JPS5918038B2 - 抗生物質ｂｎ−１８６−ａ物質の添加培養による高収率製造法 - Google Patents
抗生物質ｂｎ−１８６−ａ物質の添加培養による高収率製造法Info
- Publication number
- JPS5918038B2 JPS5918038B2 JP15493476A JP15493476A JPS5918038B2 JP S5918038 B2 JPS5918038 B2 JP S5918038B2 JP 15493476 A JP15493476 A JP 15493476A JP 15493476 A JP15493476 A JP 15493476A JP S5918038 B2 JPS5918038 B2 JP S5918038B2
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- antibiotic
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はシュードモナス属に属するＢＮ−１８６株を培
養し、抗生物質ＢＮ−１８６−ＡおよびＢＮ−１８６−
Ｂ物質を得るに際し、特定の物質を添加して、ＢＮ−１
８６−Ａ物質を多量に産生取得する方法に関する。
養し、抗生物質ＢＮ−１８６−ＡおよびＢＮ−１８６−
Ｂ物質を得るに際し、特定の物質を添加して、ＢＮ−１
８６−Ａ物質を多量に産生取得する方法に関する。
本発明者らは医薬及びその原料として有効な抗生物質Ｂ
Ｎ−１８６−ＡおよびＢＮ−１８６−Ｂ物質をシュード
モナス属に属するＢＮ−１８６株が生産することを見出
し次のようにしてその構造を独自に決定した。
Ｎ−１８６−ＡおよびＢＮ−１８６−Ｂ物質をシュード
モナス属に属するＢＮ−１８６株が生産することを見出
し次のようにしてその構造を独自に決定した。
（特願昭５１−４７７９４、同５ｌ−８６５６５）
その後特開昭５１−９１３８９に公開された抗生物質Ｂ
ｕ−２１８３−ＡおよびＢｕ−２１８３−Ｂと構造的に
同一であることが判明した。
ｕ−２１８３−ＡおよびＢｕ−２１８３−Ｂと構造的に
同一であることが判明した。
さらにＢＮ−１８６株の培養研究を進めた結果ＢＮ−１
８６−Ａを多量に産生取得する方法を確立し、本発明を
完成した。
８６−Ａを多量に産生取得する方法を確立し、本発明を
完成した。
本発明に使用されるＢＮ−１８６株の通常の培養で生産
される抗生物質ＢＮ−１８６−ＡとＢＮ−１８６−Ｈの
割合はおおよそ４：６であり、精製分離は両方の混合部
分が多く経済的に不利であるが、本発明による添加培養
により、抗生物質ＢＮ−１８６−Ａを多量に蓄積せしめ
ることが可能となり、精製も容易となった。
される抗生物質ＢＮ−１８６−ＡとＢＮ−１８６−Ｈの
割合はおおよそ４：６であり、精製分離は両方の混合部
分が多く経済的に不利であるが、本発明による添加培養
により、抗生物質ＢＮ−１８６−Ａを多量に蓄積せしめ
ることが可能となり、精製も容易となった。
本発明に使用されるＢＮ−１８６株の通常の培養には、
炭素源としてグルコース、デキストリン、水あめ、デン
プンなど窒素源としてペプトン、肉エキス、粉末ブイヨ
ン、大豆粕、コーンステイープリカー、硫安、塩安など
が用いられ、培養方法としては振盪培養法、深部通気攪
拌培養法等の液体培地を使用する方法が適当である。
炭素源としてグルコース、デキストリン、水あめ、デン
プンなど窒素源としてペプトン、肉エキス、粉末ブイヨ
ン、大豆粕、コーンステイープリカー、硫安、塩安など
が用いられ、培養方法としては振盪培養法、深部通気攪
拌培養法等の液体培地を使用する方法が適当である。
培養温度は２０〜３５℃、培養時間は２〜４日が適当で
ある。
ある。
このような培養条件で培養した時に得られる抗生物質Ｂ
Ｎ−１８６−ＡとＢＮ−１８６−Ｂの割合はおおよそ４
：６であるが、培養基にあらかじ積ｒ？Ｉ）０．１〜１
．０％のプロピオン酸アミド、１ｓｏ−酪酸アミドを添
加して培養すると抗生物質ＢＮ−１８６−Ａを多量に蓄
積させることができる。
Ｎ−１８６−ＡとＢＮ−１８６−Ｂの割合はおおよそ４
：６であるが、培養基にあらかじ積ｒ？Ｉ）０．１〜１
．０％のプロピオン酸アミド、１ｓｏ−酪酸アミドを添
加して培養すると抗生物質ＢＮ−１８６−Ａを多量に蓄
積させることができる。
培養物からの抗生物質ＢＮ−１８６−Ａｏ抽出、精製は
その化学的性状にしたがって、陽イオン交換樹脂、ゲル
沢過剤、シリカゲル等の吸着剤を適宜組合せ行うことが
できる。
その化学的性状にしたがって、陽イオン交換樹脂、ゲル
沢過剤、シリカゲル等の吸着剤を適宜組合せ行うことが
できる。
ここにＢＮ−１８６株（虹研菌寄第３４８８号）を用い
て３０１ジヤーフアメンターを用いて２８℃、１４０時
間培養した場合における添加物の種類の差異によるＢＮ
−１８６−Ａ及びＢ物質の収得量を示すと次表のとおり
である。
て３０１ジヤーフアメンターを用いて２８℃、１４０時
間培養した場合における添加物の種類の差異によるＢＮ
−１８６−Ａ及びＢ物質の収得量を示すと次表のとおり
である。
（添加量０．５％）
上記の表から、本発明によりプロピオン酸アミド又はイ
ソブチルアミドを培地に添加した場合には無添加に比べ
てＢＮ−１８６−Ａ物質の収得量が著しく増大すること
が判る。
ソブチルアミドを培地に添加した場合には無添加に比べ
てＢＮ−１８６−Ａ物質の収得量が著しく増大すること
が判る。
本発明に使用されるシュードモナス属のＢＮ−１８６株
は本発明者らによって広島市北部の土壌から新たに分離
され工業技術院微生物工業技術研究所に受理番号３４８
８号として寄託されているシュードモナス属ＢＮ−１８
６株の菌学的性質は以下に示す通りである。
は本発明者らによって広島市北部の土壌から新たに分離
され工業技術院微生物工業技術研究所に受理番号３４８
８号として寄託されているシュードモナス属ＢＮ−１８
６株の菌学的性質は以下に示す通りである。
（ａ） 形態的性質
肉汁寒天上で培養した細胞は０．４〜０．６ Ｘ Ｏ，
８〜１．２ミクロンの桿菌であり極毛性のペン毛で運動
する。
８〜１．２ミクロンの桿菌であり極毛性のペン毛で運動
する。
胞子は作らず多形性も示さない。ダラム染色性、抗酸性
ともに陰性である。
ともに陰性である。
（ｂ） 培養的性質
（１）肉汁寒天培養：菌体は淡い茶褐色を呈して増殖し
集落はクリーム様で、顕著な粘稠性、遊走性は示さない
。
集落はクリーム様で、顕著な粘稠性、遊走性は示さない
。
（２）キングＢ培地：黄緑色の螢光性水溶性色素を生産
し菌体はわずかに赤味をおびた茶色でクリーム様に増殖
する。
し菌体はわずかに赤味をおびた茶色でクリーム様に増殖
する。
（３）肉汁培養：培地全体が濁り液面に薄い菌膜を形成
する。
する。
（４）肉汁ゼラチン穿刺培養二層状に液化される。
（５）リドマスミルク培養二弱アルカリ性を示しながら
急速に液化される。
急速に液化される。
（Ｃ） 生理的性質
（１）硝酸塩の還元：陰性
（２）脱窒反応：陰性
（３）ＭＲテスト：陰性
（４）ＶＰテスト：陰性
（５）インドールの生成：陰性
（６）硫化水素の生成：陰性（鉛糖紙法）（７）デンプ
ンの加水分解：陰性 （８）クエン酸の利用：陽性（シモンズ法）（９）無機
窒素源の利用ニアンモニウム塩を唯一の窒素源として利
用する。
ンの加水分解：陰性 （８）クエン酸の利用：陽性（シモンズ法）（９）無機
窒素源の利用ニアンモニウム塩を唯一の窒素源として利
用する。
（１０色素の生成：キングＢ培地で黄緑色の螢光色素を
生成する。
生成する。
Ｕυ栄養要求性：ナシ
＠ オキシダーゼ：陽性
ｕ３）生育温度二５〜３７℃で生育できるが４２℃では
生育できない。
生育できない。
Ｉ 嫌気条件下の増殖は認められない。
α５）ＯＦテスト：Ｏ型（ヒューレイフンン法）αｅ
炭素源の利用性 利用する炭素源ニゲルコース、グリセリン、キシロース
、マンニット、Ｄ−酒石酸、Ｌ−オルニチン 利用できない炭素源：マルトース、スターチ、フコース
、セロビオース、Ｄ−アラビノース、サルチル酸、セル
バシン酸、レフリン酸、シトラコン酸、メサコン酸、２
．３−ブタンジオール 以上の菌学的性質を有するＢＮ−１８６株をバーシャー
の微生物同定法便覧（第８版、１９７４）（Ｂｅｒｇｅ
ｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａ−
ｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ８ｔｈ ｅ
ｄｉｔｉｏｎ（１９７４））の記載と比較し、次の結論
を得た。
炭素源の利用性 利用する炭素源ニゲルコース、グリセリン、キシロース
、マンニット、Ｄ−酒石酸、Ｌ−オルニチン 利用できない炭素源：マルトース、スターチ、フコース
、セロビオース、Ｄ−アラビノース、サルチル酸、セル
バシン酸、レフリン酸、シトラコン酸、メサコン酸、２
．３−ブタンジオール 以上の菌学的性質を有するＢＮ−１８６株をバーシャー
の微生物同定法便覧（第８版、１９７４）（Ｂｅｒｇｅ
ｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａ−
ｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ８ｔｈ ｅ
ｄｉｔｉｏｎ（１９７４））の記載と比較し、次の結論
を得た。
１ グラム陰性桿菌で胞子を作らす極毛によって運動す
るという形態的性質を有し絶対好気性であることからこ
の菌株はシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
） に所属すると同定できる。
るという形態的性質を有し絶対好気性であることからこ
の菌株はシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
） に所属すると同定できる。
２ 螢光性色素の生産、炭素源の利用性、ゼラチン氷解
陽性、脱窒反応陰性、生育温度などの特徴からこの菌株
はシュードモナス属の中でもいわゆるフローレノセント
群（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｇｒｏｕｐ ）に所属でき
ると同定できる。
陽性、脱窒反応陰性、生育温度などの特徴からこの菌株
はシュードモナス属の中でもいわゆるフローレノセント
群（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｇｒｏｕｐ ）に所属でき
ると同定できる。
これらの知見から本発明者らはこの菌株をＰｓｅｕｄ。
−ｍｏｎａｓ ｓｐ ＢＮ−１８６と命名した。
次に本発明の実施例を記載するが、これは単なる例示で
あってなんら本発明を制限するものではない。
あってなんら本発明を制限するものではない。
実施例 １
グリセリン３％、大豆粕１．５％、ペプトン０．４％、
炭酸カルシウム０．４％、塩化アンモニウム０．４％、
プロピオン酸アミド０．５％、消泡用シリコン油０．０
３％を含む、培養基１５Ａを３０１容培養槽に仕込んで
１２０℃、１０分殺菌し冷却後あらかじめ同培地にて２
本の坂ロフラスコで２日間前培養したＢＮ−１８６株の
種菌を培養槽に植菌した。
炭酸カルシウム０．４％、塩化アンモニウム０．４％、
プロピオン酸アミド０．５％、消泡用シリコン油０．０
３％を含む、培養基１５Ａを３０１容培養槽に仕込んで
１２０℃、１０分殺菌し冷却後あらかじめ同培地にて２
本の坂ロフラスコで２日間前培養したＢＮ−１８６株の
種菌を培養槽に植菌した。
２８℃にて通気攪拌培養（通気量１５１／分、攪拌数２
０Ｏｒ−ｐ−ｍ−）Ｌ培養４日で３５００μｆ／ｄの培
養液１４１を得た。
０Ｏｒ−ｐ−ｍ−）Ｌ培養４日で３５００μｆ／ｄの培
養液１４１を得た。
この培養液から固形分をＰ別しＰ液をアンバーライトＩ
ＲＣ−５０（ＮＨ４型）（ローム・アンド・ハース社製
）ｌＯｌＯカラムに通し、有効成分を吸着させ、水洗し
たのち、０．２規定アンモニア２５１にて溶出する。
ＲＣ−５０（ＮＨ４型）（ローム・アンド・ハース社製
）ｌＯｌＯカラムに通し、有効成分を吸着させ、水洗し
たのち、０．２規定アンモニア２５１にて溶出する。
溶出される活性区分を集め、減圧濃縮し２５．６ｆの粗
粉末を得る。
粉末を得る。
この粗粉末を少量の水に溶解しアンバーライトＣＧ−５
０（ＮＨ，型）（ローム・アンド・・・−ス社製）７０
０ｒＩＬｌのカラムに通し有効成分を吸着させ、水洗し
たのち、０．０７５規定アンモニアにて溶出する。
０（ＮＨ，型）（ローム・アンド・・・−ス社製）７０
０ｒＩＬｌのカラムに通し有効成分を吸着させ、水洗し
たのち、０．０７５規定アンモニアにて溶出する。
溶出液を１５ｔずつフラクションコレクターで分画し、
ｎ−ブタノール−エタノール−クロロホルム−アンモニ
ア（４：５：２：８）の展開溶媒で薄層クロマトグラフ
ィーを行い、ニンヒドリン反応の発色で観察し、ＢＮ−
１８６−Ａ物質の存在する２０１〜５５０画分を集め、
濃縮乾固し１６、ＯＳ’のＢＮ−１８６−Ａ物質を得、
又ＢＮ−１８６−Ｂ物質の存在する５５１〜７６０画分
を集め、濃縮乾固し７．６ ｆｔのＢＮ−１８６−Ｂ物
質を得た。
ｎ−ブタノール−エタノール−クロロホルム−アンモニ
ア（４：５：２：８）の展開溶媒で薄層クロマトグラフ
ィーを行い、ニンヒドリン反応の発色で観察し、ＢＮ−
１８６−Ａ物質の存在する２０１〜５５０画分を集め、
濃縮乾固し１６、ＯＳ’のＢＮ−１８６−Ａ物質を得、
又ＢＮ−１８６−Ｂ物質の存在する５５１〜７６０画分
を集め、濃縮乾固し７．６ ｆｔのＢＮ−１８６−Ｂ物
質を得た。
実施例 ２
グリセリン３％、大豆粕１．５％、ペプトン０．４％、
炭酸カルシウム０．４％、塩化アンモニウム０．４％、
イソ酪酸アミド０．５％、消泡用シリコン油０．０３％
を含む培養基１５１を３０１培養槽に仕込んで、１２０
℃、１０分殺菌し冷却後、あらかじめ同培地にて２本の
坂ロフラスコで２日間前培養したＢＮ−１８６株の種菌
を培養槽に植菌した。
炭酸カルシウム０．４％、塩化アンモニウム０．４％、
イソ酪酸アミド０．５％、消泡用シリコン油０．０３％
を含む培養基１５１を３０１培養槽に仕込んで、１２０
℃、１０分殺菌し冷却後、あらかじめ同培地にて２本の
坂ロフラスコで２日間前培養したＢＮ−１８６株の種菌
を培養槽に植菌した。
２８°Ｃにて通気攪拌（通気量１５１／分、攪拌数２０
０ｒ−ｐ−ｍ−） し、培養４日で３０００μ？／１ｒ
Ｌｌの培養液１５１を得た。
０ｒ−ｐ−ｍ−） し、培養４日で３０００μ？／１ｒ
Ｌｌの培養液１５１を得た。
この培養液から固形分を沢別しｆ液をアンバーライ）Ｉ
ＲＣ−５０（ＮＨ４型）（ローム・アンド・）・−ス社
製）１０１のカラムに通し吸着、水洗したのち０．２規
定アンモニア２５１にて溶出する。
ＲＣ−５０（ＮＨ４型）（ローム・アンド・）・−ス社
製）１０１のカラムに通し吸着、水洗したのち０．２規
定アンモニア２５１にて溶出する。
溶出される活性区分を集め、減圧濃縮し１７．６ ｆの
粗粉末を得る。
粗粉末を得る。
この粗粉末を少量の水に溶解しアンバーライトＣＧ−５
０（ＮＨ４型）（ローム°アンド°ハース社製）８８０
ｒｆＬｌのカラムに通し有効成分を吸着させ、水洗した
のち０．０７５規定アンモニアにて溶出する。
０（ＮＨ４型）（ローム°アンド°ハース社製）８８０
ｒｆＬｌのカラムに通し有効成分を吸着させ、水洗した
のち０．０７５規定アンモニアにて溶出する。
溶出液を１５１ずつフラクションコレクターで分画し、
実施例１と同様な方法で薄層クロマトグラフィーを行い
、ニンヒドリン反応の発色で観察し、ＢＮ−１８６−Ａ
物質の存在する４０１〜７００両分を集め濃縮乾固し、
１５．１’のＢＮ−１８６−Ａ物質を得、又ＢＮ−１８
６−Ｂ物質の存在する７０１〜８５０両分を集め濃縮乾
固し１．１？のＢＮ−１８６−Ｂ物質を得た。
実施例１と同様な方法で薄層クロマトグラフィーを行い
、ニンヒドリン反応の発色で観察し、ＢＮ−１８６−Ａ
物質の存在する４０１〜７００両分を集め濃縮乾固し、
１５．１’のＢＮ−１８６−Ａ物質を得、又ＢＮ−１８
６−Ｂ物質の存在する７０１〜８５０両分を集め濃縮乾
固し１．１？のＢＮ−１８６−Ｂ物質を得た。
Claims (1)
- １ シュードモナス属に属するＢＮ−１８６株を培養す
ることによってＢＮ−１８６−ＡおよびＢＮ−１８６−
Ｂ物質を得るに際し、プロピオン酸アミドまたはイソ酪
酸アミドな添加培養して、培地中にＢＮ−１８６−Ａ物
質を多量に蓄積せしめ、これを分離取得することを特徴
とするＢＮ−１８６−Ａ物質の高収率製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15493476A JPS5918038B2 (ja) | 1976-12-24 | 1976-12-24 | 抗生物質ｂｎ−１８６−ａ物質の添加培養による高収率製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15493476A JPS5918038B2 (ja) | 1976-12-24 | 1976-12-24 | 抗生物質ｂｎ−１８６−ａ物質の添加培養による高収率製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5381690A JPS5381690A (en) | 1978-07-19 |
| JPS5918038B2 true JPS5918038B2 (ja) | 1984-04-25 |
Family
ID=15595124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15493476A Expired JPS5918038B2 (ja) | 1976-12-24 | 1976-12-24 | 抗生物質ｂｎ−１８６−ａ物質の添加培養による高収率製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5918038B2 (ja) |
-
1976
- 1976-12-24 JP JP15493476A patent/JPS5918038B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5381690A (en) | 1978-07-19 |
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