JPS5910193B2 - アミラ−ゼ阻害物質ａｉ−ｂの製造法 - Google Patents
アミラ−ゼ阻害物質ａｉ−ｂの製造法Info
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- JPS5910193B2 JPS5910193B2 JP55074203A JP7420380A JPS5910193B2 JP S5910193 B2 JPS5910193 B2 JP S5910193B2 JP 55074203 A JP55074203 A JP 55074203A JP 7420380 A JP7420380 A JP 7420380A JP S5910193 B2 JPS5910193 B2 JP S5910193B2
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアミラーゼ阻害物質Ａｌ−Ｂの製造法に関する
ものである。
ものである。
アミラーゼ阻害物質は消化系器官や体内においてアミラ
ーゼ活性を阻害するために、高脂肪症、糖尿症などの治
療薬として、また虫歯の予防剤として有用であり、その
ためにすぐれたアミラーゼ阻害物質の開発が期待されて
いる。
ーゼ活性を阻害するために、高脂肪症、糖尿症などの治
療薬として、また虫歯の予防剤として有用であり、その
ためにすぐれたアミラーゼ阻害物質の開発が期待されて
いる。
また、急性膵炎などの臨床診断において用いられている
血清アミラーゼ活性の測定において、アミラーゼ阻害剤
を用いて唾液型アミラーゼと膵臓型アミラーゼを分別定
量できればその臨床的意義が一段と高まることが期待さ
れる。本発明者らはよりすぐれた性質を持つアミラーゼ
阻害物質を微生物に求め、多くの菌株を系統的に探索し
たところ、ストレプトマイセス属の一菌株が全く新規な
アミラーゼ阻害物質を産生することを知り、この物質を
Ａｌ−Ｂと名づけた。
血清アミラーゼ活性の測定において、アミラーゼ阻害剤
を用いて唾液型アミラーゼと膵臓型アミラーゼを分別定
量できればその臨床的意義が一段と高まることが期待さ
れる。本発明者らはよりすぐれた性質を持つアミラーゼ
阻害物質を微生物に求め、多くの菌株を系統的に探索し
たところ、ストレプトマイセス属の一菌株が全く新規な
アミラーゼ阻害物質を産生することを知り、この物質を
Ａｌ−Ｂと名づけた。
上記アミラーゼ阻害物質Ａｌ−Ｂは、ストレプトマイセ
ス属に属するアミラーゼ阻害物質Ａｌ−Ｂ産生菌を培養
し、培養物よりアミラーゼ阻害物質Ａｌ−Ｂを採取する
ことによつて製造される。本発明で使用するストレプト
マイセス属の菌株は、アミラーゼ阻害物質Ａｌ−Ｂの産
生菌であればいかなる菌株でもよいが、本発明者らが先
に分離した菌株Ｊｆ６．２９７−Ａ２が有効に使用され
る。この菌株遥２９７−Ａ２はその菌学的性質がストレ
プトマイセス・ビリドポラス（ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓｖｉｒｉｄｏｓｐｏｒｕｓ）の性質とよく一致し、
そのため、この菌株はストレプトマイセス・ビリドスポ
ラス▲２ ９７−Ａ２と命名された。この菌株は工業技
術院微生物工業技術研究所に微生物受託番号 微工研菌
寄第５４０５号 ＦＥＲＭ−Ｐ遥５４０５で寄託されて
いる。次にストレプトマイセス・ビリドスポラス遥２９
７−Ａ２の菌学的性質について記述する。
ス属に属するアミラーゼ阻害物質Ａｌ−Ｂ産生菌を培養
し、培養物よりアミラーゼ阻害物質Ａｌ−Ｂを採取する
ことによつて製造される。本発明で使用するストレプト
マイセス属の菌株は、アミラーゼ阻害物質Ａｌ−Ｂの産
生菌であればいかなる菌株でもよいが、本発明者らが先
に分離した菌株Ｊｆ６．２９７−Ａ２が有効に使用され
る。この菌株遥２９７−Ａ２はその菌学的性質がストレ
プトマイセス・ビリドポラス（ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓｖｉｒｉｄｏｓｐｏｒｕｓ）の性質とよく一致し、
そのため、この菌株はストレプトマイセス・ビリドスポ
ラス▲２ ９７−Ａ２と命名された。この菌株は工業技
術院微生物工業技術研究所に微生物受託番号 微工研菌
寄第５４０５号 ＦＥＲＭ−Ｐ遥５４０５で寄託されて
いる。次にストレプトマイセス・ビリドスポラス遥２９
７−Ａ２の菌学的性質について記述する。
１、形態
胞子形成菌糸は単純分枝をなし、開環状または不規則な
螺旋状をなし、１０胞子以上連鎖する。
螺旋状をなし、１０胞子以上連鎖する。
胞子は有刺型で大きさは０．５〜０．８×１．１〜１５
ミクロンである。２、各種培地における生育状態 （１）シユクロース・硝酸塩寒天培地 生育（Ｇ）中程度、無色 気菌糸（ＡＭ）：中程度、灰色 可溶性色素（ＳＰ）：なし （２）グルコース・アスパラギン寒天培地Ｇ：中程度、
無色 ＡＭ：貧弱、白色 ＳＰ：なし （３）グリセリン・アスパラギン寒天培地Ｇ：豊富、帯
黄の褐色 ＡＭ：豊富、帯緑の灰色 ＳＰ：なし （４）スターチ・無機塩寒天培地 Ｇ：豊富、うすいオレンジ ＡＭ：豊富、帯緑の灰色 ＳＰ：なし （５）チロシン寒天培地 Ｇ：中程度、無色 ＡＭ：中程度、灰色 ＳＰ：なし （６）栄養寒天培地 Ｇ：中程度、無色 ＡＭ：中程度、明るい灰色 ＳＰ：なし （７）イースト・麦芽寒天培地 Ｇ：豊富、強い帯黄のオレンジ ＡＭ：豊富、帯緑の灰色 ＳＰ：なし （８）オートミール寒天培地 Ｇ：豊富、帯黄のオレンジ ＡＭ：豊富、帯緑の灰色 ＳＰ：なし ３．生理的性質 （１）生育温度範囲 イースト・麦芽寒天培地において、１５℃〜４０℃で生
育し、最適温度は２５℃〜３７℃であつた。
ミクロンである。２、各種培地における生育状態 （１）シユクロース・硝酸塩寒天培地 生育（Ｇ）中程度、無色 気菌糸（ＡＭ）：中程度、灰色 可溶性色素（ＳＰ）：なし （２）グルコース・アスパラギン寒天培地Ｇ：中程度、
無色 ＡＭ：貧弱、白色 ＳＰ：なし （３）グリセリン・アスパラギン寒天培地Ｇ：豊富、帯
黄の褐色 ＡＭ：豊富、帯緑の灰色 ＳＰ：なし （４）スターチ・無機塩寒天培地 Ｇ：豊富、うすいオレンジ ＡＭ：豊富、帯緑の灰色 ＳＰ：なし （５）チロシン寒天培地 Ｇ：中程度、無色 ＡＭ：中程度、灰色 ＳＰ：なし （６）栄養寒天培地 Ｇ：中程度、無色 ＡＭ：中程度、明るい灰色 ＳＰ：なし （７）イースト・麦芽寒天培地 Ｇ：豊富、強い帯黄のオレンジ ＡＭ：豊富、帯緑の灰色 ＳＰ：なし （８）オートミール寒天培地 Ｇ：豊富、帯黄のオレンジ ＡＭ：豊富、帯緑の灰色 ＳＰ：なし ３．生理的性質 （１）生育温度範囲 イースト・麦芽寒天培地において、１５℃〜４０℃で生
育し、最適温度は２５℃〜３７℃であつた。
（２）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチ
ン培地）２１日間培養で液化する。
ン培地）２１日間培養で液化する。
（３）スターチの加水分解（スターチ寒天培地）陽性（
４）脱脂牛乳の凝固 陰性 （５）脱脂牛乳のペプトン化 陽性 フ ッ （６）硝酸塩還元能 陽性 （７）メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地、ペプトン・イースト・鉄寒天培地、
トリフトン・イーストプロス培地のいずれにおいてもメ
ラニ７様色素の生成は認められない。
４）脱脂牛乳の凝固 陰性 （５）脱脂牛乳のペプトン化 陽性 フ ッ （６）硝酸塩還元能 陽性 （７）メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地、ペプトン・イースト・鉄寒天培地、
トリフトン・イーストプロス培地のいずれにおいてもメ
ラニ７様色素の生成は認められない。
４．炭素源の同化性（プリドハム・ゴツトリーブ寒天培
地）Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−フラグドーズ、イノシトール、Ｌ−ラムノース
、Ｄ−マンニツトをよく利用するが、シユクロース、ラ
フイノース、セルロースは利用しない。
地）Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−フラグドーズ、イノシトール、Ｌ−ラムノース
、Ｄ−マンニツトをよく利用するが、シユクロース、ラ
フイノース、セルロースは利用しない。
以上の性状を要約すると黒２９７−Ａ２株はストレブト
マイセス属に属し、気菌糸は不規則な螺旋糸を形成し、
胞子表面構造は有刺型である。
マイセス属に属し、気菌糸は不規則な螺旋糸を形成し、
胞子表面構造は有刺型である。
気菌糸は豊富に着生し、スターチ・寒天培地、イースト
・麦芽寒天培地などでは帯緑の灰色を呈する。メラニン
様色素および可溶性色素を産生せず、シユクロース、ラ
フイノースを利用しない。バージエイズ・マニユアル・
オブ・デタミナテイーブ・バクテリオロジ一第８版１９
７４年（Ｂｅｒｇｅｙ′ＳＭ佃ＵａｌＯｆＤｅｔｅｒｍ
ｉｒｌａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｌＯｌＯｇｙｌ８ｔｈ．
Ｅｄｄ・、１９７４）およびＩＳＰ（インターナシヨナ
ル・ストレプトマイセス・プロジエクト）の記載（イン
ターナシヨナル・ジヤーナル・オブ・システマテイツク
。
・麦芽寒天培地などでは帯緑の灰色を呈する。メラニン
様色素および可溶性色素を産生せず、シユクロース、ラ
フイノースを利用しない。バージエイズ・マニユアル・
オブ・デタミナテイーブ・バクテリオロジ一第８版１９
７４年（Ｂｅｒｇｅｙ′ＳＭ佃ＵａｌＯｆＤｅｔｅｒｍ
ｉｒｌａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｌＯｌＯｇｙｌ８ｔｈ．
Ｅｄｄ・、１９７４）およびＩＳＰ（インターナシヨナ
ル・ストレプトマイセス・プロジエクト）の記載（イン
ターナシヨナル・ジヤーナル・オブ・システマテイツク
。
バクテリオロジ一、２２巻、１９７２年〔Ｉｎｔｅｍａ
ｔｉＯｎａｌＪＯｕｒｎａｌＯｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ
ＢａｃｔｅｒｌＯｌＯｇｙ〕）に基づき屋２９７−Ａ２
株の近縁菌種を調べると、ストレプトマイセス・ビリド
スポラス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｖｉｒｉｄＯｓｐ
Ｏｒｕｓ）が最も近似している。
ｔｉＯｎａｌＪＯｕｒｎａｌＯｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ
ＢａｃｔｅｒｌＯｌＯｇｙ〕）に基づき屋２９７−Ａ２
株の近縁菌種を調べると、ストレプトマイセス・ビリド
スポラス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｖｉｒｉｄＯｓｐ
Ｏｒｕｓ）が最も近似している。
すなわち気菌糸が不規即な螺旋糸を形成し、胞子の表面
構造が有刺型であるなどの形態的特徴、スターチ寒天培
地、イースト・麦芽寒天培地およびグリセロール・アス
パラギン寒天培地などで帯緑灰色の気菌糸を形成するな
どの培養性状、またメラニン様色素や可溶性色素を生成
せず、シユクロース、ラフイノースを利用しないなどの
生理的特徴において両者は一致している。
構造が有刺型であるなどの形態的特徴、スターチ寒天培
地、イースト・麦芽寒天培地およびグリセロール・アス
パラギン寒天培地などで帯緑灰色の気菌糸を形成するな
どの培養性状、またメラニン様色素や可溶性色素を生成
せず、シユクロース、ラフイノースを利用しないなどの
生理的特徴において両者は一致している。
よつて、屋２９７−Ａ２株をストレプトマイセス・ビリ
ドスポラス黒２９７−Ａ２菌株と同定した。次に本発明
で得られるアミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの理化学的性質
は次の通りである。
ドスポラス黒２９７−Ａ２菌株と同定した。次に本発明
で得られるアミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの理化学的性質
は次の通りである。
１．作用
膵臓アミラーゼの活性を阻害し、唾液アミラーゼ、バク
テリアα−アミラーゼ、グルコアミラーゼおよび麦芽の
β−アミラーゼの活性をほとんど阻害しない。
テリアα−アミラーゼ、グルコアミラーゼおよび麦芽の
β−アミラーゼの活性をほとんど阻害しない。
２．安定性
ＰＨ安定性：３７℃、１時間の処理でＰＨ５．５からＰ
ＨｌＯ．Ｏの間で安定である。
ＨｌＯ．Ｏの間で安定である。
温度安定性：０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）中、
７０℃３０分の処理で８０％以上の残存活性がある。３
．分子量 セフアデツクスＧ−７５のゲル沢過法によつて求めた分
子量は８０００である。
７０℃３０分の処理で８０％以上の残存活性がある。３
．分子量 セフアデツクスＧ−７５のゲル沢過法によつて求めた分
子量は８０００である。
４．性質
中性ポリペプタイドである。
５．アミラーゼ阻害性測定法
アミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂのアミラーゼ阻害活性の測
定法は、２単位のブタ膵臓アミラーゼ活性の５０％を阻
害する量を阻害活性１単位とする。
定法は、２単位のブタ膵臓アミラーゼ活性の５０％を阻
害する量を阻害活性１単位とする。
ただし、アミラーゼ活性は次のようにして測定した。０
．５ｄの希釈酵素液に０．５７ｎ１の精製水を加え、３
７℃で５分間予熱した後、２ｍ１の１．５％可溶性デン
プンを加え、３７℃で１０分間反応させる。
．５ｄの希釈酵素液に０．５７ｎ１の精製水を加え、３
７℃で５分間予熱した後、２ｍ１の１．５％可溶性デン
プンを加え、３７℃で１０分間反応させる。
反応液に０．５Ｎ塩酸５Ｗ１１を加えて振りまぜ、反応
を止めた後、この液０．３ｍ１Ｋ０．００５％ヨウ素、
０．０５％ヨウ化カリウム液３ｍ１を加えて振りまぜ、
吸光度６６０ｎｍの値を測定する。この時の吸光度の読
みをＣとする。別に酵素液の代りに精製水を用いて同様
の操作をする。その時の吸光度の読みをＢＢ−Ｃとする
。
を止めた後、この液０．３ｍ１Ｋ０．００５％ヨウ素、
０．０５％ヨウ化カリウム液３ｍ１を加えて振りまぜ、
吸光度６６０ｎｍの値を測定する。この時の吸光度の読
みをＣとする。別に酵素液の代りに精製水を用いて同様
の操作をする。その時の吸光度の読みをＢＢ−Ｃとする
。
上記の値の？＝０．４の時のアミラＢ一ゼ活性を１単位
とする。
とする。
阻害活性測定の際は、希釈酵素液０．５ｍ１に上記精製
水の代りに阻害物質希釈液０．５ｍ１を加えて同様の操
作をする。
水の代りに阻害物質希釈液０．５ｍ１を加えて同様の操
作をする。
この時の吸光度の読みをＴとする。阻害物質が存在しな
い時のアミラーゼ活性Ａは次の通りである。
い時のアミラーゼ活性Ａは次の通りである。
阻害物質が存在する時の阻害パーセントＩは次の通りで
ある。
ある。
阻害活性
６．失活
３７℃１時間の処理でＰＨ４．Ｏ以下で完全に失活し、
０．１Ｍリン酸５緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）中１００℃３０
分の熱処理で完全に失活する。
０．１Ｍリン酸５緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）中１００℃３０
分の熱処理で完全に失活する。
７．呈色反応
銅・フオーリン法で青色に呈色する。
８．阻害剤
２−メルカプトエタノール、エチレンジアミン四酢酸ナ
トリウム、ｐ−クロルマーキユリベンゾエイト、モノヨ
ード酢酸、ｏ−フエナンスロリン８−ヒドロキシキノリ
ンの各１ｍＭ添加で活性を失わない。
トリウム、ｐ−クロルマーキユリベンゾエイト、モノヨ
ード酢酸、ｏ−フエナンスロリン８−ヒドロキシキノリ
ンの各１ｍＭ添加で活性を失わない。
９．阻害性
トリプシン、α−キモトリプシン、ペプシン、アルコー
ル脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素、コレステロールオ
キシダーゼ、アルカリンホスファターゼ、リパーゼの活
性を阻害しない。
ル脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素、コレステロールオ
キシダーゼ、アルカリンホスファターゼ、リパーゼの活
性を阻害しない。
１０．紫外吸収スペクトル
第１図に示すように極大吸収は２７８ｎｍで極少吸収は
２５２ｎｍである。
２５２ｎｍである。
１１．赤外吸収スペクトル
第２図に示すとうりである。
１２．アクリルアミド・ゲル・デイスク電気泳動アクリ
ルアミド・ゲル・デイスク電気泳動はディビスの方法（
Ａｍｎ．Ｎ．Ｙ．ＡｃａｄＳｃｉ．、１２１、４０４、
１９６４）に従つて標準ゲル５０ｍＭトリス・グリシン
緩衝液（ＰＨ８．３）を使用し、１カラム当り３ｍＡの
定電流で泳動を行なつた。
ルアミド・ゲル・デイスク電気泳動はディビスの方法（
Ａｍｎ．Ｎ．Ｙ．ＡｃａｄＳｃｉ．、１２１、４０４、
１９６４）に従つて標準ゲル５０ｍＭトリス・グリシン
緩衝液（ＰＨ８．３）を使用し、１カラム当り３ｍＡの
定電流で泳動を行なつた。
その結果、アミラーポ阻害物質ＡＩ−Ｂのプロムフエノ
ールブル一に対する相対移動度（Ｒｍ）は０．６５であ
つた。以上の理化学的性質より、本発明によつて得られ
るアミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂは従来知られている植物
起源のアミラーゼ阻害物質や微生物起源のアミラーゼ阻
害物質と全く異なるものであり、新規アミラーゼ阻害物
質と認められる。
ールブル一に対する相対移動度（Ｒｍ）は０．６５であ
つた。以上の理化学的性質より、本発明によつて得られ
るアミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂは従来知られている植物
起源のアミラーゼ阻害物質や微生物起源のアミラーゼ阻
害物質と全く異なるものであり、新規アミラーゼ阻害物
質と認められる。
特に本物質は膵臓型アミラーゼのみを特異的に阻害する
ことが特徴であ゛り、血清アミラーゼの測定において唾
液型アミラーゼと膵臓型アミラーゼの分別定量に有効に
利用できる。本発明におけるアミラーゼ阻害物質ＡＩ−
Ｂの産生は、ストレプトマイセス属に属するアミラーゼ
阻害物質ＡＩ−Ｂ産生菌を一般的手法によつて培養する
ことによつて培地中に生成蓄積することができる。
ことが特徴であ゛り、血清アミラーゼの測定において唾
液型アミラーゼと膵臓型アミラーゼの分別定量に有効に
利用できる。本発明におけるアミラーゼ阻害物質ＡＩ−
Ｂの産生は、ストレプトマイセス属に属するアミラーゼ
阻害物質ＡＩ−Ｂ産生菌を一般的手法によつて培養する
ことによつて培地中に生成蓄積することができる。
産地培地に＼おける窒素源としては、ポリペプトン、肉
工キズ、大豆粉が用いられ、炭素源としてはデンプン、
グルコース、グリセリン、デキストリンが用いられ、無
機塩は食塩、リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、硫
酸マグネシウムなどが用いられる。
工キズ、大豆粉が用いられ、炭素源としてはデンプン、
グルコース、グリセリン、デキストリンが用いられ、無
機塩は食塩、リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、硫
酸マグネシウムなどが用いられる。
次に、次表に示される各種の組成をもつ培養基でストレ
プトマイセス・ビリドスポラス還２９７−Ａ２を振盪培
養してアミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの産生を調べた。
プトマイセス・ビリドスポラス還２９７−Ａ２を振盪培
養してアミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの産生を調べた。
この際の振盪培養は、５００ｍｊのフラスコに１００ｍ
１の培地を入れ、２７〜２９℃で１分間２００回転の振
盪機にのせて行なつた。基礎培地としてポリペプトン１
．０％、大豆粉０．５％、塩化ナトリウム０．１％、リ
ン酸二カリゥム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％
、ＰＨ７．Ｏを用いた。培養２日目からアミラーゼ阻害
物質ＡＩ−Ｂの産生が認められた。ノ ーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの産生に好ましい炭素源であるこ
とがわかる。
１の培地を入れ、２７〜２９℃で１分間２００回転の振
盪機にのせて行なつた。基礎培地としてポリペプトン１
．０％、大豆粉０．５％、塩化ナトリウム０．１％、リ
ン酸二カリゥム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％
、ＰＨ７．Ｏを用いた。培養２日目からアミラーゼ阻害
物質ＡＩ−Ｂの産生が認められた。ノ ーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの産生に好ましい炭素源であるこ
とがわかる。
また本物質はタンク培養法でも振盪培養法と同じように
産生される。例えば、デンプン１．０％、ポリペプトン
１．０％、大豆粉０．５％、塩化ナトリウム０．１％、
リン酸二ナトリウム０．１％（ＰＨ７．Ｏ）の培地を５
０リツトル容のジアーフアーメンタ一に３０リツトル入
れて滅菌し、２００ｒｐｍ、０．４ｖｖｍ１２７〜２９
℃で培養すると本物質の産生は４２〜７２時間で最高に
達した。上記のようにして得た培養物を遠心または沢過
によつて菌体を取り除き、除菌液を０．５飽和以上の硫
酸アンモニウムで塩析する。
産生される。例えば、デンプン１．０％、ポリペプトン
１．０％、大豆粉０．５％、塩化ナトリウム０．１％、
リン酸二ナトリウム０．１％（ＰＨ７．Ｏ）の培地を５
０リツトル容のジアーフアーメンタ一に３０リツトル入
れて滅菌し、２００ｒｐｍ、０．４ｖｖｍ１２７〜２９
℃で培養すると本物質の産生は４２〜７２時間で最高に
達した。上記のようにして得た培養物を遠心または沢過
によつて菌体を取り除き、除菌液を０．５飽和以上の硫
酸アンモニウムで塩析する。
その沈殿物を０．０１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ５．５〜７
．０）に対して１夜透析する。透析液を塩基性イオン交
換セルロース、弱酸性イオン交換セルロースに吸着させ
、塩化ナトリウムによつてその活性区分を溶出し、最後
にセフアデックスＧ−５０を用いてゲル▲過を行ない、
溶出した活性区分を集めて凍結乾燥を行なう。次に本発
明の実施例を示す。
．０）に対して１夜透析する。透析液を塩基性イオン交
換セルロース、弱酸性イオン交換セルロースに吸着させ
、塩化ナトリウムによつてその活性区分を溶出し、最後
にセフアデックスＧ−５０を用いてゲル▲過を行ない、
溶出した活性区分を集めて凍結乾燥を行なう。次に本発
明の実施例を示す。
デンプン１．０％、ポリペプトン１．０％、大豆粉０．
５％、塩化ナトリウム０．３％、リン酸二ナトリウム０
．１％を含む培地（ＰＨ７，Ｏ）３０リツトルを５０リ
ツトル容ジヤーフアーメンタ一に入れ、１２０℃、２０
分間滅菌した。
５％、塩化ナトリウム０．３％、リン酸二ナトリウム０
．１％を含む培地（ＰＨ７，Ｏ）３０リツトルを５０リ
ツトル容ジヤーフアーメンタ一に入れ、１２０℃、２０
分間滅菌した。
冷却後、一方で、５００ｍｔ容の三角フラスコに同一組
成培地１００１１１を入れ、ストレプトマイセス・ビリ
ドスポラス扁２９７−Ａ２（微工研菌寄第５４０５号）
を接種し、２４時間２８℃で振盪培養しておいた種培養
液６００ｄを入れた。２８℃、２００ｒｐｍ、０．４ｖ
ｖｍの一定培養条件で４８時間培養し、４８時間後、培
養液３０リツトルを吸引▲過して菌体を除き、▲液に０
．７飽和の硫酸アンモニウムを加えて塩析した。
成培地１００１１１を入れ、ストレプトマイセス・ビリ
ドスポラス扁２９７−Ａ２（微工研菌寄第５４０５号）
を接種し、２４時間２８℃で振盪培養しておいた種培養
液６００ｄを入れた。２８℃、２００ｒｐｍ、０．４ｖ
ｖｍの一定培養条件で４８時間培養し、４８時間後、培
養液３０リツトルを吸引▲過して菌体を除き、▲液に０
．７飽和の硫酸アンモニウムを加えて塩析した。
生じた沈殿を遠心分離して集めた後、０．０１Ｍリン酸
緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）に対して１夜透析し、この透析液
を、ジエチルアミノエチルセルロースに吸着させ、活性
区分を０．１Ｍの塩化ナトリウムを含む０．０１Ｍリン
酸緩衝液で溶出した。活性区分を限外沢過法で濃縮し凍
結乾燥して、４５０Ｕ／Ｗ９のアミラーゼ阻害活性を有
する、アミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの粗製物１．２ｖを
得た。上記のようにして得たアミラーゼ阻害物質ＡＩＢ
の粗製物１．２７を、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ５
．５）に溶解した後、カルボキシメチルセルロースに吸
着させ、塩化ナトリウムＯから０．５Ｍのグラジエント
で溶出した。
緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）に対して１夜透析し、この透析液
を、ジエチルアミノエチルセルロースに吸着させ、活性
区分を０．１Ｍの塩化ナトリウムを含む０．０１Ｍリン
酸緩衝液で溶出した。活性区分を限外沢過法で濃縮し凍
結乾燥して、４５０Ｕ／Ｗ９のアミラーゼ阻害活性を有
する、アミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの粗製物１．２ｖを
得た。上記のようにして得たアミラーゼ阻害物質ＡＩＢ
の粗製物１．２７を、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ５
．５）に溶解した後、カルボキシメチルセルロースに吸
着させ、塩化ナトリウムＯから０．５Ｍのグラジエント
で溶出した。
活性区分を集め、限外沢過法で濃縮した後、濃縮液をセ
フアデツクスＧ−５０でゲル沢過を行ない、活性区分を
集めて濃縮した後、凍結乾燥して２５００Ｕ／Ｗｌｙの
精製物１５０Ｗ９を得た。
フアデツクスＧ−５０でゲル沢過を行ない、活性区分を
集めて濃縮した後、凍結乾燥して２５００Ｕ／Ｗｌｙの
精製物１５０Ｗ９を得た。
第１図はアミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの紫外吸収スペク
トルを示し、第２図はアミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの赤
外吸収スペクトルを示す。
トルを示し、第２図はアミラーゼ阻害物質ＡＩ−Ｂの赤
外吸収スペクトルを示す。
Claims (1)
- １ ストレプトマイセス属に属するアミラーゼ阻害物質
Ａ I −Ｂ産生菌を培養し、その培養物よりアミラーゼ
阻害物質Ａ I −Ｂを採取することを特徴とするアミラ
ーゼ阻害物質Ａ I −Ｂの製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55074203A JPS5910193B2 (ja) | 1980-06-04 | 1980-06-04 | アミラ−ゼ阻害物質ａｉ−ｂの製造法 |
| US06/267,828 US4463091A (en) | 1980-06-04 | 1981-05-28 | Method of producing amylase inhibitor AI-B |
| DE19813121831 DE3121831A1 (de) | 1980-06-04 | 1981-06-02 | Verfahren zur produktion von amylase-inhibitor ai-b |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55074203A JPS5910193B2 (ja) | 1980-06-04 | 1980-06-04 | アミラ−ゼ阻害物質ａｉ−ｂの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS572684A JPS572684A (en) | 1982-01-08 |
| JPS5910193B2 true JPS5910193B2 (ja) | 1984-03-07 |
Family
ID=13540388
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55074203A Expired JPS5910193B2 (ja) | 1980-06-04 | 1980-06-04 | アミラ−ゼ阻害物質ａｉ−ｂの製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4463091A (ja) |
| JP (1) | JPS5910193B2 (ja) |
| DE (1) | DE3121831A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5885899A (ja) * | 1981-11-16 | 1983-05-23 | Fujirebio Inc | アミラ−ゼインヒビタ−およびその製造法 |
| JP3195937B2 (ja) * | 1992-04-22 | 2001-08-06 | 日清製粉株式会社 | アミラーゼ阻害物質の取得方法 |
| SG10202103727PA (en) | 2014-08-18 | 2021-05-28 | Eddy Current Lp | Tuning of a kinematic relationship between members |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA658522A (en) * | 1963-02-26 | Berger Julius | Antibioticum and process for the preparation thereof | |
| CA627136A (en) * | 1961-09-12 | Charney Jesse | Streptogramin and process for production | |
| CA514894A (en) * | 1955-07-19 | Ehrlich John | Production of antibiotic sistomycosin using streptomyces viridosporus | |
| US3132995A (en) * | 1961-10-20 | 1964-05-12 | Carter Prod Inc | Endotoxin fractions and method for producing same |
| US3278378A (en) * | 1962-04-19 | 1966-10-11 | Schindler Charles Alvin | Staphylococcus-derived antibiotic |
| US3316148A (en) * | 1962-11-30 | 1967-04-25 | Umezawa Hamao | Enomycin and process for preparation |
| US4010258A (en) * | 1974-03-15 | 1977-03-01 | Ajinomoto Co., Inc. | Microbial amylase inhibitor and preparation thereof with the use of streptomyces diasticus var. amylostaticus |
| US3944537A (en) * | 1974-11-26 | 1976-03-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Preparation of alpha-amylase inhibitor |
| JPS5251090A (en) * | 1975-10-13 | 1977-04-23 | Nippon Kayaku Co Ltd | Method of preparing leupeptin |
| FR2338707A1 (fr) * | 1976-01-22 | 1977-08-19 | Rhone Poulenc Ind | Nouvel inhibiteur de glyco-hydrolases et sa preparation par culture d'un streptomyces |
| DE2701890C2 (de) * | 1977-01-19 | 1983-08-04 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Peptielischer Glycosidhydrolase-Inhibitor aus einem Streptomyceten und seine Verwendung |
| JPS5823078B2 (ja) * | 1979-04-09 | 1983-05-12 | 株式会社 林原生物化学研究所 | アミラ−ゼインヒビタ−の改質方法 |
-
1980
- 1980-06-04 JP JP55074203A patent/JPS5910193B2/ja not_active Expired
-
1981
- 1981-05-28 US US06/267,828 patent/US4463091A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-06-02 DE DE19813121831 patent/DE3121831A1/de not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3121831A1 (de) | 1982-07-08 |
| US4463091A (en) | 1984-07-31 |
| JPS572684A (en) | 1982-01-08 |
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