JPS59106295A - 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法Info
- Publication number
- JPS59106295A JPS59106295A JP21569682A JP21569682A JPS59106295A JP S59106295 A JPS59106295 A JP S59106295A JP 21569682 A JP21569682 A JP 21569682A JP 21569682 A JP21569682 A JP 21569682A JP S59106295 A JPS59106295 A JP S59106295A
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- isoleucine
- strain
- arginine
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明紘発酵法によるＬ−イソロイシンの製造法に関す
る。
る。
さらに詳しくは、コリネバクテリウム属に属し、アルギ
ニンを生育に要求する微生物を用いる発酵法によるＬ−
イソロイシンの製造法に関する。その目的とするところ
祉、経済的に有利なＬ−イソロイシンの工業的生産方法
を提供するととＫある。
ニンを生育に要求する微生物を用いる発酵法によるＬ−
イソロイシンの製造法に関する。その目的とするところ
祉、経済的に有利なＬ−イソロイシンの工業的生産方法
を提供するととＫある。
従来、発酵法によるＬ−イソロイシンの製造法の主たる
ものは、ミクロコツカス・グルタミクスに属するスレオ
ニン、メチオニン、ホそセリンまたはロイシン要求株を
用いる方法（％公昭３８−７０９１）、ブレビバクテリ
ウム・フラブムのα−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸耐
性でかつプリンまたはリジン要求株を用いる方法（特開
昭４９−８５２８８ ）、α−アミノ−β−ヒドロキシ
吉草酸耐性で０−メチルスレオニン耐性の変異株を用い
る方法（特開昭４９−９３５８ｆｌ）、ブレビバクテリ
ウム属またはコリネバクテリウム属のα−アミノ−β−
ヒドロキシ吉草酸耐性で同時にエチオニン、２−チアゾ
ールアラニンおよび５−（２−アミノエチル）−Ｌ−シ
スティンのうちの少なくと本１つに耐性の変異株を用い
る方法（特開昭５Ｏ−１０１５８２）および、ブレビバ
クテリウム属に属し、イソロイシンアナ四グに耐性でか
つメチオニンまたはリジン要求性の変異株を用いる方法
（特開昭５ｌ−７３１８８）、コリネバクテリウム属ま
たはプレビバクテリウム属のビタミンＰ耐性の変異株を
用いる方法（特開昭５７−２６８７）が知られている。
ものは、ミクロコツカス・グルタミクスに属するスレオ
ニン、メチオニン、ホそセリンまたはロイシン要求株を
用いる方法（％公昭３８−７０９１）、ブレビバクテリ
ウム・フラブムのα−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸耐
性でかつプリンまたはリジン要求株を用いる方法（特開
昭４９−８５２８８ ）、α−アミノ−β−ヒドロキシ
吉草酸耐性で０−メチルスレオニン耐性の変異株を用い
る方法（特開昭４９−９３５８ｆｌ）、ブレビバクテリ
ウム属またはコリネバクテリウム属のα−アミノ−β−
ヒドロキシ吉草酸耐性で同時にエチオニン、２−チアゾ
ールアラニンおよび５−（２−アミノエチル）−Ｌ−シ
スティンのうちの少なくと本１つに耐性の変異株を用い
る方法（特開昭５Ｏ−１０１５８２）および、ブレビバ
クテリウム属に属し、イソロイシンアナ四グに耐性でか
つメチオニンまたはリジン要求性の変異株を用いる方法
（特開昭５ｌ−７３１８８）、コリネバクテリウム属ま
たはプレビバクテリウム属のビタミンＰ耐性の変異株を
用いる方法（特開昭５７−２６８７）が知られている。
しかしながら、これらの方法は、緑酒的なＬ−イソロイ
シンの工業的生産にとってまだ満足すべき生産性を有し
ていない。
シンの工業的生産にとってまだ満足すべき生産性を有し
ていない。
本発明者らは、すぐれたＬ−インロイシン生産菌を誘導
する研究の過程で、コリネバクテリウム属に属するアル
ギニン要求性変異株がＬ−イソｐイシンを蓄積する能力
を有することを見出し本発明を完成した。
する研究の過程で、コリネバクテリウム属に属するアル
ギニン要求性変異株がＬ−イソｐイシンを蓄積する能力
を有することを見出し本発明を完成した。
従来、アルギニン要求性のＬ−イソロイシン生産菌につ
いては全く報告がなく、本発明はかかる新規な知見に基
づいている。
いては全く報告がなく、本発明はかかる新規な知見に基
づいている。
以下本発明の詳細な説明する。
本発明に使用する微生物の代表例としては、コリネバク
テリウム・グルタミクムＭ２９５−９およびコリネバク
テリウム・グルタミクム５Ｓ−３９−２１をあげること
ができる。Ｍ２Ｏ３−９は、コリネバクテリウム・グル
タミクムの野性株ＦＩＲＭ−Ｐ３２９５から紫外線照射
（を用い常法によって誘導されたアルギニン要求株であ
シ、また８Ｂ−３９−２１は、上記のＭ２Ｏ３−９から
、さらにＮ−メチル−Ｎｌ−ニド四−Ｎ−二ト四ソグア
ニジン処理によって常法によシ誘導されたアルギニン要
求性でかつ５−（２−アミノエチル）−Ｌ−システィン
耐性の性質を有する変異株である。
テリウム・グルタミクムＭ２９５−９およびコリネバク
テリウム・グルタミクム５Ｓ−３９−２１をあげること
ができる。Ｍ２Ｏ３−９は、コリネバクテリウム・グル
タミクムの野性株ＦＩＲＭ−Ｐ３２９５から紫外線照射
（を用い常法によって誘導されたアルギニン要求株であ
シ、また８Ｂ−３９−２１は、上記のＭ２Ｏ３−９から
、さらにＮ−メチル−Ｎｌ−ニド四−Ｎ−二ト四ソグア
ニジン処理によって常法によシ誘導されたアルギニン要
求性でかつ５−（２−アミノエチル）−Ｌ−システィン
耐性の性質を有する変異株である。
以下にコリネバクテリウム・グルタミクムＭ２９５−９
およびコリネバクテリウム・グルタミクム８８−３９−
２１の具体的誘導方法を示すＯ コリネバクテリウム・グルタミクムＦＥＢＭＰ−３２９
５を常法によシ紫外線照射処理（９９，９９Ｎ死滅）し
た後、常法によりアルギニン要求性株を採取した。この
アルギニン要求性株の中からＬ−インロイシン生産能の
高い菌株Ｍ２９５−９を選んだ。
およびコリネバクテリウム・グルタミクム８８−３９−
２１の具体的誘導方法を示すＯ コリネバクテリウム・グルタミクムＦＥＢＭＰ−３２９
５を常法によシ紫外線照射処理（９９，９９Ｎ死滅）し
た後、常法によりアルギニン要求性株を採取した。この
アルギニン要求性株の中からＬ−インロイシン生産能の
高い菌株Ｍ２９５−９を選んだ。
上記で得られたコリネバクテリウム・グルタミクムＭ２
９５−９を常法によりＮＴＧ処理（ｐＨ５のトリスマレ
イン酸溶液中１００μＶ／Ｘｔ、３０℃で３０分間）し
た後、遠心洗浄し、５−（２−アミノエチル）−Ｌ−シ
スティンｉ、ｏｏ。
９５−９を常法によりＮＴＧ処理（ｐＨ５のトリスマレ
イン酸溶液中１００μＶ／Ｘｔ、３０℃で３０分間）し
た後、遠心洗浄し、５−（２−アミノエチル）−Ｌ−シ
スティンｉ、ｏｏ。
μｆ／＊ｔｓスレオニン１，０００μり／−を含む最少
寒天培地〔グルコース０゜５ Ｎ、 （ＮＨ４）茸８０
４０．１５Ｘ、ＫＨｌＰＯａ ０１１５％、Ｋ！ Ｉ
Ｆ（ＰＯ４０，０５Ｘ、 ＮｔｈＣｌｏ、 ０１ Ｎ、
ＭｙＢＯ＜ ・’ＩＨｘＯＯ，０５Ｘ、 ＣａＣｔ！
６２Ｈｚ０１μｆ／ｄ、ＭｎＣ１鵞・４Ｈ２Ｏ７ｐｆ／
ｍｌ、 Ｆｅ８０ａ ・７Ｈ震０ １０μｆ、メｄ、チ
アミン塩酸塩０．１μｆ／ｍｅ、ビオチン０．０３μｆ
／ｄ、アルギニン塩酸塩０．０１％、寒天１．５１
ｐＩ（７，２）Ｋプｖ−）ａｌ＋１０？個の割で撒き、
３０℃５日間培養した。生育した５０のコ四ニーの中か
らＬ−インロイシン生産能の高い菌株８Ｂ−３９−２１
を選んだ。
寒天培地〔グルコース０゜５ Ｎ、 （ＮＨ４）茸８０
４０．１５Ｘ、ＫＨｌＰＯａ ０１１５％、Ｋ！ Ｉ
Ｆ（ＰＯ４０，０５Ｘ、 ＮｔｈＣｌｏ、 ０１ Ｎ、
ＭｙＢＯ＜ ・’ＩＨｘＯＯ，０５Ｘ、 ＣａＣｔ！
６２Ｈｚ０１μｆ／ｄ、ＭｎＣ１鵞・４Ｈ２Ｏ７ｐｆ／
ｍｌ、 Ｆｅ８０ａ ・７Ｈ震０ １０μｆ、メｄ、チ
アミン塩酸塩０．１μｆ／ｍｅ、ビオチン０．０３μｆ
／ｄ、アルギニン塩酸塩０．０１％、寒天１．５１
ｐＩ（７，２）Ｋプｖ−）ａｌ＋１０？個の割で撒き、
３０℃５日間培養した。生育した５０のコ四ニーの中か
らＬ−インロイシン生産能の高い菌株８Ｂ−３９−２１
を選んだ。
これらの微生物を用いてＬ−イソロイシンを生産せしめ
るにはとくに困難はなく、炭素源、窒素源、無機塩類、
生育簀子等を有する通常の発酵培地を用いて、常法によ
って行うことができる。
るにはとくに困難はなく、炭素源、窒素源、無機塩類、
生育簀子等を有する通常の発酵培地を用いて、常法によ
って行うことができる。
使用する炭素源としては、グルコース、シェークｐ−ス
、廃糖蜜、デンプン加水分解物などの（５） 炭水化物、酢酸、プロピオン酸、乳酸、ギ酸、ピルビン
酸、７マール酸などの有機酸類、メタノール、エタノー
ル、フ四パノール等のアルコール類を単独あるい祉組合
せて使用することができる。
、廃糖蜜、デンプン加水分解物などの（５） 炭水化物、酢酸、プロピオン酸、乳酸、ギ酸、ピルビン
酸、７マール酸などの有機酸類、メタノール、エタノー
ル、フ四パノール等のアルコール類を単独あるい祉組合
せて使用することができる。
窮素源としては、硫安、硝安、塩安、リン安、尿素、ア
ンモニア、その他を使用できる。また、使用菌の要求す
るアルギニンその他の物質は、純標品として、もしくは
それらを含有する天然栄養物の形で添加することができ
る。
ンモニア、その他を使用できる。また、使用菌の要求す
るアルギニンその他の物質は、純標品として、もしくは
それらを含有する天然栄養物の形で添加することができ
る。
Ｌ−イソロイシンの発酵生産のための発酵条件としては
、通気培養がよく、発酵温度は２４〜３７℃、発酵日数
は２〜７日間である。発酵液のｐＨは５〜９の範囲内に
継続されるが、ｐ）！調整には、無機あるいは有機の酸
あるいはアルカリ、さらには尿素、災酸カルシウム、ア
ンモニアガス等を使用することができる。
、通気培養がよく、発酵温度は２４〜３７℃、発酵日数
は２〜７日間である。発酵液のｐＨは５〜９の範囲内に
継続されるが、ｐ）！調整には、無機あるいは有機の酸
あるいはアルカリ、さらには尿素、災酸カルシウム、ア
ンモニアガス等を使用することができる。
発酵液からのＬ−イソロイシンの単離は通常イオン交換
樹脂法、その他公知の方法を組合わせて行われる。
樹脂法、その他公知の方法を組合わせて行われる。
以下に実施例を示す。
（６）
実施例１
コリネバクテリウム・グルタミクムＭ２９５−９（アル
ギニン要求株） （ＦＥＢＭ Ｐ−６８３２）および５
ｓ−ａｅ−２ｘ （アルギニン要求性、５−（２−アミ
ノエチル）−Ｌ−システィン耐性株）（ＦＥＢＭ Ｐ−
６８３０）を、各々２０−の種培地（クルコース５％、
酵素エキス１に、ペフトｙＩＮ、尿素０．３％、ＮａＣ
ｔＯ，２５％、コーン・ステイープ・リカー０．５％、
ビオチン５０μｆ／ｌ。
ギニン要求株） （ＦＥＢＭ Ｐ−６８３２）および５
ｓ−ａｅ−２ｘ （アルギニン要求性、５−（２−アミ
ノエチル）−Ｌ−システィン耐性株）（ＦＥＢＭ Ｐ−
６８３０）を、各々２０−の種培地（クルコース５％、
酵素エキス１に、ペフトｙＩＮ、尿素０．３％、ＮａＣ
ｔＯ，２５％、コーン・ステイープ・リカー０．５％、
ビオチン５０μｆ／ｌ。
ｐＨ７，２）を含む３００ｄ容三角フラスコに接種し、
２８℃で、２４時間、２１０ｒｐｍの回転数のロータリ
ーシェーカー上で振盪培養した。
２８℃で、２４時間、２１０ｒｐｍの回転数のロータリ
ーシェーカー上で振盪培養した。
この種培養液２−を、２０ｍ１の発酵培地を含む３０〇
−容三角フラスコに接種して、７２時間、上記の種培養
と同様の方法で培養した。
−容三角フラスコに接種して、７２時間、上記の種培養
と同様の方法で培養した。
培養終了液中のＬ−イソロイシンの蓄積量拡、Ｍ２９５
１の場合０．５ ｑｉ ／ ｄであ郵、５ｓ−３９−２
１の場合は８．３町／−であった。対照とした親株ＦＥ
ＢＭ Ｐ−３２９５（野生株）のＬ−イソロイシン蓄積
量は０．１ ｑ ／ ｍｌ以下であった。
１の場合０．５ ｑｉ ／ ｄであ郵、５ｓ−３９−２
１の場合は８．３町／−であった。対照とした親株ＦＥ
ＢＭ Ｐ−３２９５（野生株）のＬ−イソロイシン蓄積
量は０．１ ｑ ／ ｍｌ以下であった。
用いた発酵培地の組成は次のとおり。
廃１ｆＸＷ、 （ｆルコース換Ｘ＞Ｓ％、コーン・ステ
イープ・リカー０．５％、塩安２％、尿素０、２ Ｘ、
ＫＨ２ＰＯ４０，２％、Ｍ ｙ Ｓ Ｏａ・７Ｈ！０
０．０５Ｘ、 ＦｅＦｅ５０ｎ７ＨＯ，００１％、Ｍｎ
Ｃ／４−４Ｈ＊ＯＯ，００１Ｘ、 ＣｕＳＯ４４５Ｈｚ
ＯＯ，００１Ｘ−ＣａＣｔｔ ・２Ｈ＊ ＯＯ，ＯＯ１
％、ＺｒｘＢＯａ・７ＨｔＯ’１１Ｌｑｌ／ｌ、 Ｎ
ｉＣ／４ １”Ｐ／ｄ、 （ＮＨ４）ｓＭＯｔｏ＊
ａ ｅ４Ｈｚ０ １１１！／１． Ｃ’ｏＣｔ２−６
Ｈ１０１”ｊ’／ｌ。
イープ・リカー０．５％、塩安２％、尿素０、２ Ｘ、
ＫＨ２ＰＯ４０，２％、Ｍ ｙ Ｓ Ｏａ・７Ｈ！０
０．０５Ｘ、 ＦｅＦｅ５０ｎ７ＨＯ，００１％、Ｍｎ
Ｃ／４−４Ｈ＊ＯＯ，００１Ｘ、 ＣｕＳＯ４４５Ｈｚ
ＯＯ，００１Ｘ−ＣａＣｔｔ ・２Ｈ＊ ＯＯ，ＯＯ１
％、ＺｒｘＢＯａ・７ＨｔＯ’１１Ｌｑｌ／ｌ、 Ｎ
ｉＣ／４ １”Ｐ／ｄ、 （ＮＨ４）ｓＭＯｔｏ＊
ａ ｅ４Ｈｚ０ １１１！／１． Ｃ’ｏＣｔ２−６
Ｈ１０１”ｊ’／ｌ。
パントテン酸カルシウム１０ｑ／ｌ、ビオチンｓ Ｏｐ
ｆ／ｌ、 フルギニｙ塩酸塩５００ μｆ／ｄｃ ｐ）
Ｉ７．４）。
ｆ／ｌ、 フルギニｙ塩酸塩５００ μｆ／ｄｃ ｐ）
Ｉ７．４）。
Claims (1)
- コリネバクテリウム属に属し、生育にアルギニンを要求
しかつＬ−インロイシンを生成蓄積する能力を有する微
生物を、培地に培養して培養物中にＬ−イソロイシンを
蓄積せしめ、該培養物からＬ−イソロイシンを採取する
ことを特徴とするＬ−イソロイシンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21569682A JPS59106295A (ja) | 1982-12-09 | 1982-12-09 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21569682A JPS59106295A (ja) | 1982-12-09 | 1982-12-09 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59106295A true JPS59106295A (ja) | 1984-06-19 |
| JPH0160237B2 JPH0160237B2 (ja) | 1989-12-21 |
Family
ID=16676638
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21569682A Granted JPS59106295A (ja) | 1982-12-09 | 1982-12-09 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59106295A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0248238A2 (de) * | 1986-06-06 | 1987-12-09 | Degussa Aktiengesellschaft | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Isoleucin aus D,L-alpha-Hydroxybutyrat |
-
1982
- 1982-12-09 JP JP21569682A patent/JPS59106295A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0248238A2 (de) * | 1986-06-06 | 1987-12-09 | Degussa Aktiengesellschaft | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Isoleucin aus D,L-alpha-Hydroxybutyrat |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0160237B2 (ja) | 1989-12-21 |
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