JPS60112721A - コラ−ゲン−トロンビン組成物 - Google Patents

コラ−ゲン−トロンビン組成物

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JPS60112721A
JPS60112721A JP59172522A JP17252284A JPS60112721A JP S60112721 A JPS60112721 A JP S60112721A JP 59172522 A JP59172522 A JP 59172522A JP 17252284 A JP17252284 A JP 17252284A JP S60112721 A JPS60112721 A JP S60112721A
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thrombin
manufacturing
solution
freeze
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 皮先公１ 本発明はコラーゲン−トロンビン組成物、・より特定し
ていえば、貯蔵安定性を有するコラーゲン−トロンビン
組成物に関する。
更米挟涛 ここに使用される「天然コラーゲン」という語は、化学
的変性を受けることなしには、アルカリ水溶液または無
機塩溶液に溶解しないコラーゲンを意味し、牛皮、はぎ
皮、その他は乳類、は由類の皮膚を含む。より特定して
いえば、天然不溶性コラーゲンとは牛の生皮の銀面と肉
面の間の中間層である真皮を意味する。
若い動物ではそのコラーゲンにある程度の溶性を４える
分子間またはフィブリル間の架橋はほとんどない。
ここに使用される「ネイティヴコラーゲン（ｒ＋ａｔｉ
ｖｅ　ｃｏｌｌａｇｅｎ）　Ｊとは、天然の不溶性コラ
ーゲンであろうと可溶性コラーゲンであろうと、蛋白質
の第４次構造が保存されているコラーゲンを意味する。
コラーゲンは結合組織を構成し、高等を椎動物の繊維蛋
白質の主要なタイプである。コラーゲンはその天然の状
態で３末鎖ら線として存在し、１線にならんだ３末鎖に
一定の周期性がある。コラーゲンの３末鎖ら線の形は時
にフィブリルとよばれ、フィブリルは約６４０λの軸方
向の周期をもって１線にならぶ。
数種のタイプのコラーゲンがあるが、主要なタイプはｒ
タイプＩＪとよばれ、それは皮膚、骨、鮭の主要なコラ
ーゲンである。タイプ■コラーゲンは［α１（Ｉ）２α
２］の鎖状構造を有する。
α１（■）とα２鎖は同族である。
実質的に純粋な形のコラーゲンの利用が、米国特許第３
９３９８３１号、３５１４５１８号に開示されているよ
うな、やけど用手当材料や、米国特許第３１５７５２４
や３６２８９７４号に開示されているような同様の医学
上の応用として提案されている。
従来提案されたコラーゲンのおおくの用途のうちには１
１血剤としての用途がある。コラーゲンは血液の凝固と
治癒を促進することが知られている。市血剤または体内
埋没用に使用されるときのコラーゲンの利点のひとつは
コラーゲンが酵素による消化やその他の生物学的過程に
よって溶解することである。これは第１義的にはコラー
ゲンの本来の性質であり、それゆえ、コラーゲンが体内
に埋没されるときには、その本来の性質が維持されるこ
とが望ましい。
さらに、局所止血や組織結合はトロンビンのような血液
凝固因子によって達成されることが認められている。例
えば、米国特許第２４３３２９９号や４３６３３１９号
に開示されているように、血液凝固剤としてトロンビン
を含む数種の組成物が提案されている。乾燥状態のトロ
ンビンは密閉容器にいれて供給されるとき、貯蔵安定性
を有する。そのようなトロンビンを使用するには容器か
ら出してただちに使用しなければならない、トロンビン
それ自身は取り扱いと安定性に関する問題のゆえに、血
液凝固剤として限定された用途を有するのみである。そ
の最も望ましい形態においてトロンビンは、傷に適用で
きるように、ある種のパッドや基層に配合される０体外
の凝固部位に使用するために、貯蔵安定性を有するトロ
ンビンパッドやトロンビン含有基層を提供するための多
くの試みがなされたが、成功したものもあり、しないも
のもある、埋没材料に関しては、コラーゲンとトロンビ
ンの組み合せは内部の傷の治癒に理想的であり、特に外
科手術に有用である。コラーゲンはトロンビンの担体と
して使用でき、そのなかに含浸された［ロンビンを含む
コラーゲンパッド等は凝固促進のために傷に使用するこ
とができ、それはあとで生体系のなかで消化される。
これらの努力の大部分は、安定化したトロンビン溶液ま
たは安定化しないトロンビン溶液をコラーゲンの布はく
、パッド等に配合することに限られていた。しかしなが
ら、このようなトロンビン含有コラーゲンの基層は、貯
蔵安定性に問題があるので、ただちに使用しなければな
らない。さらに、トロンビン含有コラーゲン基層のなか
で、トロンビンが非常に移動するので、含浸パッドが外
科手術で使用されるときに、トロンビンが特定の器官に
漏出する潜在的可能性がある。コラーゲン−トロンビン
の組み合せの例は南アフリカ特許出願第８２０１２３号
（発明の名称Ｍａｔｅｒｉａｌ　ｆｏｒＳｅａｌｉｎｇ
　ａｎｄ　Ｈｅａｌｉｎｇ　ｏｆ　Ｗｏｕｎｄ）に開示
されている組成物である。それゆえ、そのなかでトロン
ビンが移動せず、また特定器官に移行することのない、
しかも貯蔵安定性を有するトロンビン含浸コラーゲン基
層を提供することが当業者間に望まれていた。
、　のン　的記 本発明のコラーゲン−トロンビン止血性組成物の製法は
、塩基性ｐＨのもとでコラーゲンとトロンビンの均質水
性混合物を形成し、該コラーゲン−トロンビン混合物を
冷凍乾燥して、そのなかにトロンビンを含む安定なコラ
ーゲンスポンジを形成することからなる。この方法に使
用されるコラーゲンは生体内に置かれるとき、吸収され
る。さらに、冷凍乾燥したコラーゲン製品は、生体内に
置かれるときに吸収されるコラーゲンとコラーゲン内に
分散したトロンビンからなる。このコラーゲン製品は貯
蔵安定性を有する。
ｉ里立且１遊ＩＩ 本発明の実施に有用なコラーゲンは生体内で酵素による
消化またはその他の生物学的過程によって溶解すること
のできるものである。もっとも好ましくは、コラーゲン
は潜在的に可溶性のｌネイティヴコラーゲンか、生来的
に架橋していて酸性または塩基性の媒質のいずれにも不
溶の天然不溶性コラーゲンである。
さらに、水分散性または可溶性になるように処理された
コラーゲンも、再構成されたときに第４次構造を維持し
、かくて、生体内で酵素的消化やその他の生物学的過程
によって溶解する能力を維持する限り、使用できる。本
発明の実施に有用な天然不溶性コラーゲンは米国特許４
４１２９４７号に記載されている。
架橋していない本発明の実施に有用なネイティヴコラー
ゲンは、第４次構造を維持しながら切断された個々のポ
リペプチド鎖のあいだに架橋フィブリル間結合を有し、
少なくとも酸性媒質に可溶であるものである。そのよう
なコラーゲンを製造する典型的な方法は米国特許第４２
７９８１２号に開示されている。当業者間に知られてい
る分散性または可溶性のコラーゲンを製造する他の方法
も、コラーゲンの本来の性質が維持される限り使用でき
る。
本発明方法の実施に有用なトロンビンはヒト。
ブタ、ウシまたはウマに由来するものでよい。トロンビ
ンは当業者に公知の方法でつくることができ、典型的に
はプロトロンビンから製造される。
本発明の実施に有用なコラーゲンを製造するためには、
特定のコラーゲンを水、典型的には酸性媒質中に分散し
、満足な分散または溶解を起させる。分散物は好ましく
は、水中に約０．１ないし約０．６重に％のコラーゲン
を含む。コラーゲンの分散に続いて、必ずしも必要では
ないが、好ましくは蒸留水に対して透析して塩類を除去
し、次いブ、１１０北にト橿Ｌｌ”＋スト盾ζ★鋳葎＋
トリウム水溶液に対して透析する。第２回目の透析、即
ちｐＨ透析は滅菌を維持し、さらに、酸性コラーゲン溶
液の塩基性側へのより制御した転化を起すのに好ましい
。典型的には、透析後のコラーゲン溶液のｐＨは約７．
１ないし約８．０である６コラーゲンは通常約０．３規
定ないし約３規定の０度の水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウムまたは同様の塩基の水溶液中に対して透析される
。透析後に純粋な形のトロンビン粉末が水性コラーゲン
分散液または溶液に加えられ、均質になるまで攪拌され
る。
トロンビン粉末はコラーゲン０．１ｇにつき３００単位
以トの濃度で配合される。この濃度以下ではコラーゲン
製品は十分な止血性を示さないことがわかった。溶液中
に含まれるトロンビンの最大限部というものはない、し
かしながら、コラーゲンＯ，１ｇについて、１１，００
０単位までが特に有効である。
コラーゲン−トロンビン混合物の均一分散液または溶液
の形成後に、溶液または分散液を盆や皿のような適当な
容器に入れて冷凍乾燥する。当業者によく知られた冷凍
乾燥法が使用できるが、コラーゲン結合のある程度の低
温分解を起して、遊離基を生ずるような冷凍乾燥法が特
に好ましい。
そのような方法は、コラーゲン−トロンビン溶液の温度
を毎時間−１８℃ないし一２４℃の割合で一６０℃ない
し一７０℃まで冷却し、凍った溶液を初期温度−６０℃
ないし一７０℃で１Ｏ−３ないし１０−５ｔｏｒｒで真
空昇華することである。真空乾燥操作は約１２ないし２
４時間を要し、最終温度３０℃でおわる。冷凍乾燥は真
空昇華に先立つコラーゲン溶液の温度が一２０℃である
ように操作してもよい。
コラーゲン溶液が冷凍乾燥されて水分が除去された後、
そのなかにトロンビンが分散したコラーゲンスポンジと
なる。
このように製造されたコラーゲン製品は貯蔵安定性があ
り、止血剤として特に有効であり、特にｌｆ：ｌｌ１ｌ
剤が体内に保留されねばならない場合に有効である。か
くて外科手術中にコラーゲン製品は止血のために特定の
切開部や傷の部分に置かれ、傷と接触して、および体内
に留まることができる。
時間の経過とともに、コラーゲン製品すなわちスポンジ
は酵素による消化やその他の生物学的過程によって溶解
する。
本発明は次の実施例によってさらに十分に理解されるで
あろうが、これらに限定されるものでははない。
実施例１ 米国特許第４２７９８１２号の実施例１に記載の方法に
よって製造したコラーゲン溶液３０−１を適当な容器に
入れた。コラーゲン溶液は固形分０．２重量％であった
。コラーゲン溶液は蒸留水に対して透析して残留塩分を
除去した。蒸留水に対する透析の後、コラーゲン溶液は
さらに水酸化ナトリウムの０．１Ｎ水溶液に対してＰＨ
７、２まで透析した。第２回目の透析の後に、実質的に
純粋なトロンビン粉末（１２ｇ　（６，６Ｏ０単位）を
コラーゲン溶液に加え、あきらかに均質になるまで攪拌
した。コラーゲン溶液を皿に入れ。
−６０℃まで毎時間−２０℃の割合で冷却し、−６０℃
〜−７０℃で冷凍した０次いで、コラーゲンは一６０℃
の初期温度で冷凍乾燥し、１６時間後に３０℃で乾燥を
終った。滅菌条件下で室温で１週間貯蔵後、コラーゲン
製品は試験され、トロンビン７．０Ｏ０単位を含むこと
がわかったが、使用したトロンビンに対して少し−Ｆま
わった回収率であった。
実施例２ 米国特許４４１２９４７号の実施例１に記載の方法で製
造した架橋ネイティヴコラーゲンの０．２重ψ％分散液
３０１を０．ＩＮ水酸化ナトリウム溶液に対してｐＨ７
，２まで透析した。トロンビン粉末を実施例１と同様に
して同一の濃度で加えた。生成物を実施例１と同様に冷
凍乾燥した。このようにして得られたコラーゲン製品を
貯蔵した後に、試験したが、コラーゲン製品の製造のた
めに最初に使用した同量のトロンビンが有効に含まれて
いた。
実施例３ 実施例１を繰り返した。ただし、コラーゲンは透析せず
、固形分０．３％で０．ＩＮ水酸化ナトリウム溶液でｐ
Ｈを７．２に調節し、りん酸緩衝液を加えた。・実施例
１のように０．１ｇのトロンビン粉末をコラーゲン溶液
に配合し、実施例１のように冷凍乾燥した。このように
製造されたコラーゲン製品は貯蔵後にトロンビン活性を
試験したが、３，１４７単位を示し、最初に加えた縫に
ほぼ等しかった。
本発明のコラーゲン製品は安定性のために他の安定剤を
転化する必要がない、さらにトロンビンのコラーゲンに
よる固定のために体内＋１−面剤として特に有用である
。
本発明は特定材料と特定方法について詳細に説明された
が、それに限定されるものではなく特許請求の範囲によ
ってのみ限定されるものである。
特許出願人　ジートン・カンパニー 代理人　弁理士　松井政広（外１名）

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、　１１１７＆性ｐＨにおいてコラーゲンとトロンビ
    ンの均質水性混合物を形成し、 該コラーゲン−トロンビン混合物を冷凍乾燥して、その
    なかにコラーゲンを含み、生体内に置かれたときに該コ
    ラーゲンが吸収されうる安定なコラーゲンスポンジを形
    成することからなるコラーゲン−トロンビン止血組成物
    の製法。 ２、特許請求の範囲第１項記載の製法であって、該コラ
    ーゲン−トロンビン混合物が約７．１ないし約８．０の
    ｐ　Ｈである製法。 ３、　特許請求の範囲第１項記載の製法であって、コラ
    ーゲン対トロンビンの比がトロンビン３００牛位または
    それ以上に対してコラーゲン約０．１ｇである製法。 ４、　４′ｆ許請求の範囲第１項記載の製法↑あって、
    水性混合物中のコラーゲンが　約０．１ないし約０．６
    重量％である製法。 ５、特許請求の範囲第１項記載の製法であって、コラー
    ゲンがネイティヴコラーゲンである製法。 ６、特許請求の範囲第１項記載の製法であって。 該コラーゲンが天然不溶性コラーゲンである製法。 ７、生体内に置かれたときに吸収されるコラーゲンと該
    コラーゲン中に分散したトロンビンからなり、冷凍乾燥
    された、貯蔵安定性を有するコラーゲン製品。 ８、　特許請求の範囲第７項記載の製品であって。 該コラーゲンがスポンジ状であるもの。 ９、特許請求の範囲第７項記載の製品であって、コラー
    ゲン対トロンビンの比がトロンビン３００単位またはそ
    れ以上に対してコラーゲン約０．１ｇである製品。 １０、特許請求の範囲第７項記載の製品であって、コラ
    ーゲンが天然不溶性コラーゲンである製品。 １１、特許請求の範囲第７項記載の製品であって、コラ
    ーゲンがネイティヴコラーゲンである製品。
JP59172522A 1983-11-16 1984-08-21 コラ−ゲン−トロンビン組成物 Pending JPS60112721A (ja)

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US06/552,110 US4515637A (en) 1983-11-16 1983-11-16 Collagen-thrombin compositions

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US (1) US4515637A (ja)
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JP (1) JPS60112721A (ja)
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