JPS5918039B2 - 微生物による蛋白質の製造法 - Google Patents
微生物による蛋白質の製造法Info
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- JPS5918039B2 JPS5918039B2 JP51067981A JP6798176A JPS5918039B2 JP S5918039 B2 JPS5918039 B2 JP S5918039B2 JP 51067981 A JP51067981 A JP 51067981A JP 6798176 A JP6798176 A JP 6798176A JP S5918039 B2 JPS5918039 B2 JP S5918039B2
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- Japan
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- protein
- microorganisms
- added
- proteins
- production method
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A63—SPORTS; GAMES; AMUSEMENTS
- A63D—BOWLING GAMES, e.g. SKITTLES, BOCCE OR BOWLS; INSTALLATIONS THEREFOR; BAGATELLE OR SIMILAR GAMES; BILLIARDS
- A63D13/00—Bagatelles or similar games
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A63—SPORTS; GAMES; AMUSEMENTS
- A63H—TOYS, e.g. TOPS, DOLLS, HOOPS OR BUILDING BLOCKS
- A63H1/00—Tops
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A63—SPORTS; GAMES; AMUSEMENTS
- A63F—CARD, BOARD, OR ROULETTE GAMES; INDOOR GAMES USING SMALL MOVING PLAYING BODIES; VIDEO GAMES; GAMES NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- A63F7/00—Indoor games using small moving playing bodies, e.g. balls, discs or blocks
- A63F7/22—Accessories; Details
- A63F7/30—Details of the playing surface, e.g. obstacles; Goal posts; Targets; Scoring or pocketing devices; Playing-body-actuated sensors, e.g. switches; Tilt indicators; Means for detecting misuse or errors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
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- Health & Medical Sciences (AREA)
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Toys (AREA)
- Pinball Game Machines (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は微生物による蛋白質の製造方法に関する。
微生物を用いて蛋白質を製造する方法は、将来の蛋白質
資源を供給する有力な方法として注目され種々の研究が
なされている。
資源を供給する有力な方法として注目され種々の研究が
なされている。
しかしこれら従来の方法は、いずれも蛋白質を微生物菌
体（ＳＣＰ）として生産するものであり、従って微生物
菌体なそのまま蛋白源として用いる場合には、消化率が
低い点や、ＲＮＡ等核酸成分が多く含まれるので安全性
の点で問題が有る。
体（ＳＣＰ）として生産するものであり、従って微生物
菌体なそのまま蛋白源として用いる場合には、消化率が
低い点や、ＲＮＡ等核酸成分が多く含まれるので安全性
の点で問題が有る。
また菌体から蛋白質を取り出して用いる場合には、蛋白
質の抽出、分離に種々煩雑な操作を必要とする等の欠点
が有る。
質の抽出、分離に種々煩雑な操作を必要とする等の欠点
が有る。
一方微生物を用いて蛋白質を菌体外蛋白質として生成せ
しめる方法としては、酵素生産の例が良く知られている
が、この場合には生産量が少なく、しかも高価な有機窒
素源を多量必要とするものが多く、又有機窒素源からは
菌体外蛋白は生産され難い等の欠点を有する。
しめる方法としては、酵素生産の例が良く知られている
が、この場合には生産量が少なく、しかも高価な有機窒
素源を多量必要とするものが多く、又有機窒素源からは
菌体外蛋白は生産され難い等の欠点を有する。
本発明者等はこれら欠点を改良すべく種々検討を重ねた
結果、微生物を培養する際、対数増殖期に、細胞壁合成
阻害抗生物質を添加して培養することにより、微生物が
蛋白質を菌体外に著量生産することを見い出し、本発明
を完成した。
結果、微生物を培養する際、対数増殖期に、細胞壁合成
阻害抗生物質を添加して培養することにより、微生物が
蛋白質を菌体外に著量生産することを見い出し、本発明
を完成した。
本発明で使用される微生物はバチルス属に属する微生物
が使用される。
が使用される。
これら微生物の培養に用いられる蛋白生産用培地は炭素
源、窒素源、無機塩類及び有機微量栄養素を含有する培
地であり、炭素源としてはグルコース、フラクトース、
マルトース、シュークロース、澱粉等の炭水化物、エタ
ノール、グリセリン等のアルコール、酢酸等の脂肪酸な
どであり、さらにこれら成分を含有する例えばケーンモ
ラセス、ビートモラセス等の粗原料が使用される。
源、窒素源、無機塩類及び有機微量栄養素を含有する培
地であり、炭素源としてはグルコース、フラクトース、
マルトース、シュークロース、澱粉等の炭水化物、エタ
ノール、グリセリン等のアルコール、酢酸等の脂肪酸な
どであり、さらにこれら成分を含有する例えばケーンモ
ラセス、ビートモラセス等の粗原料が使用される。
窒素源としては、アンモニア水、硫安、硝安、酢酸アン
モニューム等有機又は無機アンモニューム塩等が使用さ
れる。
モニューム等有機又は無機アンモニューム塩等が使用さ
れる。
無機塩類としては、ＫＨ２Ｐ０４２ＭｔＳＯ４・７Ｈ２
０，ＦｅＳＯ４゜Ｍｎ５Ｏ，等有機微量栄養素としては
、ビタミン、アミノ酸酵母エキス、ペプトン、肉エキス
、麦芽エキス、コーンス・ステイープ・リカー、等が使
用される。
０，ＦｅＳＯ４゜Ｍｎ５Ｏ，等有機微量栄養素としては
、ビタミン、アミノ酸酵母エキス、ペプトン、肉エキス
、麦芽エキス、コーンス・ステイープ・リカー、等が使
用される。
培養液へ添加する細胞壁合成阻害抗生物質としては、ペ
ニシリン、セファロスポリン、バシトラシン、Ｄ−シク
ロセリン、０−力ルバミルーＤ−セリン、リストセチン
、バンコマイシン及びこれらの誘導体が使用される。
ニシリン、セファロスポリン、バシトラシン、Ｄ−シク
ロセリン、０−力ルバミルーＤ−セリン、リストセチン
、バンコマイシン及びこれらの誘導体が使用される。
これら抗生物質の添加時期は、微生物が増殖し、細胞壁
の合成が盛んに行われる対数増殖期であり、望ましくは
、７５０ｍμのＯＤが２６に達した時点が最も効果が大
である。
の合成が盛んに行われる対数増殖期であり、望ましくは
、７５０ｍμのＯＤが２６に達した時点が最も効果が大
である。
又添加量は使用される微生物によって差が見られるが少
なくとも培養液に対し、０．１γ／ｒＩＬ１以上は必要
である。
なくとも培養液に対し、０．１γ／ｒＩＬ１以上は必要
である。
微生物の培養は、温度を２５〜４５℃、培養ｐＨ６〜９
に調節して、２〜４日間好気的に培養されるが、これら
抗生物質を添加することにより添加しない場合の３〜１
０倍の蛋白質が菌体外に生産される。
に調節して、２〜４日間好気的に培養されるが、これら
抗生物質を添加することにより添加しない場合の３〜１
０倍の蛋白質が菌体外に生産される。
このようにして生産される菌体外蛋白は数種類の蛋白質
の混合物であり各蛋白は各種アミノ酸を構成４分とする
通常の単純蛋白質である。
の混合物であり各蛋白は各種アミノ酸を構成４分とする
通常の単純蛋白質である。
培養液中に生産された蛋白質の採取方法は通常の蛋白質
の採取方法が使用される。
の採取方法が使用される。
添加する抗生物質の種類により、添加した抗生物質を除
去する必要が有る場合には培養液を遠心分離、または濾
過して、菌体を分離後、得られる上清液にアセトン・エ
タノール等の有機溶媒、あるいは硫安、硫酸ソーダ等の
塩類を加えて蛋白質を沈澱させる方法、上清液のｐＨを
蛋白質の等電点に調製する等電沈澱法等により蛋白質を
沈澱させ、これを分離採取する方法、さらに上清液を限
外濾過法、イオン交換樹脂法で濃縮する方法等により、
添加した抗生物質を殆ど含まない蛋白質を分離、採取す
ることができる。
去する必要が有る場合には培養液を遠心分離、または濾
過して、菌体を分離後、得られる上清液にアセトン・エ
タノール等の有機溶媒、あるいは硫安、硫酸ソーダ等の
塩類を加えて蛋白質を沈澱させる方法、上清液のｐＨを
蛋白質の等電点に調製する等電沈澱法等により蛋白質を
沈澱させ、これを分離採取する方法、さらに上清液を限
外濾過法、イオン交換樹脂法で濃縮する方法等により、
添加した抗生物質を殆ど含まない蛋白質を分離、採取す
ることができる。
一方添加抗生物質の除去な必要としない場合には、上記
方法の他に培養液又は上清液をそのまま減圧濃縮後乾燥
する方法も適用される。
方法の他に培養液又は上清液をそのまま減圧濃縮後乾燥
する方法も適用される。
本発明の実施により生産される蛋白質は、利用され易い
水溶性蛋白質であり、蛋白以外の不純物をほとんど含有
せず、微生物菌体自身よりも優れた蛋白質であり、本発
明は将来の蛋白不足を補う有力な手段の一つを提供する
ものである。
水溶性蛋白質であり、蛋白以外の不純物をほとんど含有
せず、微生物菌体自身よりも優れた蛋白質であり、本発
明は将来の蛋白不足を補う有力な手段の一つを提供する
ものである。
実施例 １
グルコース５９／ｄｌ、（ＮＨ４）２ＳＯ４１，５ｆ／
ｄｌ、 ＫＨ２Ｐ ０４０．１ ｆｆ／ｄｌ、 Ｍグ５
Ｏ４７Ｈ２００、０２？／ｄｌ、 Ｆ ｅ Ｓ ０４・
７１Ｈ２０１，Ｏ’１ｌ１９／ｄｉ。
ｄｌ、 ＫＨ２Ｐ ０４０．１ ｆｆ／ｄｌ、 Ｍグ５
Ｏ４７Ｈ２００、０２？／ｄｌ、 Ｆ ｅ Ｓ ０４・
７１Ｈ２０１，Ｏ’１ｌ１９／ｄｉ。
ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０１，０１ｒ１ｇ／ｄ１１ＺｎＳＯ
４・７Ｈ２００、１７７２！ｉｉ’／ｄｌ、 Ｌ−グル
タミン酸０．０３グ／ｄｌ、パントテン酸カルシウム０
．４■／ｄｌ、葉酸０．００２■／ｄｌ、ナイアシン０
．４〜／ｄｌ、 Ｐ−アミノベンゾイック・アンド２■
／ｄｌ （ｐＨ＝ ７．８ ）を含む培地を５００１７
１Ａ’容の肩付フラスコに２０ｒＩＬｌずつ入れ、１１
０℃で１０分間加熱殺菌した。
４・７Ｈ２００、１７７２！ｉｉ’／ｄｌ、 Ｌ−グル
タミン酸０．０３グ／ｄｌ、パントテン酸カルシウム０
．４■／ｄｌ、葉酸０．００２■／ｄｌ、ナイアシン０
．４〜／ｄｌ、 Ｐ−アミノベンゾイック・アンド２■
／ｄｌ （ｐＨ＝ ７．８ ）を含む培地を５００１７
１Ａ’容の肩付フラスコに２０ｒＩＬｌずつ入れ、１１
０℃で１０分間加熱殺菌した。
これに第１表に示す微生物の前培養液を１ｒｆＬｌ接゛
種し、各フラスコに別殺菌した０、４Ｓ’のＣａＣＯ３
を加え３４℃で振盪培養を行ない、培養開始後ｕ時間経
過時に、ペニシリンＧカリニーム塩、セファロスポリン
Ｃ誘導体（セフアメシン、藤沢製薬部）、Ｄ−シクロセ
リン、バシトラシンを夫々添加し、更に９６時間培養し
た。
種し、各フラスコに別殺菌した０、４Ｓ’のＣａＣＯ３
を加え３４℃で振盪培養を行ない、培養開始後ｕ時間経
過時に、ペニシリンＧカリニーム塩、セファロスポリン
Ｃ誘導体（セフアメシン、藤沢製薬部）、Ｄ−シクロセ
リン、バシトラシンを夫々添加し、更に９６時間培養し
た。
添加した抗生物質の種類、添加量と菌体外蛋白生産量を
第１表に示した。
第１表に示した。
培養液中の蛋白質の定量は次のようにして行った。
一定量の培養液を遠心分離して菌体を除去し、得られる
上清液に等量の１０％過塩素酸を加えて蛋白を沈澱させ
る。
上清液に等量の１０％過塩素酸を加えて蛋白を沈澱させ
る。
これを遠心分離（ｓｏｏ。ｒｐｍ、１０分間）として集
め、ＩＮ ＮａｏＨで溶解し、中性溶液としてからＬ
ｏｗｒｙ法（Ｊ、Ｂｉｏｌ−ｃｈｅｍ−，１９３〜２６
５（１９５１）〕によって測定した。
め、ＩＮ ＮａｏＨで溶解し、中性溶液としてからＬ
ｏｗｒｙ法（Ｊ、Ｂｉｏｌ−ｃｈｅｍ−，１９３〜２６
５（１９５１）〕によって測定した。
実施例 ２
実施例１と同様の方法で、バチルス・プレビスＡＪ１１
０４１ ＦＥＲＭ−Ｐ３５８１を抗生物質を添加して
培養し、得られた培養液を遠心分離して菌体を除去し、
清澄液１．Ｏｌを得た。
０４１ ＦＥＲＭ−Ｐ３５８１を抗生物質を添加して
培養し、得られた培養液を遠心分離して菌体を除去し、
清澄液１．Ｏｌを得た。
これに１．０１のアセトンを添加して蛋白を沈澱させ、
これを濾別後減圧乾燥した。
これを濾別後減圧乾燥した。
添加した抗生物質の種類と得られた蛋白質の乾物重量を
第３表に示した。
第３表に示した。
Claims (1)
- １ バチルス属に属し、菌体外に蛋白質を蓄積する能力
を有する微生物をアンモニウム塩を窒素源とする培地で
培養し、対数増殖期に細胞壁合成阻害抗生物質を添加し
て好気的に培養を行い、菌体外に蛋白質を蓄積せしめ、
これを採取することな特徴とする蛋白質の製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51067981A JPS5918039B2 (ja) | 1976-05-26 | 1976-05-26 | 微生物による蛋白質の製造法 |
| ES1976224845U ES224845Y (es) | 1976-05-26 | 1976-12-01 | Juguete. |
| DE7638983U DE7638983U1 (de) | 1976-05-26 | 1976-12-13 | Unterhaltungsvorrichtung |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51067981A JPS5918039B2 (ja) | 1976-05-26 | 1976-05-26 | 微生物による蛋白質の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS52151792A JPS52151792A (en) | 1977-12-16 |
| JPS5918039B2 true JPS5918039B2 (ja) | 1984-04-25 |
Family
ID=13360660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51067981A Expired JPS5918039B2 (ja) | 1976-05-26 | 1976-05-26 | 微生物による蛋白質の製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5918039B2 (ja) |
| DE (1) | DE7638983U1 (ja) |
| ES (1) | ES224845Y (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0061250A3 (en) * | 1981-03-23 | 1983-09-28 | Biogen N.V. | Improved process for recovering products produced by host organisms |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5148490A (en) * | 1974-10-25 | 1976-04-26 | Ajinomoto Kk | Biseibutsu nyoru tanpakushitsuno seizoho |
-
1976
- 1976-05-26 JP JP51067981A patent/JPS5918039B2/ja not_active Expired
- 1976-12-01 ES ES1976224845U patent/ES224845Y/es not_active Expired
- 1976-12-13 DE DE7638983U patent/DE7638983U1/de not_active Expired
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5148490A (en) * | 1974-10-25 | 1976-04-26 | Ajinomoto Kk | Biseibutsu nyoru tanpakushitsuno seizoho |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE7638983U1 (de) | 1978-04-13 |
| ES224845U (es) | 1977-02-16 |
| ES224845Y (es) | 1977-06-16 |
| JPS52151792A (en) | 1977-12-16 |
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