BR112013027567B1

BR112013027567B1 - Composição hemostática, método para preparar uma composição hemostática, composição e kit

Info

Publication number: BR112013027567B1
Application number: BR112013027567-7A
Authority: BR
Inventors: Christian Gagnieu; Patricia Forest; Sylvain Picot
Original assignee: Biom'up France SAS
Priority date: 2011-04-27
Filing date: 2012-04-26
Publication date: 2022-03-29
Also published as: DK3513803T3; SI2701729T1; CN106390186B; CN103635202B; US10342856B2; CA2830659A1; US20140023714A1; JP2014512403A; EP2701729A1; AU2021200468A1; PL2701729T3; EP3513803A1; CN103635202A; ES2882911T3; BR112013027567A2; US20230381288A1; US9283187B2; US20180318403A1; US9662374B2; US20160166655A1

Abstract

COMPOSIÇÃO HEMOSTÁTICA, MÉTODO PARA PREPARAR UMA COMPOSIÇÃO HEMOSTÁTICA, COMPOSIÇÃO E KIT. Trata-se de uma composição hermostática em forma de pó que compreende colágeno do tipo fibrilar que compreende um teor de colágeno fibroso e/ou colágeno fibrilar de pelo menos 70% em peso relativo ao peso total do colágeno e pelo menos um monossacarídeo e, opcionalmente, pelo menos um composto selecionado dentre fatores de coagulação e glicosaminoglicanos. A invenção se refere a adicionalmente a um método para preparar tal composição e a uma unidade que compreende tal composição e um dispositivo de aspersão.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se ao campo de composições hemostáticas, ao uso de compostos ou composições específicos como um agente hemostático, a um método para preparar uma composição hemostática e a um método hemostático.

ANTECEDENTES DA TÉCNICA

[002] Feridas, sejam externas ou internas, traumáticas ou cirúrgicas, frequentemente levam a sangramento. Tal sangramento pode se tornar mais ou menos significativo. O sangramento é impedido e interrompido por meio de um conjunto de fenômenos fisiológicos chamado “hemostasia”. A hemostasia ajuda a reparar a ruptura vascular e, em geral, garante a manutenção da integridade do vaso e tecido.

[003] Quando um vaso sanguíneo é lesado, um mecanismo natural que compreende vários estágios é acionado para obstruir o fluxo de sangue. Primeiramente, a vasoconstrição, que retarda o sangramento, dura de 15 a 60 segundos e induz uma cascata complexa de reações. Uma rede fibrosa composta de fibrina se forma ao redor do tampão de plaquetas: o trombo final é formado e é protegido de dissolução prematura por fator XIII, que estabiliza a fibrina. Finalmente, a rede de fibrina se torna mais estreita (retração) e as bordas da ferida se juntam, e a ferida encolhe. Dentro da fibrina reticulada, estável, os fibroblastos podem então proliferar e se organizar em uma matriz conjuntiva dentro do trompo e finalmente fechar a ferida.

[004] Nenhuma fibrina sólida está presente no sangue em circulação; se foi essa que obstruiu vasos vitais. No entanto, o precursor da fibrina, o fibrinogênio, está presente. Sob a ação da trombina, cuja síntese é ativada por fatores de coagulação, o fibrinogênio é transformado em fibrina insolúvel.

[005] Por último, diversos dias ou semanas após a regeneração em sucedida da ferida, o agrupamento de fibrina é destruído durante a fibrinólise.

[006] Apesar desse fenômeno bioquímico, é normalmente necessário, particularmente no caso de feridas que são muito grandes ou no caso de sangramento difuso, para executar “artificialmente” a hemostasia.

[007] Há soluções “mecânicas” para ajudar a obter hemostasia, tal como pressão, ligadura e eletrocoagulação, que são usados como tratamentos de primeira linha. No entanto, essas soluções têm pouca ou nenhuma eficácia em um certo número de casos, tal como hemorragias capilares por gotejamento, hemorragias de órgãos hipervascularizados tais como o baço ou o fígado, hemorragias que levam a sangramento difuso, por exemplo, ossos e/ou em neurocirurgia.

[008] Soluções “químicas”, particularmente empregadas em certos produtos hemostáticos atuais, também existem. Os componentes das ditas soluções químicas são em geral do tipo ou “absorvente” ou “ativo”.

[009] Os produtos hemostáticos absorventes, particularmente que compreendem polissacarídeos tais como celulose ou alginatos oxidados regenerados, funcionam principalmente por ação mecânica e absorção simples. Esses frequentemente apresentam um problema de inchamento excessivo. Se o dito inchamento levar à absorção rápida de líquido, particularmente sangue, pode levar à pressão indesejável quando usada em um ambiente “fechado”, por exemplo, em contato com a dura-máter ou em urologia.

[010] Adicionalmente, certos produtos, particularmente aqueles que compreendem polissacarídeos vegetais, tais como celulose ou alginatos, podem causar ainda reações inflamatórias durante sua reabsorção e/ou podem levar à degradação de produtos não reconhecidos pelo hospedeiro. A consequência disso é que é desejável remover tais produtos de modo que os mesmos não permaneçam no corpo e assim não produzam esses efeitos adversos.

[011] Os produtos hemostáticos ativos, tais como produtos que contêm trombina ou fibrina, são normalmente produtos derivados de sangue. Tais produtos envolvem riscos de alergias e transmissão de doenças, particularmente no caso em que o vetor da doença não poderia ser inativado por tratamentos classicamente aplicados. Adicionalmente, os ditos tratamentos a jusante são em geral complexos e/ou custosos. Finalmente, em geral podem exigir a preparação antes do uso, o que pode ser uma restrição, de fato um problema, em termos de uma emergência.

[012] Além disso, os produtos que contêm tanto fibrina quanto trombina baseia seu modo de ação na interação entre os dois produtos derivados de sangue que compreendem o produto. A reação pode ser ocasionalmente executada sem a interação com o sangue, em cujo caso os produtos são ditos flutuantes. Em outras palavras, o produto é impulsionado pelo sangue que continua a fluir, possivelmente fazendo com que o produto se torne diluído ou coagule e forme um gel no topo do sangue, uma situação em que o fluxo de sangue não é bloqueado. A hemostasia pode assim não ser atingida.

[013] Os produtos disponíveis hoje no mercado podem ser na forma de: - esponjas ou matrizes: essa forma típica facilita o manuseio, mas pode ser problemática durante o uso em áreas complexas oi em operações laparoscópicas, - fibras: essa forma pode ser facilmente posicionada na área a ser tratada, se a área for acessível, e pode reduzir a quantidade de produtos a serem implantados; por outro lado, é fortemente contraindicado em vasos, particularmente para evitar a passagem de fibras para a circulação, de vido a tal situação apresentar riscos de embolia assim como riscos de adesão a instrumentos, - líquidos solidificantes, tais como adesivos biológicos: tais composições são normalmente compreendidas em pelo menos dois produtos, que são misturados durante a preparação a fim de reagirem e polimerizarem. Os ditos produtos em geral devem ser preparados apenas antes do uso, particularmente no ambiente de operação, o que torna sua preparação enfadonha e exige que seu uso seja previsto, - aspersões: adesivos podem ser na forma de aspersão que exige o uso de um dispositivo particular para conectar a seringa a um aparelho que fornece o ar necessário para propelir o produto. A dose, homogeneidade de distribuição e/ou espessura da camada depositada são difíceis ou impossíveis de regular, - pó: alguns pós feitos de amido estão disponíveis no mercado. O pó hemostático é alcançado graças à absorção do sangue pelo pó. O amido não tem quaisquer propriedades biológicas em relação ao sangue. A densidade e granulometria (graduação de tamanho) desse pó é muito baixa e o pó não pode ser aspergido sem formar uma nuvem que não é adequada para aplicações laparoscópicas. Por exemplo, o pó descrito em WO 2005/072700 não é adequado para uma aspersão homogênea e precisa na ferida, especialmente em laparoscopia.

[014] As composições da técnica anterior são em geral fornecidas nas formas de esponjas, fibras ou líquidos viscosos, tais como adesivos de fibrina, que podem ser aspergidos. No entanto, nenhum pó adequado para ser aspergido está disponível atualmente.

[015] A presente invenção assim visa obter uma composição que soluciona todos ou alguns dos problemas mencionados acima e, particularmente, uma composição que é satisfatória em relação à segurança, eficácia, facilidade de uso e/ou custo. Particularmente, o produto ou a composição pode atender à aprovação reguladora de acordo com as regulações em vigor em cada país.

[016] Mais precisamente, a invenção visa obter uma composição com capacidade de absorção satisfatória, boa capacidade hemostática, efeitos adversos mínimos (ou nenhum efeito adverso), boa capacidade de ancoragem na borda da ferida e a possibilidade de ser aspergida, penetração no fluxo sanguíneo quando aspergido e/ou inchamento limitado.

[017] Particularmente, a composição visa à possibilidade de ser administrada na maioria dos procedimentos cirúrgicos, tais como laparotomias, laparoscopias, celioscopias e técnicas de cirurgia robótica e/ou poder ser administrada. A composição e metabólitos da mesma podem ter preferencialmente inocuidade satisfatória, ter segurança melhorada, causar uma resposta imunológica fraca ou nenhuma, não ser carcinogênicos e/ou ser reabsorvíveis. Particularmente, a reabsorção é compatível com os fenômenos de hemostasia e regeneração a fim de possibilitar que sejam deixados no local após o procedimento.

[018] A composição pode visar ainda ser fornecida em uma forma que pode ser aspergida.

[019] Adicionalmente a solucionar todos ou alguns dos problemas mencionados acima, a presente invenção pode também visar obter uma composição. - tornar possível obter um produto, particularmente um pó aspergível, seco que compreende todos os componentes úteis para a ação hemostática, particularmente, durante seu armazenamento, em outras palavras, um produto que pode ser armazenado em uma forma que é pronta para uso e que não exige a mistura logo antes do uso; e/ou - cujo componente principal ou cujos componentes não absorvem tanto sangue que haja risco de pressão indesejável; e/ou - cujos componentes simultaneamente têm atividade hemostática, mecânica e bioquímica ou atividade biológica; e/ou - que pode ser usado imediatamente sem preparação, sem manuseio do produto hemostático e que pode ser, por exemplo, de uso de laparoscopia assim como em laparotomia.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

[020] De acordo com um primeiro aspecto, a invenção assim refere-se a uma composição hemostática que compreende ou constitui em: - colágeno que compreende um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar de pelo menos 50% em peso em relação ao peso total do colágeno, que é um colágeno do tipo fibrilar; - pelo menos um monossacarídeo; e - opcionalmente, pelo menos um composto selecionado dentre: o fatores de coagulação, particularmente, trombina, que pode particularmente vir do sangue ou ser obtida por métodos biotecnológicos e o glicosaminoglicanos, particularmente sulfato de condroitina, sulfato de dermatano, ácido hialurônico e misturas dos mesmos.

[021] Preferencialmente, é proposta uma composição hemostática em forma de pó que compreende colágeno do tipo fibrilar que compreende um teor de colágeno fibroso e/ou de colágeno fibrilar de pelo menos 70% em peso em relação ao peso total do colágeno e pelo menos um monossacarídeo.

[022] A presente invenção pode particularmente tornar possível obter-se uma composição com propriedades hemostáticas boas, notavelmente graças às características de tamanho e/ou densidade das partículas da dita composição e aos componentes da mesma, enquanto produz inchamento limitado.

[023] De acordo com uma variante, a composição é livre de componentes obtidos direta ou indiretamente do sangue. Quando a trombina está presente, por exemplo, essa pode ser trombina extraída do sangue ou recombinante. Muito particularmente, a composição é constituída por compostos que são rapidamente degradados no corpo e/ou são biocompatíveis, em outras palavras, que não induzem uma resposta indesejável.

[024] Os aspectos preferenciais, mas não limitantes da composição, tomados sozinhos ou em combinação, são os seguintes: - a composição compreende um teor de colágeno na faixa de 80% a 90% em peso em relação ao peso total da composição, - a composição compreende um teor de monossacarídeo na faixa de 1% a 12,5% em peso em relação ao peso total da composição, - a composição compreende uma razão ponderal de colágeno/monossacarídeo na faixa de 10 a 50 e preferencialmente de 19, - o colágeno compreende um teor de colágeno fibroso e/ou de colágeno fibrilar na faixa de 85% a 95% em peso em relação ao peso total do colágeno, - a composição compreende ainda um teor de glicosaminoglicano na faixa de 2% a 25% em peso em relação ao peso total da composição, - a composição compreende ainda uma razão ponderal de compostos de carboidrato totais/colágeno na faixa de 2 a 40, em que o peso dos compostos de carboidrato totais é a soma do peso do(s) monossacarídeo(s) e o peso do(s) glicosaminoglicano(s), - a composição compreende ainda fator de coagulação, particularmente trombina, em uma quantidade na faixa de 0,01 lU/mg a 20 lU/mg da composição, - a composição tem uma densidade compactada maior que 0,4 g/ml, - a composição compreende pelo menos 50% em peso de partículas cujo tamanho está entre 200 μm e 400 μm. - a composição de qualquer uma das reivindicações 1 a 10 que compreende: o colágeno em uma quantidade de 86,36% em peso em relação ao peso total da composição, o glicose em uma quantidade de 4,54% em peso em relação ao peso total da composição, o sulfato de condroitina em uma quantidade de 9,09% em peso em relação ao peso total da composição, - a composição compreende ainda trombina, em uma quantidade de 0,2 lU/mg a 2 lU/mg da composição.

[025] De acordo com um aspecto adicional, a invenção refere-se a um método para preparar uma composição hemostática que compreende pelo menos as seguintes etapas: a) formação de uma suspensão aquosa que compreende um colágeno de tipo fibrilar que tem um teor de colágeno fibroso e/ou de colágeno fibrilar de pelo menos 70% em peso em relação ao peso total do colágeno e pelo menos um monossacarídeo, em que o colágeno usado nessa etapa é preferencialmente obtido por extração básica; b) recuperação do produto na forma de precipitado, pasta ou gel, particularmente por centrifugação ou decantação; c) secagem do produto; d) moagem do produto à granulometria desejada.

[026] Tal método pode compreender a etapa e) subsequente à etapa d), que consiste em adicionar pelo menos um composto selecionado dentre: - fatores de coagulação, particularmente trombina; e - glicosaminoglicanos, particularmente sulfato de condroitina, sulfato de dermatano, ácido hialurônico e misturas dos mesmos.

[027] A invenção refere-se ainda a um kit que compreende a composição descrita acima e um dispositivo de aspersão adaptado para conter e propelir tal composição.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[028] Outras características e vantagens da invenção se tornarão claras a partir da seguinte descrição que é apenas dada para propósitos ilustrativos e não é, de forma alguma, limitante e deve ser interpretada com referência aos desenhos anexos em que a Figura 1 é um exemplo de um resultado de uma eletroforese conforme descrito no exemplo 13.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[029] Na seguinte descrição, exceto que haja declaração ao contrário, porcentagens de peso são dadas em relação ao peso seco total da composição.

[030] No contexto da presente invenção, “peso seco total da composição” refere-se ao peso total da composição livre de solvente, particularmente água e assim o peso total em relação ao produto anidro.

[031] Adicionalmente, os pesos dos componentes e as porcentagens resultantes podem corresponder ao peso anidro desses componentes, em outras palavras, ao peso do componente que não inclui água que o mesmo pode conter. Isso pode ser também aplicado às porcentagens obtidas.

[032] A composição pode compreender um teor de colágeno maior ou igual a 70% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente maior ou igual a 75% em peso, particularmente maior ou igual a 77% em peso, de fato maior ou igual a 80% em peso.

[033] Adicionalmente, a composição pode compreender um teor de colágeno menor ou igual a 99% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente menor ou igual a 96% em peso, particularmente menor ou igual a 93% em peso, de fato menor ou igual a 90% em peso.

[034] Assim, a composição pode compreender um teor de colágeno na faixa de 70% a 99% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 75% a 96% em peso, particularmente na faixa de 77% a 93% em peso, de fato na faixa de 80% a 90% em peso. Preferencialmente, o teor de colágeno é cerca de 86% em peso do peso total da composição.

[035] O colágeno é a proteína de estrutura principal em mamíferos. O colágeno consiste em moléculas de tropocolágeno (TC) que têm comprimentos de cerca de 280 a 300 nm e diâmetros de cerca de 1,5 nm.

[036] O termo “colágeno fibroso” refere-se a colágeno na forma de fibra, que corresponde a uma montagem de fibrilas. As fibras em geral têm um diâmetro na faixa de 1 μm a 10 μm. O termo “colágeno fibrilar” refere-se a colágeno na forma de fibrilas. Mais precisamente, as fibrilas em geral têm um diâmetro de 10 nm a 1 μm. Assim, as fibrilas são formadas de arranjos escalonados de moléculas de tropocolágeno e essas fibrilas podem ser dispostas para formar fibras de colágeno. O colágeno fibroso e/ou fibrilar é em geral não solúvel, enquanto o colágeno não fibrilar é altamente solúvel.

[037] A definição de colágeno fibroso e colágeno fibrilar pode ser particularmente aquela dada por Markus Buehler em “Nature designs tough collagen: explaining the nanostructure of collagen fibrils”, em PNAS, 15 de agosto de 2006, volume 103, n° 33, página 12.285 a 12.290.

[038] Mais de 28 colágenos diferentes foram revelados e são classificados em 3 categorias principais: colágenos do tipo fibrilar, colágenos do tipo não fibrilar e colágenos FACIT.

[039] Os colágenos do tipo fibrilar são colágenos que principalmente compreendem colágenos fibrilares e/ou fibrosos e quase nenhum colágeno não fibrilar (por exemplo, colágeno do tipo I). Similarmente, os colágenos do tipo não fibrilar são colágenos que compreendem principalmente colágenos não fibrilares. Alguns colágenos do tipo não fibrilar podem consistir apenas em colágenos não fibrilares (por exemplo, colágeno do tipo IV ou V).

[040] A extração e purificação industriais de colágeno em geral consistem na desestruturação dos tecidos iniciais para 1) remover cada ou a maioria das proteínas contaminantes e 2) obter o nível de estruturação exigido dependendo do uso final do produto. A extração de colágeno é em geral realizada em condições ácidas ou básicas que permitem a solubilização de colágeno solúvel monomolecular que não é fibrilar. O colágeno final naturalmente contém uma mistura de colágeno fibrilar/fibroso e colágeno não fibrilar. A proporção entre colágeno fibrilar/fibroso e colágeno não fibrilar depende do tecido escolhido para a extração e o processo de extração.

[041] O produto final é diferente de um colágeno que foi obtido por uma mistura artificial de apenas colágeno fibrilar e apenas colágeno não fibrilar. No artigo intitulado “Extraction of collagem from connective tissue by neutral salt solutions” (Procedimentos da NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES Volume 41 Número I 15 de janeiro de 1955 por Jerome Gross, John H. Highberger e Francis O. Schmitt), são mostradas as diferenças entre colágenos fibrilares e não fibrilares obtidos após um processo de extração especificado que leva - conforme descrito previamente - a uma mistura de desses dois colágenos.

[042] Na presente composição, o colágeno é do tipo fibrilar e compreende colágeno fibroso e/ou fibrilar em uma quantidade de pelo menos 60% em peso, particularmente pelo menos 70% em peso, particularmente pelo menos 75% em peso, de fato pelo menos 80% em peso em relação ao peso total do colágeno.

[043] Mais particularmente, o colágeno compreende pelo menos 85%, particularmente pelo menos 90%, particularmente pelo menos 95%, de fato pelo menos 98% em peso de colágeno fibroso e/ou fibrilar em relação ao peso total do colágeno na composição.

[044] Preferencialmente, a composição compreende um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar na faixa de 85% a 95% em peso em relação ao peso total do colágeno na composição e mais preferencialmente de 85% a 90% em peso.

[045] Isso significa que na modalidade preferencial, a composição assim compreende um teor de colágeno não fibrilar na faixa de 5% a 15% em peso em relação ao peso total do colágeno na composição e mais preferencialmente de 10% a 15% em peso.

[046] É muito vantajoso ter uma composição com tal proporção de colágeno fibroso e/ou fibrilar em relação ao colágeno não fibrilar, particularmente para uso como um pó hemostático. De fato, o colágeno fibroso e/ou fibrilar deve estar presente em uma quantidade suficiente para realizar a hemostasia e o colágeno não fibrilar deve estar também em uma quantidade suficiente para a coesão do produto e não em uma quantidade muito grande para evitar o excesso de inchamento.

[047] O colágeno pode ser selecionado entre os colágenos de tipo I ou colágenos do tipo I e III. O colágeno pode ser extraído de vários tecidos fonte, particularmente pele e/ou tendões, de todas as espécies, mais particularmente espécies de suínos, bovinos ou equinos.

[048] O colágeno pode ser feito principalmente de colágeno fibroso de origem suína extraído da pele e/ou tendões. No caso de colágeno extraído de tendões, a extração pode ser tal como descrita no pedido internacional WO 2010/125086.

[049] O colágeno mencionado acima, particularmente colágeno fibroso e/ou fibrilar, pode vir de extração ácida ou básica. De acordo com uma modalidade particular, o dito colágeno vem da extração básica. De acordo com uma modalidade particular, o colágeno pode ser tal como descrito no pedido de patente FR2944706.

[050] Preferencialmente, o colágeno vem de uma extração básica que possibilita maximizar o teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar no colágeno extraído. Ademais, tal extração básica pode ser otimizada por controle da proporção do colágeno fibrilar/fibroso e o colágeno não fibrilar dentro do colágeno extraído. Diferente da extração ácida, a extração básica permite a hidrólise de proteoglicanos. Essa ação leva à desestruturação do tecido e à separação das fibras sem modificação de seu formato. Em condições ácidas, o inchamento das moléculas de colágeno internas nas fibras leva a sua desestruturação parcial durante o processo com a liberação de uma quantidade maior de colágeno solúvel não fibrilar.

[051] O colágeno pode ser reticulado, particularmente por modos clássicos de reticulação tal como desidratação térmica, o uso de agente de ponte, por exemplo, formaldeído e/ou glutaraldeído; por polissacarídeos oxidados, por exemplo, de acordo com o método descrito no pedido internacional WO 2010/125086; e/ou por amilopectinas ou glicogênio oxidados.

[052] A composição compreende pelo menos um monossacarídeo, sozinho ou em mistura com outros monossacarídeos. Os ditos monossacarídeos podem ser selecionados dentre ribose, sacarose, frutose, glicose e misturas dos mesmos. O monossacarídeo presente na composição da invenção, sozinho ou em mistura com os monossacarídeos, é particularmente glicose.

[053] A composição pode compreender um teor de monossacarídeo na faixa de 1% a 12,5% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 1,5% a 10% em peso, particularmente na faixa de 2% a 8% em peso e muito particularmente na faixa de 2,5% a 7,5% em peso. Mais preferencialmente, o teor de monossacarídeo é cerca de 5% em peso em relação ao peso total da composição.

[054] A composição pode compreender uma razão ponderal de colágeno/monossacarídeo na faixa de 5 a 100, particularmente de 7 a 65, mais particularmente de 10 a 50 e ainda mais particularmente de 11 a 40. Mais particularmente, a composição compreende uma razão ponderal de colágeno/monossacarídeo de cerca de 19.

[055] O monossacarídeo, particularmente ribose, sacarose, frutose, glicose e misturas dos mesmos, e particularmente glicose, pode particularmente tornar possível obter partículas que compreendem principalmente colágeno fibroso e/ou fibrilar e monossacarídeos com as características desejadas, particularmente de tamanho e densidade. A incorporação de monossacarídeo na mistura de colágeno permite ainda a redução das cargas elétricas dentro da composição, que possibilita a formação de um pó adaptado para ser colocado dentro de um recipiente tal como tubos, soprador, dispensador por aspersão.

[056] Muito particularmente, a presença de monossacarídeo pode tornar mais fácil e/ou mais barato obter partículas de uma densidade e/ou tamanho desejado, particularmente em termos de aprimoramento das propriedades hemostáticas de um pó da composição.

[057] Moer as fibras de colágeno sem quaisquer aditivos leva à redução do tamanho das fibras e diminui a densidade do pó. Ademais, a preparação final contém uma quantidade importante de cargas elétricas que impedem a manipulação do produto final. É assim proposto adicionar monossacarídeo antes da moagem do colágeno, que leva a um endurecimento da preparação para mistura permitindo uma moagem rápida (limitação de desnaturação), assim possibilitando a preparação de um pó com cargas elétricas reduzidas (adequadas para colocar o pó nos recipientes, tal como dispensador por aspersão) e uma densidade final adequada para aspergir a composição.

[058] Diferente do que poderia ser esperado, tal adjunção de monossacarídeo não tem efeito na atividade final do produto. Particularmente, não modifica a bioatividade do produto final. O monossacarídeo não tem efeitos hemostáticos.

[059] Ademais, tal adjunção do monossacarídeo não faz o mesmo se comportar como um agente de formação de espuma como é o caso em WO 01/97873. Em WO 01/97873, o aquecimento da solução diluída leva à formação de gelatina. A concentração alta de gelatina pode ser feita para obter solução muito concentrada, mas o produto final contém gelatina e não colágeno. A gelatina é conhecida como sendo menos hemostática que o colágeno já que a agregação de plaquetas precisa da presença de fibrilas de colágeno e estrutura do colágeno nativo que estão ausentes na gelatina.

[060] De acordo com uma modalidade, a composição compreende, de fato consiste em, partículas que compreendem, de fato que consiste em, colágeno e monossacarídeo, particularmente selecionado dentre ribose, sacarose, frutose, glicose e misturas dos mesmos, particularmente glicose.

[061] A composição pode compreender pelo menos um, particularmente um, fator de coagulação. Os ditos fatores de coagulação são bem conhecidos por aquelas pessoas versadas na técnica. Preferencialmente, o fato de coagulação é trombina.

[062] O dito fator de coagulação, particularmente trombina, pode vir de fontes animais (extraída de tecidos ou fluidos de animais) ou de fontes recombinantes (produzidas por culturas de células geneticamente modificadas). O fator de coagulação pode, por exemplo, ser trombina extraída de tecidos humanos.

[063] Quando um fator de coagulação, particularmente trombina, está presente, seu teor pode ser menor que 0,1 % em peso em relação ao peso total da composição.

[064] No caso da trombina, unidades internacionais (IU) são em geral usadas. Assim, a composição pode compreender um teor de trombina de 0,01 lU/mg a 20 lU/mg da composição, particularmente de 0,05 lU/mg a 10 lU/mg, particularmente de 0,1 lU/mg a 5 lU/mg, de fato de 0,2 lU/mg a 2 lU/mg. De preferência máxima, o teor de trombina - se houver - é cerca de 0,83 lU/mg da composição.

[065] Além do monossacarídeo, a composição pode compreender pelo menos um outro composto de carboidrato, que pode ser um glicosaminoglicano. Tal composto de carboidrato pode ser parte da composição, com ou sem um fator de coagulação tal como trombina.

[066] Tal glicosaminoglicano pode ser selecionado dentre sulfatos de condroitina, sulfato de dermatano, ácido hialurônico e misturas dos mesmos, particularmente sulfatos de condroitina.

[067] Os glicosaminoglicanos podem tornar possível aprimorar a velocidade em que o sangue é absorvido pelo pó. Mais particularmente, os glicosaminoglicanos podem acelerar o contato entre o sangue e os produtos hemostáticos, particularmente colágeno e trombina.

[068] A composição pode compreender um teor de glicosaminoglicano na faixa de 2% a 25% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 3% a 20% em peso, particularmente na faixa de 4% a 15% em peso e muito particularmente na faixa de 5% a 12,5% em peso. De preferência máxima, o teor de glicosaminoglicano - se houver - é cerca de 9% em peso do peso total da composição.

[069] A composição pode compreender uma razão ponderal de colágeno/glicosaminoglicano na faixa de 2,5 a 50, particularmente de 3,5 a 35, mais particularmente de 5 a 25 e ainda mais particularmente de 6,5 a 20.

[070] De acordo com uma modalidade, a composição compreende pelo menos um, particularmente um, monossacarídeo e pelo menos um, particularmente um, glicosaminoglicano, particularmente tal como definido acima, e particularmente nas quantidades definidas acima.

[071] Os compostos de carboidrato são muito particularmente monossacarídeos e glicosaminoglicanos.

[072] A composição pode compreender um teor de carboidrato na faixa de 2% a 25% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 5% a 23% em peso, particularmente na faixa de 7% a 21% em peso e muito particularmente na faixa de 10% a 18% em peso.

[073] A composição pode compreender uma razão ponderal de colágeno/carboidrato na faixa de 2 a 40, particularmente de 2,5 a 30, mais particularmente de 3 a 20 e ainda mais particularmente de 3,5 a 15.

[074] A expressão “peso total de compostos de carboidrato” refere-se à soma do peso dos monossacarídeos definidos acima e o peso dos outros compostos de carboidrato mencionados acima.

[075] De acordo com uma modalidade, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno que compreende principalmente um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar de pelo menos 50% em peso em relação ao peso total do colágeno; e - pelo menos um, particularmente um, monossacarídeo.

[076] Muito particularmente, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno, particularmente em uma quantidade na faixa de 70% a 99% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 75% a 96% em peso, particularmente na faixa de 77% a 93% em peso, de fato da faixa de 80% a 90% em peso, em que o dito colágeno compreende um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar de pelo menos 50% em peso em relação ao peso total do colágeno; e - pelo menos um monossacarídeo, particularmente glicose, em uma quantidade na faixa de 1% a 12,5% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 1,5% a 10% em peso, particularmente na faixa de 2% a 8% em peso e muito particularmente na faixa de 2,5% a 7,5% em peso.

[077] De acordo com outra modalidade, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno que compreende principalmente um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar de pelo menos 50% em peso em relação ao peso total do colágeno; - pelo menos um, particularmente um, monossacarídeo; - pelo menos um, particularmente um, fator de coagulação.

[078] Muito particularmente, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno, particularmente em uma quantidade na faixa de 70% a 99% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 75% a 96% em peso, particularmente na faixa de 77% a 93% em peso, de fato da faixa de 80% a 90% em peso, em que o dito colágeno compreende um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar de pelo menos 50% em peso em relação ao peso total do colágeno; - pelo menos um monossacarídeo, particularmente glicose, em uma quantidade na faixa de 1% a 12,5% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 1,5% a 10% em peso, particularmente na faixa de 2% a 8% em peso e muito particularmente na faixa de 2,5% a 7,5% em peso; e - pelo menos um, particularmente um, fator de coagulação, particularmente trombina, em uma quantidade na faixa de 0,01 lU/mg a 20 lU/mg da composição, particularmente de 0,05 lU/mg a 10 lU/mg, particularmente de 0,1 lU/mg a 5 lU/mg, de fato de 0,2 lU/mg a 2 lU/mg.

[079] De acordo com outra modalidade, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno que compreende principalmente um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar de pelo menos 50% em peso em relação ao peso total do colágeno; - pelo menos um, particularmente um, monossacarídeo; e - pelo menos um, particularmente um, glicosaminoglicano.

[080] Muito particularmente, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno, particularmente em uma quantidade na faixa de 70% a 99% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 75% a 96% em peso, particularmente na faixa de 77% a 93% em peso, de fato da faixa de 80% a 90% em peso, em que o dito colágeno compreende um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar de pelo menos 50% em peso em relação ao peso total do colágeno, - pelo menos um monossacarídeo, particularmente glicose, em uma quantidade na faixa de 1% a 10% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 1% a 12,5% em peso, particularmente na faixa de 1,5% a 10% em peso, particularmente na faixa de 2% a 8% em Petição 870210114501, de 09/12/2021, pág. 28/60 20/41 peso e muito particularmente na faixa de 2,5% a 7,5% em peso, e - pelo menos um glicosaminoglicano, particularmente sulfato de condroitina, em uma quantidade na faixa de 2% a 25% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 3% a 20% em peso, particularmente na faixa de 4% a 15% em peso e muito particularmente na faixa de 5% a 12,5% em peso.

[081] De acordo com ainda outra modalidade, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno que compreende um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar de pelo menos 50% em peso em relação ao peso total do colágeno, - pelo menos um, particularmente um, monossacarídeo; - pelo menos um, particularmente um, fator de coagulação; e - pelo menos um, particularmente um, glicosaminoglicano.

[082] Muito particularmente, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno, particularmente em uma quantidade na faixa de 70% a 99% em peso, particularmente na faixa de 75% a 96% em peso, particularmente na faixa de 77% a 93% em peso, de fato na faixa de 80% a 90% em peso em relação ao peso total, particularmente ao peso seco, da composição, em que o dito colágeno compreende um teor de colágeno fibroso e/ou fibrilar de pelo menos 50% em peso em relação ao peso total do colágeno, - pelo menos um monossacarídeo, particularmente glicose, em uma quantidade na faixa de 1% a 10% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 1% a 12,5% em peso, particularmente na faixa de 1,5% a 10% em peso, particularmente na faixa de 2% a 8% em peso e muito particularmente na faixa de 2,5% a 7,5% em peso, - pelo menos um fator de coagulação, particularmente trombina, em uma quantidade na faixa de 0,01 lU/mg a 20 lU/mg da composição, Petição 870210114501, de 09/12/2021, pág. 29/60 21/41 particularmente de 0,05 lU/mg a 10 lU/mg, particularmente de 0,1 lU/mg a 5 lU/mg, de fato de 0,2 lU/mg a 2 lU/mg e - pelo menos um glicosaminoglicano, particularmente sulfato de condroitina, em uma quantidade na faixa de 2% a 25% em peso em relação ao peso total da composição, particularmente na faixa de 3% a 20% em peso, particularmente na faixa de 4% a 15% em peso e muito particularmente na faixa de 5% a 12,5% em peso.

[083] De acordo com uma modalidade bem particular, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno do tipo fibrilar, principalmente que compreende colágeno fibroso e/ou fibrilar, em que o dito colágeno do tipo fibrilar é, por exemplo, obtido por extração em meio básico e está em uma quantidade de cerca de 85% em peso em relação ao peso total da composição; - glicose em uma quantidade de 4,9% em peso em relação ao peso total da composição; - trombina em uma quantidade de 0,2 lU/mg a 2 lU/mg da composição; e - sulfato de condroitina em uma quantidade de 10% em peso em relação ao peso total da composição.

[084] De acordo com outra modalidade particular, a composição compreende, de fato consiste em: - colágeno do tipo fibrilar, principalmente que compreende colágeno fibroso e/ou fibrilar, em que o dito colágeno do tipo fibrilar é, por exemplo, obtido por extração em meio básico e está em uma quantidade de cerca de 85% em peso em relação ao peso total da composição; - glicose em uma quantidade de 5% em peso em relação ao peso total da composição; e - sulfato de condroitina em uma quantidade de 10% em peso em Petição 870210114501, de 09/12/2021, pág. 30/60 22/41 relação ao peso total da composição.

[085] No contexto da presente invenção, a expressão “uma quantidade de cerca de X%” refere-se a uma variação de mais ou menos 20%, em outras palavras, uma quantidade de cerca de 10% significa de 8% a 12%, particularmente uma variação de mais ou menos 10%, de fato mais ou menos 5%.

[086] Quando a trombina é adicionada, o pó de trombina é misturado ao pó da mistura molecular homogênea de colágeno/monossacarídeo já preparada. Quando sulfato de condroitina é adicionado, a trombina é primeiramente adicionada ao sulfato de condroitina em pó e essa mistura é adicionada à mistura prévia de colágeno/monossacarídeo (já moído em pó). A trombina não é estabilizada nem por carboidrato nem colágeno. A trombina não está nunca em contato com uma solução do monossacarídeo (ao contrário a WO 98/57678) que impede qualquer desnaturação da proteína e uma reidratação do pó que leva a uma impossibilidade de secar o mesmo novamente de modo apropriado.

[087] A composição pode ser ainda fornecida de diversas formas de pós sólidos, particularmente um pó aspergível. A composição da invenção é preferencialmente um pó aspergível.

[088] A composição na forma de pó pode particularmente compreender ou consistir em: - partículas que compreendem ou que consistem em colágeno do tipo fibrilar e pelo menos um monossacarídeo, particularmente glicose, em que particularmente as ditas partículas têm um tamanho, granulometria e/ou densidade tal como definidas na presente descrição e - opcionalmente, partículas que compreendem, ou que consistem em, pelo menos um glicosaminoglicano, particularmente sulfatos de condroitina e/ou pelo menos um fator de coagulação, particularmente trombina, em que particularmente as ditas partículas têm um tamanho, granulometria e/ou densidade tal como definidas na presente descrição.

[089] A presente composição na forma de pó, muito particularmente um pó aspergível, pode ter vantajosamente uma densidade compactada maior que 0,4 g/l, muito particularmente maior ou igual a 0,41 g/l. De fato, quando se usa um pó como um agente hemostático, a densidade deve ser suficiente para impedir qualquer diluição e repulsão do produto pelo fluxo sanguíneo. Fornecer uma composição de pó com uma densidade maior que 0,4 g/l impede que o pó seja enxaguado pelo sangue.

[090] Quando aplicado manualmente, os cirurgiões devem comprimir o pó com uma gaze sem remover o produto ao final da compressão.

[091] Quando a composição em pó destina-se a ser aspergida em uma ferida com sangramento, é preferencial que tal composição tenha uma densidade muito maior para permitir que os grânulos em pó alcancem uma certa energia cinética quando ejetados do aspersor. De fato, o pó com uma densidade menor não pode ser movido perfeitamente pelo ar para alcançar a ferida sem a formação de uma nuvem, que não é compatível com a administração precisa necessária na maioria dos casos. Ter uma densidade alta também permite que o aspersor confira ao pó uma energia cinética suficiente para um bom impacto do pó na ferida. Assim, a composição em pó tem preferencialmente uma densidade compactada maior que 0,4 g/ml. Ainda mais preferencialmente, a composição em pó tem uma densidade compactada menor ou igual a 0,6 g/ml.

[092] Uma forma de obter uma composição em pó com tais recursos de densidade consiste em moer uma torta de colágeno seco, em que tal torna é uma preparação dura e densa de colágeno. A densidade exigida não pode ser alcançada por moagem de uma preparação liofilizada de colágeno, devido ao fato de que as partículas finais poderiam ser planas e assim não aspergíveis, com uma carga eletrostática importante. Por exemplo, o produto conforme preparado em WO 01/97873 não pode ser reduzido a um pó que tem tal densidade e tais recursos aspergíveis.

[093] O pó descrito em WO 2005/072700 em uma densidade muito baixa e esse pó não pode ser assim aspergido para alcançar um órgão alvo especialmente em laparoscopia. Particularmente, não alcançará a ferida com o impacto exigido que impede a repulsão do fluxo sanguíneo.

[094] A presente composição, particularmente na forma de pó, muito particularmente aspergível, pode ter preferencialmente uma densidade suada maior que 0,4 g/l, particularmente maior que 0,41 g/l.

[095] Ainda mais preferencialmente, a densidade compactada da composição em pó é maior que 0,4 g/ml e mais preferencialmente menor ou igual a 0,6 g/ml.

[096] A densidade aparente é em geral maior ou igual a 0,3 g/l, muito particularmente, maior ou igual a 0,31 g/l.

[097] A densidade aparente é vantajosamente maior que 0,3 g/l, muito particularmente, maior que 0,31 g/l.

[098] Essas densidades são medidas de acordo com os protocolos descritos nos exemplos.

[099] A composição da invenção tem vantajosamente uma capacidade hemostática na faixa de 1 segundo a 600 segundos, particularmente de 1 segundo a 200 segundos, mais particularmente de 1 segundo a 60 segundos, de fato de 1 segundo a 40 segundos. A capacidade hemostática é medida de acordo com o protocolo apresentado nos exemplos.

[0100] A composição da invenção compreende vantajosamente pelo menos 50% em peso de partículas cujo tamanho está entre 200 μm e 400 μm.

[0101] As partículas que constituem o pó vantajosamente têm uma granulometria média na faixa de 10 μm a 500 μm, particularmente de 50 μm a 400 μm.

[0102] Vantajosamente, pelo menos 90% em peso, particularmente 100% em peso, das partículas que constituem o dito pó podem ser passados através de uma peneira cuja tela tem 500 μm, particularmente 400 μm.

[0103] Pelo menos 90% em peso, e particularmente 95% em peso, das partículas que constituem o dito pó podem ser retidos por uma peneira cuja tela tem 10 μm, particularmente 20 μm, de fato 30 μm, de fato 50 μm.

[0104] Essa repartição foi escolhida por permitir que o pó seja aspergido. Com tamanhos de partículas muito pequenos, o pó é muito pulverulento para alcançar apropriadamente o alvo e com tamanhos de partículas muito grandes, o pó não pode ser aspergido.

[0105] A maioria dos compostos da composição, particularmente colágeno, pode ter uma razão de inchamento em 20 minutos na faixa de 0,7 a 1, conforme medida de acordo com o protocolo descrito nos exemplos (consulte o exemplo 4).

[0106] A composição, particularmente quando dita composição compreende pelo menos um glicosaminoglicano, e particularmente quando a dita composição compreende sulfato de condroitina, pode ter uma razão de inchamento em 20 minutos na faixa de 5 a 15, particularmente de 8 a 12 e muito particularmente de 10 a 12, conforme medido de acordo com o protocolo descrito nos exemplos (consulte o exemplo 5).

[0107] De acordo com uma modalidade preferencial, a composição é fornecida na forma de um pó seco aspergível.

[0108] A composição na forma de pó compreende particularmente: - partículas que compreendem colágeno e um monossacarídeo; e - opcionalmente, pelo menos glicosaminoglicano e/ou trombina.

[0109] A composição pode compreender: - partículas que compreendem colágeno, um monossacarídeo e opcionalmente pelo menos um glicosaminoglicano e/ou fator de coagulação; - partículas que compreendem colágeno, um monossacarídeo e opcionalmente um fator de coagulação e opcionalmente partículas de glicosaminoglicano; - partículas que compreendem colágeno e um monossacarídeo e partículas que compreendem pelo menos um glicosaminoglicano e/ou fator de coagulação.

[0110] No contexto da presente invenção, a expressão “pó seco” significa que a composição compreende um teor limitado de solvente, particularmente água. O dito teor limitado pode ser menor que 20% em peso, particularmente menor que 15% em peso, particularmente menor que 10% e muito particularmente menor que 5% em peso em relação ao peso total da composição.

[0111] A dita forma seca pode ser obtida por evaporação simples do solvente usado, por desidratação por solventes orgânicos.

[0112] A composição na forma de pó seco pode ser particularmente administrada por aspersão.

[0113] Particularmente, a invenção refere-se a um kit que compreende: - uma composição de acordo com a invenção; e - um dispositivo de aspersão.

[0114] A composição é tal como definida de acordo com a presente descrição. Aquelas pessoas versadas na técnica conhecem vários dispositivos de aspersão para aspergir composições farmacêuticas na forma de pó.

[0115] Particularmente, o dispositivo pode compreender um reservatório de gás pressurizado, em que a dita pressão é liberada pela ativação de meios de ativação, particularmente por um acionador.

[0116] O dispositivo pode compreender: - meios de ativação; - um reservatório de pó, que compreende particularmente um pó de acordo com a invenção; - um reservatório de gás, conectado ao reservatório de pó; - um aspersor conectado ao reservatório de pó; - uma válvula A acoplada aos meios de ativação, em que a dita válvula A é fechada quando os meios de ativação estão em repouso e assim bloqueia o fluxo de gás entre o reservatório de gás e o reservatório de pó e em que a dita válvula é aberta quando os meios de ativação são ativados a fim de entregar uma injeção de gás para aspergir pelo menos parte do pó.

[0117] O reservatório de gás pode ser acoplado aos meios de suprimento de gás pressurizado, por exemplo, um sistema de gás comprimido ou um tanque de gás comprimido, particularmente a fim de tornar o sistema autônomo.

[0118] O dispositivo pode compreender, entre o reservatório de gás e os meios de suprimento, uma válvula B, em que a dita válvula B é acoplada aos meios de ativação.

[0119] A válvula B está por padrão na posição aberta, exceto quando os meios de ativação estão ativados, em cujo caso essa está fechada.

[0120] Assim, quando a válvula A está aberta, a válvula B está fechada e vive versa. Isso possibilita a entrega de uma quantidade predeterminada de gás pressurizado para entregar uma dose de pó enquanto impede que contaminantes entrem em contato com o interior do dispositivo.

[0121] Quando o dispositivo não está acoplado aos meios de suprimento de gás, a válvula B está preferencialmente fechada. Isso pode ajudar a limitar os riscos de contaminação do interior do dispositivo.

[0122] Muito particularmente, o reservatório de pó está na forma de um cilindro que compreende diversas doses de pó. O dito cilindro pode ser acoplado a um propulsor ativado pelo fluxo de gás que possibilita que o pó seja aspergido e assim girando o cilindro e alterando a dose de pó após a ativação dos meios de ativação.

[0123] As doses presentes no cilindro podem ser vedadas a fim de serem estéreis, particularmente com um componente que abre por ruptura quando o fluxo de gás cruza a dose mencionada acima. Isso torna possível preservar as doses em um ambiente estéril.

[0124] O volume de uma dose pode ser cerca de 0,2 cm3 a 1 cm3, particularmente cerca de 0,3 cm3.

[0125] O gás usado pode ser ar, dióxido de carbono ou qualquer gás inerte.

[0126] Particularmente, o dispositivo é tal como descrito na patente europeia EP11163820.1 e pedido provisório n° US 61/479,805 ambos depositados em 27 de abril de 2011 e incorporados a título de referência.

[0127] A presente invenção também se refere a um método para preparar uma composição hemostática, particularmente tal como definida acima, que compreende pelo menos as seguintes etapas de: a) formação de uma suspensão aquosa que compreende, que consiste de fato em, colágeno do tipo fibrilar - que compreende principalmente colágeno fibroso e/ou fibrilar - e um monossacarídeo, tal como glicose, b) recuperação do produto na forma de precipitado, pasta ou gel, particularmente por centrifugação ou decantação, c) secagem do produto, por exemplo, por evaporação, d) moagem do produto até a granulometria desejada, particularmente por um moinho de martelo e e) opcionalmente, adição de trombina e/ou sulfato de condroitina, particularmente na forma de sólido, particularmente na forma de pó.

[0128] A formação na etapa a) de uma suspensão aquosa que compreende o colágeno fibroso/fibrilar e um monossacarídeo leva a uma repartição homogênea do monossacarídeo ao redor das moléculas de colágeno. Ademais, o contato próximo entre as espécies moleculares de colágeno e o monossacarídeo leva, após a desidratação, a uma torta dura adequada para obter - por moagem - um pó com a densidade alta exigida. Ao contrário, misturar um colágeno em pó e uma glicose em pó não levam a um pó homogêneo e aspergível, particularmente devido à densidade e às cargas elétricas.

[0129] Na etapa a) o colágeno pode estar presente em uma concentração que varia de 30 g/l a 150 g/l.

[0130] O monossacarídeo pode ser adicionado à suspensão ou à pasta homogênea de colágeno em uma quantidade tal como definido na descrição e mais particularmente de cerca de 2% a 5% em peso em relação ao peso do colágeno.

[0131] Na etapa a) o monossacarídeo pode estar presente em uma concentração que varia de 0,3 g/l a 10 g/l.

[0132] A suspensão aquosa de colágeno da etapa a) pode ser ácida e, em particular, compreender um ácido tal como ácido clorídrico. O dito ácido pode estar presente em uma concentração que varia de 0,01 M a 0,5 M e em particular de 0,02 M a 0,1 M, de fato, cerca de 0,05 M. Tal suspensão pode ser na forma de pasta homogênea.

[0133] A etapa b) pode compreender o despejamento da suspensão em um molde.

[0134] A etapa c) é concretizada de modo a obter um bolo tão espesso quanto for possível (superior à granulometria final desejada), com uma densidade muito alta e menos bolhas de ar quanto for possível (menos do que 5%) dentro do bolo.

[0135] A etapa d) pode ser seguida por uma etapa de triagem do pó particularmente de modo a obter a granulometria desejada.

[0136] De acordo com uma realização preferencial, a etapa a) consiste em formar uma mistura que compreende 95% em peso de colágeno do tipo fibrilar e 5% em peso de glicose. Depois de ter secado (etapa b)) e moído (etapa c)) essa mistura, o sulfato de condroitina é adicionado em um teor de 10% em peso do peso total da mistura, de modo que a composição final compreenda: - colágeno: 86,36% em peso em relação ao peso total da composição; - glicose: 4,54% em peso em relação ao peso total da composição; - sulfato de condroitina: 9,09% em peso em relação ao peso total da composição;

[0137] Quando a trombina também é adicionada, a mesma representa um teor final inferior a 0,01% em peso em relação ao peso total da composição. Na mistura acima, a trombina pode estar em uma quantidade de 0,083 lU/mg da composição.

[0138] De acordo com outra realização, a invenção também se refere aos pós obteníveis pelo método da invenção.

[0139] Para todos os produtos de pó ditos acima, é obviamente possível aplicar uma moagem mais ou menos completa para obter um pó de granulometria variável de acordo com o tipo de moagem e a duração dos mesmos.

[0140] De acordo com outro de seus aspectos, a presente invenção refere-se ao uso de uma composição tal como definido acima como um agente hemostático.

[0141] De acordo com ainda outro de seus aspectos, a invenção se refere a uma composição farmacêutica ou fármaco que compreende, de fato consistindo em, uma composição tal como definido acima, em particular como um agente hemostático.

[0142] De acordo com outro de seus aspectos, a invenção se refere ao uso de uma composição tal como definido acima para preparar um fármaco ou composição farmacêutica, em particular um fármaco hemostático ou composição farmacêutica.

[0143] De acordo com outro de seus aspectos, a presente invenção se refere a um método hemostático que compreende o depósito e/ou a aspersão de uma composição tal como definido acima em uma parte de hemorragia de um corpo de animal. Em particular, a composição pode ser usada em procedimentos cirúrgicos, em particular laparotomias, laparoscopias, coelioscopias e procedimentos robóticos.

[0144] A invenção também se refere a um método hemostático que compreende uma etapa de aspergir uma composição da invenção.

[0145] De acordo com outro de seus aspectos, a presente invenção se refere ao uso de uma composição tal como definido acima como um adesivo biológico.

[0146] De acordo com ainda outro de seus aspectos, a presente invenção se refere ao uso de uma composição tal como definido acima como um agente de cicatrização para feridas internas e externas. A expressão “agente de cicatrização” se refere a um produto que torna possível obter uma cicatrização clinicamente satisfatória dos tecidos com o qual o mesmo está em contato.

EXEMPLOS EXEMPLO 1: PROTOCOLO DE MEDIÇÃO DE DENSIDADE

[0147] O produto a ser testado (600 mg), em particular em forma de pó, é introduzido em um cilindro graduado de 5 ml. A altura do produto é medida e o volume correspondente é observado. A medição é repetida três vezes. O produto é então adensado três vezes batendo-se o tubo 100 vezes em uma superfície rígida. A altura do produto e o volume correspondente são medidos novamente. As densidades do produto antes e após o adensamento, chamada densidade aparente e densidade compactada, respectivamente, são, desse modo, obtidas.

EXEMPLO 2: PROTOCOLO DE MEDIÇÃO DE CAPACIDADE HEMOSTÁTICA IN VITRO

[0148] O sangue humano citratado (em torno de 0,1M) é mantido a 37°C em uma batelada de água em toda a medição. O produto a ser testado (10 mg) é depositado em um tubo de polipropileno de 5 ml com um tampa de encaixe e então o sangue extemporâneo citratado (2 ml) é adicionado. CaCI2 é então adicionado de modo que a concentração final de final CaCI2 no sangue é de 15 mM e então o tubo de teste é fechado. O conteúdo é então misturado por inversões vigorosas (10 vezes) e então o tubo de teste é emerso na batelada de água; o tubo de teste é retornado à posição vertical a cada 10 segundos. O tempo exigido para formar um coágulo é observado e corresponde à capacidade hemostática.

EXEMPLO 3: PROTOCOLO DE MEDIÇÃO DE TAMANHO DE PARTÍCULA

[0149] Uma quantidade conhecida de produto, particularmente de pó, é peneirada através de telas de 50 μm, 100 μm, 200 μm, 300 μm e 400 μm por 2 minutos (por tela). As frações de cada tela são pesadas. A proporção de cada faixa de granulometria é determinada.

EXEMPLO 4: PROTOCOLO DE MEDIÇÃO DO INCHAMENTO DO COMPOSTO PRINCIPAL DA COMPOSIÇÃO

[0150] O composto, em particular, o colágeno (40 mg a 70 mg) é pesado em um recipiente de pesagem. Em outro recipiente de pesagem, 6 ml de NaCI de 0,15 M é depositado. O composto a ser testado é depositado em 0,15 M NaCI (t=0). Após 20 minutos, o líquido em excesso é removido e o produto inchado é pesado. A relação de inchamento corresponde à quantidade de água absorvida em relação ao peso do produto inicial seco.

EXEMPLO 5: PROTOCOLO DE MEDIÇÃO DO INCHAMENTO DA COMPOSIÇÃO

[0151] Um frasco de 15 ml é pesado (m0 in mg) e então X mg de pó da composição seca é adicionado (m0+x em mg). Uma solução aquosa de NaCI de 0,15 M (2 ml) é adicionada e a composição é deixada para inchar por 20 minutos; o frasco é então centrifugado a 1.000 rpm.

[0152] O NaCI em excesso é removido com uma pipeta de Pasteur e gotas são eliminadas trocando-se o frasco por filtro de papel; o frasco é então pesado com o pó úmido (m1 em mg).

[0153] A relação de inchamento é calculada conforme se segue: ((m1-m0)/(m0+x-mo)).

EXEMPLO 6: PREPARAÇÃO DE COLÁGENO DO TIPO FIBRILAR POR EXTRAÇÃO BÁSICA

[0154] Pedaços de derme de porco (30 kg), desengordurado com acetona, são deixados para inchar por 3 horas em 100 kg de solução de NaOH de 0,05 M. as dermes são finamente cortadas por um moinho de corte e a pasta obtida é diluída com 50 litros de 0,05 M de NaOH. A mistura é então peneirada sob pressão através de uma tela de 1 mm. A pasta obtida é então trazida ao pH 6-7,5 com HCI e o precipitado obtido é coletado por centrifugação ou filtração através de uma tela de 1 mm.

[0155] O retentado é desidratado com acetona de acordo com métodos conhecidos àquelas pessoas versadas na técnica. Esse retentado desidratado desse modo consiste em colágeno do tipo fibrilar, com um grande teor de colágeno fibrilar/fibroso em relação ao colágeno não fibrilar. Geralmente, tal colágeno extraído compreende de 85% a 95% em peso de colágeno fibrilar/fibroso em relação ao peso total do colágeno e de 5% a 15% em peso de colágeno não fibrilar em relação ao peso total do colágeno.

EXEMPLO 7: PREPARAÇÃO DE UM PÓ HEMOSTÁTICO NO 1

[0156] 30 g de colágeno do tipo fibrilar conforme preparado no Exemplo 6 é adicionado a 1 L de uma solução aquosa de HCI de 0,02 M e a mistura é então agitada por 5 horas. Em seguida, à pasta homogênea obtida, frutose em pó é adicionada em uma quantidade de 2% (0,6 g) em peso em relação ao peso do colágeno.

[0157] A mistura é homogeneizada por 1 hora e então despejada e desidratada. Após a secagem, o produto seco é moído em uma taxa de 25 g/min com o uso de um moinho de martelos Fitzpatrick em 7.000 rpm sob aquecimento controlado. O produto é então triado por peneiramento mecânico para eliminar partículas cujo tamanho é maior do que 400 m. O sulfato de dermatano é então adicionado ao pó em uma quantidade de 2% em peso em relação à matéria seca do pó (0,612 g).

[0158] A mistura é então homogeneizada com o uso de um moinho de esferas, trombina liofilizada é adicionada à mistura em uma quantidade de 15 lU/mg de pó e finalmente a mistura é homogeneizada com o uso de um moinho de esferas.

EXEMPLO 8: PREPARAÇÃO DE UM PÓ HEMOSTÁTICO NO 2

[0159] 7,5 kg de colágeno do tipo fibrilar conforme preparado no Exemplo 6 é adicionado a 50 L de uma solução aquosa de HCI de 0,05 M e a mistura é então agitada por 16 horas. Em seguida, à pasta homogênea obtida, frutose em pó é adicionada em uma quantidade de 5% (375 g) em peso em relação ao peso do colágeno.

[0160] A mistura é homogeneizada por 3 horas e então distribuída em placas e desidratada. Após a secagem, o produto seco é moído por fração em uma taxa de 5 g/min com o uso de um moinho de martelos em 12,000 rpm sob aquecimento controlado. O produto é então triado por peneiramento mecânico para eliminar partículas cujo tamanho é maior do que 400 μm e aquelas menores do que 50 μm.

[0161] A granulometria é medida de modo a verificar que a distribuição tal que 60% da amostra em peso tenha uma granulometria maior do que 200 μm.

[0162] Os sulfatos de condroitina purificados são então adicionados ao pó em uma quantidade de 20% em peso em relação à matéria seca do pó (1,575 kg). A mistura é homogeneizada com o uso de um moinho de esferas.

[0163] Finalmente, a trombina liofilizada é adicionada à mistura em uma quantidade de 10 lU/mg de pó. Assim como anteriormente, a mistura é homogeneizada com o uso de um moinho de esferas.

EXEMPLO 9: PREPARAÇÃO DE UM PÓ HEMOSTÁTICO NO 3

[0164] 1.000 g de colágeno do tipo fibrilar conforme preparado no Exemplo 6 é adicionado a 60 ml de uma solução aquosa de HCI de 0,02 M e a mistura é então agitada por 5 horas. Em seguida, à pasta homogênea obtida, glicose em pó é adicionada em uma quantidade de 5% (50 g) em peso em relação ao peso do colágeno.

[0165] A mistura é homogeneizada por 1 hora e então aplicada e desidratada. Após a secagem, o produto seco é moído em uma taxa de 25 g/min com o uso de um moinho de martelos Fitzpatrick em 7.000 rpm sob aquecimento controlado. O produto é então triado por peneiramento mecânico para eliminar partículas cujo tamanho é maior do que 400 μm e menor do que 50 μm.

[0166] O sulfato de condroitina é então adicionado ao pó em uma quantidade de 10% em peso em relação à matéria seca do pó (105 g). A mistura é então homogeneizada com o uso de um moinho de esferas.

[0167] Tal composição em pó tem uma densidade compactada de cerca de 0,408 g/ml.

EXEMPLO 10: PREPARAÇÃO DE UM PÓ HEMOSTÁTICO NO 4

[0168] 500 g de colágeno do tipo fibrilar conforme preparado no Exemplo 6 é adicionado a 30 ml de uma solução aquosa de HCI de 0,02 M e a mistura é então agitada por 5 horas. Em seguida, à pasta homogênea obtida, glicose em pó é adicionada em uma quantidade de 5% (25 g) em peso em relação ao peso do colágeno.

[0169] A mistura é homogeneizada por 1 hora e então aplicada e desidratada. Após a secagem, o produto seco é moído em uma taxa de 25 g/min com o uso de um moinho de martelos Fitzpatrick em 7.000 rpm sob aquecimento controlado. O produto é então triado por peneiramento mecânico para eliminar partículas cujo tamanho é maior do que 400 μm e menor do que 50 μm.

[0170] O sulfato de condroitina misturado com um pó de trombina é então adicionado ao pó em uma quantidade de 10% em peso em relação à matéria seca do pó (52,5 g). A trombina é adicionada à mistura em uma quantidade final de 0,85 U/mg. A mistura é então homogeneizada com o uso de um moinho de esferas.

[0171] Tal composição em pó tem uma densidade compactada de cerca de 0,425 g/ml.

EXEMPLO 11: DESEMPENHO DE PÓ À BASE DE COLÁGENO HEMOSTÁTICO NO 3

[0172] O pó à base de colágeno no 3 conforme preparado no Exemplo 9, que contém colágeno, glicose, sulfato de condroitina, sem trombina, foi testado durante experimentações in vivo.

[0173] O protocolo da experimentação foi o seguinte: - feridas foram feitas na superfície de fígado paramediano esquerdo, de um tamanho de cerca de 10*10*1-3 mm3, - um produto sob teste foi então aplicado durante 30 segundos. Produto suficiente foi aplicado para cobrir a ferida; o material de teste foi mantido na ferida site por leve compressão com o uso da gaze, - então, uma graduação de sangramento foi feita para avaliar a porcentagem de hemostase alcançada. Se a hemostase clinicamente aceitável foi obtida, então a experimentação foi interrompida. De outro modo, outra execução de graduação de compressão foi feita, até 5 execuções de compressões. O produto sob experimentação foi renovado em cada execução.

[0174] A experimentação foi realizada com os seguintes produtos: uma gaze sem nenhuma composição hemostática (chamado “Controle”), uma gaze coberta pelo pó hemostático no 3 (chamado “GHP no 3”), a gaze hemostática “Avitene” de Davol (chamada “Avitene”, composta de fibras de colágeno), a gaze hemostática “Surgicel” de Ethicon (chamada “Surgicel”, composta de celulose oxidada).

[0175] Os resultados são resumidos na tabela n°1 a seguir, que mostra a porcentagem de hemostase alcançada para cada produto:

[0176] Essa experimentação mostra que o pó hemostático proposto é muito eficiente muito rapidamente, à medida que a hemostase é completa após somente duas execuções, com uma eficiência maior do que 80% somente após a primeira execução.

[0177] Para “Avitene”, a diminuição da porcentagem de hemostase alcançada entre Run2 e Run3 se dá devido ao fato de que a ferida sangrou novamente.

EXEMPLO 12: DESEMPENHO DE PÓ À BASE DE COLÁGENO HEMOSTÁTICO NO 4

[0178] O pó à base de colágeno no 4 conforme preparado no Exemplo 10 que contém colágeno, glicose, sulfato de condroitina e trombina, foi testado durante as experimentações in vivo.

[0179] O protocolo da experimentação foi o seguinte: - modelo animal: Suínos heparinizados - cirurgia abdominal: o Laparoscopia de linha mediana; Exposição de fígado; Com scalpel, feridas tangenciais de fígado de cerca de 10*10*1-3mm3; o Um produto sob teste foi aplicado de modo que a ferida seja coberta de forma satisfatória; Compressão durante 2 min; o Graduação de sangramento (escala de 0 a 4); Em caso de sucesso, ao invés de parada na Execução 1; De outro modo, novas execuções de compressão e risco de sangramento; Até 5 execuções permitidas. o Cirurgia de crista ilíaca: o Pele lateral dorsal e incisões de músculo para expor as cristas ilíacas; Corticotomia com exposição de osso esponjoso (falhas de cerca de 12*12*3 mm3); o Produto sob teste foi aplicado de modo que a ferida seja coberta de forma satisfatória; Compressão durante 2 min; o risco inicial de sangramento e graduação de sangramento adicional (escala de 0 a 4); Em caso de sucesso, ao invés da parada na Execução 1; De outro modo, novas execuções de compressão e risco de sangramento; até 5 execuções permitidas.

[0180] A experimentação foi concretizada com os seguintes produtos: uma gaze sem nenhuma composição hemostática (chamada “Control”), uma gaze coberta pelo pó hemostático no 4 (chamado “GHP no 4”), a gaze hemostática “Floseal” de Baxter (chamada “Floseal”, composta de gel de matriz gelatinosa + trombina), a gaze hemostática “Surgicel” de Ethicon (chamada “Surgicel”, composta de celulose oxidada). - os resultados foram o seguinte: Cirurgia abdominal (n=8 a 10 repetições) - os resultados dados após 10 min de compressão (= 5 execuções de 2 min cada) o controle: 10/10 falha o GHP no 4: 11/11 sucesso o Floseal: 9/9 sucesso o Surgicel: 8/10 sucesso; 2/10 falha. - ortopédica (n=4 repetições) - os resultados dados após 10 min de compressão (= 5 execuções de 2 min cada) o Control: 1/4 sucesso; 3/4 falha o GHP no 4: 4/4 sucesso o Floseal: 3/4 sucesso; 1/4: falha o Surgicel: 4/4 sucesso

[0181] Essa experimentação mostra que o pó hemostático proposto é 100% eficiente para qualquer tipo de feridas, ao contrário dos produtos do mercado que são mais específicos para ferida.

EXEMPLO 13: CARACTERIZAÇÃO DE COLÁGENO - PRESENÇA DE COLÁGENO SOLÚVEL NO COLÁGENO, DETERMINAÇÃO DA RELAÇÃO ENTRE COLÁGENO FIBRILAR/FIBROSO E COLÁGENO NÃO FIBRILAR.

[0182] O objetivo da experimentação é para determinar a proporção de colágeno fibrilar/fibroso e colágeno não fibrilar em um colágeno (colágeno extraído ou colágeno moído em pó). Tal proporção pode ser determinada estudando-se a proporção de colágeno insolúvel (correspondente ao colágeno fibrilar/fibroso) e solúvel (correspondente ao colágeno não fibrilar) no colágeno.

[0183] A experimentação consiste em solubilizar cerca de 2,5 g do colágeno sob teste em 166 ml de água em pH 13 durante 16 horas. A solução é então centrifugada (10.000 rpm durante 10 minutos). O sobrenadante (correspondente ao colágeno não fibrilar) e o resíduo (correspondente ao colágeno fibroso/fibrilar) são então divididos. O resíduo é diretamente seco com bateladas sucessivas de acetona e sob um fluxo controlado de ar. O pH do sobrenadante é ajustado a pH 3 com ácido acético e ácido clorídrico a 6 M. O colágeno sólido do sobrenadante é obtido adicionando-se 0,6M de NaCI e concretizando-se uma centrifugação. O mesmo é então seco com bateladas sucessivas de acetona e sob um fluxo controlado de ar.

[0184] Os pesos de colágeno do resíduo (Mresíduo) e do sobrenadante (Msobrenadante) são calculados, e a fórmula Mresíduo/(Mresíduos + Msobrenadante) x 100 proporciona a porcentagem de colágeno fibroso em quantidade total de colágeno.

[0185] Na invenção, a relação Mresíduo/(MResíduos + Msobrenadante) precisa ser superior a 80% tanto para o colágeno usado para prepara o pó quanto para o final colágeno pó. Preferencialmente a relação é superior a 85%.

[0186] Por exemplo, a experimentação acima feita de três bateladas de colágeno preparada conforme no Exemplo 6 proporciona relações muito similares de 92,67%, 94,60% e 91,51 % respectivamente. Depois de ter moído o colágeno dessas três bateladas, a relação permanece muito similar do que a mesma em 91,63%, 88,02% e 88,69% respectivamente.

[0187] Outro modo de mostrar a presença tanto do colágeno fibroso/fibrilar quanto do colágeno solúvel é realizar uma Eletroforese de página de SDS.

[0188] A Figura 1 ilustra tal eletroforese, com a amostra S1 correspondente ao sobrenadante de uma primeira batelada (feita do colágeno extraído como no Exemplo 6), sendo que a amostra S2 corresponde ao resíduo dessa primeira batelada e a amostra S3 corresponde ao sobrenadante de uma segunda batelada (também feita de colágeno extraído como no Exemplo 6), sendo que a amostra S4 corresponde ao resíduo dessa segunda batelada.

[0189] Os resultados mostram que, para o colágeno do resíduo, uma quantidade maior de fibra não pode mitigar através do gel de acrilamida e são manchados na parada do gel. A preparação da amostra não permite a divisão de cada cadeia do colágeno. Portanto, as cadeias alfa estão presentes em uma quantidade muito baixa. O colágeno do sobrenadante tem capacidade de migrar inteiramente no gel, não há fibra bloqueada no topo, as cadeias do colágeno são apropriadamente divididas durante o processo de eletroforese. DADOS BIBLIOGRÁFICOS - documento no WO 2005/072700 - “Nature designs tough collagen: explaining the nanosctructure of collagen fibrils”, de Markus Buehler (PNAS, 15 de agosto de 2006, vol.103, no 33, pp 12.285 a 12.290). - “Extraction of collagen from connective tissue by neutral salt solutions”, de Jerôme Gross, John H. Highberger e Francis O. Schmitt (procedimentos do NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES, Volume 41, Número I, 15 de janeiro de 1955). - documento no WO 2010/125086 - documento no FR2944706 - documento no WO 01/97873

Claims

1. COMPOSIÇÃO HEMOSTÁTICA, em forma de pó, caracterizada por compreender: - colágeno, do tipo fibrilar, que compreende um teor de colágeno fibroso e/ou de colágeno fibrilar de pelo menos 70% em peso em relação ao peso total do colágeno, dito colágeno sendo em um teor que varia de 80% a 90% em peso em relação ao peso total da composição; - pelo menos um monossacarídeo em um teor que varia de 1% a 12,5% em peso em relação ao peso total da composição; e - pelo menos um glicosaminoglicano em um teor que varia de 2% a 25% em peso em relação ao peso total da composição.

2. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pela dita composição compreender uma razão em peso de colágeno/monossacarídeo que varia de 10 a 50.

3. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pela dita composição compreender uma razão em peso de colágeno/monossacarídeo de 19.

4. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo colágeno compreender um teor de colágeno fibroso e/ou de colágeno fibrilar que varia de 85% a 95% em peso em relação ao peso total do colágeno.

5. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pela dita composição compreender adicionalmente uma razão em peso, de compostos de colágeno/carboidrato total, que varia de 2 a 40, em que o peso dos compostos de carboidrato total é a soma do peso do(s) monossacarídeo(s) e o peso do(s) glicosaminoglicano(s).

6. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pela dita composição compreender adicionalmente fator de coagulação em uma quantidade que varia de 0,01 lU/mg a 20 lU/mg da composição.

7. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pela dita composição compreender trombina como fator de coagulação.

8. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pela dita composição ter uma densidade compactada superior a 0,4 g/mL.

9. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pela dita composição compreender pelo menos 50% em peso de partículas cujo tamanho está entre 200 μm e 400 μm.

10. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo glicosaminoglicano ser escolhido entre sulfato de condroitina, sulfato de dermatano, ácido hialurônico e misturas dos mesmos.

11. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada por compreender: - colágeno em um teor que varia de 80% a 90% em peso em relação ao peso total da composição, - pelo menos um monossacarídeo em um teor que varia de 2,5% a 7,5% em peso em relação ao peso total da composição, e - pelo menos um glicosaminoglicano em um teor que varia de 5% a 12,5% em peso em relação ao peso total da composição.

12. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada por compreender: - colágeno em uma quantidade de 86,36% em peso em relação ao peso total da composição; - glicose em uma quantidade de 4,54% em peso em relação ao peso total da composição; - sulfato de condroitina em uma quantidade de 9,09% em peso em relação ao peso total da composição.

13. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 12, caracterizada por compreender adicionalmente trombina em uma quantidade de 0,2 lU/mg a 2 lU/mg da composição.

14. MÉTODO PARA PREPARAR UMA COMPOSIÇÃO HEMOSTÁTICA, caracterizado por compreender pelo menos as seguintes etapas: a) formação de uma suspensão aquosa que compreende um colágeno do tipo fibrilar que tem um teor de colágeno fibroso e/ou de colágeno fibrilar de pelo menos 70% em peso em relação ao peso total do colágeno, e pelo menos um monossacarídeo, com o teor de colágeno variando de 80% a 90% em peso em relação ao peso total da composição e um teor de monossacarídeo variando de 1% a 12,5% em peso em relação ao peso total da composição; b) recuperação do produto na forma de precipitado, pasta ou gel; c) secagem do produto; d) moagem do produto à granulometria desejada; e) adição de pelo menos um glicosaminoglicano em um teor que varia de 2% a 25% em peso em relação ao peso total da composição.

15. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pela recuperação da etapa b) ser feita por centrifugação ou decantação.

16. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 15, caracterizado pelo colágeno usado na etapa a) ser obtido por extração básica.

17. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 16, caracterizado por na etapa e), ser ainda adicionado pelo menos um fator de coagulação.

18. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por na etapa e) ser adicionado trombina como fator de coagulação.

19. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 18, caracterizado pelo glicosaminoglicano ser escolhido entre sulfato de condroitina, sulfato de dermatano, ácido hialurônico e misturas dos mesmos.

20. COMPOSIÇÃO, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou obtida através do método, conforme definido na reivindicação 14, caracterizada por ser para o seu uso como um agente hemostático.

21. KIT, caracterizado por compreender: - a composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 13 ou 20; e - um dispositivo de aspersão.