JPS6014908A - プロテアーゼ固定化酵素膜の製造法 - Google Patents
プロテアーゼ固定化酵素膜の製造法Info
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- JPS6014908A JPS6014908A JP58124135A JP12413583A JPS6014908A JP S6014908 A JPS6014908 A JP S6014908A JP 58124135 A JP58124135 A JP 58124135A JP 12413583 A JP12413583 A JP 12413583A JP S6014908 A JPS6014908 A JP S6014908A
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- B01D—SEPARATION
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、固定化生物活性物質膜の製造法に関する。更
に詳しくは、限外口過膜に酵素などの生物活性物質を固
定化させる固定化生物活性物質膜の製造法に関する。
に詳しくは、限外口過膜に酵素などの生物活性物質を固
定化させる固定化生物活性物質膜の製造法に関する。
従来、膜状物に酵素を固定化する方法として、吸着法、
イオン結合法、共有結合法、包括法、包括架橋法などが
知られている。
イオン結合法、共有結合法、包括法、包括架橋法などが
知られている。
吸着法：単に膜材料と酵素との親和力によって結合され
る イオン結合法：膜に均一に存在するイオン交換性基と酵
素のアミノ基、カルボキシル基などとの結合に依存する 共有結合法：その工程上、膜に均一に酵素が結合される 包括法：膜材料ｙｊ？ ＩＪママ−マ） ＩＪラックス
中均一に酵素が分散固定化される 包括架橋法二上記包括法でポリマーマ） ＩＪラックス
中固定化された酵素が、更に架橋試薬によって補強固定
化される これらの方法は、いずれも膜に酵素を均一に固定化させ
る方法であり、得られる固定化酵素膜は、酵素の作用と
は無関係な部分に迄酵素が固定化されているため、非効
率的でコスト高となっているばかりではなく、酵素の活
性収率（仕込み酵素量に対して実際に機能する酵素量の
割合）をも低下せしめている。
る イオン結合法：膜に均一に存在するイオン交換性基と酵
素のアミノ基、カルボキシル基などとの結合に依存する 共有結合法：その工程上、膜に均一に酵素が結合される 包括法：膜材料ｙｊ？ ＩＪママ−マ） ＩＪラックス
中均一に酵素が分散固定化される 包括架橋法二上記包括法でポリマーマ） ＩＪラックス
中固定化された酵素が、更に架橋試薬によって補強固定
化される これらの方法は、いずれも膜に酵素を均一に固定化させ
る方法であり、得られる固定化酵素膜は、酵素の作用と
は無関係な部分に迄酵素が固定化されているため、非効
率的でコスト高となっているばかりではなく、酵素の活
性収率（仕込み酵素量に対して実際に機能する酵素量の
割合）をも低下せしめている。
固定化酵素膜は、例えばセルフクリーニングメンブレン
などに用いられるが、この場合膜が汚染されるのはたん
白質などの分離を行なう緻密層の部分である。即ち、分
離の際、膜の緻密層側に圧力をかけるので、この層側に
例えば高分子量のたん白質などが汚染物質として付着す
る。このような汚染物質を分解し、膜面に付着しないよ
うにするには、緻密層およびそれに隣接する部分に集中
的に酵素を固定化することが、膜中に酵素を均一に分散
固定化せしめるよりもはるかに効率的でかつ有効である
。
などに用いられるが、この場合膜が汚染されるのはたん
白質などの分離を行なう緻密層の部分である。即ち、分
離の際、膜の緻密層側に圧力をかけるので、この層側に
例えば高分子量のたん白質などが汚染物質として付着す
る。このような汚染物質を分解し、膜面に付着しないよ
うにするには、緻密層およびそれに隣接する部分に集中
的に酵素を固定化することが、膜中に酵素を均一に分散
固定化せしめるよりもはるかに効率的でかつ有効である
。
このような観点から、膜の特定部位に酵素を高密度に集
中せしめることはきわめて望ましいことであるが、従来
法ではいずれもそれが不可能である現状に鑑み、本発明
者はかかる課題を解決すべく鋭意研究の結果、一方の面
側に緻密層およびそれに続く中間層をそれぞれ有する限
外口過膜を生物活性物質架橋試薬水溶液中に浸漬し、該
水溶液中から引き上げた限外口過膜を加熱処理した後、
生物活性物質水性溶液中に浸漬し、該水性溶液から引き
上げた限外口過膜を通風乾燥させて固定化生物活性物質
膜を製造することにより、前記目的を達成し得ることを
見出した。従って、本発明は、このようにして行われる
固定化酵素膜によって代表される生物活性物質膜の製造
法に関する。
中せしめることはきわめて望ましいことであるが、従来
法ではいずれもそれが不可能である現状に鑑み、本発明
者はかかる課題を解決すべく鋭意研究の結果、一方の面
側に緻密層およびそれに続く中間層をそれぞれ有する限
外口過膜を生物活性物質架橋試薬水溶液中に浸漬し、該
水溶液中から引き上げた限外口過膜を加熱処理した後、
生物活性物質水性溶液中に浸漬し、該水性溶液から引き
上げた限外口過膜を通風乾燥させて固定化生物活性物質
膜を製造することにより、前記目的を達成し得ることを
見出した。従って、本発明は、このようにして行われる
固定化酵素膜によって代表される生物活性物質膜の製造
法に関する。
一方の面側に緻密層およびそれに続く中間層をそれぞれ
有する限外口過膜としては、一般に他方の面にはフィン
ガースドラクチャ−構造を有するポーラス層を有してい
るものが用いられ、かかる膜状物は、ポリスルホン、ポ
リアクリロニトリル、ポリビニルアルコール、ポリプロ
ピレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、ポリ
アミド、ポリイミド、ポリカーボネートなどの重合体の
ドープ准をガラス板、金属板などの基質上に流延し、製
膜した後、逆浸透水中に浸漬することにより製造される
。得られた膜状物の他方の面のポーラス層はフィンガー
スドラクチャ−構造を有しており、この構造の内部は同
時に多数の連続孔を有しており、これら連続孔の存在が
本発明方法に大きく寄与しているので、フィンガースド
ラクチャ−構造を必ずしも有しなくとも、ポーラス層側
に多数の連続孔が穿設されていれば、かかる膜状物も同
様に用いることができる。
有する限外口過膜としては、一般に他方の面にはフィン
ガースドラクチャ−構造を有するポーラス層を有してい
るものが用いられ、かかる膜状物は、ポリスルホン、ポ
リアクリロニトリル、ポリビニルアルコール、ポリプロ
ピレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、ポリ
アミド、ポリイミド、ポリカーボネートなどの重合体の
ドープ准をガラス板、金属板などの基質上に流延し、製
膜した後、逆浸透水中に浸漬することにより製造される
。得られた膜状物の他方の面のポーラス層はフィンガー
スドラクチャ−構造を有しており、この構造の内部は同
時に多数の連続孔を有しており、これら連続孔の存在が
本発明方法に大きく寄与しているので、フィンガースド
ラクチャ−構造を必ずしも有しなくとも、ポーラス層側
に多数の連続孔が穿設されていれば、かかる膜状物も同
様に用いることができる。
このように、一方の面側に緻密層およびそれに続く中間
層をそれぞれ有する限外口過膜は、酵素架橋試薬水溶液
中に浸漬される。酵素架橋試薬としては、例えばグリオ
キザール、マロンジアルデヒド、サクシンジアルデヒド
、グルタルアルデヒド、アジピンジアルデヒド、マレイ
ンジアルデヒド、７タルアルデヒド、イソフタルアルデ
ヒド、テレフタルアルデヒド、ジアルデヒドでん粉など
のジアルデヒド化合物が用いられ、特にグルタルアルデ
ヒドおよびジアルデヒドでん粉が好ましい。
層をそれぞれ有する限外口過膜は、酵素架橋試薬水溶液
中に浸漬される。酵素架橋試薬としては、例えばグリオ
キザール、マロンジアルデヒド、サクシンジアルデヒド
、グルタルアルデヒド、アジピンジアルデヒド、マレイ
ンジアルデヒド、７タルアルデヒド、イソフタルアルデ
ヒド、テレフタルアルデヒド、ジアルデヒドでん粉など
のジアルデヒド化合物が用いられ、特にグルタルアルデ
ヒドおよびジアルデヒドでん粉が好ましい。
これらのジアルデヒド化合物は、約１〜５０％の濃度の
水溶液に調製され、限外口過膜はこの水溶液中に約１分
間乃至約２４時間程度浸漬される。
水溶液に調製され、限外口過膜はこの水溶液中に約１分
間乃至約２４時間程度浸漬される。
浸漬された限外口過膜は、この酵素架橋試薬からす１き
上げられた後、加熱処理される。加熱処理は、オープン
などを用い、約５０〜１２０℃、好甘しく Ｖｌ約５０
〜８０℃の温度で、約１分間乃至２４時間程度行われる
。この加熱処理によって、膜中に含浸された架橋試薬は
、ポーラス層のフィンガースドラクチャ−構造を伝わっ
て中間層および緻密層の部分に集積される。
上げられた後、加熱処理される。加熱処理は、オープン
などを用い、約５０〜１２０℃、好甘しく Ｖｌ約５０
〜８０℃の温度で、約１分間乃至２４時間程度行われる
。この加熱処理によって、膜中に含浸された架橋試薬は
、ポーラス層のフィンガースドラクチャ−構造を伝わっ
て中間層および緻密層の部分に集積される。
この加熱処理された膜は、次いで酵素水性溶液中に浸漬
される。酵素としては、例えばグルコースオキシダーゼ
、アミノ酸オキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ
、ウリカーゼなどのオキシダーゼ類、ウレアーゼ、クレ
アチニナーゼ、グルタミナーゼ、ベニシリナーゼ、カラ
ターゼ、パーオキシダーゼ、インベルターゼ、ムタロタ
ーゼ、アミラーゼ、パパイン、トリプシン、アルカリプ
ロテアーゼなどのプロテアーゼ、グルコースイソメラー
ゼ、ウロキナーゼなどが挙げられる。これらの酵素は、
一般に所定のｐｉ（に調愁した綬衝液７：Ｃどの水性溶
液の約０．００１〜０．１％溶液として調製され、この
水性溶液中に加熱処理膜が、約１分間乃至２４時間程度
浸漬される。
される。酵素としては、例えばグルコースオキシダーゼ
、アミノ酸オキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ
、ウリカーゼなどのオキシダーゼ類、ウレアーゼ、クレ
アチニナーゼ、グルタミナーゼ、ベニシリナーゼ、カラ
ターゼ、パーオキシダーゼ、インベルターゼ、ムタロタ
ーゼ、アミラーゼ、パパイン、トリプシン、アルカリプ
ロテアーゼなどのプロテアーゼ、グルコースイソメラー
ゼ、ウロキナーゼなどが挙げられる。これらの酵素は、
一般に所定のｐｉ（に調愁した綬衝液７：Ｃどの水性溶
液の約０．００１〜０．１％溶液として調製され、この
水性溶液中に加熱処理膜が、約１分間乃至２４時間程度
浸漬される。
酵素の水性溶液中に浸漬された膜（ｄ′、そこから引き
上げられた後、通風乾燥させる。通風乾燥は、一般に約
２０〜４０℃で行われる。この浸漬および通風乾燥は、
くり返して行なうこともできる。かかる処理により、酵
素はポーラス層のフィンガースドラクチャ−構造を伝わ
り、架橋試薬と反応して、中間層および緻密層の部分に
高密度に架橋、固定化される。
上げられた後、通風乾燥させる。通風乾燥は、一般に約
２０〜４０℃で行われる。この浸漬および通風乾燥は、
くり返して行なうこともできる。かかる処理により、酵
素はポーラス層のフィンガースドラクチャ−構造を伝わ
り、架橋試薬と反応して、中間層および緻密層の部分に
高密度に架橋、固定化される。
以上の説明は、主として酵素の固定化についてなされて
きたが、その構造中にアミン基を有するタン白質、例え
ばレクチン、ペプチド系ホルモンなどの他の生学物的に
活性を有する生物活性物質にも、本発明方法は同様に有
効に適用される。
きたが、その構造中にアミン基を有するタン白質、例え
ばレクチン、ペプチド系ホルモンなどの他の生学物的に
活性を有する生物活性物質にも、本発明方法は同様に有
効に適用される。
本発明方法で得られる固定化生物活性物質膜は、膜の中
間層および緻密層のそれぞれに酵素などの生物活性物質
が高密度に固定化され、固定化された生物活性物質はそ
れとの反応物質である各種基質に顕著に作用し、それの
生物活性効果を十分に発揮させるので、このような作用
および効果を有効に利用して、例えばたん白質による汚
染のために生ずる限外口過膜の透水量低下防止用プロテ
ア−４１ｆｆｌ化酵素膜、いわゆるセルフクリーニング
メンブレンやバイオセンサー用固定化酵素膜、バイオリ
アクターなどに効果的に用いられる。
間層および緻密層のそれぞれに酵素などの生物活性物質
が高密度に固定化され、固定化された生物活性物質はそ
れとの反応物質である各種基質に顕著に作用し、それの
生物活性効果を十分に発揮させるので、このような作用
および効果を有効に利用して、例えばたん白質による汚
染のために生ずる限外口過膜の透水量低下防止用プロテ
ア−４１ｆｆｌ化酵素膜、いわゆるセルフクリーニング
メンブレンやバイオセンサー用固定化酵素膜、バイオリ
アクターなどに効果的に用いられる。
次に、実施例について本発明を説明する。
実施例１〜２
限外口過膜の製造
ポリスルホン（ＵＯＯ社製品Ｐ−１７００） １５９を
ジメヂルホルムアミド７５９に溶解させ、Ｂ型粘度計（
東京計器製）を用いて２０℃で測定した粘度が２７００
ｐＳのドープ液を調製した０このドープ液を、ガラス板
上に流延し、ガラス俸を用いて製膜した。得られた膜を
、温度２０℃、相対湿度６０％の雰囲気に３０秒間放置
した後、２５℃の逆浸透水中に浸漬し、ゲル化させて、
限外口過膜を製造し ７こ 。
ジメヂルホルムアミド７５９に溶解させ、Ｂ型粘度計（
東京計器製）を用いて２０℃で測定した粘度が２７００
ｐＳのドープ液を調製した０このドープ液を、ガラス板
上に流延し、ガラス俸を用いて製膜した。得られた膜を
、温度２０℃、相対湿度６０％の雰囲気に３０秒間放置
した後、２５℃の逆浸透水中に浸漬し、ゲル化させて、
限外口過膜を製造し ７こ 。
限外口過膜の性能
ポリエチレングリコールまたはポリビニルピロリドンを
検体として用い、この膜の限外口過性能を、基１；、７
Ｈ圧力１〜で測定した。測定に際しては、全有機炭素ｈ
１゛（島原製作所製ＴＯＯ−１０Ｅ ）が用い０れ、膜
透過前後の水溶液中の検体濃度が測定された。その結果
、分画分子量け１５０００ 、また透水ｒｉ ｊ）ｉｌｄ、’ ０．５ ／ｃ１ｄ−ｈｒ、ａｔｍの値
がそれぞれ得られた。
検体として用い、この膜の限外口過性能を、基１；、７
Ｈ圧力１〜で測定した。測定に際しては、全有機炭素ｈ
１゛（島原製作所製ＴＯＯ−１０Ｅ ）が用い０れ、膜
透過前後の水溶液中の検体濃度が測定された。その結果
、分画分子量け１５０００ 、また透水ｒｉ ｊ）ｉｌｄ、’ ０．５ ／ｃ１ｄ−ｈｒ、ａｔｍの値
がそれぞれ得られた。
分子量既知のポリエチレングリコールまたはポリビニル
ピロリドンの０．５〜１重量％水溶液を腓に流し、その
分離率が９０％の分子量を分画分子量とする。
ピロリドンの０．５〜１重量％水溶液を腓に流し、その
分離率が９０％の分子量を分画分子量とする。
限外口過膜用セルに膜を取り付け、セルの一方の膜面側
から１＝に加圧された水を流し、セルの他方の膜面側の
浸透液中に流れ出た水の量を測定し、それをＣｎｉ／ｃ
ｙｓｔ 、ｈｒ −ａｔｍ単位に変換する。
から１＝に加圧された水を流し、セルの他方の膜面側の
浸透液中に流れ出た水の量を測定し、それをＣｎｉ／ｃ
ｙｓｔ 、ｈｒ −ａｔｍ単位に変換する。
限外口過膜の膜構造
乾燥状態で膜厚約１９０μｍの限外口過膜の膜表面部を
、走査型電子顕微鏡（日立−明石製ＭＳＭ −７）を用
いて観察したところ、１００００倍の倍率で膜表面部分
に（井孔の存在が認められなかった。
、走査型電子顕微鏡（日立−明石製ＭＳＭ −７）を用
いて観察したところ、１００００倍の倍率で膜表面部分
に（井孔の存在が認められなかった。
次いで、軟Ｘ線装置（ソフテツクス社ＨＳＯＦＴＥＸＩ
ＳＭ型）を用い、９５Ｖ、２．５ｍＡ 、 ５分間の軟
ｚ １３照射条件下で、その断面部を観察した。上記表
面部側から順次緻密層および中間層が合計４０μｍｎの
厚さで形成されており、次いで裏面部となるポーラス層
が１５０μｍの厚さで形成されている。このポーラスＮ
５には、最大横幅約６０μｍ１縦方向長さ１５０μｍに
近いフィンガースドラクチャ−構造が、膜面１ ｍｒ１
当り約２３０個の割合で存在していた。
ＳＭ型）を用い、９５Ｖ、２．５ｍＡ 、 ５分間の軟
ｚ １３照射条件下で、その断面部を観察した。上記表
面部側から順次緻密層および中間層が合計４０μｍｎの
厚さで形成されており、次いで裏面部となるポーラス層
が１５０μｍの厚さで形成されている。このポーラスＮ
５には、最大横幅約６０μｍ１縦方向長さ１５０μｍに
近いフィンガースドラクチャ−構造が、膜面１ ｍｒ１
当り約２３０個の割合で存在していた。
固定化酵素膜の製造
このポリスルホン限外口過膜を、酵素架橋試薬としての
ジアルデヒドでん粉（半押化学製品）の１０％水溶液中
に１０分間浸漬し、その後この水溶液中から引き上げた
限外口過膜を、１００℃のオーブン中［３０分間放置し
、加熱処理した。この加熱処理によって、膜中に含浸さ
れた架橋試薬は、ポーラス層のフィンガースドラクチャ
−構造を伝わって中間層および緻密層の部分に集積され
る。
ジアルデヒドでん粉（半押化学製品）の１０％水溶液中
に１０分間浸漬し、その後この水溶液中から引き上げた
限外口過膜を、１００℃のオーブン中［３０分間放置し
、加熱処理した。この加熱処理によって、膜中に含浸さ
れた架橋試薬は、ポーラス層のフィンガースドラクチャ
−構造を伝わって中間層および緻密層の部分に集積され
る。
この加熱処理による膜性能への影暢を調べるために、１
０５℃のオートクレーブ内に膜を２０分間入れて加熱し
たが、それによる分画分子量および透水量への影響はみ
られなかった。
０５℃のオートクレーブ内に膜を２０分間入れて加熱し
たが、それによる分画分子量および透水量への影響はみ
られなかった。
次いで、この加熱処理された膜を、０．０１％のプロテ
アーゼ酵素（長瀬産業製品）を含む１）Ｈ７，０のリン
酸緩衝液中に１時間浸漬し、この緩衝液中から引き上げ
た限外口過膜を３０℃で通風乾燥させた。これにより、
酵素はポーラス層のフィンガースドラクチャ−構造を伝
わり、架橋試薬と反応して中間層および緻密層の部分に
高密度に架橋、固定化された。なお、この際、架橋試薬
が緩衝液中に溶出するか否かを調べるために、架橋試薬
集積膜を緩衝液中に１時間放置し、ジアルデヒドでん粉
溶出の有無を全有機炭素計で測定したが、それの溶出を
認めることはできなかった。１だ、この酵素固定膜中の
未反応アルデヒド基は、０．０５ ｙｖｔ濃度のＮａＢ
Ｈ４水溶液中に膜を１分間浸漬し、還元させた。
アーゼ酵素（長瀬産業製品）を含む１）Ｈ７，０のリン
酸緩衝液中に１時間浸漬し、この緩衝液中から引き上げ
た限外口過膜を３０℃で通風乾燥させた。これにより、
酵素はポーラス層のフィンガースドラクチャ−構造を伝
わり、架橋試薬と反応して中間層および緻密層の部分に
高密度に架橋、固定化された。なお、この際、架橋試薬
が緩衝液中に溶出するか否かを調べるために、架橋試薬
集積膜を緩衝液中に１時間放置し、ジアルデヒドでん粉
溶出の有無を全有機炭素計で測定したが、それの溶出を
認めることはできなかった。１だ、この酵素固定膜中の
未反応アルデヒド基は、０．０５ ｙｖｔ濃度のＮａＢ
Ｈ４水溶液中に膜を１分間浸漬し、還元させた。
膜に固定化されたプロテアーゼ酵素は、分子量が約２６
０００で１９種、２７５個のアミノ・酸で形成されてお
り、その中アルデヒド基と結合可能性を有するアミノ酸
は、アルギニン、アスパラギン、グルタミンおよびリジ
ンである。固定化の確認は、得られた膜を前記緩衝液中
に２４時間浸漬し、酵素溶出の有無を紫外および可視吸
光光度計（島原製作所製ｔｆｆ−１９０）を用い、２８
０ ｎｍの波長の吸光度を測定することにより行われた
。その結果、酵素の溶出を認めることができなかった。
０００で１９種、２７５個のアミノ・酸で形成されてお
り、その中アルデヒド基と結合可能性を有するアミノ酸
は、アルギニン、アスパラギン、グルタミンおよびリジ
ンである。固定化の確認は、得られた膜を前記緩衝液中
に２４時間浸漬し、酵素溶出の有無を紫外および可視吸
光光度計（島原製作所製ｔｆｆ−１９０）を用い、２８
０ ｎｍの波長の吸光度を測定することにより行われた
。その結果、酵素の溶出を認めることができなかった。
また、固定化酵素量を、ケルダール窒素分析装置（三菱
化成製ＫＮ−１０）を用いて測定したところ、膜１り当
り０，０５りの酵素が固定されていることが判った。
化成製ＫＮ−１０）を用いて測定したところ、膜１り当
り０，０５りの酵素が固定されていることが判った。
固定化酵素膜の性能
酵素基質として牛血清ヘモグロビン（シグマ社製品）を
用い、それの０．００２％緩衝液（ｐＨ７，０）を調製
し、これを供給液に用いて、固定イヒ酵緊膜の限外口過
試験を、１〜の圧力で行なった。試験時間に対する透水
量の減少は、図面の曲線■に示される。曲線■は、酵素
を固定化していない唯のポリスルホン限外口過膜を用い
た場合２対照例として示したものである。この結果から
、プロテアーゼ酵素固定化膜は、膜面に付着するヘモグ
ロビン２分解するので、ヘモグロビンによる膜の汚染に
よってもたらされる透水量の低下を有効に防止し得るこ
とが判る。また、試験時間５時間後における酵素の残存
活性率（試験後の膜中酵素の活性／試験前の膜中酵素の
活性Ｘ １００ ）の値は、７３．８％であった。なお
、酵素の活性は、アンソン−荻原氏変法によって測定さ
れた。
用い、それの０．００２％緩衝液（ｐＨ７，０）を調製
し、これを供給液に用いて、固定イヒ酵緊膜の限外口過
試験を、１〜の圧力で行なった。試験時間に対する透水
量の減少は、図面の曲線■に示される。曲線■は、酵素
を固定化していない唯のポリスルホン限外口過膜を用い
た場合２対照例として示したものである。この結果から
、プロテアーゼ酵素固定化膜は、膜面に付着するヘモグ
ロビン２分解するので、ヘモグロビンによる膜の汚染に
よってもたらされる透水量の低下を有効に防止し得るこ
とが判る。また、試験時間５時間後における酵素の残存
活性率（試験後の膜中酵素の活性／試験前の膜中酵素の
活性Ｘ １００ ）の値は、７３．８％であった。なお
、酵素の活性は、アンソン−荻原氏変法によって測定さ
れた。
同様に、牛血清ヘモグロビン緩衝液の代りに、ミルクカ
ゼイン（メルり社製品）の０．０１％緩衝液（ｐＨ７，
０）を供給液に用いて、透水量の経時変化を測定した。
ゼイン（メルり社製品）の０．０１％緩衝液（ｐＨ７，
０）を供給液に用いて、透水量の経時変化を測定した。
結果は、図面の曲線■によって表わされ、酵素を固定し
ていない唯のポリスルホン限外口過膜を用いた対照例の
場合の曲線■よりも、透水量の低下の割合が少ないこと
を示している。
ていない唯のポリスルホン限外口過膜を用いた対照例の
場合の曲線■よりも、透水量の低下の割合が少ないこと
を示している。
捷た、試験時間５時間後における酵素の残存活性率（ｄ
、７０．０％の値を示した。なお、ミルクカゼインは、
プロテアーゼ酵素によって、約２〜３時間のうちにほぼ
完全に分解されることが、ゲルクロマトグラフ（ウォー
ターズ社製）によって確められている。
、７０．０％の値を示した。なお、ミルクカゼインは、
プロテアーゼ酵素によって、約２〜３時間のうちにほぼ
完全に分解されることが、ゲルクロマトグラフ（ウォー
ターズ社製）によって確められている。
このように、本発明方法により、膜の中間層および緻密
層に固定化された酵素は、酵素との反応物質である各種
基質に顕著に作用し、その酵素作用が十分に発揮される
。
層に固定化された酵素は、酵素との反応物質である各種
基質に顕著に作用し、その酵素作用が十分に発揮される
。
比較例１〜２
実施例において、オープンによる加熱処理を行なうこと
なく、固定化酵素膜が製造された。この膜について、実
施例１〜２と同ザにして、血清ヘモグロビンまたはミル
クカゼインによる汚染実験を行なった。測定された透水
膜低下率および残存活性率は、次の俵に示される。
なく、固定化酵素膜が製造された。この膜について、実
施例１〜２と同ザにして、血清ヘモグロビンまたはミル
クカゼインによる汚染実験を行なった。測定された透水
膜低下率および残存活性率は、次の俵に示される。
表
実施例１ 血清ヘモグロビン ５．８ ７３．８比較例
１ ４０．５ ５３．５ 実施例２ ミルクカゼイン ６８，０ ７０．０比較例
２ ８１．４ ５１．３
１ ４０．５ ５３．５ 実施例２ ミルクカゼイン ６８，０ ７０．０比較例
２ ８１．４ ５１．３
図面は、実施例１〜２およびこれらの対照例に係る股を
限外口過膜に用いた場合の血清ヘモグロビンまたはミル
クカゼインによる汚染防止効果を経時的に示したグラフ
である。 代理人 弁理士 吉 １）俊 夫 零ζ験時間（時Ｍ）
限外口過膜に用いた場合の血清ヘモグロビンまたはミル
クカゼインによる汚染防止効果を経時的に示したグラフ
である。 代理人 弁理士 吉 １）俊 夫 零ζ験時間（時Ｍ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一方の面側に緻密層およびそれに続く中間層をそれ
ぞれ有する限外口過膜を生物活性物質架橋試薬水溶液中
に浸漬し、該水溶液中から引き上げた限外口過膜を加熱
処理した後、生物活性物質水性溶液中に浸漬し、該水性
溶液から引き上げた限外口過膜を通風乾燥させることを
特徴とする固定化生物活性物Ｊｊ：を膜の製造法。 ２ 限外口過膜として、緻密層、中間層およびフィンガ
ースドラクチヤ−構造を有するポーラス層をそｈぞれ有
する膜が用いられる特許請求の範囲第１項記載の固定化
生物活性物質膜の製造法。 ３、生物活性物質として酵素が用いられる特許請求の範
囲第１項記載の固定化生物活性物質膜の製造法。 ４、生物活性物質架橋試薬としてジアルデヒド化合物が
用いられる特許請求の範囲第１項または第３項記載の固
定化生物活性物質膜の製造法。 ５、加熱処理が約５０〜１２０℃で行われる特許請求の
範囲第１項または第４項記載の固定化生物活性物質膜の
製造法。 ６、通風乾燥が約２０〜４０℃で行われる特許請求の範
囲第１項記載の固定化生物活性物質膜の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58124135A JPS6014908A (ja) | 1983-07-08 | 1983-07-08 | プロテアーゼ固定化酵素膜の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58124135A JPS6014908A (ja) | 1983-07-08 | 1983-07-08 | プロテアーゼ固定化酵素膜の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6014908A true JPS6014908A (ja) | 1985-01-25 |
| JPH0420648B2 JPH0420648B2 (ja) | 1992-04-06 |
Family
ID=14877785
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58124135A Granted JPS6014908A (ja) | 1983-07-08 | 1983-07-08 | プロテアーゼ固定化酵素膜の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6014908A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013141620A (ja) * | 2012-01-06 | 2013-07-22 | Tokyo Univ Of Agriculture & Technology | ろ過膜 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56102906A (en) * | 1980-01-23 | 1981-08-17 | Hitachi Ltd | Preparation of fixed enzyme membrane |
-
1983
- 1983-07-08 JP JP58124135A patent/JPS6014908A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56102906A (en) * | 1980-01-23 | 1981-08-17 | Hitachi Ltd | Preparation of fixed enzyme membrane |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013141620A (ja) * | 2012-01-06 | 2013-07-22 | Tokyo Univ Of Agriculture & Technology | ろ過膜 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0420648B2 (ja) | 1992-04-06 |
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