JPS6221509B2

JPS6221509B2 -

Info

Publication number: JPS6221509B2
Application number: JP15320784A
Authority: JP
Inventors: Naoya Kubo; Takafumi Harumi; Katsuo Wakao; Tsunero Oda
Original assignee: NITSUKEN KAGAKU KK; NORINSUISANSHO SHOKUHIN SOGO KENKYUSHOCHO
Current assignee: NITSUKEN KAGAKU KK; NORINSUISANSHO SHOKUHIN SOGO KENKYUSHOCHO
Priority date: 1984-07-25
Filing date: 1984-07-25
Publication date: 1987-05-13
Also published as: JPS6131082A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、新規微生物に関する。更に詳細に
は、トルロプシス（Torulopsis）属に属する新規
微生物に関する。

発酵によるポリオール類の製造方法、就中トル
ロプシス属に属する微生物を使用してグリセロー
ル又はマンニトールを製造する方法は公知であ
る。例えば特公昭47−8589号公報にはトルロプシ
ス・マンニトフアシエンス（Ｔ．
mannitofaciens）を使用する方法が述べられてお
り、また同47−20393号公報にはトルロプシス・
アノマーラ（Ｔ．anomala）を使用する方法が述
べられている。更に、G.H.Hajny他；Applied
Miclobiology，８：５（1960）にはトルロプシ
ス・マグノルア（Ｔ．magnoliae）を使用する方
法が述べられている。しかしながら、これら公知
の方法で用いられる微生物は、生育上低い基質濃
度が要であつたり、あるいはポリオール類への変
換率が必ずしも十分でないことから、未だ工業的
に利用されていない。

本発明者らは、かねてより生体触媒としての微
生物の有用性に注目し、種々の微生物についてそ
のポリオールへの変換能の検索を行なつてきた
が、偶々、ある種の発酵食品から分離された微生
物が著しく高いポリオール類への変換能を有する
ことを見出し、本発明に到達したものである。

本発明は、トルロプシス属に属し、栄養細胞が
２〜６×２〜６μの球形で、多極出芽により増殖
し、子のう胞子、菌糸、偽菌糸が見られず、ガラ
クトース発酵性ならびにガラクトース、Ｄ−アラ
ビノース、Ｌ−アラビノース資化性があり、YM
寒天培地上に２週間培養するとうすい橙黄色のコ
ロニーとなり、液体培地では皮膜を形成し、かつ
発酵性糖類をグリセロール、マンニトールなどの
ポリオール類に変換する能力を有する新規微生物
に関する。

本発明に係るトルロプシス属に属する新規微生
物としては、本発明者らが分離したトルロプシス
sp.SN−18菌株があり、本菌は次のような菌学的
性状を有する。

１培地上の生育状況１顕微鏡的所見栄養細胞の大きさ（＊１）
２〜６×２〜６μ 栄養細胞の形状（＊１）円形栄養細胞の増殖法（＊１）多極出芽菌糸体（＊２）形成せず（註）＊１ YM寒天培地に27℃、５日間培養＊２ポテトグルコース寒天によるスラ
イド培養２寒天斜面（＊３）生育良好光沢白色（光沢無し）色素
２週間以上培養すると橙黄色のコロニー（註）＊３ YM寒天培地３液体培養（＊４）表面生育皮膜形成濁度透明沈査大（註）＊４ YM液体培地２子のう胞子の形成ポテトグルコース寒天培地形成せずコーンミール寒天培地形成せず YM寒天培地形成せずニンジンエキス寒天培地形成せず V₈寒天培地形成せず３生理的性質酸素要求性好気的生育温度 20〜39℃ 最適生育温度 33℃ 生育PH 2.5〜10.0 最適生育PH 7.0〜9.0 KNO₃資化性（＊５）有り（NH₄）₂SO₄資化性（＊５）有り脂肪の分解（＊６）無し尿素の分解無しゼラチンの液化有りスクロースの生育可能最高濃度（＊７）約70％生育最適濃度（＊７）約30％塩化ナトリウムの生育可能最高濃度（＊８） 0.5％生育最適濃度（＊８） 0.1％カロチノイドの生成無し有機酸の生成有りデンプン様物質の生成無しビタミンの要求性（＊５）無し（註）＊５ Wickerhamの合成培地を用いた
J.Lodderらの方法により判定＊６牛脂を使用＊７液体培地＊８ 20％（ｗ／ｗ）グルコース培地中
での生育、液体４糖の発酵性（＊５）グルコース＋ラクトース − ガラクトース＋メリビオース − スクロース＋ラフイノース＋マルトース − ５糖の資化性（＊５）グルコース＋Ｄ−キシロース − ガラクトース＋エリスリトール − Ｄ−アラビノース＋Ｌ−アラビノース＋Ｄ−ソルボース − Ｌ−ソルボース＋Ｄ−リボース − スクロース＋Ｌ−ラムノース − マルトース＋エタノール − セロビオース − グリセロール − トレハロース − アドニトール − ラクトース − ズルシトール − メリビオース＋Ｄ−マンニトール − ラフイノース＋Ｄ−ソルビトール − メレジトース − α−メチル−Ｄ−グルコシド − イヌリン＋サリシン − イノシトール − 可溶性デンプン − DL−乳酸 − コハク酸 − クエン酸 − 上記の如き菌学的性質を有する本菌株の分類学
上の位置をTHE YEASTS（J.Lodder et al；
1970年版）、YEASTS（J.A.Barnett et al；1083
年版）及びＡ GUIDE TO IDENTIFYING
AND CLASSIFYING YEASTS（J.A.Barnett
et al；1979年版）を参照して検討した結果、本
菌株はトルロプシス属に属するが、菌種について
厳密に既知株と同定すべき記載が見られないので
新菌種であると判定し、これをトルロプシスsp.
SN−18菌株と命名した。

即ち、本発明の微生物はある種の発酵食品から
常法に従つて純粋分離されたもので、トルロプシ
ス属に属し、栄養細胞が２〜６×２〜６μ球形
で、多極出芽により増殖し、子のう胞子、菌糸、
偽菌糸が見られず、ガラクトース発酵性並びにガ
ラクトース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノー
ス資化性があり、YM寒天培地上に２週間培養す
るとうすい橙黄色のコロニーとなり、液体培地で
は皮膜を形成し、かつ発酵性糖類をグリセロー
ル、マンニトールなどのポリオール類に変換する
能力を有する点で他の微生物と区別されるもので
ある。

本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所に
「微生物受託番号微工研菌寄第7593号」とし
て寄託されている。

次に、本発明の新規微生物を発酵培地に接種
し、好気的に培養してグリセロール、マンニトー
ルなどのポリオール類を製造する方法について説
明する。

炭素源としては上記のグルコース、フルクトー
ス、マンノースなどが用いられる。これらの炭素
源は培地中に10〜40％（ｗ／ｗ）、特に好ましく
は20〜30％（ｗ／ｗ）となるように添加使用する
ことが出来る。窒素源としては酵母により利用可
能な窒素化合物、例えば脱脂大豆粉、酵母エキ
ス、ペプトン、コーンスチープリカー、カゼイン
分解物などが使用されるが、酵母エキス、コーン
スチープリカーなどが特に好ましい。

無機塩類としては例えばリン酸、マグネシウ
ム、カルシウム、カリウム、鉄などの塩類が使用
される。また、必要に応じて酵母の生育に必要な
各種の有機物、無機物などを培地に添加すること
ができる。

本発明の方法における培養は、通常液体培地を
用いて好気的条件下に行なわれるが、工業的には
通気撹はん培養を行なうのが有利である。培養温
度は微生物が生育しうる範囲内、即ち26〜36℃で
行なわれるが、特に好ましくは30〜35℃の範囲で
ある。培地のPHは6.0〜9.3、特に8.5〜9.0の範囲
が好ましく、また、培養期間は培養条件などによ
つて一概には言えないが、通常２〜15日間程度で
あつて、培地の栄養源が最大限に利用され、かつ
培養液中のポリオール生成量が最高に達した時点
で培養を終了すればよい。

尚、培養液中のポリオール量はガスクロマトグ
ラフイー、高速液体クロマトグラフイーなどの周
知の方法を用いて速やかに測定することが出来
る。

かくして、培養液中に蓄積されたポリオール類
は次いで常法に従つて培養液から分離される。即
ち、かかる場合に当該分野において通常使用され
ている周知の手段、例えばろ過、遠心分離、イオ
ン交換又は吸着クロマトグラフイー、溶媒抽出、
蒸留、結晶化などの操作が必要に応じて適宜組み
合わせて用いられる。一例を挙げれば、培養液か
らろ過、遠心分離などによつて菌体を除去し、次
いでこの液を活性炭で処理して着色物質などを除
き、更にイオン交換樹脂により脱イオンした後、
液を濃縮してシロツプとする。次に、このシロツ
プからマンニトールを結晶化して分離し、更にマ
ンニトールを分離した後の母液は、これを更に減
圧（真空）蒸留により精製してグリセロールを得
る。

次に実施例を示し、本発明の態様を更に具体的
に説明する。

実施例１グルコース20％（ｗ／ｗ）、酵母エキス（Difco
製）0.5％を含む培地80mlを綿栓した500mlの三角
フラスコに入れ、120℃、15分間滅菌した。放冷
後、2N−NaOHで培地のPHを無菌的に9.0に調整
した。このフラスコにトルロプシスsp.SN−18菌
株「微工研菌寄第7593号」を接種し、30℃、
180rpmで８日間振とう培養を行なつた。その結
果、培養液中にグルコースは認められず、グリセ
ロール6.9ｇ（対糖収率43.1％）及びＤ−マンニ
トール3.4ｇ（対糖収率21.2％）が生成した。遠
心分離によつて培養液より菌体を除去し、活性炭
処理を行なつた後、イオン交換樹脂充填カラム
（IRA−410：IR−120B＝２：１）を通した。

この処理液を減圧下に濃縮し、シロツプ状とし
た。これに熱エタノールを加えて抽出し、抽出液
を適度に濃縮したのち５℃に保存して結晶化を行
なつた。得られた結晶を同様にエタノールより再
結晶し、白色の甘味を有する結晶2.1ｇを得た。

この結晶は融点165〜166℃を示した。また飽和
ホウ砂液による旋光度、TMS誘導体を用いたガ
スクロマトグラフイー、高速液体クロマトグラフ
イーによる同定から標品のＤ−マンニトールに一
致することが確認された。

また、エタノール抽出残査に含まれるグリセロ
ールは上記クロマトグラフイーの保持時間から同
定された。

実施例２グルコース20％（ｗ／ｗ）、酵母エキス1.0％、
KH₂PO₄0.02％からなる培地50mlを300mlの三角フ
ラスコに入れ120℃、15分間滅菌した。放冷後、
培地のPHを無菌的に9.0に調整した。これにトル
ロプシスsp.SN−18菌株「微工研菌寄第7593
号」を接種し、30℃、220rpmで11日間振とう培
養を行なつた。

その結果、培養液中にグリセロール0.6ｇ、Ｄ
−マンニトール4.8ｇが生成した。

実施例３グルコース20％（ｗ／ｗ）、酵母エキス0.5％、
酒石酸カリウム0.1％からなる培地50mlを500mlの
三角フラスコに入れ滅菌した。放冷後、培地のPH
を無菌的に9.0に調整した。この培地にトルロプ
シスsp.SN−18菌株「微工研菌寄第7593号」を
接種し、30℃、220rpmで14日間振とう培養を行
なつた。その結果、この培養液中にグリセロー
ル4.5ｇ及びＤ−マンニトール2.2ｇが生成した。

Claims

【特許請求の範囲】１トルロプシス属に属し、栄養細胞が２〜６×
２〜６μの球形で、多極出芽により増殖し、子の
う胞子、菌糸、偽菌糸が見られず、ガラクトース
発酵性ならびにガラクトース、Ｄ−アラビノー
ス、Ｌ−アラビノース資化性があり、YM寒天培
地上に２週間培養するとうすい橙黄色のコロニー
となり、液体培地では皮膜を形成し、かつ発酵性
糖類をグリセロール、マンニトールなどのポリオ
ール類に変換する能力を有する新規微生物。２トルロプシス属に属する微生物がトルロプシ
スsp.SN−18菌株（微工研菌寄第7593号）である
特許請求の範囲第１項記載の微生物。