JPH02109980A - 酵素固定用中空糸状膜 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は酵素一定用中止糸状碩２よび該膜を用い′Ｃな
る中窓糸状＃素固定膜に関し、詳しくは内外両表面に緻
密ノーを有さす、多孔質構造のみからなる中壁糸状膜に
特定の処理？ｒ、施こしてなる酵素（ロ）定用中！糸状
Ｍｊ？よび酵素固定膜に関する。

〈従来の技術〉 近年、酵素反応を利用した工業的規模での実施は医薬品
ｆ食品工業の分野で盛んに行なわれているが、酵素自体
の価格が高価なことｆ、＃液状態にて使用した場合に反
応後における生成物と酵素の分離ｆ回収が困離であるこ
となどの間趙点から。

担持体に酵素ｔｄ定する。所謂固定化酵素の手法が種々
検討されている。

反応生成物と酵素の分離を酵素反応と同時に処理できる
方法として限外濾過膜の如＠膜を利用し九方法が研究さ
れており、精密分離精製の前処理として分子分画による
粗分離処理が極めて容易になるものとして注目されて訃
り、とりわけ、高分子基質から低分子生成物を得るため
の＃素反応への適用が期待されている。こｎらの一つと
して。

酵：Ａを膜に固定したメンブレンリアクターが提案され
、酵素を異方性限外濾過膜の多孔質部に閉じ込めて被覆
を施こす方法（特開昭５９−２５６８６号公＠）’Ｆ、
多孔多孔区部素をゲルと共に封入包括する方法（特公昭
５７−４１２３８号公報）などが開示さルているが、い
ずれの方法も酵素を長期間にわたって安定に保持できる
ものではない。

ま几、酵素を安定に保持するために、′に能基金有する
膜に直接共Ｍ結合によって酵ｆＡを固定する方法も提案
されているが、この方法では酵素活性が低下したり、酵
素が失活し７？：際の再生が困難であるなどの問題ケ有
するものでめ９．工業的規模での実用化に光分に耐えう
るものではない。

上記問題点ｔ−解決する之めに０本発明者らは既に、外
面に緻密ノｍ　ｋ有する非対称限外鑵遇膜からなる中を
糸状ｇ金円いた酵素４定用膜が、優れた自由度を保ちな
がら＃素一定でき、しかも固定化さルた＃索の活性は長
期間にわ之って維持されることを見い出した（’Ｎ願昭
６２−８０７１４号）。

しかし、このよりなＨ！Ｘは固定化する酵素の種類ＪＰ
一定化定性条件って、酵素反応中での膜の透水性能にバ
ラツキがｊ！ｂｖ、透水性能が大幅に低下す場合もあっ
た。

〈発明が解決しようとする課題〉 従って１本発明の第１の目的は、膜の透水性能全大幅に
低下させることなる酵素固定でき、且つ酵素を長期間に
わ之って＾活性に保持することができる＃Ｘ固定用中空
糸伏膜上提供することにある。

本発明の第２の目的は、上記酵素（２）に用中空糸状膜
を用いてなる＃素一定膜を提供することにある。

く課題全解決する几めの手段〉 本発明者らは上記目的を達成すべく鋭意検討ｒ直ｔ２之
結果、内外両表面に緻密ｔｆｉ４’を有さず、裏全体が
多孔質構造を有する中ｌ糸状膜に、水浴性高分子を含浸
させ、腋高分子を架橋剤によって架橋せしめ之膜が優れ
之自由度を維持しながら酵′Ａ全一定でき、且つ＃１ｇ
一定後も高い透水性能を維持できることを見い出し１本
発明を完成するに至った。

即ち８本発明の＃素−逆用中空糸状膜は、多孔質構造か
らなる中空糸状膜の多孔質ノーに、少なくとも２個の官
能基を有する水浴性高分子が架橋状態にて保持さ几てい
ることｔ特徴とするものである。

ｉ友、かかる中ｌ糸状膜に共有結合にて酵素を固定する
ことによって中正系状酵素固定換金得ることができる。

本発明において用いらルる中ｌ糸状膜は、有効膜面積が
大さく、固定化される酵素と基質との接触面積が大きく
なるものであって１分−分子量が５００、ｔｌｏｏ　〜
５．Ｕ００，０００の性能ｆｒ、有する多孔質構造から
なるものであり、内外両表面には緻密ノーｔＭさないも
のである。なお１本発明における分画分子量は、阻止率
９０％以上のボリエテレンオΦサイドの分子量から求め
友ものである。

通常、酵素−逆用の膜としては、単位膜体積当りの酵素
固定ｔを多くする之めに裏全体の孔径を小さくシ、膜の
内表面積を増大させる必要がある。

一方、膜の透水性能を高くするためには、膜強度が維持
される範囲でできる限り裏全体の孔径金穴きくする必要
がある。本発明はこのような相反する条件を調定するべ
く検討し几結果、孔径０．１〜２μｍに設定し几多孔質
構造の中１糸状属が特に優れ几特注を有することを見い
出した。但し２膜の外表面に存在する孔部は、酵素反応
中の膜の内１１（基質ｄ欣）から外１ｌｌ（生成物溶液
）への値生物汚染防止の観点から、！＆大孔径が０．５
μｓｆ超えないようにすることがｉｉ！ましい。

即ち１本発明の膜の多孔質構造は県体的には内表面に孔
径０．１〜２μｍの不定形の孔部金有し、外表面に最大
孔径が０．５μ溝を超えない略円形の孔部金、且つ内外
両表面間に位置する中間層に孔径０．１〜２μ懲の孔部
を有するものでめる。

本発明にて用いる中ｌ糸状膜は多孔′Ｒ酵造体である之
めに、酵素固定の際に裏全体にわ之る略均−な固定が可
能となり、ま九、緻密ノーを有さないのでｍｖｌ！Ｉｊ
ｉ！１ｉｌｖｃ起因する目詰１り等も防止でき、酵素一
定後も透水性能が低下しに〈＜、高い透水性を維持でき
るものである。

Ｊ：記中空糸状膜ｔｒｓ造するに際して用いる材料とし
では０例えば芳香族ポリスルホン、芳香族ポリエーテル
スルホン、芳＃族ポリアミド、ポリイミド、酢酸セルロ
ース、ポリアクリロニトリルなどが挙げられ、これらの
材料は後述する水ｍ−注高分子や酵素と反応するような
官能基を特に有゛する必要はなく、中空糸状膜に！Ｉ！
膜できるものであルば特に制ｒａはない。これらの膜材
料のうち、耐熱性ヤ機械的強度、耐薬品性の面で、芳香
族ポリスルホンが好適に使用できる。

上記中空糸状膜は既知の方法で製造することができる。

その−力として以’Ｆに芳香族ポリスルホン中空糸状膜
の製法を述べる。

芳香族ポリスルホンｔ−ｍ解する＊注有機溶剤と。

該溶剤と混和するが芳香族ポリスルホンｄ解しない溶剤
（以下、＃ｄ剤という）との混合ｍ剤に芳香族ポリスル
ホン會溶解して製膜溶液を調製し。

次に二重管機ノズルの外管に製１１！溶液を、また内管
に内部凝固液としての上記極性有機溶剤と水との混合５
ｉｔ−通液して、相対湿度８０％以上の加湿雰囲気中に
押出しｔのち、水中に１！ｌ漬して脱溶剤、ａＩＩ！ｆ
ｌさせることによって本発明に用いる中空糸状膜を得る
ことができる。

上記芳香族ポリスルホンの極性有ｆｉ　ｄ　剤、！：し
ては、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ジメチルホルムア
ミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド等
が好ましく用いられ、非溶剤としてはエチレングリコー
ル　ジエチレングリコール　グロビレングリコール、ポ
リエチレングリコールグリセリン等の脂肪族多側′ｒル
コール　メタノール　エタノール　イソグロビルアルコ
ール等の低級脂肪族アルコール　アセトン、メチルエチ
ルクトン等の低級脂肪族ケトン尋が好ましく！用できる
。なお、膜材質が他の高シト密λの場合は、上記以外の
溶剤も（資）用できることはいうよでもない。

混合溶剤中の非溶剤のｆｒｉｌｌ得らルる混合ｍ剤およ
び裂ｇ−液が均一でめれば特に開−さルなイカ、通常、
　５〜５０　重ｉｉ　％　、好ましくｒｔ２ｔ）〜４５
直量５の範囲で混合する。

また、二重管緘ノズルの内管に通液する内部凝液中の極
性有機溶剤の含有ｉｔは１通常７０〜９０重量％、好ま
しくは７５〜８５直量％の範囲で設定する。極性有機溶
剤のさ有象が多くなるほど傅ら几る中止糸状膜の内面が
多孔質化するので多孔度の調！Ｉを該溶剤量で行なうこ
とができる。

上記二重雪型ノズルから製膜ｆｆ！ｉ′ｌ！、及び内部
凝固液ｔ″７７１１湿雰囲気中に押出し、水中に浸漬す
るまでの更気中走行距離は通常、２〜５０　（ｍ　、好
ましくは５〜２０（ｍであり、望気中走行速７には通常
、５〜５０ｍ／分、好ましくは１０〜３ｏｍ／分とする
。

空気中走行距離がＯＣ：ＩＬ、即ちｌｉ樋水中に装膜ｄ
液′４ｆ：押出す場合、得られる中空糸状膜の外表面に
緻密ノーが形成され、目的とする中窓糸状膜が得られず
、走行距離が５ａＧＬを超える場合は中正系伏に製膜さ
れない場合が生じる。

装膜浴ｆＬ尋を押出す雰囲気中の加湿条件は相対ｍ度を
２０％以上、好ましくＦｉ８０％以上に設定する。相対
湿度が２０％に虜たない乾燥雰囲気では得られる中空糸
状膜の外表面が充分に多孔化さｎず、緻密ノーが形成さ
れるので好ましくない。

本発明の酵素固定用中空糸状膜は上記で得られた中！糸
状膜に２少なくとも２４ｗ４の官能基を有する水溶性高
分子水溶漱七言浸させて該水溶性高分子を多孔質ノー（
膜全体）に物理吸着させ、架橋剤によって架橋せしめて
得られる。このような水溶性高分子としては１例えばポ
リエチレンイミンボリグロピレンイミン　ポリブチレン
イミンの如きポリアルキレンイミン、ポリエチレングリ
コール　ボリグロピレ／グリコールの如きポリアルキレ
ンクリコ〜ルホリリジン　ポリスルホンノ類きポリアミ
ノ酸、ポリアリールアミンなどが挙げられ１通常２重量
平均分子量が約１．＋）００〜２００．０００．官能基
数が数十〜ｅａのものが好葦しく、Ｖ、用するｒＩＩ素
の種類ｆ膜材料の種類に応じて適宜選択することができ
る。これらの水溶性高分子のうち、ポリエチレンイぐン
ｆボリアリールアミンは官能基数の調節が容易で１反応
性も高いので好適に用いることができる。

上記水浴性高分子のｍ液を中空糸状膜に含浸する＃Ｃめ
之り、該ｍ液の＃ｊ質濃度は１重ｔ％以下。

好ましくは０．０５〜０．２５重菫％の範囲に設定する
。

Ｍ質護度が１重量％を超え之場合は溶液粘度が高くなり
、膜内に水溶性高分子が充分に含浸ざ几なかつたり、含
浸した水溶′改高分子が膜孔を間層して、透水性能が低
下したりすることがある。

と記のように水溶性高分子を中ｌ糸状膜に含浸し、物理
吸着させる方法としては、中を糸状膜を水溶性高分子水
浴液に所定時間浸漬する方法ｆ。

中ｌ糸状膜の内表面側ま九は外表面側から水浴゛注高シ
ト水ｆＩｊ液を刀口圧透過させる方法等があるが。

短時間で安定に水溶性高分子を吸着させる之めには、加
圧透過Ｖこよる方法が好ましい。

加圧透過によって水溶性高シト金言浸せしめる際のカロ
圧条件としては、０．１〜０．５　ＫＦ／／ｃｔＡの範
囲に設定することが好ましく、高加圧下での甘皮では多
孔′質重内部１で水浴性高分子の圧着化が生じ、膜孔を
閉扇し几り、逆にＩ吸着されずに換を通過する恐ｆＬが
ある、ま九訓圧条件が低くすぎると水浴性高分子の含浸
に時間がかかつ之り、多孔質ノー全体への均一な言＆を
行ない嬢い。

’！、ｆｊ、加圧透過する方向は内表面側、外表面側の
いずれの側からでもよいが、Ｂ！Ｘリアクターとして中
空系状ｇを数百〜数千本束ねてモジュールとじ之場合に
は６束ねられ比容中正系状膜に均一に水溶性高分子ｍ液
を流すという点から、内表面側からの加圧透過すること
が好ましい。

上記の如く含浸を行なつ之水溶′性高分子は中空糸状膜
全体、即ち多孔質ｌ−に略均−に物理吸着により保持さ
れるが、数回の膜洗浄操作によって未吸着の水浴性高分
子ｆ極度に低分子量の水溶性高分子が除去される。しか
るのち架橋剤ｍ液中に含浸せしめるか、前記水溶性高分
子浴液含浸時の加圧条件範囲内１通常は前記と同条Ｉ４
：Ｆにて水溶性高分子を透過した側から透過せしめて前
記水溶性高シトｆｒ、架橋せしめる。このような架橋手
段を施こすことによって水溶性高分子は三次元化して不
浴化し０分子のかさばりｆ立体障害が大きくなるので、
中ｌ糸状膜から脱離することなく、安定に膜の孔内に保
持することができる。

このような架橋剤としては、グリオキサールグルタルア
ルデヒド、アジピンアルデヒド、マロンジアルデヒド、
ジアルデヒド澱粉の如きジアルデヒド類、ヘキサメチレ
ンジインシアネート、トルエンジイソシアネートの如き
ジイノ′７ア木→ト類、ヘキサメチレンジインチオシア
ネートのｇｏ　ｅジイソチオシアネート類などが挙げら
れ、水溶性高分子にポリアミノ酸を更用した場合ＶＣは
水溶性カルボジイミドなどの縮合試薬を用いることもで
きる。こｎらのうち、特にジアルデヒドｆＡＰジインシ
アネート類は水ｍ液中で比較的安定で反応性も高い几め
に好適に用いることができる。

上目ｒ２架橋剤に浴液状態で１用するが、水溶性高分子
中の官能基量と該架橋剤中の官能基★とのモルー度比を
２〜５０．好ましくは６〜２０とすることによって、の
ちにｒ＃累と結合する官能基！＆を充分に残存させるこ
とができる。

ｋ、記のようにして本発明の酵素（２）電用中空糸膜上
ｒ得ることができるが、酵累金面定化するに際して上記
のように架橋した膜に通常の洗浄処理である膜洗浄によ
って多孔質Ｊ−に残ｆｔする未架橋の水浴性高分子千木
反応の架橋剤を除去することが好ましい。

このようにして得られた酵ｌＡ固逆用中正系状は酵素ｍ
夜を内表面側もしくは外表面側より透過させて、前記水
溶性高分子の官能基を介して共有結合で酵素を一定化す
ることによって、酵素固定膜となる。

前記水溶性高分子はその分子末端やＳＷＳにアミン基、
カルホキフル基、ヒドロキシル基などの官能基を有して
いるので、既知の手法を用いてｒｆ＃累がＭする官能基
と直接、ま之は前記架橋剤ｆカップリング剤によってＩ
！ｔｌ　ｌｉｄ的に共有結合させる。さらに、Ｉａ定化
さｆ′Ｌ之酵素の可動性を大きくシ、酵素反応を高める
之めにスベー丈−を介在させることもできる。

このような酵素としては特に限定さｎるものではないが
１本発明の酵素固定膜を用いて謙過膜としての持゛注金
充分に発揮する之めには多１１８＠ヤ蛋白質の加水分解
酵素が有用であり１例えばα−アミラーゼ、グルコアミ
ラーゼ、ペクチナーゼ、セル・クーゼ、ムラミダーゼの
如き多ＩＩ類加水分解酵虞、パパイン　ペグ７／、トリ
グンン、キモトリプンン　プロメライン、グロテアーゼ
の如き蛋白質加水分解酵素などが挙げられる。

〈発明の効果〉 以とのように本発明の酵′Ｊｇ同逆用中ｌ糸状膜は。

内外両表面にｍ′！！ｊノーを舊さず多孔質構造からな
り。

裏全体に略均−に特定の水浴性高分子が架橋状態にて保
持されているので、該水浴性高分子の有する官能基金倉
して酵素を共有結合にて固定することができる。筐几、
緻密層をＭさないので、透水性能に優れ、酵素固定後で
も肴しい透水性能の低ＦＬ？生じないものである。

鑓って、このＭ４を酵素固定膜として便用すると。

以下のμ口き効果を突する。

即ち、酵素の目出度を確保するように高活性全維持しな
がら確実に固定できるので、長期間にわ友る酵素反応に
も酵素の離脱がなく開用することがＯＴ能となる。また
本発明の膜は加圧条件Ｆにて水峙性高シト等金含浸、透
過させると短時間での＃造ができ、基質ｍｅ、の透過経
路である孔内に酵Ｘ′に保持しているので接触機会が確
実に多くなり。

反応と同時に反応生成物の分ｌｌｌを短時間で達成でき
るので、基質溶液の大量処理を効率的に行なえる。

さらに、緻密層をＭざない膜を用いているので。

膜の目詰りが少なく、また扁い透水性能を有するので低
圧力にて効率的な酵素反応を行なうことができる。

〈実施例〉 以下に本発明の実兄例を示し、さらに詳細に説明するが
１本発明の技術的思想を逸脱しない範囲で樵々の応用が
可能でるる。

′Ａ施例１ Ｎ−メチル−２−ピロリドン５８重量部と、ジエチレン
グリコール２５重量部との混合浴剤に。

芳香族ポリスルホン樹脂（Ｐ−３５００，ＵＣＣ社製）
１７ポｔｓ’ｔｓ解して製膜溶液金調製し友。

二改管戯ノズルの外管から上記ｊｓ膜浴液ｔ、内管から
は内部凝固液として８０直濾％のＮ−メチル−２−ピロ
リドン水溶液を相対湿度９０％、温ｆｆ４０’ｃの莫気
中に押出し、望気中をＩＵｃｍ走行させたのち、水温２
５℃の水中ｖｃ浸膚して水中で脱ｍ剤化、凝固させるこ
とによって、内径１．１鵡。

外径１．８１１１の中正糸状膜を得た。

この膜の構−１ＩＬ全走査型電子顕微跳にて観察し几と
ころ、１７３表面には０．１〜１．５μｍの孔径１ｊｒ
、有する不定形孔（第１図参照）が存在し、外表面には
孔径０．１５〜０．２μ溝の略円形の孔部（、＠２図参
照）の存在が確認された。ま之、内外両表面間に位置す
る中間ノーには０．５〜１．５μ亀の孔径を育する孔部
（第３図、第４図参照）が確認さ几た。

さらに、この膜の分画性能をポリエチレンオキ丈イドの
阻止率から推定すると１分画分子ｔは約１００万であつ
几。

上記で侍几中空糸膜上６０本を組み込んだ小型モジュー
ル（有効膜長１５ｃｒＩＬ、有効膜面積３００ｃｄ　）
を作成し、膜の内表面側から０．１％１量％護変のポリ
エチレンイミン水浴液（１量平均分子童７０．０００，
１分子当りのアミノ基故約４００）ｆ。

０．３ゆ／ｅ４のカロ圧Ｆにて約３０分透過させた。

さらに約５ｇの水を用い同圧ｆにて洗浄したのち、モジ
ュール全体ｔｌ−４０℃に維持しながら架橋剤としてｏ
、ｏｓｙ１重％のグルタルアルデヒド溶液（Ｖん酸４１
儒液ｐＨ７，ｕ）を同加圧下で透過し、多孔質ノーに保
持されているポリエチレンイミンを架橋した。

室温下１１Ｖ／Ｉ：４のカロ圧条件で中を糸状膜の外表
面側より純水にて逆洗＃ｅ行ない未吸着のポリエチレン
イミンや未反応のグルタルアルデヒド金除去して本発明
の酵素固定用中空糸状ｌ１ＩＩ′ｆ、得た。

この膜の純水透過流束（測定条件：平均圧力ＩＱ／ｄ　
）は２８４　ｇ／ｍ’−ｈ−ａｔｍ　ａｔ　２５℃で６
　ッ７ｊ。

Ｊ：記のようにして得几酵素固逆用中空糸状膜に。

４０℃にて内表面側から２．５重量％のグルタルアルデ
ヒド溶液（りん酸緩鴬液ｐＨ７，０）　？Ｉ：　０．　
ｌ　ｋｃｉ／ｃｄの〃０圧条件Ｖこでｉｔ！遇し、ポリ
エチレンイミンの１ミノ基を活性化した。同加圧条件に
て水洗し之のちＬｔｎ９／ゴのゲルコアきラーゼ浴液（
酢酸緩衝液ｐＨｓ、ｏ）′ｆｒ、前記加圧Ｆにて透過し
共有結合によってＩＩ！ｉｉｆ化金行ない、グルコアミ
ラーゼ固定膜を得た。

この固定膜の純水透過流束は１４５１／ｒｌ・ｈ・ａｔ
ｍａｔ２５’ｃであり、＃素因走化前の５１％の透過流
束を維持してい友。

比較例１ 実施例１において製膜ｍ液の！気中走行距離ｔｏ　ｃ！
ＩＬ、即ち、二重管型ノズルからｌＪ！接水中へ製膜ｍ
液を押出し友以外は、実施例１と同様にして中正系状ｇ
を得た。

この膜の４通を走ｆｍ電子頑倣虜にて嶋察したところ、
外表面ｖｃ緻＠１−を有し、その他の構造は実施例１に
て得らｔ’Ｌｆ１−中ｌ糸状膜とほば同様で６つ几（第
５図、第６図参照）。′ま几１分画分子量は約１０万で
あり、純水透過流束は９４６／ｒｒｌ・ｈ・ａｔｍａｔ
２５℃で６つ九。

このようにして得られた中空糸状膜に実施例１と同様に
してグルコアミラーゼを固定化してグルコアミラーゼ固
定膜を得比。

この固定膜の純水透過流束は９５６／ｒｌ−ｈ−ａｔｍ
ａｔ２５℃であり、酵素固定化前の１０％の透過流束に
低−Ｆしてい比、 上記実施例１および比較例１にて得たグルコアゼラーゼ
固定膜に、ｌ直置％の液化デンプン溶液（酢酸４１ｇＲ
液ＰＨ５，０１中だ糸状膜の同表面側から、　０．２ｋ
ｇ／Ｉ４の加圧下で供給し、５０１：にて酵素反応を行
なり九。

＃虞反応開始３０分後の透過流束、透過液中の全糖量２
よびグルコース盪から求めたグルコース生成速度と透過
液中のグルコース含有率ｔ−調べた。

結果ｔ−第１表に示す。

第１表 比較例２ 架橋剤としてのグルタルアルデヒドｍ液を透過せず、ポ
リエチレンイミンの架Ｊａ処虐を行なわなかった以外は
実施例１と同様の操作を行ない物理吸着法のみでグルコ
アゼラーゼ固定膜を得之。

実月例１及び比較例２にて得られたグルコアミラーゼ固
定膜に１重量％のマルトースｆ＃液（酢酸ａ備１ｐ１−
Ｌｓ、ｏ）全中空系状膜の内表面側から０．２に！’／
ｃ４のカロ圧下で供給し、４ｔ）℃にてｊ５［反応ｉ１
０日Ｉｉ１続け１反応開始３０分俊と１０日後における
透過液中の生成グルコース盪ｔ−測定し念。

上記式により活性の保持率を調べた結果、実施例１にて
得られた固定膜は活゛注保持率９８％であり、安定にグ
ルコアミラーゼが固定化さ７ｔていることが示唆され几
。

一方、比較例２にて得らｎた固定膜の４合、活性保持率
が２８％に大１鴫低ドして２９．大半の酵素が流出し之
ものと推定さｎる。

実施例２ 実施例１と同じ中ｌ糸状膜からなる小型モジュールの内
表面側から、０．１ｉＪｉ％のボリアリールアミン水溶
液（＠濾平均分子１に１０，０００，１分子当りのアミ
ノ基数約１，７５０　）　ｖｆ−０，２時／−の刃口圧
下にて約３０分間透過させ之。

さらに約５ｇの水を用い、同圧ｆにて先側し友のち、架
橋剤として０．１重ｔ％のヘキサメチレンジインシアネ
ート水ｍ液を開扉圧下にて透過し。

多孔質ノーに吸着、保持されているポリアリールアミ／
ｌ−架橋し念。

次に膜洗浄によって水＋５５を充分に行ない、未吸着の
ボリアリールアミンや未反応の架橋剤金除去して本発明
の＃素固逆用中空糸伏模を侍之。

上記のようにして得た酵素固定用中正糸状膜に。

４０℃にて内表面側から２．５（−徽％のグルタルアル
デヒド溶液（９んＩＩＷ４ＬｄＥ［Ｐ）１７．０　）　
０．１に９／ｃｔ＆の加圧下にて透過させ、ボリアリー
ルアミンの官能基忙活注化させ比。同カロ圧条件下にて
水洗したのち３ｍｇ／ｄのグロテアーゼのりん酸緩備液
（ｐＨ７，５）浴液ｉｔ）、１Ｋｇ／−の加圧下、４℃
にて透過し。

共Ｍ結合によって固定化を行ない、グロテアーゼ固定ｇ
を得九〇 傅らルたプロテア−ゼ固定膜をりん酸緩負液（ＰＨ７，
５）にて充分に逆洗浄し九のち、１重量％のカゼイン博
液（りん酸緩漬液、　Ｐ）１７．５　）全０．２々／ｃ
４の加圧下にて連続的に供給して＃素反応を行ない、透
過液中の蛋白質分解＊ｔ−ケルダール法。

トリクロロ酢酸沈澱により測定し之。透過液はトリクロ
ロ酢酸で沈澱を生じず、該液中の菫嬌量から算出して０
．９ｆｉ量％の濃度の低分子ペプチドが連続して１００
時間透過していることが判明し比。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第４図は実施例１にて傅之酵素ｔＩ！ｄ定用中
空糸状膜の構造を示す走ｆ型戒子顧微虜写爽であり、第
５図２よびＪ６図は比較例１にて得九酵素固定用中空糸
状膜の構造金示す走ｆ型邂子顕微鏡写真である。倍率は
第３図１に除き、２０．０００倍である。第３図下段は
２Ｌ）０倍、第３図１段は部分拡大（２，０００倍）の
写真である。 特杆出願人 日東電工株式会社 代表者　鎌　居　五　朗 １゜ ２゜ ３゜ （自発） 手続補正書 昭和６３年１２月１２ 日 事件の表示 昭和６３年 特 許 願 第２６２４４３号 発明の名称 酵素固定用中空糸状膜 補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 郵便番号　　　５６７ 住　　所　　　大阪府茨木市下穂積１丁目１番２号名　
称（３９６）日東電工株式会社 （１）明細書第１４頁第２行目の「酵素固定用中空糸状
」を、「酵素固定用中空糸状膜」と補正する。 （２）同第１９頁第１８行目のｒ　９５　Ｉｔ　／　ｒ
ｆｒ−ｈ−ａｔａ＋　Ｊを、ｒ　９．５　Ｉｔ／　ｒｄ
　−ｈ−ａｔｍ　Ｊ　と補正する。 （以上） ５゜ 補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 手続（１１正書（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和６３年　特許願　第２６２４４３号２、発明の名称 酵素固定用中空糸状膜 ３、補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 郵便番号　　　５６７ 住　　所　　　大阪府茨木市下穂積１丁目１番２号名　
称（３９６）日東電工株式会社 （１）明細書第１７頁第７行目の「（第１図参照）」を
削除する。 （２）同頁第８行目の「（第２図参照）」を削除する。 （３）同頁第１１行目の「（第３図、第４図参照）」を
削除する。 （４）明細書第１９真第１２行目の［（第５図、第６図
参照）」を削除する。 （５）明細書第２３頁第９行目〜第１６行目の、［第１
図〜第４図は・・・の写真である。」を削除する。 （６）図面（企図）を削除する。 （以上） ４、補正命令の日付 平成　元年　１月３１日 ５、補正の対象

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）多孔質構造からなる中空糸状膜の多孔質層に、少
   なくとも２個の官能基を有する水溶性高分子が架橋状態
   にて保持されていることを特徴とする酵素固定用中空糸
   状膜。
2. （２）中空糸状膜の多孔質構造が、内表面に孔径０．１
   〜２μｍの不定形孔を有し、外表面に最大孔径が０．５
   μｍを超えない略円形孔を有し、且つ内外両表面に存在
   する中間層に孔径０．１〜２μｍの孔部を有するもので
   ある請求項（１）記載の酵素固定用中空糸状膜。
3. （３）請求項（１）又は（２）記載の酵素固定用中空糸
   状膜に酵素が共有結合にて固定化されてなる中空糸状酵
   素固定膜。