JPS5988085A - ビフイズス菌及び乳酸菌の生菌を含有する培養物及び製造法 - Google Patents

ビフイズス菌及び乳酸菌の生菌を含有する培養物及び製造法

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JPS5988085A
JPS5988085A JP57195376A JP19537682A JPS5988085A JP S5988085 A JPS5988085 A JP S5988085A JP 57195376 A JP57195376 A JP 57195376A JP 19537682 A JP19537682 A JP 19537682A JP S5988085 A JPS5988085 A JP S5988085A
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Tsutomu Kudo
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Hiroya Wakiguchi
湧口 浩也
Akinori Hiramatsu
明徳 平松
Susumu Teraguchi
進 寺口
Tomoko Yaejima
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    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/822Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/885Streptococcus

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ビフィドバクテリウム属に属する公知の微生
物(r以下ビフィズス菌」と記載する)の生菌菌体、ラ
クトバチルス属に属する公知の微生vl(以下「ラクト
バチルス菌」と記載する)及び酸素吸収能の高い新規な
ストレプトコッカス・サーモフィルス(以下S菌と記載
する)の生菌を(3) 含有し、好気的な保存によるビフィズス菌の死滅が少な
いビフィズス菌及び乳酸菌の生菌を含有する培養物及び
その製イシ法に関する。
ビフィズス菌は、乳児をはじめ人の腸管内において最優
勢の細菌であり、その有用性及び健康との関連性につい
ては、広く研究され、従来からビフィズス菌は、整腸剤
、食品、栄養剤などに利用されている。
一方、動物の胆管内においては動物の種類によって嚢な
るが、ビフィズス菌が人と同様有用であり、従来から飼
料として利用されている。
しかし、ビフィズス菌は、一般に酪農乳酸菌と比較して
、ア)個性嫌気性菌であるため、酸素の存在する好気的
条件下では、長期間生存できない、イ)耐酸性に乏しく
、低pH域では長期間生存できないなどの性質を有して
おり、従来の発酵乳にビフィズス菌を応用した場合、そ
の生菌数を維持させることは極めて困難とされている(
馬用:New Food Industr7 を第24
巻、第1号、第63頁、1982年)。すなわち、発酵
乳中のビフィズス菌(4) は、製造及び保存の過程での空気との接触による酸素の
浸透及び低pHの相乗的な悪影響によって、生残率(培
養終了直後培養物中のビフィズス菌の生菌数に対する保
存後の@養物中のビフィズス菌の生菌数の百分感で表わ
す。以下同じ)が著しく低下する。従来これらの間顯を
解決する方法として、a)製造及び保存の期間中全く空
気に接触しない製造法及び特殊な製品形態を採用する方
法、b)ビフィズス菌の耐酸性かつ耐酸素性の変異株を
取得し、応用する方法などが試みられている。
しかし、a)の方法は、技術上の繁雑さと製造費の増大
を招来し、望ましくない。b)の方法の変異株としては
、ビフィドバクテリウム・ブリーベ(特公昭56−42
250号公報、特開昭57−99190号公報)、ビフ
ィドバクテリウム・ビフィダム(特公昭56−4225
0号公報)及び本発明者らが先に特許出願したビフィド
バクテリウム・ロンガム(特願昭57−106182 
)が知られているが、ビフィズス菌の菌種が限定される
ため、ビフィズス菌のその他の種では応用できない。
以上のようにffl物中でfiR々のビフィズス菌をf
lTt単な方法でイ呆存することは従来極めて困難であ
った。
一方、乳酸菌の酸素吸収能については、既にラクトバチ
ルス属に属するラクトバチルス・アシドフィルス、ラク
トバチルス・アラビノ−サス、ラクトバチルス・バタタ
ス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・デルブ
ルエツキ、ラクトバチルス・フエルメンチイ、ラクトバ
チルス・プランタルム、ラクトバチルス・サケ(北原、
幅井:日本塵共化学会誌、7g26巻、第555頁、1
952年。
C,F、 Strittmatter : Journ
al of TliologlcalChemistr
y 、1ffl 234巻、第2789頁、 1959
年。
M−1−Dolin  :  The  l1aete
ria  +  Ed、  L  C。
cunsatus s R−Y−5tlllller 
+ Aead、 Press Ine*第425頁、1
961年。若木ら:薬学雑誌、第99巻、第354頁、
1979年。)、ロイコノストック属に属するロイコノ
ストック・メセンテロイデス(若木ら:薬学雑誌、第9
9巻、第354頁、1979年)、ストレプトコツカス
属に属するストレプトコッカス・アガラクテイエ、スト
レプトコッカス・クレモリス、ストレプトコッカス・フ
ェカリス、ストレプトコッカス拳フェシウム、ストレプ
トコッカス・ラクチス、ストレプトコッカス・リケファ
シエンス、ストレプトコッカス・マスチチデイス(0,
J、 OKane + L C,Gunsalus :
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大蒜ら:日本農交化学会誌、第34巻、第272頁、1
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cteria 、 Ed、 I。
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l第94巻、第184頁、1967年。R,F、 An
dersら: AppHed Mlcrobiolog
y l第19巻、第608頁、1970年。M、 J、
 Coventry :The Au5tralian
 Journal of Dairy Technol
ogy 1第33巻、第148頁、1978年。若木ら
:薬学雑誌、第99巻、第354頁、1979年。)に
関する報告があるが、ストレプトコッカス−サーモフィ
ルス(以下この種の総称としてサーモフィルス菌と記載
する)に関する報告は、rtnsonら(The(7) Australian Journal of I)a
lry Technology l第37巻、第14頁
、1982年)があるだけである。
Tln5onらによれば、サーモフィルス菌の酸素膜j
lI(能は、0.1%酵母エキスを含む脱脂乳を基質と
した場合、33.5’Cにおいて12mgの乾燥菌体重
量当り、90分間で7.3マイクロモル酸素分子(PI
I101eα)であったと報告しているが、この値を換
算すると、fi、フロナノモル酸素分子/(mg乾轢菌
体重滑・分) (以下この単位を「ナノモル」と略記す
る)であり、従来サーモフィルス閑の酸素吸収能は栖め
て低いことが知られており、酸素吸収能の高いサーモフ
ィルス閑の存在は知られていない。更に従来から発酵乳
中のラクトバチルス閃とサーモフィルス菌との割合につ
いては、はば1:4〜4:1の範囲内(R,K、 Ro
binson IAm Y、 Tamime : Jo
urnal of the 5oeiety ofDa
lny Technology l第28巻、第149
頁、1975年。森地:乳技協資料、第25巻、第2頁
、1975年。菊池二発酵と工業、第37巻、第133
頁、1979年)であることが知られているが、ピフィ
(8) ズス菌を含有する発酵乳中の両画の比率に関する知見は
少ない。5chulerら(Mllchwissens
eh@ft l第23巻、第9号、第554頁及び第1
0号、第614頁、1968年。)によれば、ストレプ
トコツカス属のwiニアシトフィラス菌:ビフィズス菌
の比が約5:l:1のスターターを用い、発酵終了後の
上記出量が約15 : 1 : 2の発酵乳を7I!J
造したが、pH4,6〜4.9で7日間保持した場合、
ビフィズス菌の生残率は、約1%であったと報告してい
る。
以上のようにビフィズス菌の生4’+[は保存中に著し
く低下するが、この生残率の低下を簡便かつ効果的に防
止する方法は知られていない。
本発明者らは、これらの間顆点を解決すべく、公知のビ
フィズス菌を用いて、その生残性と酪農乳酸菌との相互
関係を研究していたが、ビフィズス菌の発酵乳中での生
暢牲に極めて好影響を与えるS菌の存在を発見した。そ
してこのsii@は酸素吸収能が高く、ビフィズス菌と
共存させることにより、酸素がビフィズス菌に及ぼす悪
影費を緩和し、低いpHの発酵乳中でビフィズス菌を保
存したときもビフィズス菌の生残性を′fli躍的に向
上させることを−1い出し、本発明を完成した。
本発明の目的は、ビフィズス菌を好気的巣件下で保存し
たときビフィズス菌の生残率の高い培養物及びその製造
法を稈供することにある。本発明の他の目的は、好気的
な保存によるビフィズス菌の生残率の高い食品、#着剤
、II+!:膨剤及び飼料として利用し得る培養物を提
供することにある。
次に本発明について詳細に脱明する。
本発明の培養物は、少なくとも公知のビフィズス菌、公
知のラクトバチルス菌及び新規なSn2を含有し、製造
面後の培養物中のS閑の生菌数がラクトバチルス閑のそ
れの少なくとも10倍を含有する。そして1llj蒔T
1M後の培養物1g中のビフィズス菌の生菌数は少なく
とも2X107であり、5℃で7日間保存したと含又は
この保存φ件と客質的に同一の条件で保存したときのビ
フィズス菌の生残率は、少なくとも5%である。又、製
*r*後の培養41g中の合計の生菌数は少なくとも1
.3×tc?である。
本発明の培養物においては、含有されているS菌の高い
酸!lc吸収能により保存中のビフィズス菌の死滅が防
止され、従来にないすぐれたビフィズス菌の生残効果を
有している。従って本発明の培養物は、そのまま又は通
常の加工を行ない食品、栄養剤又は飼料として利用する
ことも可能であり、受に培養物を常法により凍結乾燥し
て整腸剤として利用することも可能である。
本発明の培養物の製造法は、次のとおりである。
牛乳・脱脂乳・還元脱脂乳又はこれらの濃縮物等通常用
いられる乳を主成分とする培地、又はこれらの@地に各
画の生育を促進することが知られている物質を添加した
培地を常法により滅菌して使用する。滅菌、冷却した2
itlI+に、常法により調製したビフィズス菌、ラク
トバチルスM&びS@のスターターをw!m(シ、培養
する。これらの3踵のスターターは、それぞれ別個に調
製され、目的トバチルス閑:S閑: 100 :職〜5
0:3〜600の比率(重量)の範囲内で混合して培地
に1#挿しく11) でもよく、この場合、培4111に対して1.4〜16
%(V/V )の割合で混合スターターを接種する。そ
して常法により37〜42℃で3〜24時間培養を行な
い、培養物を得る。このようにして得られた製造W後の
培養物1g中には、通常ビフィズス菌の生菌が2〜50
0 X 10’、S菌の生菌が1〜20×10そしてラ
クトバチルス菌の生菌が5〜100×IO含まれている
ヌピフイズス閑、ラクトバチルス菌及びS閑のスタータ
ーをそれぞれ別個の培地に3〜10%(V/V)、1〜
5%(V/V )及U 1〜5 % (V/V )l!
種し、それぞれ37〜42″Cで3〜24時1M1lt
IiJ養して培養生犀物を得る。通常ビフィズス菌の培
養生産物1g中には5〜50 X 10 、ラクトバチ
ルス菌の培養生即物1g中には2〜20X10、S菌の
培養生産物1g中には1〜10 X 10の生菌が含ま
れている。そしてビフィズス菌のMll生産物(基ma
tooとする)、ラクトバチルス閑の培養生産柳及びS
@のjF+11生産物を目的により100:0.28〜
625 : 11〜24.800の比率(重量)の範(
12) 曲内で混合し、培養物を得ることもできる。
このように本発明の培養物の製造法は極めて簡便であり
、従来のm合法を何ら変更することはないが、新規なS
菌を使用していることにより、保存後のビフィズス菌の
生残率を著しく向上する効果を有している。
/)ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する菌株
の分離 ストレプトフッカス・サーモフィルスに属する菌株は、
下記の小沢らの方法(農業技術研究所報告G(畜産)、
第5号、第41頁、1953年。)に従って、分離した
。即ち生牛乳を45〜50℃に4〜5日′1!taした
凝固物又は自然酸敗孔を多数検鏡し、その中で連鎖状球
菌の存在を認めた試料を、115℃15分間滅菌した1
0%(WA)還元脱脂乳培地に5%(V/V )の割合
で接種し、45〜50℃で凝固するまで培養した。さら
に、同様の方法で2〜3回lIP固を繰り返した後、そ
の−白金耳量を採取し、M−17寒天培地(Appli
ed Microblology。
第29巻、第6号、第807頁、1975年。)に塗抹
し、40℃で2〜3日培養し、生成した多数のコロニー
から、菌株を分厚した。分厚菌株の菌学的性質を、前記
Bergey’s mannual of deter
mlnatiマe bacteriology記載のサ
ーモフィルス菌のそれと比較し、ストレプトコッカス・
サーモフィルスと同定した4ON株を得た。
2)サーモフィルス菌の酸素吸収能 生牛乳の凝固1m及び自然酸敗乳から分離した前記のス
トレプトコッカス・サーモフィルスに属する40菌株、
標準菌株として酵杯水産省畜産試験場の森地氏から分譲
を受けたストレプトコッカス・サーモフィルス9Y株(
IDF株) (日本畜産学会報、f453巻、第161
頁、1982年)及びAmericanType Cu
1tare Co11eetlon  (以下ATCC
と略記する)に寄託されているストレプトコッカス・サ
ーモフィルス19258株のtt42の菌株について、
酸素吸取能を次の方法により測定した。まず、これらの
菌株を液体i@地(日本農芸化学会誌、第45巻、第4
23頁、1971年)に5%(V/V)1種し、37℃
で16時間静m培養し、得られた培養液から遠心分離機
を用いて菌体を分離し、菌体を滅菌生理食塩水で無菌的
に洗浄し、滅菌生理食塩水11中に乾燥重量にして3〜
5 mgの菌体量の割合で菌体を分散したm液を調製し
た。各菌株の酸素吸取能をワールブルグ検圧法(吉川ら
綱:化学の領域増刊第13号、「ワールブルグ検圧計」
、南江堂、1954年2月)によってmg定した。その
概略は次のとおりである。
2側室容器を使用し、反応容器の主室に、前記菌i1.
om7!とpn a、oの0.1モルgt*リン酸緩衝
液0.5m/を入れ、側室2個所に基質溶液として20
%(w、’v )滅菌還元脱脂乳0.75mJずつIf
f 1.5幌を入れ、副室に二酸化炭素吸収剤として2
0%(W/V )水酸化カリウム溶液0・2 m/を浸
み込ませた濾紙片を入れた。なお、基質溶液は、発酵乳
中の酸素吸収能を推定するため、最終濃度10%(w、
”w )になるように滅11m112元脱脂乳を用いた
測定は37°Cで行い、あらかじめ容器を5分間振とう
して温度平衝に達した後、側室の711i質W4Iwを
加え、酸素吸収量を3分おきに測定し、最大吸収(15
) 速度を求めて酸素吸収能とした。
供試菌株の酸素吸収能の結果を第1褒に示す。
第   1   褒 菌  株     酸素吸収能(ナノモル)9 Y  
         19.8ATCC1925810,
l 5TH−0130,0 3TH−1737,3 STH−2342,3 STH−5078,5 STH−1514,7 STH−3212,1 他の341M株         18.5以下第1表
から明らかなように、分離した40菌株のうち36菌株
の酸素吸収能は18.5ナノモル以下であったのに対し
、他の4菌株の酸素吸収能は、30.0〜78.5ナノ
モルであった。標準菌株の酸素吸収能は9Y株が19.
8ナノモル、ATCC19258株(16) が10.1ナノモルであった。
なお、本発明者らは酸素吸収能の値が高かった4M株に
ついて前記Tin5onらと同一の方法による酸素吸収
能の測定を試みた。しかしながらこれらの4菌株の酸素
吸取能が顕著に高いので、Tin5onらと同様に90
分間の測定は不能であった。従ってこれらの4M株の酸
素吸収能についてTin5onらが報告している7、3
マイクロモル酸素分子の値に到達するまでの所要時間を
Tin5onと同一の方法により測定した。その結果T
in5onらの値が90分であるのに対して、5TH−
01株及び5TI(−23株は26分、5TH−17株
は28分、そして5TIN−50株は21分(参考まで
に9Y株は46分、ATCC19258株は140分で
あった)であり、いずれの菌株の酸素吸取能も他の菌株
のそれよりも′Wi著に高いことを認めた。
J)S菌の菌学的性質 斐に本発明者らはこれらの4M株について菌学的性質を
試験したが、酸素吸収能が高いことを除きその他の菌学
的性質は各菌株とも前記Bergeyl g$ man
nual of determinative bac
teriologyに記載されたサーモフィルス菌と同
一の次のとおりであった。
(A)M−179天平板培曲を用い、37°Cで48時
間好気培養したときの閑の形態: αノ大きさく直径):0.7〜069戸■形状    
 :球状または楠円状で連鎖(FJ) M−17家天平
板W3@を用い、37℃で48時間好気培養したときの
コロニーの形態■形状二円形 ■@起:凸円状 ■周縁:円滑 ■大きさく直径):0.5〜1.5+nm■色調:白色
で不透明 ■表面:円滑で光沢あり (C)ガス:産生せず (D)20°C以下で生育せず (E)45℃で生育 (F)連判性なし くG)胞子形成せず (H)ダラム陽性 (1)ベンジジン陰性 (J)カタラーゼ陰性 (K)65°C30分間の加熱で生存 (L)2%(W/V )塩化ナトリウム存在下で生育せ
ず(M)o、t%(W/V )メチレンブルー添加乳で
生育せず(N) pH0,6で生育せず (0)糖からの酸生成 グルコース、フラクトース、シュークロース及びラクト
ースは陽性。アラビノース、キシロース、ラフィノース
、マルトース、トレハロース、イヌリン、マニトール、
ソルビトール、サリシン及びグリセロールは陰性。
(P)アルギニンからアンモニアを生成せずそしてこれ
らの4菌株を20代以上継代P3養しても高い酸素医収
能を保持していた。従って本発明者らは、これらの微生
物を新規な微生物と認定し、STH−01株、5TH−
17株、STH−23株及びSTH−50株をそれぞれ
ストレプトコッカス・サーモフィルスM −8202、
ストレプトコッカスーサ(19) 一モフィルスM−8203、ストレプトコッカス・サー
モフィルスM −8204及びストレプトコッカス・サ
ーモフィルスM −8205と命名し、昭和57年lθ
月22日に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託し、
それぞれ微工研菌寄第6777号、微工研菌寄第677
8号、微工研閑′?9第6779号及び微工研閑寄第6
780号なる受託番号を得た。
t)サーモフィルス閉とラクトバチルス閑の菌数比率に
ついて S[l!li及び酸素吸収能の低いサーモフィルス菌か
ら、それぞれ代表的な1株M −8205(STH−5
0)株及びSTH−32株を選び、公知のラクトバチル
ス菌の1種であるラクトバチルス・ブルガリクス、及び
公知のビフィズス菌であるビフィドバクテリウム・ロン
ガム(ATCC15708)株を用いて、サーモフィル
ス菌とラクトバチルス菌の生菌数の比率が興なる発酵乳
をW11111!シ、発酵乳中のビフィズス菌の生残性
を試験した。サーモフィルス菌及びラクトバチルス菌の
スターターは、115’Cで15分間滅菌した10%(
W/W )還元脱脂乳培地に3(20) %(V/V )接種し、37@Cで16時間培養したも
のを用い、ビフィズス菌のスターターは、115℃で1
5分間滅菌した0、25%(W/W )の酵母エキスを
含(715%(W/’IF )還元脱脂粉乳@地ニ1O
96(V/V)R?種し、37℃で5時間培養したもの
を用いた。均質後90℃で10分間殺菌した牛乳にサー
モフィルス菌スタータ一対うクトバチルス閑スターター
の割合が容量パーセントで■1.0 : 2.0、び■
5.9 : 0.1の比率で添加し、さらにビフィズス
菌のスターターを、それぞれに5.0%(V/V )添
加し、40″Cで3.5〜4.5時間発酵し、直ちに冷
却し、約pH4,5の発酵乳を調製した。これらの発酵
乳中のサーモフィルス菌とラクトバチルス菌の生菌数及
び両画数の比率、更に5℃で7日間保存した場合のビフ
ィズス菌の生菌数の変化と生残率をpHと共に第2表に
示す。サーモフィルス菌及びラクトバチルス菌の生菌数
は、常法によりBCP加プリプレートカウント寒天培地
いた混釈平板培養法でコロニーの形態による違いから両
画を判別し測定した。また両画の菌数比は、ラクトバチ
ルス菌の生菌数に対するサーモフィルス閑の生菌数の割
合で示した。ビフィズス菌の生菌数は発酵乳を光間の嫌
気性菌用希釈液(光間:臨床検査、第18巻、第116
3頁、1974年。)で段階的に希釈した後、ビフィズ
ス菌の選択培曲であるMにLP寒天培地(食品衛生学雑
誌、第23巻、第39頁、1982年)を用いた高層寒
天培養法で測定した。
ビフィズス菌の生残率は、製造直後の生菌数に対する7
日間保存後の生菌数の百分率(%)で示した。なお、7
日間保存後の発酵乳中のサーモフィルス菌とラクトバチ
ルス菌の化17J数は、製造nイ後と変化がなかったの
で省略した。
第2表から明らかなように@養終了直後のラクトバチル
ス閑の生菌数に対するS菌の生菌数の比率が高くなるほ
ど保存後のビフィズス菌の生II均率は向上し、上記の
菌数比を10倍以上にした場合、他のサーモフィルス閑
を使用したときの30〜100倍も高く、その効果は顕
著であることが判明した。
一方、酸素吸収能の低いSTH−32株ではSMと同一
の条件であっても保存後のビフィズス菌の生残率は低く
、酸素吸収能の低いサーモフィルス閑には保gfiのビ
フィズス菌の生残率を向上させる効果は全く存在しない
夕) S菌がビフィズス菌の生残率に及ばす効果につい
て 受に本発明者らは、M−8205株以外のSrMと、S
TH−32株以外の酸素吸収能の低いサーモフィルス菌
、標準株の9Y株及びATCC19258株とを用いて
調製した発丙テ乳を保存したときのビフィズス菌の生残
率を前記t)に記載と同一の方法によって試験した。そ
の結果、サーモフィルス菌の生菌数をラクトバチルス菌
の生菌数の約40倍とし、5℃で7日間保存した法のビ
フィズス菌の生残率は、S菌を使用した場合、いずれも
10%以上であったのに対して、同条件下で酸素吸収能
の低いサーモフィルス菌及びW準株の9Y株、ATCC
19258株を使朋した場合、いずれも1%以下であり
、S菌が格段に高いビフィズス菌の生残効果を示した。
t)各種ビフィズス菌の生残性に対するサーモフィルス
菌の効果について 次に公知の各種ビフィズス菌の発酵乳中での生残性に及
ぼすサーモフィルス菌の影響について次の試験を行なっ
た。使用したビフィズス菌は、ビフィドバクテリウム・
ビフィダムATCC15696、ビフィドバクテリウム
噛インファンチスATCC15697、ビフィドバクテ
リウム・ブレーベATCC15700及びビフィドバク
テリウム・アドレッセンチスATCC15706のtt
4株であり、使用したサーモフィルス菌は、ATCC1
9258株及びM −8205株である。均質後90℃
で10分間殺菌した牛乳に前記t)記載と同様の方法で
調製したサーモフイルス菌、ラクトバチルス菌及びビフ
ィズス菌のスターターをそれぞれ、2・8%(V/V)
 0.2%(V/V )及び1.5%(V/V )添加
し、40”Cで約4時間発酵し、のち直ちに冷却し、p
H4,6の発酵乳を調製した。発酵乳を5 @Cで7日
間保存した場合のビフィズス菌の生菌数の変化と生残率
をpHと共に第3表に示す。
発酵乳中のラクトバチルス閑に対するサーモフィルス菌
の生菌数の比率は、ATCC19258株を用いた場合
、約30@、M −8205株を用いた場合、約20倍
であった。
(27) (28) 第3表から明らかなように発酵乳中のビフィズス菌の生
残率は、菌種によって相違が認められるが、M−820
5株を使用した場合は、ATCC19258株を使用し
た場合と比較して、約800倍から10万倍の高いビフ
ィズス菌の生残率を示した。このように公知の各種ビフ
ィズス菌の生残性に対しても、5ivJは、格段の効果
を有し、S菌は、極めて良好なビフィズス菌の保護作用
を有することが判明した。
また、従来、発酵乳に使用されているラクトバチルス・
ブルガリクス以外のラクトバチルス菌であるラクトバチ
ルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ヘルベチカス
、ラクトバチルス・ジュガーチ、ラクトバチルス・カゼ
イを用いて、S菌と共にビフィズス菌を含有する発酵乳
を調製したところ、上記S菌の生菌数がいずれのラクト
バチルス菌の生菌数の10倍以上である場合に、ビフィ
ズス菌の生残率は、極めて高いことが認められた。
実施例1 90℃で30分間殺菌し、冷却した10%(W/W )
還元脱脂乳培地2500711/にストレプトコッカス
・サーモフィルスM−8202(STH−01)の前培
養物を3%(V/V )の割合で接種し、37℃で16
時間培養した。また、115℃15分間rt4菌し、冷
却した同一組成の培地1001rLI!にラクトバチル
ス・ブルガリクスATCC11842(7)前培養物を
3%(V/V )の割合で接種し、37℃で16時間培
養した。一方、90@Cで30分間殺菌し、冷却した酵
母エキス0.2%(W/W)及び還元脱脂粉乳10%(
W/IF )からなる培g tsoo−に、ビフィドバ
クテリウム拳ロン−)J A ATCC15708(7
)前培養物を10%(V/V )の割合で接種し、37
℃で6時間培養した。これとは別に、乳脂肪3.1%(
W/IF ) 、無脂乳固形分9.0%(w、’v )
からなる調乳液100tを60℃に加温し、150に9
7’dの圧力で均質し、90℃で10分間殺菌し、40
℃に冷却した。この殺菌した牛乳に前記の3菌株のスタ
ーターを全量1M種し、50〇−容の容器に充填し、密
封し、40℃で4時間発酵し、直ちに冷却した。得られ
た発酵乳は乳酸酸度0.78%、pH4,60であり、
ストレプトコッカス・サーモフィルス110 X 10
’/ rat 、ラクトバチルス・ブルガリクス75 
X 10’/ ml lビフィドバクテリウム・ロンガ
ム90X10’/mJを含有していた。この発酵乳を5
℃で7日間保存した後のビフィドバクテリウム・ロンガ
ムの生菌数は12 X 10’/ mlであり生残率は
13.3%であった。
実施例2 90℃で30分間殺菌し、39°Cに冷却した0、1%
(W/IF )カザミノ酸を含む18%(V1還元脱脂
乳30I!にストレプトコッカス・サーモフィルスM−
8204(STH−23) ヲ3%(V/V ) (7
) pH合で接種し、37〜38℃で18時間発酵した
。115”015分間滅菌後冷却した酵母エキス0.1
%(w、’w )及び還元脱脂粉乳10%(w、’v 
)からなる培tI1121にラクトバチルス・アシドフ
ィルスATCC4356を3%(V/V ”)の割合で
接種し、37℃で18時間発酵した。また、90℃で3
0分間殺菌し、冷却したカザミノ酸0.1%(W/TF
)、酵母エキス0.1%(w7v )及び脱脂粉乳12
%(W/w)からなる培地107に、ビフィドバクテリ
ウム・インファンチスATCC15697JE−5%(
V/V)(7)割合テs種シ、37℃で8時間発酵した
。これとは別に、砂糖13に9、耐酸性CMC0,6K
9及び香料0.2に9を含んだシロップ65に9を12
0℃で2秒間殺菌し、約201Cに冷却し、その58に
9に上記のストレプトコッカス・サーモフィルスの発酵
乳30Kg、ラクトバチルス・アシドフィルスの発酵乳
2 K9及びビフィドバクテリウム・インファンチスの
発酵乳10に9を混合した調乳液100に9を調製した
。これを5otc9/cd及びlooKg/diの条件
で2度均質し、200 nil容ガタガラスビン填し、
乳製品乳酸菌飲料約400本を製造した。得られた乳製
品乳酸M飲料は、ストレプトコッカス・サーモフィルス
32XIO/Rhラクトバチルス番アシドフィルス22
 X 10’/ rrLA ’、’ゼフイード/、fク
チlJつA ・イ:、tファンチス27 X 10′/
幌を含有し、ptt 4.8 、乳酸酸度0.63%で
あった。この飲料を5℃で7日間保存した径のビフィド
バクテリウム・インファンチスの生菌数は、29 X 
10’/mであり、生残率は10.7%であった。

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)乳を主成分とする培地でビフィドバクテリウム属
    に属する微生物、ラクトバチルス属に属する微生物及び
    ストレプトコッカス・サーモフィルスを培養して得られ
    、これらの菌の生菌を含有する@va物において、 8)ワールブルグ検圧法で測定したとき、少なくとも3
    0ナノモル(nmole)酸素分子/mg乾燥菌体重量
    ・分)の酸素吸収能を示すストレプトコッカス・サーモ
    フィルスを使用すること。 b)該培養物を7日間5℃で好気的に保存したとき、培
    養終了直後の該培養物中のビフィドバクテリウム属に属
    する微生物の生菌数に対する保存後の該培養物中のビフ
    ィドバクテリウム属に属する微生物の生菌数の百分率で
    表わされる生残率が少なくとも5%であること。 C)培養直後の該培養物中に存在するストレプトコッカ
    ス・サーモフィルスの生菌数が、ラクトバチルス属に属
    する微生物のそれの少なくとも10倍であること。 を特徴とするビフィズス菌および乳酸菌の生菌を含有す
    る培養物。
  2. (2)培養直後の該培養物1 ml当り少なくともIX
    I♂のストレプトコッカス・サーモフィルスの生菌菌体
    、少なくとも2X10’のビフィドバクテリウム属に属
    する微生物の生菌菌体及び少なくとも5X10’のラク
    トバチルス属に属する微生物の生菌菌体を含有すること
    を特徴とする特許請求の範囲第1項に記載の培養物。
  3. (3)ストレプトコッカス・サーモフィルスがストレプ
    トコッカス・サーモフィルスM −8202(徽工研菌
    寄第6777号)、ストレプトコッカス・サーモフィル
    スM−8203(微工研閑寄第6778号)ストレプト
    コッカス・サーモフィルスM−8204(微工研菌寄第
    6779号)及びストレプトコッカス・サーモフィルス
    M−8205(@工研菌寄第6780号)からなる群よ
    り選ばれる1種又は2種以上であることを特徴とする特
    許請求の範囲第1項又は第2項に記載の培養物。
  4. (4)乳を主成分とする滅菌した培地に、それぞれ別個
    に70.1 Mしたビフィドバクテリウム属に属する微
    生物のスターター、ラクトバチルス属に属する微生物の
    スターター及び少なくとも30ナノモル(nmole)
    の酸素分子/(mg乾燥閑体重fft ・分)の酸素吸
    収能を有するストレプトコッカス・サーモフィルスのス
    ターターからなる混合スターターを接種し、好気的条件
    下で培養するか、又は上記3種のスターターをそれぞれ
    別個に上記培地に接種し、好気的条件下でそれぞれ別個
    に培養し、のち得られた培養生産物を混合することを特
    徴とするビフィズス菌及び乳酸菌の生菌を含有する培養
    物の製造法。
  5. (5)混合スターターが、ビフィドバクテリウム属に属
    する微生物のスターター(基準4FZ1oOとする) 
    :ラクトバチルス属に属する微生物のスターター:該ス
    トレプトコッカス・サーモフィルスのスターター:10
    0 : 0.5〜50 : 3.0〜600の比(重量
    )であることを特徴とする特WF請求の範囲第4項に記
    載の製造法。
  6. (6)混合スターターを接部した培flftが37〜4
    26Cで3〜24時間培養されることを特徴とする特許
    請求の範囲第4項又は第5項に記載の製造法。
  7. (7)得られた培養生産物が、ビフィドバクテリウム属
    に属する微生物の培養生産物(基準値100とする):
    ラクトバチルス属に属する微生物の培養生産物:該□ス
    トレプトコッカス・サーモフィルスの培養生産物= 1
    00 : 0.28〜625 : 11〜24,800
    の比率(重′WL)で混合されることを特徴とする特許
    請求の範囲第4項に記載の製造法。
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