JPH0383947A - 新規なｑ―５４８６―ａ物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、Ｑ−５４８６−Ａ物質及び該物質の製造法に
関する。　Ｑ−５４８６−Ａ物質は、新規化合物であっ
て、ホスホリパーゼＡ２阻害作用を有し、抗炎症剤、抗
アレルギー剤等として医薬の分野で利用できる。

（発明の解決しようとする課題及び課題を解決するため
の手段） 本発明者らは、天然に存在する多数の微生物の産生ずる
物質について研究を行っていたところ、ストレプトミセ
ス属に属する一菌株が培地中にＱ５４８６−　Ａ物質を
生産することを見出した。そして、該物質を単離同定し
たところ、これは新規化合物であって、ホスホリパーゼ
八８の活性を抑制する作用があるという知見を得て本発
明を完成するに至った。

すなわち、 本発明は、 次の平面化学構造式 （１） ％式％ ５４８６−　Ａ　９１質及び該物質の製造法に関する。

本発明のＱ−５４８６−Ａ物質の理化学的性質を示すと
第１表のとおりである。

第 表 Ｑ−５４８６−Ａ物質は、３個の不斉炭素原子を有し、
また二重結合をもち、光学異性体、幾何学異性体等の立
体異性体が存在する。

本発明ではこれらの異性体の分離されたものおよびそれ
らの混合物をも包含する。　Ｑ−５４１１１６−Ａ物質
は、ストレプトミセス属に属するＱ−５４８６−Ａ物質
生産菌を培養し、培養液中にＱ−５４８６−Ａ物質を生
産Ｍ積させ、培養液から該物質を採取することによって
製造することができる。

ストレプトミセス属に属するＱ−５４８６−Ａ物質生産
菌としては、例えば本発明者らが沖縄県石垣島で採取し
た土壌から分離したストレプトミセスエスピー（ＳＬｒ
ｅｐＬｏｍｙｃｅｓ　ＳＰ、）Ｑ−５４８Ｇ株（微工研
菌寄第１０９４６号）を挙げることができる。このＱ−
５４８６株の菌学的１生質を説明する。

（１）　　形態 本菌株は各種合成及びイｉ′機培地においてよく廿育す
る。スターチ・無ｎ塩寒天培地、オートミール寒天培地
、イースト麦′！Ａ寒天培地などでは、灰色の気菌糸が
豊富に形成されるが、ペプトン・イースト・鉄寒天培地
やグルコース・アスパラギン寒天培地上にはほとんど形
成されない。光学顕微鏡観察によれば、気菌糸は単純分
枝で、先端が閉じたらせん状（Ｃ１ｏｓｅｄ　５ｐｉｒ
ａｌ）を示し、形状はセクションスピラレス（Ｓ）であ
る、電子顕微鏡での観察で、胞子は５０（ＩＪＪ程度の
連鎖を認め、胞子の大きさは０．４〜０．６　Ｘ　Ｏ，
７〜０．９μ−であり、その表面構造は毛状である。輪
生技、胞子襄、菌核などの特殊な器官は認められない。

（２）各種寒天培地上の性状 各種寒天培地上の性状は、以下に示すとおりである。特
に記載しないかぎり、２７℃で２１日間培養し、常法に
従って観察したものである０色調の記載については色の
［準（日本色彩研究所）によった。

尺 ；裏面の色相 ；可溶性色素 （３） 生理的性質 ゼラチン （２８°Ｃ） 陰性 ？）ＮａＣ１耐性　　　　　　　〈６％（注）生育温度
は各温度（５，１０，１５，２０，２４，２７，３０３
３、３７，４０，４５，５０°Ｃ）で、７〜２１日まで
の観察結果、ミルクに対する作用は３７℃で３〜２１日
までの観察結果、それ以外は、特に指摘のないかぎり２
７°Ｃで２週間後の観察結果を示す。

（４）炭素源の資化性（プリドハム・ゴドリープ寒天培
地、２７℃培養） Ｌ−アラビノース Ｄ−キシロース Ｄ−グルコース Ｄ−フラクトース シュクロース イノシトール ラムノース ラフィノース Ｄ−マンニトール スターチ マンノース メリビオース ラクトース Ｄ−ガラクト−ス ート ＋ 十　− ＋− ＋ マルトース ＋ キサンチン　　　　　＋ （注）十：生育する　　トー；生育が疑わしい一；生育
しない （５）　　ジアミノピメリン酸（ＤＡＩ’）の分析Ｌ［
ＩＣ１１ＶＡＬ１［Ｒらの方法（Ｌ［ＣＩＩＶＡＬＩ［
！Ｒ，Ｍｌ’、ｅＬ　ａｌ著Ｄｌ［ｉＴＺ、Ａ　　ｅｔ
　　ａｌ　　１扁、八ｃＬｉｎｏｍｙｃｅＬｅＴａｘｏ
ｎｏ＋＊ｙ、ＳＩＭＳｐｅｃｉａｌ　ｐｕｂｌｉｃａｔ
ｉｏｎ　Ｏ，２３８，２７７（１９８０）　）に従い、
本菌株の酸加水分解物の分析を行った結果、ＬＬ−シア
〔ノピメリン酸及びグリシンが検出された。

以上の性状を要約すると、Ｑ−５４８６株は、各種寒天
培地上で形成される気菌糸が単純分枝で、その形状はセ
クションスピラレス（Ｓ）であり、５０個程度の胞子の
連鎖が観察される０色相は生育がうず黄茶〜黄、気菌糸
が灰色を呈し、可溶性色素、メラニン様色素の生成は認
められない。

また菌体の酸加水分解物の分析よりＬＬ−ジアミノピメ
リン酸とグリシンが検出された。

上記託性質より、本菌株はストレプトミセス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｔｎｙｃｅｓ）属に属する菌株と考えられ、本菌
株に類似する既知菌種を、「バーシーズ・マニュアル・
オン・デクミネティブ・バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇｅ
ｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｒ　ＤｅＬａｍｉｎａｔｉｖ
ｅｌｌａｃＬｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版、１９７４年」
、「インターナショナル・ジャーナル・オン・システマ
ティック・バクテリオロジ−（ＩｎＬｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　ＳｙｓｔｅｍａＬｌｃ　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第１８巻、２号、６９−１
８９頁、４号、２７９−３９２頁（１９６８）、第１９
巻、４号、３９１−５１２頁（１９６９）、第２２′＠
、４号、２６５−３９４頁（１９７２）　Ｊより検索し
た。その結果、本菌株に類似な菌とし°Ｃは、ストレプ
トミセスバクタム（Ｓ、ｐａｃｔｕｍ）があげられ、こ
の菌と文献上の性質で比較した０本菌株は気菌糸の形状
と色調、胞子の形状、炭素源の資化性や生育温度などの
生理性状において、ストレプトミセスバクタムとよく一
致している。しかし第２表に示すように、一部の培地上
での気菌糸の着生、色調、可溶性色素の有無及び生産物
において差が見られた。以上の点より本菌株は、ストレ
プトミセス　バクタムに非常に近縁な菌と考えられるが
、分類学的詳細については、今後さらに検討を加えてい
くこととする。そこで本菌株をとりあえず、ストレプト
ミむス・エスピー（Ｓｔｙｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ＳＰ、
　）　Ｑ　−５４８６株と命名した０本閑株は、工業技
術院微生物工業伎術研究所に微工研菌寄第１０９４６号
として寄託されている。

第２表 Ｑ−５４８６株　Ｓ、ｐａｃｔｕｔｔｒなお、 微生物は人工的に、 また自然に変異を起 しやすいが、本発明のストレプトミセス　ニス・ピー　
Ｑ　　５４Ｂ６株は天然から分離された肢線菌のほかに
これを紫外線、Ｘ線、化学薬剤などで人工的に変異させ
たもの及びそれらの自然変異株についても、包含される
ものである。

Ｑ−５４８６物質の生産はストレプトミセス　ニス・ピ
ー　Ｑ−５４８６株を培地に培養し、培養物より採取す
ることにより行なわれる。培養方法は一般微生物の培養
方法に準じて行なわれるが、通常は液体培地により深部
培養法が有利である。培養に用いられる培地としては、
ストレプトミセス　ニス・ピー　Ｑ−５４８６株が利用
する栄養源を含有する培地であればよい。

すなわち、合成培地、半合成培地あるいは天然培地が用
いられ、培地の組成は、例えば炭素源としてはグルコー
ス、アラビノース、フラクトース、デンプン、植物油等
が、窒素源としては肉エキス、ペプトン、グルテンミー
ル、綿実粕、大豆粉、落花生粉、魚粉、コーンスチーブ
リカー、乾燥酵母、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝
酸アンモニウム、尿素その他の有機、無機の窒素源が用
いられる。また、金属塩としてＮａＪ＋Ｍｇ＋Ｃａ＋Ｚ
ｎ＋Ｆｅなどの硫酸塩、６ｒＩ酸塩、塩化物、炭酸塩、
燐酸塩などが必要に応じて添加される。

また、必要に応じてメチオニン、システィン、シスチン
、チオ硫酸塩、オレイン酸メチル、ラード抽、シリコン
油、界面活性剤などの抗生物質生成促進物質又は消泡剤
を添加することもできる。

培養条件としては好気的条件下に培養するのが一般的に
有利で、培養温度は約１５〜３７℃の範囲が望ましく、
好ましく約２５〜２７°Ｃ附近で行われる。

培地のｐｌ＋は約５〜１０、好ましくは約６〜８の範囲
に保存すると好結果が得られる。培養期間は培地の組成
、温度条件に応じて適宜設定される。

培養物より目的とするＱ−５４８６−Ａ　９１質を単Ｆ
ｉｌｌ採取するには通常の微生物の培養物より抗生物質
を単離する方法が適用される。目的物は主に培養液中に
含有されるので、遠心分離又は濾過により菌体を除去し
た後、濾過液から有効物質の抽出を行う、すなわち、適
当な溶剤に対する溶解性及び溶解度の差、種々の吸着剤
に対する吸着親和性の差、２種の液相間における分配の
差などを利用する一般の抗生９Ｊ質の製造に用いられる
手段によって、分離、採取、精製される。これらの方法
は必要に応じて単独に用いられ、あるいは任意の順序に
組合わせ、また反覆し適用できる。

（実施例） 以上、本発明の詳細な説明したが、以下に実施例により
さらに説明する。

実施例１゜ グルコース１．０％、ポテトスターチ２．０％、酵母０
．５％、ポリペプトン０．５％、ＣａＣＯ３０，４％を
含む液体培地（ｐＨ７，０）を作製し、これを５００ｄ
容三角フラスコに各１００１１１ずつ分注し、１２１’
Ｃで２０分間滅菌したものに、ベネット寒天培地上に生
育させた菌糸をかき取って接種し、２８℃で４８時間振
盪培養を行い種培養液とする。つぎに、グルコース２．
０％、ポテトスターチ４．０％、酵母エキス１．０％、
ポリペプトン１．　ｏ％、ＣａＣＯ３０，４％を含む液
体墳地（ｐ１１７．ｏ）を２０１３ＯＮジャーファーメ
ンタ−に作製し、１２１　”Ｃで２０分間滅菌したもの
に種培養液を２．０％の割合で植菌した。２８°Ｃで９
０時間３００ｒｐ＋ｍ２０１　／　ｗｉｎで通気撹ＩＴ
培養を続ける。

このようにして得られた培養液１０１にラジオライｌ−
４６００（昭和化学工業！！！りを加えて撹拌した後、
濾過すると濾液８１が得られる。この濾液をｐｌ＋７．
０に調整した後、８１の酢酸エチルを加えてよ＜　ｎ！
拌する。酢酸エチル層を分離して、これに無水硫酸ナト
リウムを加えて脱水する。脱水した酢酸エチル層を減圧
濃縮すると褐色エキス３ｇが得られる＊　ｔ’）られた
褐色エキス３汀を少量のりＣｌロホルムに溶解させ、ワ
コーゲルＣ−２００（和光純ｉ製）　１２０ｇをクロロ
ホルムにて充填したカラムに乗せ、クロロホルム：メタ
ノール５０：ｌを展開溶媒とするカラム・クロマトグラ
フィーを行う。

Ｑ　−５４８６−Ａ　ｖｙＪｉｆの検出には簡便なシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーを利用した。すなわち、
カラム・クロマトグラフィーの溶出液の各分画をＴＬＣ
プレートシリカゲル（ｉｏｈｓｎ　　（メルク社製）に
スポットして、クロロホルム：メタノール（９：ｌ）の
ｉ１４合溶媒で展開して、紫外線ランプ（２５４ｎ＋ｍ
）でＩＩ　ｒ　ｆ＋Ｉ′＋０　、４２を示□し、かつホ
スホリパーゼ八、１（■古作用を示ずＱ−５４８（ｉ−
Ａ物質を検出する。　Ｑ−５４８６−Ａ物質だけがｔｒ
ｔＥするカラム・り［＋マドグラフィーの両分を集めて
減圧濃縮すると純粋なＱ−５４８６−Ａ物質が枯ちょう
な頷色液体として０．５ｇ得られた。

こうして得られたＱ−５４８６−Ａ物質は、トランス配
置を有する立体異性体である（Ｑ−５４８６−Ａ　、と
称す）、この物質の理化学的性質については前述のとお
りであった。

（発明の効果） 本発明の新規物質Ｑ−５４１Ｊ６−Ａ物質は、ホスホリ
パーゼＡ！阻害作用を有し、抗炎症剤等として有用であ
る。すなわち、従来、炎症、アレルギー等に関与する物
質としてプロスタグランデイン、ロイコトリエン等が知
られている。これらの生体内物質の生成機構は、まず、
種々の刺激によってホスホリパーゼ＾２が活性化され、
アラキドン酸を細胞膜リン脂質から遊離し、このアラキ
ドン酸を出発物質としてプロスタグランデイン、ロイコ
トリエン等が生体内で合成されるものである。従って、
ホスホリパーゼ＾、は、プロスタグランデインとロイコ
トリエンとの生合成系の律速酵素であると考えられてい
る。

一方、抗炎症剤として、ステロイド系薬剤と非ステロイ
ド系薬剤とが知られている。　ｆｌｉＪ者は、プロスタ
グランデイン、ロイコトリエン両方の生合成経路を阻害
し、抗炎症作用は強いが、しばしば好ましくない副作用
が現れる。また、後者は、抗炎症作用は前者にくらべて
弱い。

本発明のＱ　−５４８６−Ａ物質は、ホスホリパーゼＡ
２の活性を抑制することによってプロスタグランデイン
とロイコトリエンとの生合成を抑え、副作用の少ない、
強い抗炎症剤とすることができる。また抗アレルギー剤
をも提供することができる。

さらに、プロスタグランデイン、ロイコトリエン、ホス
ホリパーゼａＸ反応生成物等が造血時の組織のえ死に関
与することが知られており、本発明のＱ−５４８６−Ａ
物質は、ホスホリパーゼＡ２阻害を阻害するので、これ
らの物質の生成を抑制し、その結果、虚血性血管障害、
潰瘍、敗血症等の治療にも有効であることが期待できる
。

次に、本発明のＱ　−５４８６−Ａ物質のホスホリパー
ゼＡ２阻害作川、アラキドン酸遊離阻害作用及びこれら
の作用によって生ずるマウス耳浮脛の１０１制効果につ
いて実験例をあげて説明する。

（１）ホスホリパーゼへ、阻害活性の測定ジャーナル　
オン　バイオロジカル　ケミストリー（Ｊ、１１ｉｏ＋
、Ｃｈｅｍ、、２６０Ｇ）、４２３９−４２４６　（１
９Ｆ１６））に記載の方法に準じ、以下の方法で測定し
た。

１３．５ａ＋Ｂ！化力ルシウムト２７０μｇ／＋＊１（
７）牛血’Ｉｎ　７　／Ｌ／プミンを含む１３５ａ＋Ｍ
　）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）１００μｌにウサギ
血小板由来ホスホリパーゼＡｔｌＯ０ｎｇを加え水中で
３０分間インキュベーションを行う。

次に本発明の化合物Ｑ−５４８（ｉ−ＡＩＯμｉ、及び
トリチウム標識オレイン酸を取り込ま一仕た大腸菌のオ
ートクレイプ標晶２５μｌ約２０万ｃｐｓ）を反応液に
加え、６℃で１０分間反応させる０反応は２規定塩酸５
０μｌの添加によって停止させる０反応停止後２０＋ｓ
ｇ／ｍの牛血清アルブミン５０μ２を加えて氷中３０分
間放置したのち遠心し、遠心上清のカウントを測定した
。

なお、ホスホリパーゼ八２阻害活性の測定に基質として
用いた、トリチウム標識オレイン酸を取り込んだ大腸菌
のオートフレイブ標品は以下のようにして調製した。−
視程培養した大腸菌培養液を１００−のトリプトンメデ
ィウム（１％バクトドリプトン−０，５％塩化ナトリウ
ム）に加えて３７℃で０Ｄ５５０が０．４となるまでイ
ンキュベーションする０次にＢｒ１Ｊ３５（界面活性剤
）を１　／１００１とトリチウム標識オレイン酸５ｍＣ
１を加え、さらに３７℃で５時間インキュベーションを
続けた後、１２０°Ｃ２０２０°Ｃ２０分間オートフレ
イブ４°Ｃに放置する。

その後、菌体を０．１％牛血清アルブミンと１０ｍＭ塩
化カルシウムを含む０．７Ｍ　）リス塩酸緩衝液でよく
洗浄した後、０．２％アジ化すトリウムと１０ｍＭ塩化
カルシウムを含む０．７Ｍ　Ｆリス塩酸緩衝液に！Ｑ濁
し、使用時まで４°Ｃで保存する。この方法で測定した
本発明化合物のホスホリパーゼへ、阻害活性のＩＣ５０
値を第３表に示す。

（２）アラキドン酸遊前の阻害活性の測定マウス腹腔よ
り得たマウス白血病細胞Ｐ３８８細胞を、１０％牛脂児
血清を含むＲＰＭ１１６４０培地に２Ｘ１０’細胞／　
ａｌｌとなるように懸濁し、トリチウム標識アラキドン
酸を終濃度０．８μＣＩ／ｄとなるように加え、炭酸ガ
スインキュベーター中３７℃１６時間培養する。

培養後細胞をＲＰＭｌ１６４０でよく洗浄し、再び１０
％牛脂児血清を含むＲＰＭ１１６４０培地５００μｌに
懸濁し、供試サンプル（Ｑ−５４８６−Ａ）　１０ｕ　
ｌを加える。３７°Ｃで１５分間インキュベー１・した
後Ａ２３１８７を終濃度ＩＯμＭとなるように加え、さ
らにインキュベ−１、を続ける。１時間後に培養液を遠
心し上清中のカウント（上清中に’ａｍしたアラキドン
酸量）を測定する。結果はアラキドン酸の′ｆｌ離を５
０％阻害するＱ−５４８６−Ａの濃度（ＩＣ５０）とし
て第３表に示した。

（３）マウス耳浮胛の抑制 ＆ＩＣｆ’１ＥＩＣＲ７ウス（休ｆｆＬ３０〜３５ｇ）
　（７）　両耳にニア　セ）ンに溶解したＱ−５４８６
−Ａあるいはアセトンのみを塗布し、その３０分後に右
耳のみに、フォルボール・１２−ミリステイト−１３−
アセチイト（ＴＩＩＡ）ｌμｇ／ｅａｒを塗布する。４
時間後に左右の耳を切り取り、その重攪を測定し、ＴＩ
ＩＡによる耳浮１１１（耳重潰の増加）の程度をコント
ロールと比較する。結果は、ＴＰ＾によるマウスの耳浮
胛を５０％抑制するＱ−５４８ＧＡ　ｆｆｉ　（ＥＤ、
。）として第３表に示した。

第３表 ＩＣｓ＋＋　　　　　　　ＩＣ５ｏ　　　　　　　　　
　ＥＤｓ。

１１−５４８６−八　　７Ｘ１０−’Ｍ　　　　　　ｌ
Ｘｌ０−’Ｍ　　　　　　１２０μｇ／耳この結果、Ｑ
−５４８（ｉ−へ物質は、ｌ’ＬＡｚ阻害活性、アラキ
ドン酸遊Ｍ　Ｉｌｌ害作用を有し、ＴＩＩＡ誘導マウス
の耳浮腫抑制作用があり、抗炎症剤等として有用に利用
できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｑ−５４８（ｉ−Ａ物質の紫外線吸収スペク
トルを、第２図は、赤外線吸収スペクトルを、第３図は
、′１１−核磁気共鳴スベクトルを、第４図吐１３Ｃ−
核磁気共鳴スベクトルを、第５図は質重分析スペクトル
（１！Ｉ−ＭＳ）をそれぞれ示す。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の平面化学構造式で表されるＱ−５４８６−
   Ａ物質 ▲数式、化学式、表等があります▼
2. （２）ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
   ）に属するＱ−５４８６−Ａ物質生産菌を培養し、培養
   液中にＱ−５４８６−Ａ物質を蓄積させ、この培養液か
   ら該物質を採取することを特徴とする下記平面化学構造
   式で表されるＱ−５４８６−Ａ物質の製造法▲数式、化
   学式、表等があります▼
3. （３）ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
   ）に属する菌株がストレプトミセスエスピー（Ｓｔｒｅ
   ｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）Ｑ−５４８６−（微工研菌寄
   第１０９４６号）である請求項（２）記載のＱ−５４８
   ６−Ａ物質の製造法