JPH02219575A - 酵素固定用膜の製造方法 - Google Patents
酵素固定用膜の製造方法Info
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- JPH02219575A JPH02219575A JP4060689A JP4060689A JPH02219575A JP H02219575 A JPH02219575 A JP H02219575A JP 4060689 A JP4060689 A JP 4060689A JP 4060689 A JP4060689 A JP 4060689A JP H02219575 A JPH02219575 A JP H02219575A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業との利用分野〉
本発明は酵素固定用膜及び酵素固定膜の製造方法に関す
る。
る。
〈従来の技術〉
近年、酵素反応を利用し几工業的規模での実施は医薬晶
子食品工業の分野で盛んに行なわnているが、酵素目体
の価格が高価なことf1m液状態にCV用した場合に反
応後における生rJy、物と酵素の分離で回収が困難で
あることなどの問題点から。
子食品工業の分野で盛んに行なわnているが、酵素目体
の価格が高価なことf1m液状態にCV用した場合に反
応後における生rJy、物と酵素の分離で回収が困難で
あることなどの問題点から。
担持体VC#素を固定する。所謂固定化酵素の手法が檀
々検討されている。
々検討されている。
反応生成蜀と酵素の分離を酵素反応と同時に処理できる
方法として限外濾過膜の如tA膜を利用した方法が研死
さIしており、#!密分離精製の前処理として分子分画
による粗分離処理が憔めて容易になるものとして注目さ
几てS?す、とりわけ、高分子基質から低分子生成物を
得る友めの酵A反応への適用が期待されている。これら
の一つとして。
方法として限外濾過膜の如tA膜を利用した方法が研死
さIしており、#!密分離精製の前処理として分子分画
による粗分離処理が憔めて容易になるものとして注目さ
几てS?す、とりわけ、高分子基質から低分子生成物を
得る友めの酵A反応への適用が期待されている。これら
の一つとして。
#木を膜に固定したメンブレンリアクターが提案さル、
酵累を異方性限外濾過膜の多孔質部に閉じ込めて披榎を
施こす方法(特開昭59−25686号公報)−?、多
多孔郡部酵素をゲルと共に封入包括する方法(特公昭5
7−41238号公報)などが開示されているが、いず
れの方法も酵素を長期間にわ几って安定に保持できるも
のではない。
酵累を異方性限外濾過膜の多孔質部に閉じ込めて披榎を
施こす方法(特開昭59−25686号公報)−?、多
多孔郡部酵素をゲルと共に封入包括する方法(特公昭5
7−41238号公報)などが開示されているが、いず
れの方法も酵素を長期間にわ几って安定に保持できるも
のではない。
また、酵素を安定に保持する友めに、官能基を有する膜
に直接共有結合によって酵素を固定する方法も提案され
ているが、この方法では酵素活性が低下したり、酵素が
失活した際の再生が困難であるなどの問題を有するもの
であり、工業的規模での実用化に充分に耐えうるもので
はない。
に直接共有結合によって酵素を固定する方法も提案され
ているが、この方法では酵素活性が低下したり、酵素が
失活した際の再生が困難であるなどの問題を有するもの
であり、工業的規模での実用化に充分に耐えうるもので
はない。
J:記問題点の解決のために、外直に緻密I−を有する
非対称限外濾過膜からなる中空糸状膜を用いた酵素固定
膜(特開昭62−83385号公報)−?、多孔質構造
のみからなる中空糸状膜に特定の処理を施こしてなる酵
素固定膜(特願昭63−262443号)が開発されて
いる。
非対称限外濾過膜からなる中空糸状膜を用いた酵素固定
膜(特開昭62−83385号公報)−?、多孔質構造
のみからなる中空糸状膜に特定の処理を施こしてなる酵
素固定膜(特願昭63−262443号)が開発されて
いる。
しかし、こnらの方法では加圧Fにて膜の多孔質1−に
水だ在高分子を含浸させるため、酵素固定用膜の透水性
能が低ドするという問題があった、〈発明が解決しよう
とする課題〉 従って6本発明の第1の目的は、膜の透水性能の大幅な
低下がなく、且つ#素を長期間にわ几って高活性に保持
することができる酵素固定用膜の製造方法を提供するこ
とにある。
水だ在高分子を含浸させるため、酵素固定用膜の透水性
能が低ドするという問題があった、〈発明が解決しよう
とする課題〉 従って6本発明の第1の目的は、膜の透水性能の大幅な
低下がなく、且つ#素を長期間にわ几って高活性に保持
することができる酵素固定用膜の製造方法を提供するこ
とにある。
本発明の第2の目的は上記酵素固定用膜に酵素を共有結
合にて固定化してなる#累固定膜の製造方法を提供する
ことにある。
合にて固定化してなる#累固定膜の製造方法を提供する
ことにある。
〈課題を解決するための十段〉
上記目的を達成すべく、検討を重ねた結果、多孔質構造
を有するf過膜に、少なくとも2個の官能基を有する水
溶性高分子を浸漬により含浸させ。
を有するf過膜に、少なくとも2個の官能基を有する水
溶性高分子を浸漬により含浸させ。
該水浴性高分子を架橋剤溶液に浸漬して架橋せしめた膜
が高い透水性能を有し、優れた自由度を維持しながら#
素を固定できることを見い出し1本発明を完成するに至
り几、 即ち本発明は、多孔質構造を有するPAB18Tを。
が高い透水性能を有し、優れた自由度を維持しながら#
素を固定できることを見い出し1本発明を完成するに至
り几、 即ち本発明は、多孔質構造を有するPAB18Tを。
少なくとも2個の官能基を有する水溶性高分子の溶液に
浸漬し、さらに架橋剤溶液に浸漬して、#。
浸漬し、さらに架橋剤溶液に浸漬して、#。
水溶性高分子を架橋する酵素固定用膜の製造方法及びか
かる方法で得られた酵素固定用膜に、水浴性高分子の官
能基を介して酵素を共有結合<て固定する酵素固定膜の
製造方法を提供する。
かる方法で得られた酵素固定用膜に、水浴性高分子の官
能基を介して酵素を共有結合<て固定する酵素固定膜の
製造方法を提供する。
本発明において用いられるPa1mは1分画−分子量が
1,000〜s、o u o、 o o oであるが0
.05〜2μ鴨の細孔をもつ多孔質構造を有しているも
のが好ましく、多孔′Jt1−と同時に緻[−を有・r
る異万注濾過膜でも艮い。その形状は平板状、管状、中
空糸状など任意に選択することができる。好ましくは有
効膜面積を大きくシ、固定化さtL之酵素と基質との接
触面積を大きくするために中空糸状膜とすることが望ま
しい。
1,000〜s、o u o、 o o oであるが0
.05〜2μ鴨の細孔をもつ多孔質構造を有しているも
のが好ましく、多孔′Jt1−と同時に緻[−を有・r
る異万注濾過膜でも艮い。その形状は平板状、管状、中
空糸状など任意に選択することができる。好ましくは有
効膜面積を大きくシ、固定化さtL之酵素と基質との接
触面積を大きくするために中空糸状膜とすることが望ま
しい。
上記fJM膜を製造するに際して用いる材料としては0
例えばポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリアミ
ド、ポリイミド、酢酸セルロースポリアクリルニトリル
などが挙げられる。こ1らの材料は後述する水浴性高分
子f#素と反応するような官能基を特にM−rる必要t
よないが、耐熱性や機械的強度の面でポリスルホンが好
適に使用できる。
例えばポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリアミ
ド、ポリイミド、酢酸セルロースポリアクリルニトリル
などが挙げられる。こ1らの材料は後述する水浴性高分
子f#素と反応するような官能基を特にM−rる必要t
よないが、耐熱性や機械的強度の面でポリスルホンが好
適に使用できる。
と記f過編は通常行なわれている既知の方法により製膜
できるが、多孔質構造を有するf過膜であればいかなる
方法、形状のものであっても本発明の技術に適用するこ
とができる。
できるが、多孔質構造を有するf過膜であればいかなる
方法、形状のものであっても本発明の技術に適用するこ
とができる。
本発明の#累固定用膜は、上記−過膜を少なくとも2個
の官能基を有する水溶性高分子物質の溶液1通常水浴液
に浸漬し1次いで架橋剤によって架橋せしめる。このよ
うな水溶性高分子としては。
の官能基を有する水溶性高分子物質の溶液1通常水浴液
に浸漬し1次いで架橋剤によって架橋せしめる。このよ
うな水溶性高分子としては。
例えばポリエチレンイミン、ポリプロピレンイミン。ポ
リブチレンイミンの如きポリアルキレンイミン、ポリエ
チレングリコール ポリプロピレングリコールの如きポ
リアルキレングリコール ポリリジン、ポリアルギニン
の如きポリアミノ酸。
リブチレンイミンの如きポリアルキレンイミン、ポリエ
チレングリコール ポリプロピレングリコールの如きポ
リアルキレングリコール ポリリジン、ポリアルギニン
の如きポリアミノ酸。
ポリアリールアミンなどfi;挙げられ1通常、直量平
均分子量が約1000〜200000 、官能基数が数
十〜故百のものが好ましく、Ij2!用する酵素の種類
−?m材料のlam、膜の形状に応じて適宜選択するこ
とが出来る。これらの水溶性高分子のうち、ポリエチレ
ンイミンfポリアリールアミンは官能基数の調節が容易
で1反応性も高いので特に好適に用いることができる。
均分子量が約1000〜200000 、官能基数が数
十〜故百のものが好ましく、Ij2!用する酵素の種類
−?m材料のlam、膜の形状に応じて適宜選択するこ
とが出来る。これらの水溶性高分子のうち、ポリエチレ
ンイミンfポリアリールアミンは官能基数の調節が容易
で1反応性も高いので特に好適に用いることができる。
上記水−往窩分子の溶液に、多孔質構造を有するP21
!gを浸漬−rるにあたり、溶液の溶*嬢度は2重量%
以下、好ましくは0.1〜1.0 i濾%の範囲に設定
する。
!gを浸漬−rるにあたり、溶液の溶*嬢度は2重量%
以下、好ましくは0.1〜1.0 i濾%の範囲に設定
する。
一質a度が2重量%以上であると過膜に水溶性高分子が
含浸及び架橋されることになり、fflの加圧洗浄によ
っても除くことができずかえって透水性能を下げる場合
がある。水′a性高分子俗液の液量は、BMモジュール
の形状及びサイズにより制約を受けるが、およそ0.0
5〜2d/64膜、好ましくは0.1−1 d/−膜の
範囲に設定するのが望°ましい。
含浸及び架橋されることになり、fflの加圧洗浄によ
っても除くことができずかえって透水性能を下げる場合
がある。水′a性高分子俗液の液量は、BMモジュール
の形状及びサイズにより制約を受けるが、およそ0.0
5〜2d/64膜、好ましくは0.1−1 d/−膜の
範囲に設定するのが望°ましい。
ま几、浸漬に要する時間は、多孔質層全体へ均一に水感
性高分子を含浸できれば特に限定されず。
性高分子を含浸できれば特に限定されず。
水溶性高分子の種類1分子通、温度及びF4膜の分画1
分子量によって適当に設定−rることかできる。
分子量によって適当に設定−rることかできる。
上記の如く含浸を行なり几水溶性高分子はf過膜の多孔
質層に保持されるが、数回の膜洗浄操作によって不純物
1−y極度に低分子量の水浴性高分子が除去さnる。
質層に保持されるが、数回の膜洗浄操作によって不純物
1−y極度に低分子量の水浴性高分子が除去さnる。
しかるのち、架橋剤m液に2請し、前記水溶性高分子を
架橋せしめる。このような架橋手段を施こすことVζよ
って水溶性高分子は三次元化して不溶化し0分子のがさ
ばD′?立体障害が大きくなるので、膜自体に結合せず
とも多孔質層の孔内に保持することができ、後の膜洗浄
によっても流出しないものとなる。
架橋せしめる。このような架橋手段を施こすことVζよ
って水溶性高分子は三次元化して不溶化し0分子のがさ
ばD′?立体障害が大きくなるので、膜自体に結合せず
とも多孔質層の孔内に保持することができ、後の膜洗浄
によっても流出しないものとなる。
このような架橋剤としては、グリオキサールグルタルア
ルデヒド、アジピンアルデヒド、マロンジアルデヒド、
ジアルデヒドM粉の如きジアルデヒド類、ヘキサメチレ
ンジイソシア$−ト、)ルエンンイソシアネートの如き
ジインシアネート類、ヘキサメチレンジインチオシアネ
ートの如きジイソチオンアネート類などが挙げられ、水
溶性高分子にポリアミノ酸を使用し次場合には水浴性カ
ルボジイミドなどの縮合試薬を用いることもできる。こ
れらのうち、特にジアルデヒド類ヤシインシアネート類
は水浴液中で比較的安定で反応性も高いために好適に用
いることができる。
ルデヒド、アジピンアルデヒド、マロンジアルデヒド、
ジアルデヒドM粉の如きジアルデヒド類、ヘキサメチレ
ンジイソシア$−ト、)ルエンンイソシアネートの如き
ジインシアネート類、ヘキサメチレンジインチオシアネ
ートの如きジイソチオンアネート類などが挙げられ、水
溶性高分子にポリアミノ酸を使用し次場合には水浴性カ
ルボジイミドなどの縮合試薬を用いることもできる。こ
れらのうち、特にジアルデヒド類ヤシインシアネート類
は水浴液中で比較的安定で反応性も高いために好適に用
いることができる。
上dd架橋剤は溶液状態1通常水浴液状態で開用するが
、水浴性高分子中の官能基量と該架橋剤中の官能基量と
のモル濃度比を2〜50.好ましくは6〜20とするこ
とによって、のちに酵素と結合する官能基量を充分に残
存させることができる。
、水浴性高分子中の官能基量と該架橋剤中の官能基量と
のモル濃度比を2〜50.好ましくは6〜20とするこ
とによって、のちに酵素と結合する官能基量を充分に残
存させることができる。
上記のようにして酵素固定用膜を得ることができるが、
酵素を固定化するに際して、上記のように架橋し71′
?、膜に6通常の洗浄処理である加圧洗浄によって多孔
質J−に残存する水架橋の水溶性高分子f未反応の架橋
剤を除去することが望ましい。
酵素を固定化するに際して、上記のように架橋し71′
?、膜に6通常の洗浄処理である加圧洗浄によって多孔
質J−に残存する水架橋の水溶性高分子f未反応の架橋
剤を除去することが望ましい。
このようにして得られた酵素固定用膜は、前記水溶性高
分子の官能基を介して共有結合で酵素を固定することに
より酵素固定膜とすることができる、前記水溶性高分子
はその分子末端や側鎖にアミン基、カルボキシル基、ヒ
ドロキシル基などの官能基を有しているので、既知の手
法を用いて酵素が有する官能基と直接、または前記架−
橋剤fカツフIJング剤によって間接的に共有結合させ
る。さらに、固定化された酵素の可動性を大きくシ、酵
巣反応を高める次めにスペーサーを介在させることもで
きる。
分子の官能基を介して共有結合で酵素を固定することに
より酵素固定膜とすることができる、前記水溶性高分子
はその分子末端や側鎖にアミン基、カルボキシル基、ヒ
ドロキシル基などの官能基を有しているので、既知の手
法を用いて酵素が有する官能基と直接、または前記架−
橋剤fカツフIJング剤によって間接的に共有結合させ
る。さらに、固定化された酵素の可動性を大きくシ、酵
巣反応を高める次めにスペーサーを介在させることもで
きる。
このような酵素としては特に限定さnるものではないが
1本発明により得られ几酵素固定膜を用いて濾過膜とし
ての特性を充分に発揮するためには、多!a類f蛋白質
の加水分解#素が有用で69゜例えばα−アミラーゼ、
グルコアミラーゼ、ペクチナーゼ、セルラーゼ、ムラミ
ダーゼの如き多糖類加水分解酵素、パパイン、ペプシン
トリプシン、キモトリプシン プロメライン プロテ
アーゼの如き蛋白質加水分解酵素などが挙げらnる。
1本発明により得られ几酵素固定膜を用いて濾過膜とし
ての特性を充分に発揮するためには、多!a類f蛋白質
の加水分解#素が有用で69゜例えばα−アミラーゼ、
グルコアミラーゼ、ペクチナーゼ、セルラーゼ、ムラミ
ダーゼの如き多糖類加水分解酵素、パパイン、ペプシン
トリプシン、キモトリプシン プロメライン プロテ
アーゼの如き蛋白質加水分解酵素などが挙げらnる。
上記酵素を含む溶液を透過させるに際しての加圧条件は
1通常0.1〜l Kg/c4の範囲に設定するのが望
ましい。刀口圧度合が大きすぎると、既に保持されてい
る水浴性高分子が圧密化されたノーを形成して、基質溶
液を透過させて酵素反応をさせる場合に、基質の透過移
動の障害となり、固定化した酵素を反応に有効活用する
ことができなくなることがある。
1通常0.1〜l Kg/c4の範囲に設定するのが望
ましい。刀口圧度合が大きすぎると、既に保持されてい
る水浴性高分子が圧密化されたノーを形成して、基質溶
液を透過させて酵素反応をさせる場合に、基質の透過移
動の障害となり、固定化した酵素を反応に有効活用する
ことができなくなることがある。
〈発明の効果〉
以とのように本発明の方法は、多孔質構造をMするP2
M膜を、水浴性高分子の浴液に浸漬し、さらに架橋剤m
液に浸漬して、水溶性高分子を架橋する比め水溶性高分
子の圧密化が起こりに〈<。
M膜を、水浴性高分子の浴液に浸漬し、さらに架橋剤m
液に浸漬して、水溶性高分子を架橋する比め水溶性高分
子の圧密化が起こりに〈<。
且つ多孔質層全体に略均−に水浴性高分子が架橋状態で
保持さnていると考えられ、透水性能に優れ且つ活性の
高い固定化酵素を得ることができる。
保持さnていると考えられ、透水性能に優れ且つ活性の
高い固定化酵素を得ることができる。
従って、この膜を酵素固定膜として開用すると酵素固定
用膜が高い透水性能を有しているため必然的に酵素を固
定した酵素固定膜も透水性能が優れ。
用膜が高い透水性能を有しているため必然的に酵素を固
定した酵素固定膜も透水性能が優れ。
また、酵素の自由度を確保するように高活性を維持しな
がら確実に固定化できるので、 &AIJにわたる酵素
反応にも酵素の離脱がなく開用することが可能となる。
がら確実に固定化できるので、 &AIJにわたる酵素
反応にも酵素の離脱がなく開用することが可能となる。
〈実施例〉
以下に本発明の実施例を示し、さらに詳細に説明するが
1本発明の技術的思想を逸脱しない範囲で檀々の応用が
可能である。
1本発明の技術的思想を逸脱しない範囲で檀々の応用が
可能である。
実施例1
内表面に0.1〜1.5μm、外表面に0.15〜0.
2μ胤の細孔が存在し1分画−分子量的1OL)万の多
孔質摘造を有するポリスルホン製中空糸状g(内径11
JIII外径1.8龍)を組み込んだ小型モジニール(
有効長9crIL、有効膜面積5L) 7 )を作製し
、これを0.04〜1.0 @量%誠度のポリエチレン
イミン(PEI)水m液(重量平均分子量的70,01
3G、1分子当たりのアミノ基数的400)20dに室
温で約16時間浸漬した。
2μ胤の細孔が存在し1分画−分子量的1OL)万の多
孔質摘造を有するポリスルホン製中空糸状g(内径11
JIII外径1.8龍)を組み込んだ小型モジニール(
有効長9crIL、有効膜面積5L) 7 )を作製し
、これを0.04〜1.0 @量%誠度のポリエチレン
イミン(PEI)水m液(重量平均分子量的70,01
3G、1分子当たりのアミノ基数的400)20dに室
温で約16時間浸漬した。
次いで水で洗浄後、0.02〜1.0重量%III度の
グルタルアルデヒド(GA)水溶液に約16時間室温で
浸漬し、多孔′R層に保持さtしているポリエチレンイ
ミンを架橋し比。
グルタルアルデヒド(GA)水溶液に約16時間室温で
浸漬し、多孔′R層に保持さtしているポリエチレンイ
ミンを架橋し比。
次いで、水で加圧(0,5即/−)洗浄し、未架橋のポ
リエチレンイミンf未反応のグルタルアルデヒドを除去
し酵素固定用膜を得た。
リエチレンイミンf未反応のグルタルアルデヒドを除去
し酵素固定用膜を得た。
上記のようにして得た酵素固定用膜に40℃にテ1.O
i!lit%譲度のグルタルアルデヒド水溶液に2時間
浸漬してポリエチレンイミンのアミン基を活性化した後
洗浄した。次に0.21ng/IIIの丈イクロデキス
トリングルカノトランスフェ2−ゼ(コンテザイム、天
野製薬製)溶液を0.3Kg/dの加圧下にて透過し、
共有結合によって酵素を固定した。
i!lit%譲度のグルタルアルデヒド水溶液に2時間
浸漬してポリエチレンイミンのアミン基を活性化した後
洗浄した。次に0.21ng/IIIの丈イクロデキス
トリングルカノトランスフェ2−ゼ(コンテザイム、天
野製薬製)溶液を0.3Kg/dの加圧下にて透過し、
共有結合によって酵素を固定した。
比較例1
O,04,6るいは0.4重量%娘度のポリエチレンイ
ミン200 d eよび1.0重量%濃度のグルタルア
ルデヒド水浴液を0.3 kC9/−の加圧下にて水層
性高分子の含浸および架橋を行なつ比以外は実施例1と
同様の操作を行ない、酵素固定用膜を得た。さらに実施
例1と同様に酵素を固定し比。
ミン200 d eよび1.0重量%濃度のグルタルア
ルデヒド水浴液を0.3 kC9/−の加圧下にて水層
性高分子の含浸および架橋を行なつ比以外は実施例1と
同様の操作を行ない、酵素固定用膜を得た。さらに実施
例1と同様に酵素を固定し比。
実施例1および比較例1で得た酵素固定用膜の透水性能
2よび酵素固定膜の透水性能と固定化酵素の活性を表1
に示す。透水性能は表1の(e)の条件で得7?1.膜
の純水透過流束の値を100として相対値で表わす相対
純水透過流束で示し、酵素活性はβ−ナイクロデキスト
リン分解速度で示し几。
2よび酵素固定膜の透水性能と固定化酵素の活性を表1
に示す。透水性能は表1の(e)の条件で得7?1.膜
の純水透過流束の値を100として相対値で表わす相対
純水透過流束で示し、酵素活性はβ−ナイクロデキスト
リン分解速度で示し几。
β−プイクロデキストリノ分解速度はpf(6,0,5
0℃、1.25道量%のグルコース存在゛ドでの0.5
重量%β−サイクロデ中ストリンの分解速変である。
0℃、1.25道量%のグルコース存在゛ドでの0.5
重量%β−サイクロデ中ストリンの分解速変である。
表1で明らかなように、実施例1の浸漬法で得友酵素固
定用膜の透水性能が優れ、また固定化酵素の活性も向上
し友。酵素活性の向上は水浴性高分子の圧密化が@減さ
れたことにより、水溶性高分子の官能基の利用率が高く
なった。あるいは。
定用膜の透水性能が優れ、また固定化酵素の活性も向上
し友。酵素活性の向上は水浴性高分子の圧密化が@減さ
れたことにより、水溶性高分子の官能基の利用率が高く
なった。あるいは。
水m性高分子が略均−に多孔質層に含浸され、酵素も略
均−に多孔質層に固定化さnた几め反応効率が増大し几
ためと考えられる。
均−に多孔質層に固定化さnた几め反応効率が増大し几
ためと考えられる。
また、50℃、pf(6,0の酢酸緩衝液を1週間透過
後の残存酵素活性は実施例1および比較例1ともおよそ
90%であり7′?、。
後の残存酵素活性は実施例1および比較例1ともおよそ
90%であり7′?、。
実施例2
シート状ポリスルホンaa外f過膜(日東電工■製r4
TU−3tso)を直径43111の円型に打抜き。
TU−3tso)を直径43111の円型に打抜き。
0.41℃%濃度のポリアリールアミン水溶液(直音平
均分子量to、000.1分子当比りのアミノ基数的1
750 ) lOdに室温で約16時間浸漬後、洗浄し
友。そして0.2電量%−度のへキサメチレンジインシ
アネート水浴液に室温で約16時間浸漬し、多孔’ll
l−に含浸されているポリアリールアミンを架橋した。
均分子量to、000.1分子当比りのアミノ基数的1
750 ) lOdに室温で約16時間浸漬後、洗浄し
友。そして0.2電量%−度のへキサメチレンジインシ
アネート水浴液に室温で約16時間浸漬し、多孔’ll
l−に含浸されているポリアリールアミンを架橋した。
次に膜を透過用セルに固定して、スキン層側より水で加
圧(0,5Kg/m )洗浄し、未架橋のポリアリール
アミンf未反応のジイソシアネートを除去し、酵素固定
用膜を得た。
圧(0,5Kg/m )洗浄し、未架橋のポリアリール
アミンf未反応のジイソシアネートを除去し、酵素固定
用膜を得た。
上記のようにして得几#素固定用換r(l扉y/dのプ
ロテアーゼ(三共製コクラーゼ5S)l’ll’[を実
施例1と同様に固定し1本発明の##A固定膜を得た。
ロテアーゼ(三共製コクラーゼ5S)l’ll’[を実
施例1と同様に固定し1本発明の##A固定膜を得た。
比較例2
実施例2におけるポリアリ−ルアばンおよびヘキナメチ
レンジイソシアネート水溶液を0.3 Kg/cdの圧
力下にて透過させ次以外は実施例2と同様の操作を行な
い、酵素固定用膜を作製し、さらに同様にプロテアーゼ
を固定し、酵素固定膜を得た。
レンジイソシアネート水溶液を0.3 Kg/cdの圧
力下にて透過させ次以外は実施例2と同様の操作を行な
い、酵素固定用膜を作製し、さらに同様にプロテアーゼ
を固定し、酵素固定膜を得た。
実施例2および比較例2で得友酵素固定用膜の純水透過
流束は実施例1の膜が約35%高かつ友。
流束は実施例1の膜が約35%高かつ友。
次に1両プロナアーゼ固定膜に1[盪%濃度のカゼイン
M液を0.3kp/−の加圧下にて連続的に供給して酵
素反応を行ない、透過液中の蛋白質分解物をケルダール
法、トリクロロ酢酸沈澱により測定した。いずnの透過
液もトリクロロ酵酸で沈澱が生じず、蛋白質が低分子ペ
プチドに分解されて−た。低分子ペプチドの生成速度は
27%ま九はグロテアーゼ固定換の純水透過流束r12
2%比較例2エリ実施例2で得られた酵素固定膜が高か
つ友。
M液を0.3kp/−の加圧下にて連続的に供給して酵
素反応を行ない、透過液中の蛋白質分解物をケルダール
法、トリクロロ酢酸沈澱により測定した。いずnの透過
液もトリクロロ酵酸で沈澱が生じず、蛋白質が低分子ペ
プチドに分解されて−た。低分子ペプチドの生成速度は
27%ま九はグロテアーゼ固定換の純水透過流束r12
2%比較例2エリ実施例2で得られた酵素固定膜が高か
つ友。
Claims (5)
- (1)多孔質構造を有するろ過膜を、少なくとも2個の
官能基を有する水溶性高分子の溶液に浸漬し、さらに架
橋剤溶液に浸漬して、該水溶性高分子を架橋する酵素固
定用膜の製造方法。 - (2)多孔質構造を有するろ過模がポリスルホン膜であ
る請求項(1)記載の酵素固定用膜の製造方法。 - (3)水溶性高分子がポリエチレンイミンまたはポリア
リールアミンである請求項(1)記載の酵素固定用膜の
製造方法。 - (4)架橋剤がジアルデヒドまたはジイソシアネートで
ある請求項(1)記載の酵素固定用膜の製造方法。 - (5)請求項(1)ないし(4)記載の方法で得られた
酵素固定用績に、水溶性高分子の官能基を介して酵素を
共有結合にて固定化することを特徴とする酵素固定膜の
製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4060689A JPH02219575A (ja) | 1989-02-20 | 1989-02-20 | 酵素固定用膜の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4060689A JPH02219575A (ja) | 1989-02-20 | 1989-02-20 | 酵素固定用膜の製造方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02219575A true JPH02219575A (ja) | 1990-09-03 |
Family
ID=12585178
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP4060689A Pending JPH02219575A (ja) | 1989-02-20 | 1989-02-20 | 酵素固定用膜の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH02219575A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8889373B2 (en) | 2010-08-12 | 2014-11-18 | Eastman Chemical Company | Enzyme catalyst immobilized on porous fluoropolymer support |
-
1989
- 1989-02-20 JP JP4060689A patent/JPH02219575A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8889373B2 (en) | 2010-08-12 | 2014-11-18 | Eastman Chemical Company | Enzyme catalyst immobilized on porous fluoropolymer support |
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