JPS5971684A - 新菌種サ−モモノスポラ・ホルモセンシス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新菌種サーモモノスポラ・ホルモセンシスに
関する。

本発明者らは、抗生物質生産能を有する微生物について
種々検索したととる、サーモモノスポラ属に属するおる
微生物が抗生物質リファマイシンＯおよびＳを生産する
こと、該微生物はサーモモノスポラ属の新菌種に属する
ことを認め、これらの知見に基づきさらに研究した結果
、本発明を完成した。

本発明は、グルコース・アスパラギン寒天培地およびイ
ースト・麦芽寒天培地の各培地上で淡桃白色の気菌糸を
着生する新菌種サーモモノスポラ・ホルモセンシスであ
る。

本発明の新菌種サーモモノスポラ・ホルモセンシスに属
する微生物としては、たとえば中華成田（台Ｒ）台北市
の土壌から通常行なわれる分離手段に従って分離した放
線菌Ｃ−３６８２０株（以下、「ｃ−３６８２０株」と
略称することもある。

）が挙げられる。

Ｃ−３６８２０株の菌学的性質は、以下のとおりである
。

１、形態学的性質 菌糸を伸長し、その主軸にそって形成された短かい胞子
柄に単胞子を形成する。以上のように、おもに気菌糸に
単胞子が形成されるが、わずかに基土菌糸にも形成され
ることもある。なお胞子柄の叉状分岐は認められない。

胞子は球形（直径約１μｍ）でその表面は平滑である。

その他の特殊な器官すなわち胞子のう、鞭毛胞子、菌核
は形成されない。

２　培養性状 各種培地上での諸性状は第１表に示すとおりである。

第１表 註：　（）　内ｕカラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃ
ｏ１ｏｒ　Ｈａ、ｒｍｏｎ３ｒ　Ｍａｎｕａ、１．　）
　Ｎ（４版、　１９５８年（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏ
ｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ＋ｎｅｒｉｃａ発行）の
色番号を示す。

３　生理的性質 Ｃ−３６８２０株の生理的諸イー′トＹ！、は第２）翳
Ｃ示すとおりである。

第　２　表 生育温度範囲　　　　　　　　　　２３〜４１ｔＥ（イ
ースト・麦芽寒天培地上） メラニン様色素の生成 ペプトン・イースト鉄寒天培地　　　陰　性チロシン寒
天培地　　　　　　　　陰　性スターチの加水分解　　
　　　　　　陰　性ゼラチンの液化　　　　　　　　　
　陽　性情酸塩の還元　　　　　　　　　　　陰　性脱
脂牛乳の凝固　　　　　　　　　　陰　性脱脂牛乳のべ
１トン化　　　　　　　陽　性プリーダム・ゴトリープ
の方法〔ジャーナル・オブ・バタテリオロジイ（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉ　−０１Ｑｇｙ）第５
６巻、１０７頁、　１９４８年〕に準拠して各種炭素源
の利用性を調べ、第３表に示す結果を得た。

第３表 廿：　よく利用する。

＋：　利用する。

±：　利用は疑わしい。

４　全細胞分解物の性質 Ｃ−３６８２０株をイースト・エキス（１％）、グルコ
ース（１％）からなる液体培地に接種し、生育して得ら
れた菌体をベラカー（Ｂｅｃｋｅｒ　　）らの方法〔ア
プライド・ミクロビオロジイ（Ａｐｐ−１１ｅｄ　Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　）第１２巻、　４２１〜４２３
頁（１９６４））に準拠して、２．６−ジアミノピメリ
ン酸の異性体についてＥべだ結果、メソ型であった。ま
た同菌体を用い、ルシエバリエ（Ｌｅｃｈｅ　−ｖａｌ
ｉｅｒ　　）の方法〔ジャーナル・オブ・ラボラトリ−
・アンド・クリニカル・メデイシン（Ｊｏｕｒ−ｎａｌ
　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉｃ
ａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）第７１巻、９３４〜９４４頁
（１９６８年）〕に従い、菌体の加水分解物をペーパー
・クロマトグラフィーにより分析した結果、グルコース
、ガヲクトーヌ、マジュロースがそれぞれ明瞭に認めら
れた。すなわち、Ｃ−３６８２０株は細胞壁タイプ■、
糖パターンＢに属する。

以上の菌学的性質のうち、気菌糸に単胞子を形成し、胞
子は非運動性であシ、＃Ｉ肥壁タイプ■型で、中温性で
あることから、本菌株をサーモモノスポラ属（Ｔｈｅｒ
ｍｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）の中温性菌群に帰属すると見
なすのが妥当である。従って、既知の類縁種として以下
の菌種が挙げられる。

（１）　　サーモモノスポラ・メソフィラ（Ｔｈｅｒｍ
ｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｍｅｓｏｐｈｉｌａ　）ジャー
ナル・オプ・ファメンテーション・チクノロシイ　（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＴｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｙ　）　ｇ５４　ｇ巻、　８９５〜９０３
頁。

１９７１年 （２）　　サーモモノスポラ・メソビホルミス（Ｔｈｅ
ｒｍｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｍｅｓｏｖｉｆｏｒｍｉｓ
　）ジャーナル・オプ・ファーメンテ−ジョン・チクノ
ロシイ　第５２巻、１０〜１３頁、　１９７４年そこで
、Ｃ−３６８２０株と上記既知菌種（サーモモノスポラ
・メソフィラＩＦ’０　１４１７９、サーモモノスポラ
・メソビホルミスエＦ’０　１４１７８）とを同一条件
下で菌学的比較を行った。

その結果、１１’０　１４１７８株は生育にビタミンＢ
群が必須であることから、各種分類培地上での生育がイ
ハめて貧弱か、あるいは全く生育が認められず、Ｃ−３
６８２０株との違いは明瞭であった。一方、ＩＦ’０　
１４１７９株は灰色の気菌糸を着生し、硝酸塩の還元が
陽性であり、Ｄ−フラクトース、Ｄ−キシロース、Ｄ−
マンニラトノ資化性が非常に良好である。以上の性質は
ｃ−３６８２０株の結果と特に異なる性質である。

上記したことから、Ｃ−３６８２０株はサーモモノスポ
ラ属の新菌種に分類されることが適当と認め、本菌ｆｆ
ｉをサーモモノスポラ・ホルモセンシス（Ｔｈｅｒｍｏ
ｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｆｏｒｍｏｓｅｎｓｉｓ　）と命
名した。

Ｃ−３６８２０株は、昭和５７年９月１４日に財団法人
発酵研究所（ＵＦＯ）に受託番号ＩＦ’０１４２０４と
して寄託され、まだ本機生物は昭和５７年９月２７日に
通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）
に受託番号１’ＥＲＭＰ−６７３０として寄託されてい
る。

新ｍｉｘサーモモノスポラ・ホルモセンシスニ属する菌
株は、他の放線菌と同様に、たとえば紫外線照射、Ｘ線
照射９入工変異剤などを用いる人工変異手段を適用する
ことにより、変異株となることがあるが、これらの変異
株であっても、グルコース・アスパラギン寒天培地およ
びイースト・麦芽寒天培地の各培地上で淡桃白色の気菌
糸を着生する限シ、本発明の新菌沖サーモモノスポラ・
ホルモセンシスに属スる。

サーモモノスポラ属に属し、リファマイシンＯおよび／
またはＳを生産する能力を有する微生物を培地に培養し
、培養物中にリファマイシン０および／またはＳを生成
蓄潰せしめ、これを採取することによりリファマイシン
○および／まだはＳを製造することができる。

サーモモノスポラ属に属する菌株は、他の放線菌と同様
に、その性質が変化しやすく、例えば紫外線照射、Ｘ線
照射９入工変異剤などを用いる人工変異手段を適用する
ことによシ容易に変異し得る。しかし、これらの変異株
であってもリファマイシンＯおよび／またはＳを生産す
る性質を失わない限勺リファマイシンＯおよび／または
Ｓの生産に使用することが出来る。勿論、か＼る変異株
が自然の原因に由来するものであっても、人工的に行わ
れたものであってもさしつかえない。

リファマイシン０および／ｉたけＳの生産においてサー
モモノスポラ瘍に属するリファマイシン０および／また
はＳ生産菌の培養に用いる培地としては、サーモモノス
ポラ属菌が利用し得る栄養物を含有するものを使用すれ
（イ良い。すなわち、栄養源として、たとえばグルコー
ス、でん粉、グＩＪ−ｈロール、テキストリン、シュー
クロース、水飴、糖蜜などの炭素源、まだ窒素源と１７
で、たとえば脱脂大豆粉および生大豆粉、コーン・スチ
ープ・リカー、小麦胚芽、　Ｍｉｌ実粉、酵１１エキヌ
、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの有機およ
び無機窒素化合物がいずれも有効に利用される。

まだ必要に応じて炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩
化カリウム、リン酸塩など無機鳴類を添加しても良い。

また菌の発育を助はリファマイシン０および／またはＳ
の生産を促進するような適宜の有機物や無機物を添加し
ても良い。

培養法としては一般の抗生物質の生産方法と同様に行な
えば良く、液体培養法とくに深部通気培養が好ましい。

焙≠社場４４着Ｈ岬−べ４呑杵Φ４十時耕ｊ打→℃が適
当１虜−巧 培養は、通常培地のｐＨ約６〜８で、温度約２４〜３７
℃で、時間は約７２〜１４４時間で行なわれる。

培養物から目的とするりファマイシンＯおよび／または
Ｓを採取するには通常の物理化学的手段を適当に組み合
せることにより行なえる。具体的にはりファマイシン０
および／またはＳはそれぞれ脂溶性物質で、主として培
養沖液中に産生されるから、培養物を濾過して得られる
ｐ液について該有効物質の採取、精製を行なうのが有利
である。

抽出に使用される有機溶媒としては、たとえば酢酸エチ
ル、酢酸ブチルなどの有機脂肪酸、エステル類、メチル
イソブチルケトンなどのケトン類。

ｎ−ブタノール、ｎ−アミルアルコールなどのアルコ−
／Ｌ’類、クロロホルム、二塩化メタンなどのハロゲン
化炭化水素類、ジエチルエーテルなどのエーテ／Ｉ／Ｌ
ｔｉなどが適宜に用いられる。

このようにして得られるそれぞれの有機溶媒層を水洗、
脱水後減圧濃縮し、直接結晶を採取するか、濃縮後に極
性の小さな有機溶媒たとえば石油エーテ／Ｖ、石油ベン
ジン、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサンなどを加えるとり
ファマイシン０および／またはＳの粗物質が析出する。

吸着剤を用いて精製する場合には、吸着剤に有効成分を
吸着させた後、適宜の溶媒を用いて脱着させる。吸着剤
として、たとえばシリカゲル、修酸を含むシリカゲル、
活性炭などが用いられる。

溶媒としては、吸着剤の種類によっても異なるが、たと
えばシリカゲルのカラムクロマトグラフィーの場合ニは
、ベンゼン、ジエチルエーテルなどの極性の小さな溶媒
で不純物を溶出させた後、極性の大きな酢酸エチル、ア
セトン、エタノールなどを単独あるいはそれらの適当な
組み合わせを行なうことによシ有効成分を溶出させるこ
とが出来る。

さらに薄層クロマトグラフィーの場合、有効成分は展開
後活性帯から抽出される。

リファマイシン０およびＳは、抗菌剤として有用である
。たとえばリファマイシンＳは、各種の微生物に対し抗
菌作用を有し、またリファマイシンＳ■と同様の抗菌ス
ペクトルを有する〔エクスベリエンチイア（Ｅｘｐｅｒ
ｉｅｎｔｉａ）第１６巻４１２頁（１９６０年）Ｇ照〕
ので、抗菌剤としてリファマイシンＳｖ〔アルツナイミ
ツテル・フオルシュンク（Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ　
Ｆｏｒａｃｂｕｎｇ　）　Ｒｅｆｔ　８ａ、第９５２〜
１００２頁（１９６５年）参照〕と同様に用いることが
できる。

以下に、実施例および参考例を挙げて本発明をさらに具
体的に説明する。

実施例／ 土壌試料を滅菌水で約５０００倍に稀釈し、そのＯ，，
１ｔｉｅを下記分離用寒天平板上にコンラジー棒で拡げ
、２８℃で７日間培養した。

可溶性でん粉　　　　　１０．（ＨＦ カゼイン　　　　　　　　　１．０ｇ Ｋ２ＨＰＯ４０，５９ 寒天　　　　１５ｇ 水道水　　　　　　　１０００　　ｔｅｌ（ｐＨ７，０
〜７．２） 上記培養により形成したコロニーを白金耳にてイースト
エキストラクト・マルトエキストラクト斜面寒天培地に
移し、２８℃で１４日間培養した。

上記斜面培地上に生育しだＣ−３９１４８株の１白金耳
を滅菌水で１００００倍に希釈し、その０．１１１をイ
ーストエキストラクト・マルトエキストラクト寒天平板
に移植し、２８℃、７日間培養し、出現した複数のコロ
ニーが相互に相異しないことを肉眼的および顕微鏡的に
確認するとともに、上記コロニーの内１０個をそれぞれ
上記斜面寒天培地に接種し、２８’Ｃ，７日間培養し、
斜面培地上の１０株がいずれも肉眼的および顕微鏡的に
同一で６Ｄ、しかも各種分類培地上の性状および生理的
性質も同一であることを確認した。

参考例／ イーストエキストラクト・マルトエキストラクト斜面寒
天培地に培養したサーモモノスポラＳｐ。

Ｃ−３６８２０（工Ｆ’０　１４２０４．ＦＩＲＭＰ−
６７３０）を２００＊を容三角フラスコ内のグルコース
２％、可溶性デンプン３％、生大豆粉１％、コーンステ
イープリカー１％、ペプトン０゜５％、ＮａＣ１０，３
％、　ＣａＣＯ３０，５９１を含む４゜＃Ｔｌの種培地
に接種し、２８ｔＥ　、４８時間回転振盪（幾重で培養
し、種培養液を得た。得られた種培養液の０．５ｄを２
００Ｉ１７容三角フラスコ内の、可溶性デンプン５％、
肉エキス０．５％、コーンステイープリカー２％、ペプ
トン０．５％＋　Ｖｆ、酸アンモニウム０．１％、硫酸
第２鉄０．０５％。

Ｃａ、ＣＯ３１９６を含む４０ｍ１の主培地に移植し、
２８ｔＥ、１４４時間回転振投機上で培養した。得られ
１ｔ−１６養液ハ、スタフィロコッカス・アウレウスＰ
ＤＡ２０９Ｐ株を検定菌とし、リファマイシンＳ■を標
準品とする微生物検定法で５μＱ／ａｔの生産力価を示
しだ。

こ＼に得られた培養液５００ｒｉｉにアセトン同量を加
えて３０分間攪拌した後、ハイフロスーパーセ／ｌ’（
ｉｌｌ、ジョンス・マンヴイル社製）２ｏｇを加えて、
あらかじめハイフロス−パーセルでプレコートしたヌッ
チェを使用して吸引濾過した。

得られたろ液を減圧下に濃縮してアセトンを留去した。

と＼に得られた水性液（４５０１１／）をｐＨ３，０に
調整した後、酢酸エチル２５０ｇ／宛で２回抽出した。

抽出液を水洗、無水硫酸ソーダで乾燥後、減圧濃縮した
。濃縮液に石油エーテルを加え、生じた沈滞を炉取する
と、粗物質］、２．５ｆｆｇが得られた。このうちの少
量をサンプルとして薄層クロマトグツフィーに付した。

すなわち、あらかじめ耐酸処理をはどこしたシリカゲ／
ｌ／６０Ｆ２．４（０，２５ｒｍ、メルク社製、西独）
を担体とし、トルエン−師酸エチ／Ｌ’（０，５％修耐
酸含有（１：１）を展開溶媒として得られたクロマトグ
ラムを被検ｍスタフィロコッカス・アウレウスとするバ
イオオートグラムに付したところ、同時に展開した標品
リファマイシンＳおよび０に相当するスポットが認めら
れた。

Ｒｆ値　サンプル　　　　　０．４２　　０．５１リフ
アマイシンＯＯ，５２ リフアマイシンＳ　　　　Ｏ，４３ 尚残シのサンプ／１１５哩を少量の酢酸エチルに溶解し
上記の条件でプレパラーテイブＴＬＣに付してリファマ
イシンＳに相当するフラクションをかきとシ、水を含む
酢酸エチルで抽出した後、水洗。

乾燥後減圧濃縮乾固した。残香にメタノ−／Ｌ’１ＯＨ
ｔを加えて溶解し、紫外部吸収スペクトルを測定したと
ころ、λｍａｘ　２２０＋　２７３．３０５（ｓｈ）、
　３３５（８ｈ）に吸収極大を有し、標品リファマイシ
ンＳのそれと一致した。

なお、上記標品リファマイシン０は特公昭４８−８８４
０号・公報に示されているス）　Ｌ／ブトミセス・トリ
ポフオラスＢ−２８４７の培養液から採取、精製された
ものである。一方、リファマイシンＳは上記リファマイ
シン０の酸化的加水分解によって製造され、その元素分
析値９分子賛、紫外部吸収スペクトル、比旋光度、抗６
１スベク）／しはいずれもエクスベリエンティア（Ｅｘ
ｐｅｒｉｅｎｔｉａ　）第１６巻、４１２頁、１９６０
年に記載のそれらと一致することが認められているもの
である。

３７１

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. グルコース・アスパラギン寒天培地およびイースト・麦
   芽寒天培地の各培地上で淡桃白色の気菌糸全着生する新
   菌種サーモモノスポラ・ホルモセンシス。