオンが存在するとき、
熱安定性の増加が認められた〔第1図cの破
線〕。 (7) 阻害剤;本酵素は、5×10-3MのHgCl2、
CuSo4、ZnSO4、AgNO3により、それぞれ、
約100%、約95%、約50%、約30%阻害された。 (8) 精製方法;本酵素は、液体培養物の遠心上澄
液から、硫安分画、DEAE−セフアロース
(Sepharose)カラム クロマトグラフイーと
バイオゲル(Biogel)A0.5mカラム クロマ
トグラフイー及び同ゲルによる再クロマトグラ
フイーにより電気泳動的に均一まで精製するこ
とができる。 (9) 分子量;バイオゲル(Biogel)A0.5mを用
いたゲル濾過法により側定した分子量は約1万
であつた。 (10) 力価側定法;0.1Mリン酸緩衝液(PH7.0)に
溶解させた2%可溶性澱粉0.5mlに適量の酵素
を加え、水で全量1mlとし、40℃で反応させ
る。この条件で1分間に1μモルのグルコース
に相当する還元力を生成する酵素量を1単位と
した。 以上の酵素的性質について、本発明依前に知ら
れているシユードモナス スツツエリのマルトテ
トラオース生成アミラーゼと比較すると(1)最適作
用PHは、本発明の酵素はPH6〜8.5の広いPH範囲
にあるのに対し、シユードモナス スツツエリ酵
素はPH8付近にあること、(2)本発明の酵素を澱粉
に作用させたとき、約65〜75%の収量でマルトテ
トラオースが得られるのに対し、シユードモナス
スツツエリの酵素の場合は約55%であること、
(3)本発明の酵素の分子量は1万前後にあるのに対
し、シユードモナス スツツエリの酵素は、
48000と58000にある〔バイオケミストリー アン
ド バイオフイジクス アクタ(Biochemistry
and Biophysics Acta)566巻、88頁(1979))な
ど、本発明の酵素とシユードモナス スツツエリ
の酵素とは、澱粉からのマルトテトラオースの収
量、最適作用PH、分子量などの性質において、顕
著な違いのあるものであり、新規な酵素というこ
とができる。 本発明の酵素を生産する例示菌として、バシル
ス サーキユランス(Bacillus circulanc)G−
4を挙げる。本菌の菌学的性質は下記に示す通り
であり、微工研条寄第820号として工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されている。 (1) 形態;桿菌、巾0.5〜1×5〜6μ、運動性な
し、グラム陰性。 (2) 胞子;通常、末端近くに1個、胞子曩のふく
らみは認められない。 (3) 肉汁;混濁、沈降する。 (4) 肉汁寒天;生育良好、淡黄〜淡褐色、周辺及
び表面凹凸あり。 (5) グルコース肉汁寒天;生育良好、淡黄〜淡褐
色。 (6) グルコース硝酸寒天;生育悪い。 (7) ポテト;生育良好、乳白色に生育。 (8) グルコース・アスパラギン寒天;生育あまり
良くない。淡黄〜黄褐色。 (9) チロシン寒天;良く生育する、わずかに褐
色。 (10) ミルク;ゆつくり凝固、ペプトン化。 (11) インドール;生成しない。 (12) カタラーゼ;生成する。 (13) アセチルメチルカルビノール;生成しな
い。 (14) 硫化水素;生成しない。 (15) クエン酸;利用する。 (16) 硝酸塩の還元;陰性。 (17) クエン酸;利用する。 (18) 食塩肉汁;8%食塩含有培地までよく生育
し、10%食塩でも少し生育する。 (19) 炭水化物の利用;D−グルコース、D−フ
ラクトース、D−マンノース、L−アラビノー
ス、D−リボース、マルトース、シユークロー
ス、澱粉などから酸を生成するが、ガスの生成
はない。 D−キシロース、L−ラムノース、L−ソル
ボースの利用性は良くない。 (20) 最適生育温度;26℃前後。 (21) 最高生育温度;約60℃。 (22) 死滅温度;100℃で30分間加熱しても死滅
しない。 以上の菌学的性質について、バージエイス マ
ニユアル オブ デタミネーテイブ バクテリオ
ロジー(Bergey′s Mannual of Determinative
Bacteriology)の第7版及び第8版〔ザ ウイ
リアムス アンド ウイルキンス カンパニー
(The Williams and Wilkins Company)、
(1957年及び1974年)を参照し、本菌をバシルス
サーキユランス(Bacillus circulans)の一種
と同定し、バシルス サーキユランスG−4と命
名した。 本発明によるアミラーゼG4を生産するための
培養は、窒素源として肉エキス、ペプトン、酵母
エキス、カゼイン、コーン・ステイープ・リカ
ー、大豆粕など、通常、微生物の培養に対し良く
用いられる有機窒素源が使用され、炭素源して
は、澱粉、デキストリン、マルトース、グルコー
ス、シユークロースなどが使用される。そして、
これに補足する栄養源として、無機窒素源、リン
塩酸、マグネシウム塩と各種金属塩を含む培地が
用される。培養はPH5〜9、温度20〜60℃で好気
的に行われる。 アミラーゼG4は、菌体外に生産される酵素で
あるので、培養終了後、濾過または遠心分離によ
り除菌し、上澄液を回収する。必要により濃縮
し、硫安、硫酸ナトリウムによる塩析によるか、
または、アセトン、イソプロパノール、ェタノー
ル、メタノールなどの有機溶培を加えて、酵素を
沈澱物として収得し、乾操、保存する。アミラー
ゼG4を用いて、澱粉を糖化する反応は次のよう
にして行う。澱粉は、酸または、α−アミラーゼ
により駅化される。液化度はマルトテトラオース
の収量に影響するので、望ましくはDE20以下の
液化澱粉が使用される(DEは固形物中の還元力
をグルコースとして表した百分率)。基質濃度は、
通常、5〜40%で行われる。反応PHは、通常5〜
9、温度は40〜60である。本酵素は、カルシウム
イオンの存在により、著しく熱安定化されるの
で、糖化反応に際して、5×10-4〜2×10-5M程
度のカルシウム塩が添加される。 アミラーゼG4による、澱粉、アミロペクチン、
グリコーゲンなどα−1、6−グルコシド結合の
分岐をもつ基質を用いる糖化反応においては、イ
ソアミラーゼ、プルナラーゼなどのα−1、6−
グルシダーゼの存在下で反応を行うと、糖化反応
を促進するため、アミラーゼG4を節減したり、
また、マルトテトラオースの収量を増加すること
ができる。 次に、実施例により本発明の詳細を説明する。 実施例 1 ポリペプトン1%、リン酸2カリ0.3%、硫酸
マグネシウム(7水塩)0.1%、可溶性澱粉1%
からなる培地30mlを200ml容三角フラスコに入れ、
120℃で10分間殺菌したのち、バチルス・サーキ
ユランスG4(微工研条寄第820号)を接種し、
30℃で4日間振盪培養(160rpm)した。 培養後、遠心分離して得た上澄液について生産
されたアミラーゼG4を測定した結果、培地1ml
あたり6.4単位であつた。 実施例 2 実施例1で得られた酵素液を使用して、澱粉の
糖化を行つた。 基質としては、DE4.2の液化澱粉100mg(固形
分)に、塩化カルシウム5×10-3Mとアミラーゼ
G4を基質1g当たり2単位加えたもの、及びこ
れにクレブシラ(Klebsiella)属のプルラナーゼ
(ナガセ生化学製)を基質1g当たり、2単位ま
たは5単位加え、水で全量1mlとして、50で反応
させた。反応開始後、20時間目と44時間目に一定
量を採り、生成したマルトテトラオースを高速液
体クロマトグラフ法により定量した。結果を第3
表に示す。
澱粉下で作用、)。 (4) 熱安定性;0.1Mトリス緩衝液(PH7.0)の下
で加熱した場合、50℃、10分間の加熱で約40%
失活し、55℃、10分間の加熱で約85%失活した
〔第1図c〕。 (5) PH安定性;0.1M緩衝液の下で、室温(25℃)
で3時間放置後、残存活性を測定した。その結
果、PH6〜9範囲ので安定であつた〔第1図
d〕。 (6) 安定化;カルシウムイオンが存在するとき、
熱安定性の増加が認められた〔第1図cの破
線〕。 (7) 阻害剤;本酵素は、5×10-3MのHgCl2、
CuSo4、ZnSO4、AgNO3により、それぞれ、
約100%、約95%、約50%、約30%阻害された。 (8) 精製方法;本酵素は、液体培養物の遠心上澄
液から、硫安分画、DEAE−セフアロース
(Sepharose)カラム クロマトグラフイーと
バイオゲル(Biogel)A0.5mカラム クロマ
トグラフイー及び同ゲルによる再クロマトグラ
フイーにより電気泳動的に均一まで精製するこ
とができる。 (9) 分子量;バイオゲル(Biogel)A0.5mを用
いたゲル濾過法により側定した分子量は約1万
であつた。 (10) 力価側定法;0.1Mリン酸緩衝液(PH7.0)に
溶解させた2%可溶性澱粉0.5mlに適量の酵素
を加え、水で全量1mlとし、40℃で反応させ
る。この条件で1分間に1μモルのグルコース
に相当する還元力を生成する酵素量を1単位と
した。 以上の酵素的性質について、本発明依前に知ら
れているシユードモナス スツツエリのマルトテ
トラオース生成アミラーゼと比較すると(1)最適作
用PHは、本発明の酵素はPH6〜8.5の広いPH範囲
にあるのに対し、シユードモナス スツツエリ酵
素はPH8付近にあること、(2)本発明の酵素を澱粉
に作用させたとき、約65〜75%の収量でマルトテ
トラオースが得られるのに対し、シユードモナス
スツツエリの酵素の場合は約55%であること、
(3)本発明の酵素の分子量は1万前後にあるのに対
し、シユードモナス スツツエリの酵素は、
48000と58000にある〔バイオケミストリー アン
ド バイオフイジクス アクタ(Biochemistry
and Biophysics Acta)566巻、88頁(1979))な
ど、本発明の酵素とシユードモナス スツツエリ
の酵素とは、澱粉からのマルトテトラオースの収
量、最適作用PH、分子量などの性質において、顕
著な違いのあるものであり、新規な酵素というこ
とができる。 本発明の酵素を生産する例示菌として、バシル
ス サーキユランス(Bacillus circulanc)G−
4を挙げる。本菌の菌学的性質は下記に示す通り
であり、微工研条寄第820号として工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されている。 (1) 形態;桿菌、巾0.5〜1×5〜6μ、運動性な
し、グラム陰性。 (2) 胞子;通常、末端近くに1個、胞子曩のふく
らみは認められない。 (3) 肉汁;混濁、沈降する。 (4) 肉汁寒天;生育良好、淡黄〜淡褐色、周辺及
び表面凹凸あり。 (5) グルコース肉汁寒天;生育良好、淡黄〜淡褐
色。 (6) グルコース硝酸寒天;生育悪い。 (7) ポテト;生育良好、乳白色に生育。 (8) グルコース・アスパラギン寒天;生育あまり
良くない。淡黄〜黄褐色。 (9) チロシン寒天;良く生育する、わずかに褐
色。 (10) ミルク;ゆつくり凝固、ペプトン化。 (11) インドール;生成しない。 (12) カタラーゼ;生成する。 (13) アセチルメチルカルビノール;生成しな
い。 (14) 硫化水素;生成しない。 (15) クエン酸;利用する。 (16) 硝酸塩の還元;陰性。 (17) クエン酸;利用する。 (18) 食塩肉汁;8%食塩含有培地までよく生育
し、10%食塩でも少し生育する。 (19) 炭水化物の利用;D−グルコース、D−フ
ラクトース、D−マンノース、L−アラビノー
ス、D−リボース、マルトース、シユークロー
ス、澱粉などから酸を生成するが、ガスの生成
はない。 D−キシロース、L−ラムノース、L−ソル
ボースの利用性は良くない。 (20) 最適生育温度;26℃前後。 (21) 最高生育温度;約60℃。 (22) 死滅温度;100℃で30分間加熱しても死滅
しない。 以上の菌学的性質について、バージエイス マ
ニユアル オブ デタミネーテイブ バクテリオ
ロジー(Bergey′s Mannual of Determinative
Bacteriology)の第7版及び第8版〔ザ ウイ
リアムス アンド ウイルキンス カンパニー
(The Williams and Wilkins Company)、
(1957年及び1974年)を参照し、本菌をバシルス
サーキユランス(Bacillus circulans)の一種
と同定し、バシルス サーキユランスG−4と命
名した。 本発明によるアミラーゼG4を生産するための
培養は、窒素源として肉エキス、ペプトン、酵母
エキス、カゼイン、コーン・ステイープ・リカ
ー、大豆粕など、通常、微生物の培養に対し良く
用いられる有機窒素源が使用され、炭素源して
は、澱粉、デキストリン、マルトース、グルコー
ス、シユークロースなどが使用される。そして、
これに補足する栄養源として、無機窒素源、リン
塩酸、マグネシウム塩と各種金属塩を含む培地が
用される。培養はPH5〜9、温度20〜60℃で好気
的に行われる。 アミラーゼG4は、菌体外に生産される酵素で
あるので、培養終了後、濾過または遠心分離によ
り除菌し、上澄液を回収する。必要により濃縮
し、硫安、硫酸ナトリウムによる塩析によるか、
または、アセトン、イソプロパノール、ェタノー
ル、メタノールなどの有機溶培を加えて、酵素を
沈澱物として収得し、乾操、保存する。アミラー
ゼG4を用いて、澱粉を糖化する反応は次のよう
にして行う。澱粉は、酸または、α−アミラーゼ
により駅化される。液化度はマルトテトラオース
の収量に影響するので、望ましくはDE20以下の
液化澱粉が使用される(DEは固形物中の還元力
をグルコースとして表した百分率)。基質濃度は、
通常、5〜40%で行われる。反応PHは、通常5〜
9、温度は40〜60である。本酵素は、カルシウム
イオンの存在により、著しく熱安定化されるの
で、糖化反応に際して、5×10-4〜2×10-5M程
度のカルシウム塩が添加される。 アミラーゼG4による、澱粉、アミロペクチン、
グリコーゲンなどα−1、6−グルコシド結合の
分岐をもつ基質を用いる糖化反応においては、イ
ソアミラーゼ、プルナラーゼなどのα−1、6−
グルシダーゼの存在下で反応を行うと、糖化反応
を促進するため、アミラーゼG4を節減したり、
また、マルトテトラオースの収量を増加すること
ができる。 次に、実施例により本発明の詳細を説明する。 実施例 1 ポリペプトン1%、リン酸2カリ0.3%、硫酸
マグネシウム(7水塩)0.1%、可溶性澱粉1%
からなる培地30mlを200ml容三角フラスコに入れ、
120℃で10分間殺菌したのち、バチルス・サーキ
ユランスG4(微工研条寄第820号)を接種し、
30℃で4日間振盪培養(160rpm)した。 培養後、遠心分離して得た上澄液について生産
されたアミラーゼG4を測定した結果、培地1ml
あたり6.4単位であつた。 実施例 2 実施例1で得られた酵素液を使用して、澱粉の
糖化を行つた。 基質としては、DE4.2の液化澱粉100mg(固形
分)に、塩化カルシウム5×10-3Mとアミラーゼ
G4を基質1g当たり2単位加えたもの、及びこ
れにクレブシラ(Klebsiella)属のプルラナーゼ
(ナガセ生化学製)を基質1g当たり、2単位ま
たは5単位加え、水で全量1mlとして、50で反応
させた。反応開始後、20時間目と44時間目に一定
量を採り、生成したマルトテトラオースを高速液
体クロマトグラフ法により定量した。結果を第3
表に示す。
【表】
表から明らかなように、アミラーゼG4を用い
て、澱粉を糖化する反応において、プルラナーゼ
を共存させて糖化反応を行うと、糖化反応が促進
され、アミラーゼG4単独の場合よりも、マルト
テトラオース含量の高い糖化物が得られた。
て、澱粉を糖化する反応において、プルラナーゼ
を共存させて糖化反応を行うと、糖化反応が促進
され、アミラーゼG4単独の場合よりも、マルト
テトラオース含量の高い糖化物が得られた。
第1図a,b,cとdはそれぞれ、アミラーゼ
G4の最適作用温度、最適作用PH、熱安定性とPH
安定性を示す。第2図は、高速液体クロマトグラ
フにより分離した糖化物の糖組成を示す。1;グ
ルコース、2;マルトース、3;マルトトリオー
ス、4;マルトテトラオース。
G4の最適作用温度、最適作用PH、熱安定性とPH
安定性を示す。第2図は、高速液体クロマトグラ
フにより分離した糖化物の糖組成を示す。1;グ
ルコース、2;マルトース、3;マルトトリオー
ス、4;マルトテトラオース。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 下記の理化学的性質を有するバチルス属に属
する微生物由来の新規なアミラーゼG4 (1) 作用:α−グルカンをマルトテトラオースを
主成分とする分解物に分解し、エンド型の分解
様式を持つ。 (2) 最適PH:PH6.5〜7.5 (3) 分子量:約1万
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60143518A JPS6225977A (ja) | 1985-06-29 | 1985-06-29 | 新規なアミラ−ゼ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60143518A JPS6225977A (ja) | 1985-06-29 | 1985-06-29 | 新規なアミラ−ゼ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6225977A JPS6225977A (ja) | 1987-02-03 |
JPH0155877B2 true JPH0155877B2 (ja) | 1989-11-28 |
Family
ID=15340601
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60143518A Granted JPS6225977A (ja) | 1985-06-29 | 1985-06-29 | 新規なアミラ−ゼ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6225977A (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS58118931A (ja) * | 1982-01-08 | 1983-07-15 | Toshiba Corp | ロ−ドセルの製造方法 |
JPH0321746U (ja) * | 1989-07-10 | 1991-03-05 | ||
WO1992001805A1 (fr) * | 1990-07-26 | 1992-02-06 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Procede de production de sucre et transfusion |
DE4218702C2 (de) * | 1992-06-06 | 1994-03-31 | Sorg Gmbh & Co Kg | Regenerative Schmelzwanne mit verminderter NOx-Bildung |
-
1985
- 1985-06-29 JP JP60143518A patent/JPS6225977A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS6225977A (ja) | 1987-02-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH0118717B2 (ja) | ||
JPH0547199B2 (ja) | ||
JPH0155877B2 (ja) | ||
JPS6015315B2 (ja) | アミラ−ゼg3の製造法 | |
JPS6339234B2 (ja) | ||
JPS594119B2 (ja) | アミラ−ゼg4,5によるオリゴ糖の製造方法 | |
JPH05236959A (ja) | プルラナーゼ、その製造法及び該酵素を用いる澱粉の 糖化法 | |
JPH0131879B2 (ja) | ||
JPS5937957B2 (ja) | アミラ−ゼg3によるマルトトリオ−スの製造法 | |
JPS6314955B2 (ja) | ||
US4925795A (en) | Method of using G-4 amylase to produce high maltotetraose and high maltose content starch hydrolysates | |
JPH0253037B2 (ja) | ||
JPS5933359B2 (ja) | アミラ−ゼg3によるマルトトリオ−スの製造方法 | |
JPH0253034B2 (ja) | ||
JPH0253036B2 (ja) | ||
JPH0253035B2 (ja) | ||
JPH0134037B2 (ja) | ||
JPH0133160B2 (ja) | ||
JPS6331194B2 (ja) | ||
JPH0378990B2 (ja) | ||
JPH0369510B2 (ja) | ||
JPH0336512B2 (ja) | ||
JPH0662882A (ja) | 澱粉の糖化によるグルコースの製造方法 | |
JPS5838155B2 (ja) | オリゴ糖の製造法 | |
JPH0116479B2 (ja) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
EXPY | Cancellation because of completion of term |