CN102105065A - 发酵乳制品中双歧杆菌生长的改善 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于制备发酵乳制品的方法，所述发酵乳制品包含双歧杆菌与乳酸乳球菌、嗜热链球菌和/或保加利亚乳杆菌种的乳酸细菌的组合。
Description
发明领域
本发明涉及通过所选择的细菌菌株改善发酵乳制品中双歧杆菌的生长。
发明背景
乳制品，特别是酸乳类制品形成了目前益生菌制品市场的最大部分。乳制品是用于递送有益益生细菌诸如双歧杆菌并将它们引入到胃肠道内的优良载体
双歧杆菌 是可从丹麦 
的Chr.Hansen A/S得到的众所周知的益生菌。以 
为例，可获得的临床证据表明需要至少109-1010cfu活益生细菌的日剂量(cfu/CFU是细胞形成单位的缩写)。因此，希望具有例如108cfu活益生细菌细胞/g发酵乳制品(例如发酵乳酸乳制品)的高水平。
发明内容
本发明要解决的问题是，提供在用于制造发酵乳制品(例如酸乳)的发酵过程中改善乳中双歧杆菌菌群生长，以便在最终制品中得到高双歧杆菌细胞数的方法。
解决方案是基于本发明人的惊奇发现，即特定的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)菌株在乳发酵过程中明显改善双歧杆菌的生长。通过使用这些菌株中的一种，所得到的发酵乳制品包含高于108cfu/g的双歧杆菌(发酵后不久)。因此，为了得到具有例如108cfu/g双歧杆菌的制品，在发酵终止后无需加入额外的双歧杆菌。发明人测试了一系列不同的乳酸乳球菌菌株，并且发现鉴定为乳酸乳球菌CHCC3912和CHCC4462并分别以DSM21406和DSM21408保藏的菌株在乳发酵过程中明显改善双歧杆菌的生长。事实上，乳酸乳球菌的一些其它菌株负面地影响双歧杆菌的生长。
此外，发明人观察到，嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)(CHCC7018)菌株具有独特的特性，这是因为该菌株也改善双歧杆菌的生长。
因此，本发明的一个方面涉及用于制备发酵乳制品，诸如包含至少108cfu双歧杆菌/g发酵乳制品的制品的方法，其中所述方法包括：
i)将乳接种包含至少一种乳酸乳球菌、至少一种嗜热链球菌菌株、至少一种双歧杆菌菌株和任选至少一种保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)菌株的培养物(诸如酸乳培养物)，其中所述乳酸乳球菌菌株之一优选选自：乳酸乳球菌菌株CHCC3912(DSM21406)、CHCC3912突变体和CHCC3912变异体；或CHCC4462(DSM21407)、CHCC4462突变体和CHCC4462变异体；
ii)在适宜条件下将乳发酵；和
iii)任选地将适宜量的发酵乳制品包装在适宜包装中。感兴趣的实施方案涉及用于制备包含至少108cfu双歧杆菌/g发酵乳制品的发酵乳制品的方法，其中所述方法包括：
i)将乳接种包含至少一种保加利亚乳杆菌菌株、至少一种嗜热链球菌菌株、至少一种乳酸乳球菌菌株和至少一种双歧杆菌菌株的酸乳培养物，其中所述乳酸乳球菌菌株之一是乳酸乳球菌菌株CHCC3912(DSM21406)或CHCC4462(DSM21407)之一；
ii)在适宜条件下将乳发酵以得到具有至少108cfu双歧杆菌/g发酵乳的发酵乳制品；和
iii)将适宜量的发酵乳制品包装在适宜包装中。
而且，本发明还涉及登录号为DSM21408的嗜热链球菌菌株CHCC7018及其突变体/变异体，并且涉及包含本发明菌株(任选与另一菌株诸如双歧杆菌菌株(如 
)在一起)的培养物(诸如起子培养物)。感兴趣的组合物包含i)从105至1012cfu/g 
和ii)从105至1012cfu/g CHCC7018。
发明详述
在第一个方面中，本发明涉及用于制备发酵乳制品的方法，其包括：
i)将乳接种
a)属于双歧杆菌菌株的细菌，和
b)属于选自下列菌株的细菌：乳酸乳球菌菌株，优选增强双歧杆菌菌株生长的菌株，诸如CHCC4462(DSM21407)、CHCC3912(DSM21406)，嗜热链球菌菌株，优选增强双歧杆菌菌株生长的菌株，诸如CHCC7018，和这些菌株中任何菌株的突变体或变异体；
ii)将乳发酵；
iii)任选地向发酵乳中加入另外的微生物和/或添加剂；
和
iv)任选地包装发酵乳制品。在当前优选的实施方案中，步骤i)还包括以属于选自保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、乳酸乳球菌和嗜酸乳杆菌的菌种的细菌接种乳。
本发明方法的实施方案是这样一种方法，其中步骤i)包括将乳接种包含下列的培养物：
a)双歧杆菌菌株；
b)保加利亚乳杆菌菌株；
c)选自CHCC4462、CHCC4462突变体、CHCC4462变异体、CHCC3912、CHCC3912突变体和CHCC3912变异体的乳酸乳球菌菌株；和/或选自CHCC7018、CHCC7018突变体和CHCC7018变异体的嗜热链球菌菌株。
另一实施方案涉及用于制备发酵乳制品(诸如包含至少108cfu双歧杆菌/g发酵乳制品的制品)的方法，其中所述方法包括：
i)将乳以包含至少一种乳酸乳球菌菌株和至少一种双歧杆菌菌株和任选至少一种嗜热链球菌菌株和至少一种保加利亚乳杆菌菌株的培养物(诸如酸乳培养物)接种，其中所述乳酸乳球菌菌株之一选自：登录号为DSM21406的乳酸乳球菌菌株CHCC3912、CHCC3912突变体和CHCC3912变异体，或者登录号为DSM21407的CHCC4462、CHCC4462突变体和CHCC4462变异体；
ii)在适宜条件下将乳发酵；和
iii)任选地将适宜量的发酵乳制品包装在适宜包装中。
再一实施方案涉及用于制备包含至少108cfu双歧杆菌/g发酵乳制品的发酵乳制品的方法，其中所述方法包括：
i)将乳以包含至少一种保加利亚乳杆菌菌株、至少一种嗜热链球菌菌株、至少一种乳酸乳球菌菌株和至少一种双歧杆菌菌株的酸乳培养物接种，其中所述乳酸乳球菌菌株之一是登录号为DSM21406的乳酸乳球菌菌株CHCC3912或登录号为DSM21407的乳酸乳球菌菌株CHCC4462；
ii)在适宜条件下将乳发酵以得到具有至少108cfu双歧杆菌/g发酵乳的发酵乳制品；和
iii)将适宜量的发酵乳制品包装在适宜包装中。
在一个实施方案中，本发明的方法还包括以另外的嗜热链球菌菌株(优选增稠菌株(texturizing strain)，诸如选自ST-BODY-3(Chr.Hansen A/S， 
丹麦)和ST8833(DSM17876)的菌株)接种乳。
双歧杆菌菌株优选属于选自青春双岐杆菌(Bifidobacteriuma adolescentis)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、星状双歧杆菌(Bifidobacterium asteroids)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和假链状双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)的种，并且当前优选地，双歧杆菌菌株是动物双歧杆菌乳酸亚种(Bifidobacterium animalis subspecies lactis)菌株。菌株实例是选自登录号为DSM15954的CHCC5445 
CHCC7158(HN019，保藏号为DSM17280)、作为ATCC 27536保藏的双歧杆菌菌株、婴儿双歧杆菌菌株Bbi99(DSM 13692)、BB-420、BI-04、CHCC2037、LAFTIB-94、DN 173010、STB-2938、R0071、R0175和BB-46TM(DSM15955)和这些菌株的任何菌株的突变体/变异体的菌株。
在有用的实施方案中，所得到的发酵乳制品在发酵结束时包含至少108cfu双歧杆菌/g发酵乳制品和/或发酵乳制品在储存于+6℃28天后包含至少108cfu/g双歧杆菌。
根据本方法的重要实施方案，步骤i)中的乳以105至3x107cfu/g双歧杆菌接种和/或以104至3.5x106cfu/g嗜热链球菌或乳酸乳球菌细菌接种。可以以多个细菌种同时接种乳。这可通过以包含两种细菌种的起子培养物接种乳方便地实现。
在又一实施方案中，乳还以至少一种细菌菌株，诸如乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subs.lactis)菌株(例如选自乳酸乳球菌乳酸亚种DN224；乳酸乳球菌乳酸亚种DN223；和这些菌株中任何菌株的突变体或变异体)接种。当前优选的是，该额外的辅助生物体是选自乳酸乳球菌乳酸亚种DN224、乳酸乳球菌乳酸亚种DN223的乳酸乳球菌乳酸亚种菌株。
应当理解，乳可以分别地/相继地以每一细菌种接种，或者同时以两种或更多种细菌种接种。目前优选的是乳以所有细菌种同时接种。这通过以包含细菌种的起子培养物接种乳方便地实现。
通过本发明方法得到的制品可以定义为“酸乳”，即当乳以保加利亚乳杆菌菌株和嗜热链球菌菌株接种时所获者。
发酵乳制品(诸如酸乳)方便地包装在密封包装中，包装中包含10-5000ml的制品，诸如从25至3000ml或从50至1000ml。示例性的包装可包含10-300ml、20-200ml或30-100ml。
在第二个方面中，本发明涉及包含下列的培养物：
a)属于双歧杆菌菌株的细菌，诸如CHCC5445 
和
b)属于选自下列菌株的细菌：乳酸乳球菌菌株，优选增强双歧杆菌菌株生长的菌株，诸如CHCC4462、CHCC3912和嗜热链球菌菌株，优选增强双歧杆菌菌株生长的菌株(诸如CHCC7018)，或者这些菌株中任何菌株的突变体或变异体。
本发明还涉及包含从105至1012cfu/g 和从105至1012cfu/gCHCC7018和/或从105至1012cfu/g乳酸乳球菌CHCC3912或CHCC4462的培养物(诸如起子培养物)。培养物可进一步包含从105至1012cfu/g的DN224或DN223。
本发明的进一步的方面涉及通过本发明方法可得到的发酵乳制品，特别是包含选自CHCC7018(DSM21408)；CHCC7018突变体；和CHCC7018变异体的嗜热链球菌菌株的发酵乳制品。目前优选的是，本发明的发酵乳制品包含103至1010cfu/g的嗜热链球菌菌株。
本发明还涉及包含属于选自下列菌株的细菌的发酵乳制品：CHCC4462和CHCC3912和这些菌株中任何菌株的突变体或变异体。发酵乳制品优选包含103、优选至少105cfu/g的细菌菌株。
本发明的发酵乳制品可进一步包含从103至1010cfu/g的双歧杆菌和/或从103至1010cfu/g的乳酸乳球菌菌株(诸如CHCC3912、CHCC4462、DN224或DN223)。在目前优选的实施方案中，发酵乳制品包含至少105、优选至少107cfu/g的双歧杆菌和/或至少105、优选至少107cfu/g的乳酸乳球菌乳酸亚种菌株。
在进一步的方面中，本发明涉及选自CHCC7018、CHCC7018突变体、CHCC7018变异体、CHCC4462、CHCC4462突变体、CHCC4462变异体、CHCC3912、CHCC3912突变体和CHCC3912变异体的细菌菌株。优选的是具有母本菌株特性中的一个或多个(优选全部)特性的突变体/变异体菌株，例如能够促进双歧杆菌菌株(特别是 )生长的突变体/变异体菌株。菌株可以是分离的形式，例如基本上无其它细菌菌株。
在优选的实施方案中，双歧杆菌是至少一种选自青春双岐杆菌、动物双歧杆菌、星状双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、链状双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌和假链状双歧杆菌的双歧杆菌。还可以使用包含两种或更多种所列这些菌株的混合物。
在所述方法的优选实施方案中，双歧杆菌菌株是动物双歧杆菌乳酸亚种菌株。具体而言，其中菌株是以登录号DSM15954保藏的动物双歧杆菌乳酸亚种菌株 
(CHCC5445)。
另一优选动物双歧杆菌乳酸亚种菌株是菌株HN019(也称作DR-10TM或HOWARUTM)。该菌株是从于2000年在台湾销售的标签为FernleafDR-10bifidus的商业可得到的婴儿配方制品中分离的。其在Hansen培养物保藏中心(Hansen Culture Collection)的登录号为CHCC7158并且以登录号DSM17280保藏在DSMZ中。
通过根据本领域的标准方法在琼脂平板上计数菌落来定量系列稀释发酵制品中的菌落形成单位(cfu)数，实现对双歧杆菌cfu/g细胞数的测量。适宜的培养基和培养如下给出：
培养基：MRS(de Man等.1960.J.Appl.Bacteriol.23：130)无酸+1％双
氯西林(SIGMA D-9016)+1％半胱氨酸(MERCK n°2839)；和
培养：在无氧条件下于37℃培养3天。
如本文所讨论，CHCC3912或CHCC4462(和/或CHCC7018)的使用提供了在发酵过程中直接从双歧杆菌的生长得到大于108cfu/g双歧杆菌的可能性。因此，第一个方面的步骤ii)的至少108cfu/g双歧杆菌涉及与发酵后直接得到的cfu/g双歧杆菌。
如在工作实施例中所示，当双歧杆菌 
与乳酸乳球菌菌株CHCC3912或CHCC4462和/或嗜热链球菌菌株CHCC7018一起生长时具有良好的存活率。
因此，在优选的实施方案中，发酵乳制品在储存于+6℃1天后具有至少108cfu/g双歧杆菌，更优选在储存于+6℃7天后至少108cfu/g双歧杆菌，甚至更优选在储存于+6℃14天后至少108cfu/g双歧杆菌，甚至更优选在储存于+6℃21天后至少108cfu/g双歧杆菌并且最优选在储存于+6℃28天后至少108cfu/g双歧杆菌。
技术人员知道与具有本文相关细菌的发酵乳相关的适宜发酵条件。
适宜条件是例如将乳以细菌接种并在38℃至43℃下，最佳温度为40℃下发酵，直到达到pH 4.4至4.6(大致在约8小时后)。
将乳冷却至+6℃终止本文相关细菌(诸如双歧杆菌)的发酵和生长。
在本文所述的优选实施方案中，改善的生长通过接种从105至3x107cfu/g的双歧杆菌；并且通过以从104至3.5x106cfu/g的浓度同时接种乳酸乳球菌菌株 CHCC3912或CHCC4462和/或嗜热链球菌菌株CHCC7018得到。
如果需要的话，人们可以在感兴趣的一些点(例如发酵完成之后)加入额外的细菌(例如额外的双歧杆菌)。
如技术人员所已知，多种不同的发酵乳制品可以通过将乳发酵得到，并且可以是液体或固体形式。在优选的实施方案中，发酵乳制品是选自酸乳、饮用酸乳、搅拌酸乳、凝固酸乳和酸乳类饮料、苦乳、酪乳、酸奶油、鲜乳酪和乳酪的制品。
如本文所述的包含至少108cfu/g双歧杆菌的发酵乳还可以用作制品添加剂，以便例如加入到其它可食用食物制品中，诸如凝乳酪、巧克力、果汁、肉制品和婴幼儿干奶粉制品。
在本文中，保加利亚乳杆菌可以是任何适宜(例如商业可得到的)保加利亚乳杆菌菌株。如技术人员所已知，它可以以足够的量接种以在最终发酵乳制品中得到足够量的保加利亚乳杆菌。
在本发明方法中，可以加入其它感兴趣的细菌，诸如辅助细菌。此类细菌可以在发酵过程中或者发酵结束之后加入。此类额外细菌的实例包括选自乳球菌属(Lactococcus)和乳杆菌属(Lactobacillus)的细菌。优选的乳杆菌属是嗜酸乳杆菌菌株 
(可从丹麦的Chr.Hansen A/S商业性获得)。如在WO98/54337(Chr.Hansen，作为EP0985043B1授权)中所描述，可以在发酵过程中加入其丙酮酸代谢具有缺陷的乳酸辅助细菌以得到许多改善，包括改善细菌的储存期。其丙酮酸代谢具有缺陷的菌株DN224(保藏为DSM 11037)和DN223(保藏为DSM 11036)被描述为适宜细菌辅助生物实例。因此，在本发明的实施方案中，还可向乳中加入其丙酮酸代谢具有缺陷的乳酸细菌辅助生物以如本文所述进行发酵。在优选的实施方案中，乳酸细菌辅助生物是选自下列的细菌：以登录号DSM 11036保藏的乳酸乳球菌乳酸亚种菌株DN223和乳酸乳球菌乳酸亚种菌株DN224(以DSM 11037保藏)。最优选地，乳酸细菌辅助生物是DN224。
一个实施方案涉及组合物，诸如培养物，包含：
i)从105至1012cfu/g 
和
ii)从105至1012cfu/g CHCC7018，
iii)从105至1012cfu/g DN224。
保藏的微生物体[专家方案]
菌株乳酸乳球菌CHCC3912、乳酸乳球菌CHCC4462、乳酸乳球菌 CHCC2907和嗜热链球菌菌株CHCC7018已经保藏在DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，Inhoffenstr.7B，D-38124Braunschweig，德国)中，登录号分别为DSM21406、DSM21407、DSM21421和DSM 21408，保藏日期为2008年4月23日。已经按照国际承认用于专利程序的微生物保藏布达佩斯条约进行了保藏。
所有申请人要求所保藏微生物的样品仅对于经申请人认可的专家可以得到。
定义
在本文中，酸乳起子培养物是包含至少一种保加利亚乳杆菌菌株和至少一种嗜热链球菌菌株的细菌培养物。依照本说明书，酸乳是通过以保加利亚乳杆菌菌株和嗜热链球菌菌株接种和发酵乳可得到的发酵乳制品。
在本文中，术语“乳”包括哺乳动物或植物的乳。乳实例为母牛乳(牛乳)、骆驼乳、水牛乳、山羊乳、绵羊乳和大豆乳。任选地，乳被酸化，例如通过加入酸(诸如柠檬酸、醋酸或乳酸)，或者与例如水混合。乳可以是未加工过的或者例如通过过滤、灭菌、巴斯德灭菌、均匀化等加工过的，或者其可以是重构干乳。根据本发明，“牛乳”的重要实例是巴斯德灭菌的母牛乳。应当理解，乳可以在以细菌接种之前、之中和/或之后被酸化、混合或加工。
在本文中，术语在适宜包装中“包装”(适宜量)发酵乳涉及发酵乳的最终包装以得到可以由例如人或一群人摄入的制品。因此，适宜包装可以是瓶或类似物，并且适宜量可以是例如10ml至5000ml，但是目前优选的是包装中的量是从50ml至1000ml。
在本文中，术语“突变体”应当理解为通过例如遗传工程、辐射和/或化学处理手段从本发明菌株(或本发明中使用的菌株)衍生的菌株。优选地，突变体是功能等效突变体。本发明菌株的优选突变体是增加乳介质中双歧杆菌细胞生长的突变体，例如具有与母本菌株基本相同或改善的双歧杆菌生长促进特性的突变体。此种突变体是本发明的一部分。特别地，术语“突变体”指通过使菌株(其为本发明的菌株)经受任何常规使用的诱变处理，包括用化学诱变剂如甲基磺酸乙酯(EMS)或N-甲基-N′-硝基-N-硝基胍(NTG)、紫外线处理得到的菌株，或指自发产生的突变体。突变体可已经经受了数次诱变处理(单一处理应理解为一个诱变步骤后接筛选/选择步骤)，但是目前优选的是开展不超过20次、或者不超过10次、或者不超过5次处理。在目前优选的突变体中，与母本菌株相比，细菌基 因组中小于5％、或者小于1％或者甚至小于0.1％的核苷酸已经被另一核苷酸替换或者缺失。
在本文中，术语“变异体”应该理解为与母本菌株功能等效的菌株，诸如增加乳介质中双歧杆菌细胞生长的菌株。变异体应当属于与母本菌株相同的种。例如，CHCC7018变异体应当理解为与CHCC7018功能等效的嗜热链球菌菌株，诸如增加乳介质中双歧杆菌细胞生长的菌株，例如具有与母本菌株相同或基本相同或改善的双歧杆菌生长促进特性的菌株，并且CHCC3912变异体应当理解为与CHCC3912功能等效的乳酸乳球菌菌株，例如具有与母本菌株相同或基本相同或改善的双歧杆菌生长促进特性的菌株。可以使用适当的筛选技术鉴定的此类变异体是本发明的一部分。
术语“一(a)”和“一(an)”和“该(the)”和相似指代在描述本发明的上下文中(特别是后附权利要求书的上下文中)的使用应当解释为涵盖单数和复数，除非本文另外指出或者上下文明显矛盾。术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应当理解为开放式术语(即，意思是“包括，但不限于”)，除非另外指出。除非本文另外指出，本文中对数值范围的描述仅旨在用作分别提及处于该范围内的各个单独数值的速记法，并且各个单独数值整合入说明书中，如同它们在本文中分别描述一样。除非本文另外指出或者除非通过上下文明显矛盾，本文所描述的所有方法以任何适宜顺序开展。本文所提供的任何和全部实例或示例性措辞(如，“例如”)的使用仅旨在更好地阐述本发明并且不限制本发明的范围，除非另外声明。说明书中的文字不能解释为表示着任何非要求保护的元素作为实施本发明的要素。
实施例
实施例1：使用多种乳酸乳球菌菌株的 
生长改善
乳介质(9.5％重构的脱脂奶粉，加热至99℃达30秒)以0.01％ 
F-DVS培养物和0.01％乳球菌属F-DVS培养物接种，导致起始 
浓度为1x107CFU。之后，将乳于40℃下发酵16小时并于8℃下储存。分别在1、14、28和45天的储存后开展 
细胞计数分析。
表1
实施例2：使用多种嗜热链球菌菌株的 
生长改善
乳介质(9.5％重构的脱脂奶粉，加热至99℃达30秒)以0.01％ 
F-DVS培养物和嗜热链球菌F-DVS培养物接种，导致起始 
浓度为1x107CFU。之后，将乳于40℃下发酵16小时并于8℃下储存。分别在1、14、28和45天的储存后开展 
细胞计数分析。
表2
实施例3：使用嗜热链球菌和乳酸乳球菌菌株的 
生长改善
根据标准的3升酸乳方法开展酸乳生产。将加入2％脱脂奶粉的鲜乳(0.5％脂肪)在92℃下加热处理20分钟。将乳冷却至43℃，以培养物接种(0.016-0.023％，取决于培养物)并发酵至pH 4.55。之后，将酸乳搅拌、冷却至25℃并于5℃下储存。
结果：
表3
*根据制品说明书所计算的
**发酵过程中的生长计算为第1天CFU/接种CFU
数据是3次3L规模酸乳生产的平均值(68‘低接种’仅2次)
在发酵乳制品中计数了已知对于 
细胞为最佳表现培养物的参照培养物ABY-10和BY-700(Chr.Hansen A/S， 
丹麦)。
培养物组合物：
“68”：包含 CHCC7018、保加利亚乳杆菌和CHCC4462(乳酸乳球菌CHCC4462)的培养物。
“74”：包含 
CHCC7018、保加利亚乳杆菌和CHCC3912(乳酸乳球菌CHCC3912)的培养物。
结论：
CHCC7018、CHCC4462和CHCC3912单独和组合均改善发酵过程中双歧杆菌 
的生长至在发酵乳制品中为至少108cfu/g。
本文中描述了本发明的优选实施方案，包括发明人已知用于实施本发明的最佳方式。在阅读前述描述后，这些优选实施方案的变化对本领域普通技术人员而言变得显而易见。发明人预期技术人员根据需要采用此类变化，并且发明人意欲以本文明确描述之外的方式实施本发明。因此，如所适用法律所允许，本发明包括在后附权利要求书中描述的主旨的所有修改形式和等同物。此外，上述元素在其所有可能的变化方式中的任何组合包括在本发明之中，除非本文另外指出或者除非根据上下文明显矛盾。
参考文献
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Claims (30)
1.用于制备发酵乳制品的方法，其包括：
i)将乳接种下列：
a)属于双歧杆菌菌株的细菌，和
b)属于选自下列菌株的细菌：增加所述双歧杆菌菌株生长的乳酸乳球菌菌株，和增加所述双歧杆菌菌株生长的嗜热链球菌菌株；
ii)将所述乳发酵；
iii)任选地，向发酵乳中加入另外的微生物和/或添加剂；和
iv)任选地，包装发酵乳制品。
2.权利要求1的方法，其中b)中的细菌属于选自下列的菌株：CHCC4462(DSM21407)、CHCC3912(DSM21406)、CHCC7018(DSM21408)和这些菌株中任何菌株的突变体或变异体。
3.上述权利要求任一项的方法，其还包括以属于选自下列的种的细菌接种所述乳：保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、乳酸乳球菌和嗜酸乳杆菌。
4.上述权利要求任一项的方法，其中步骤i)包括将乳接种包含下列的培养物：
a)双歧杆菌菌株；
b)保加利亚乳杆菌菌株；
c)选自CHCC4462、CHCC4462突变体、CHCC4462变异体、CHCC3912、CHCC3912突变体和CHCC3912变异体的乳酸乳球菌菌株；和/或选自CHCC7018、CHCC7018突变体和CHCC7018变异体的嗜热链球菌菌株。
5.上述权利要求任一项的方法，其还包括以额外的嗜热链球菌菌株，优选增稠菌株，诸如选自ST-BODY-3(Chr.Hansen A/S，
丹麦)和ST8833(DSM17876)的菌株接种所述乳。
6.上述权利要求任一项的方法，其中双歧杆菌菌株属于选自青春双岐杆菌、动物双歧杆菌、星状双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、链状双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌和假链状双歧杆菌的种。
7.上述权利要求任一项的方法，其中双歧杆菌菌株是动物双歧杆菌乳酸亚种菌株。
8.上述权利要求的方法，其中双歧杆菌菌株选自CHCC5445(
DSM15954)、CHCC7158(DSM17280)和BB-46TM(DSM15955)，和这些菌株中任何菌株的突变体/变异体。
9.上述权利要求的方法，其中双歧杆菌菌株选自CHCC5445(
DSM15954)、CHCC7158(DSM17280)和BB-46TM(DSM15955)，和这些菌株中任何菌株的突变体。
10.上述权利要求的方法，其中双歧杆菌菌株是
或其具有例如与益生菌基本相同特性的突变体。
11.上述权利要求任一项的方法，其中发酵乳制品包含至少108cfu双歧杆菌/g发酵乳制品。
12.上述权利要求任一项的方法，其中发酵乳制品在储存于+6℃28天后包含至少108cfu/g双歧杆菌。
13.上述权利要求任一项的方法，其中步骤i)中的乳以105至3x107cfu/g的双歧杆菌和/或以104至3.5x106cfu/g的嗜热链球菌或乳酸乳球菌细菌接种。
14.上述权利要求任一项的方法，其中乳还以至少一种细菌菌株，诸如乳酸乳球菌乳酸亚种菌株(例如选自乳酸乳球菌乳酸亚种DN224；乳酸乳球菌乳酸亚种DN223；和这些菌株中任何菌株的突变体或变异体)接种。
15.上述权利要求任一项的方法，其中发酵乳制品包装在密封包装中，所述密封包装包含从10ml至5000ml、或25ml至3000ml、或50ml至1000ml的制品。
16.通过上述权利要求任一项的方法可获得的发酵乳制品。
17.权利要求16的发酵乳制品，其中制品在储存于+6℃28天后包含至少108cfu/g双歧杆菌。
18.发酵乳制品，包含属于选自下列菌株的细菌：CHCC7018、CHCC4462和CHCC3912，和这些菌株中任何菌株的突变体。
19.发酵乳制品，包含属于选自下列菌株的细菌：CHCC7018和CHCC3912，和这些菌株中任何菌株的突变体。
20.上述权利要求任一项的发酵乳制品，其包含103、优选至少105cfu/g的嗜热链球菌菌株。
21.上述权利要求任一项的发酵乳制品，其还包括至少105、优选至少107cfu/g的双歧杆菌和/或至少105、优选至少107cfu/g的乳酸乳球菌乳酸亚种菌株。
22.上述权利要求任一项的发酵乳制品，其是酸乳。
23.组合物，诸如培养物，包含：
a)属于双歧杆菌菌株的细菌，诸如CHCC5445
和
b)属于选自下列菌株的细菌：乳酸乳球菌菌株，优选增强双歧杆菌菌株生长的菌株，诸如CHCC4462，CHCC3912，或这些菌株中任何菌株的突变体，和嗜热链球菌菌株，优选增强双歧杆菌菌株生长的菌株(诸如CHCC7018，或其突变体)。
24.根据前述权利要求的组合物，包含：
i)从105至1012cfu/g的选自
或其突变体的菌株，和
ii)从105至1012cfu/g的选自CHCC7018或其突变体的菌株和/或105至1012cfu/g的选自CHCC4462、CHCC3912和这些菌株中任何菌株的突变体的菌株。
25.上述权利要求的培养物，其还包含从105至1012cfu/g的DN224或DN223或其突变体/变异体。
26.细菌菌株，选自ST7018、ST7018突变体和ST7018变异体，CHCC4462、CHCC4462突变体、CHCC4462变异体，CHCC3912、CHCC3912突变体和CHCC3912变异体。
27.细菌菌株，选自ST7018、ST7018突变体和ST7018变异体，CHCC3912、CHCC3912突变体和CHCC3912变异体。
28.细菌菌株，选自ST7018、ST7018突变体、CHCC3912和CHCC3912突变体。
29.细菌菌株，选自ST7018、CHCC3912，和这些菌株中任何菌株的突变体，所述突变体具有双歧杆菌生长促进特性。
30.分离形式的前述权利要求的菌株。
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