JPS5894397A - イノシンおよびグアノシンの製造法 - Google Patents
イノシンおよびグアノシンの製造法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、イノシンおよび／またはグアノシンの製造法
に関する。
に関する。
イノシンおよびグアノシンは、医薬品や呈味性５′−リ
ボヌクレオチドなどの合成原料として重要な物質であり
、これを安価かつ大麓に製造することは工業上きわめて
意ａｍいととである。
ボヌクレオチドなどの合成原料として重要な物質であり
、これを安価かつ大麓に製造することは工業上きわめて
意ａｍいととである。
従来、アデニン要求性変異株を用いるイノシン／または
グアノシンの発酵法による生産においては、培地Ｋｆ！
Ａ加するアデニン源の量を一定の範囲に定める必要があ
り、七の範囲を越えて過剰に添加した場合には、イノシ
ンおよび／またはグアノシンの生成量が著しく低下する
ことが知られている〔例えば、核酸発＃ニアミノ酸核酸
集談金−１１２ｇ頁、昭和５１年、講談社発行、および
アグリ力ルチュフＶ・アンド・バイオロジカル・ケミス
トリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ） ：第４８巻、８
９８頁、１９７９年 など〕。
グアノシンの発酵法による生産においては、培地Ｋｆ！
Ａ加するアデニン源の量を一定の範囲に定める必要があ
り、七の範囲を越えて過剰に添加した場合には、イノシ
ンおよび／またはグアノシンの生成量が著しく低下する
ことが知られている〔例えば、核酸発＃ニアミノ酸核酸
集談金−１１２ｇ頁、昭和５１年、講談社発行、および
アグリ力ルチュフＶ・アンド・バイオロジカル・ケミス
トリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ） ：第４８巻、８
９８頁、１９７９年 など〕。
しかるＫ、本発明者らは、上記のような事情にとられれ
ない新しい型のイノシンおよび／ま九はグアノシン発酵
を確立する目的で鋭意研究を進めたところ、アダニン要
求性を有し、イノシンおよび／またはグアノシンを生成
する能力を有する徽生物を過剰のアデニン源を含む培地
Ｋ、空気よりも酸素濃度の高い気体を通気しながら培養
することにより、イノシンおよび／またはグアノシンの
生成量を飛躍的に増大させることができることを発見し
、この知見に基づいてさらに研究を重ねた結果、本発明
を完成した。
ない新しい型のイノシンおよび／ま九はグアノシン発酵
を確立する目的で鋭意研究を進めたところ、アダニン要
求性を有し、イノシンおよび／またはグアノシンを生成
する能力を有する徽生物を過剰のアデニン源を含む培地
Ｋ、空気よりも酸素濃度の高い気体を通気しながら培養
することにより、イノシンおよび／またはグアノシンの
生成量を飛躍的に増大させることができることを発見し
、この知見に基づいてさらに研究を重ねた結果、本発明
を完成した。
本発明は、生育にアデニンを要求しイノシンおよび／１
ｆｃはグアノシン生産能を有する微生物を培地に培養し
培養物中にイノシンおよび／ｌたはグアノシンを生成蓄
積せしめ培養物からイノシンおよび／またはグアノシン
を採取する方法において、イノシンおよび／またはグア
ノシンの蓄積量が通常の空気による通気培養下で極大値
を示すアデニン量を越える過剰のアデニン源を培地中に
存在せしめ、かつ通常の空気より酸素濃度を高めて酸素
を培地に供給しながら培養することを特徴とするイノシ
ンおよび／またはグアノシンの製造法である。
ｆｃはグアノシン生産能を有する微生物を培地に培養し
培養物中にイノシンおよび／ｌたはグアノシンを生成蓄
積せしめ培養物からイノシンおよび／またはグアノシン
を採取する方法において、イノシンおよび／またはグア
ノシンの蓄積量が通常の空気による通気培養下で極大値
を示すアデニン量を越える過剰のアデニン源を培地中に
存在せしめ、かつ通常の空気より酸素濃度を高めて酸素
を培地に供給しながら培養することを特徴とするイノシ
ンおよび／またはグアノシンの製造法である。
本発明方法において用いられるアデニンａｈ、アデニン
そのものでもよいし、アデニン誘導体またはアデニンを
含有する物質でもよい。
そのものでもよいし、アデニン誘導体またはアデニンを
含有する物質でもよい。
該アデニン誘導体としては、アデノシン、５′−アデノ
シンモノリン酸、８／−アデノシンモノリン酸られる。
シンモノリン酸、８／−アデノシンモノリン酸られる。
またアデニンを含有する物質としては上記アデニンおよ
び（″また＃ｉ）アデニン誘導体を含有する微生物菌体
（例、酵母）やその抽出物、牛肉エキス、魚肉エキスな
どＯＲ有機物などが挙げられる。
び（″また＃ｉ）アデニン誘導体を含有する微生物菌体
（例、酵母）やその抽出物、牛肉エキス、魚肉エキスな
どＯＲ有機物などが挙げられる。
通常の空気による通気培養下イノシンおよび／ｉ九はグ
アノシンの蓄積量が極大値を示すアデニン量とは、通常
の通気培養条件下でイノシンおよび／ｌたはグアノシン
の蓄積量が最も多くなるよりなアデニン源の量をいう。
アノシンの蓄積量が極大値を示すアデニン量とは、通常
の通気培養条件下でイノシンおよび／ｌたはグアノシン
の蓄積量が最も多くなるよりなアデニン源の量をいう。
なお、「核酸発酵」第１２８頁昭和５１年講談社発行に
は、イノシン発酵において蓄積量が極大値を示すアデニ
ン量は、使用する菌株により多少相違するが、５ｏない
し１６０屑シーで１あることが、またアグリカルチュラ
ル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー第４８巻８
９８頁１９７９年には、グアノシンの蓄積に最適なアデ
ニン源（リボ核酸）の濃度はｌ。
は、イノシン発酵において蓄積量が極大値を示すアデニ
ン量は、使用する菌株により多少相違するが、５ｏない
し１６０屑シーで１あることが、またアグリカルチュラ
ル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー第４８巻８
９８頁１９７９年には、グアノシンの蓄積に最適なアデ
ニン源（リボ核酸）の濃度はｌ。
４９／１前後であって、リポ核酸の濃度が１．８ｆｌ／
１１あるいはそれ以上になると、グアノシンの蓄積量が
顕著に低下することが、それぞれ記載されており、本発
明でいうイノシンおよび／またはグアノシンの蓄積量が
極大値を示すアデニン量として、上記文献等に示された
公知の技術におけるｆＭ（アデニン以外の物質がアデニ
ン源として用いられている場合はそれをアデニンに換算
した時の値）を採用してもよい。
１１あるいはそれ以上になると、グアノシンの蓄積量が
顕著に低下することが、それぞれ記載されており、本発
明でいうイノシンおよび／またはグアノシンの蓄積量が
極大値を示すアデニン量として、上記文献等に示された
公知の技術におけるｆＭ（アデニン以外の物質がアデニ
ン源として用いられている場合はそれをアデニンに換算
した時の値）を採用してもよい。
本発明方法において培地に存在せしめる好ましいアデニ
ン源の濃度は、アデニンに換算して、約２・ＯＯないし
８００μｌ／ｌｌであり、さらに好ましシフ くは３００ないしδｏｏｌｔノＡｉｌである。
ン源の濃度は、アデニンに換算して、約２・ＯＯないし
８００μｌ／ｌｌであり、さらに好ましシフ くは３００ないしδｏｏｌｔノＡｉｌである。
本発明方法において培地に存在せしめるアデニ宍、
ζ「ノ
ンの添加時期は、特に限定されない。たとえば、あらか
じめ、その全量を培地中に添加しておいて発酵−を開始
してもよいし、発酵の進行に伴って、適宜、分割して添
加してもよい。
じめ、その全量を培地中に添加しておいて発酵−を開始
してもよいし、発酵の進行に伴って、適宜、分割して添
加してもよい。
本発明の方法において用いられる微生物を培養するに際
しては、通常の通気攪拌深部培養などの方法がとられる
が、本発明の方法においては、とくに通常の空気よりも
酸素濃度の高い気体が通気（ｂｕｂｂｌｅ ）サレル。
しては、通常の通気攪拌深部培養などの方法がとられる
が、本発明の方法においては、とくに通常の空気よりも
酸素濃度の高い気体が通気（ｂｕｂｂｌｅ ）サレル。
本発明の方法に用いられる気体としては、純酸素ガスは
本とより、それに空気を混合した気体や、モレキュラー
シーブ法もしくは膜分離法等による酸素発生装置より発
生した高濃度酸素含有気体などでもよい。
本とより、それに空気を混合した気体や、モレキュラー
シーブ法もしくは膜分離法等による酸素発生装置より発
生した高濃度酸素含有気体などでもよい。
空気よりも酸素濃度の高い気体を供給する方法としては
、発酵期間中、終始一定の速度で供給しつづけてもよい
し、培養液中の溶存酸素を測定しながら、必要な量を自
動的に供給するようＫしてもよい。
、発酵期間中、終始一定の速度で供給しつづけてもよい
し、培養液中の溶存酸素を測定しながら、必要な量を自
動的に供給するようＫしてもよい。
また、酸素濃度の高い気体を供給する場合圧、たとえば
通常の空気と酸素とをそれぞれ別のノズルから培地に供
給するようＫしてもよい。
通常の空気と酸素とをそれぞれ別のノズルから培地に供
給するようＫしてもよい。
本発明の方法において、発酵期間中、終始一定の速度で
気体を供給する場合、培地へ供給される空気および酸素
の量は、従来法における通常の空気の供給量をＱｏ （
１／ｍ ）とすると、次式に従って求めることができる
。
気体を供給する場合、培地へ供給される空気および酸素
の量は、従来法における通常の空気の供給量をＱｏ （
１／ｍ ）とすると、次式に従って求めることができる
。
ここでＱＡＩＩＩおよびＱＯＸＹＧＩＮはそれぞれ培地
への空気および酸素の供給量（１７ｍ ）を表わし、Ｃ
は両者を混合して得られる混合気体の酸素濃度（％）を
表わす。なお、Ｃは培地中のアデニンの量から、次式に
よって容易に知ることができる。
への空気および酸素の供給量（１７ｍ ）を表わし、Ｃ
は両者を混合して得られる混合気体の酸素濃度（％）を
表わす。なお、Ｃは培地中のアデニンの量から、次式に
よって容易に知ることができる。
Ｃ≧Ａｄ Ｘ １０８
ただし、Ａｄ Ｆｉアデニン源のアデニン換算濃度（重
量／容量−％）を表わす。
量／容量−％）を表わす。
本発明で使用される微生物は、イノシンまたは／および
グアノシン生産能を有する微生物であればいずれでもよ
い。該微生物の具体例としては、たとえばバチシス（１
３ａｃｉｌｌｕｓ ）属菌、ブレビバクテリウム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｔｃｒｉｕｍ）属！ｉｌ！ｒ、コリネバク
テリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属１など
が挙げられる。該バチルス属菌としては、たとえばバチ
ルス−プミル、ｘ、 （Ｂａｃｉｌ ｌｕｓ ｐｕｍｉ
１ｕｓ）。
グアノシン生産能を有する微生物であればいずれでもよ
い。該微生物の具体例としては、たとえばバチシス（１
３ａｃｉｌｌｕｓ ）属菌、ブレビバクテリウム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｔｃｒｉｕｍ）属！ｉｌ！ｒ、コリネバク
テリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属１など
が挙げられる。該バチルス属菌としては、たとえばバチ
ルス−プミル、ｘ、 （Ｂａｃｉｌ ｌｕｓ ｐｕｍｉ
１ｕｓ）。
パーｔｔｖスーズブｆすｘ（Ｂａｃ目１ｕｓ ５ｕｂｔ
ｉｌｉｓ）などの４１（ｓｐｅｃｉｅｓ）が挙げられ、
さらに具体的にはバチルス・プミルスＮｈｌｄ８−８−
１６（ＦＥＲＭ ＢＰ−ｓ、ＩＦＯ１２４８Ｂ）。
ｉｌｉｓ）などの４１（ｓｐｅｃｉｅｓ）が挙げられ、
さらに具体的にはバチルス・プミルスＮｈｌｄ８−８−
１６（ＦＥＲＭ ＢＰ−ｓ、ＩＦＯ１２４８Ｂ）。
バチルス・プミルス掩１５８−Ａ−１７（ＰＥＲＭ
ＢＰ−７，ＩＦＯ１２４７７）、バチルス・ズブチリス
ＡＴＣＣ１１２２１（ＩＦＯ１４１２ｇ）、バチルス・
ズブチリスＡＴＣＣ１！１９５６（ＩＦＯ１４１２４）
などが挙げられる。該ブレビバクテリウム属菌としては
、たとえばブレビバクテリウム・アンモニア１７’ ＊
ス（Ｂｒｅｖｉ−ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｒＩｒＱｏ
ｎｉａｇｅｎｅｓ）などの種（ｓｐｅｃｉｅｓ ）が挙
げられ、さらに具体的にはブレビバクテリウム・アンモ
ニアゲネスＡＴＣＣ２１４７７、ＡＴＣＣ２１４７８，
ＡＴＣＣ２１４７Ｇ、ＡＴＣＣ２１４ｇＧなどが挙げら
れる。
ＢＰ−７，ＩＦＯ１２４７７）、バチルス・ズブチリス
ＡＴＣＣ１１２２１（ＩＦＯ１４１２ｇ）、バチルス・
ズブチリスＡＴＣＣ１！１９５６（ＩＦＯ１４１２４）
などが挙げられる。該ブレビバクテリウム属菌としては
、たとえばブレビバクテリウム・アンモニア１７’ ＊
ス（Ｂｒｅｖｉ−ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｒＩｒＱｏ
ｎｉａｇｅｎｅｓ）などの種（ｓｐｅｃｉｅｓ ）が挙
げられ、さらに具体的にはブレビバクテリウム・アンモ
ニアゲネスＡＴＣＣ２１４７７、ＡＴＣＣ２１４７８，
ＡＴＣＣ２１４７Ｇ、ＡＴＣＣ２１４ｇＧなどが挙げら
れる。
上記バチルス・プミルス−１４８−８−１１１およびバ
チルス・グミセス２１ｂ１５ は、財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に昭和４２年１月１
１日から受託番号ＩＦＯ １２４８Ｊ１およびＩＦＯ
１２４７７としてそれぞれ寄託されており、また上
記バチルス・プミルス庵１４８〜５ー１６株およびバチ
ルス・プミルスｍ１ ５ ｇ −Ａ−１７株は、通商産
業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ ）に昭
和５６年６月４日からブダペスト条約に基づく寄託とし
て受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６およびＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−７としてそれぞれ寄託されている。
チルス・グミセス２１ｂ１５ は、財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に昭和４２年１月１
１日から受託番号ＩＦＯ １２４８Ｊ１およびＩＦＯ
１２４７７としてそれぞれ寄託されており、また上
記バチルス・プミルス庵１４８〜５ー１６株およびバチ
ルス・プミルスｍ１ ５ ｇ −Ａ−１７株は、通商産
業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ ）に昭
和５６年６月４日からブダペスト条約に基づく寄託とし
て受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６およびＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−７としてそれぞれ寄託されている。
、ト記バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ １９２！１株
およびバチルス・ズブチリスＡＴＣＣ １８９５６株
はジ・アメリカン・タイプ・力Ｍチャー・コレクション
のカタログφオプｅストレインズＩ 第１４版１９８０
年（ Ｔｈｅ ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ Ｃａｔａｌｏｇｕｅｏｆ
５ｔｒａｉｎｓ ｌ Ｆｏｕｒｔｅｅｎｔｈ Ｅｄ
ｉｔｉｏｎｌｓｓｏ）に掲載されている。またバチルス
・ズブチリスＡＴＣＣ １９２２１株およびバチルス
・ズブチリスＡＴＣＣ １ｇ９５６株は財団法人発酵
研究所に昭和５６年５月２７日から受託番号ＩＦＯ
１４１２８門よびＩＦＯ 目１２４としてそれぞれ寄
託されている。
およびバチルス・ズブチリスＡＴＣＣ １８９５６株
はジ・アメリカン・タイプ・力Ｍチャー・コレクション
のカタログφオプｅストレインズＩ 第１４版１９８０
年（ Ｔｈｅ ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ Ｃａｔａｌｏｇｕｅｏｆ
５ｔｒａｉｎｓ ｌ Ｆｏｕｒｔｅｅｎｔｈ Ｅｄ
ｉｔｉｏｎｌｓｓｏ）に掲載されている。またバチルス
・ズブチリスＡＴＣＣ １９２２１株およびバチルス
・ズブチリスＡＴＣＣ １ｇ９５６株は財団法人発酵
研究所に昭和５６年５月２７日から受託番号ＩＦＯ
１４１２８門よびＩＦＯ 目１２４としてそれぞれ寄
託されている。
上記ブレビバクテリウム・アンモニアゲネスＡＴＣＣ
２１４７７、ＡＴＣＣ ２１４７８，ＡＴＣＣ
２１４７９およびムＴＣＣ ２１４８０株ハシ・アメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクションのカタログ
・オプ・ストレインズ ！第１４版１９８０年に掲載さ
れている。
２１４７７、ＡＴＣＣ ２１４７８，ＡＴＣＣ
２１４７９およびムＴＣＣ ２１４８０株ハシ・アメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクションのカタログ
・オプ・ストレインズ ！第１４版１９８０年に掲載さ
れている。
本発明の方法において、微生物を培養する培地としては
、通常のイノシンおよび／またはグアノシン発酵に用い
られる培地が利用される．たとえば、伏素源としては、
でんぷん、ぶどう塘，Ｒ糖ナトの糖類のほか、グリセリ
ン、メタノール、エタノール、ソルビトールなどの一価
乃至多価のアルコール類、酢酸，プロピオン酸．ステア
リン酸、オレイン酸などの脂肪酸類、大豆油．オリーブ
油、魚油、鯨油、綿実油、パーム油、ラードなどの油脂
類、ノナン、デカン、ウンデカン、ヘキサデカン、エイ
コサン、ペンタコサンなどのｎ−バフフィン類のほか、
ケロ七ン、ガスオイル、ヘビーガスオイルなどの炭化水
素類などがそれぞれ単独もしくは混合して用いられる。
、通常のイノシンおよび／またはグアノシン発酵に用い
られる培地が利用される．たとえば、伏素源としては、
でんぷん、ぶどう塘，Ｒ糖ナトの糖類のほか、グリセリ
ン、メタノール、エタノール、ソルビトールなどの一価
乃至多価のアルコール類、酢酸，プロピオン酸．ステア
リン酸、オレイン酸などの脂肪酸類、大豆油．オリーブ
油、魚油、鯨油、綿実油、パーム油、ラードなどの油脂
類、ノナン、デカン、ウンデカン、ヘキサデカン、エイ
コサン、ペンタコサンなどのｎ−バフフィン類のほか、
ケロ七ン、ガスオイル、ヘビーガスオイルなどの炭化水
素類などがそれぞれ単独もしくは混合して用いられる。
炭素源としては、上記したでんぷん、ぶどう糖および（
または）ＲＩｎヒ゛０＠麹１．伺候まし・・・ 培地に添加される窒素源としては、ペプトン。
または）ＲＩｎヒ゛０＠麹１．伺候まし・・・ 培地に添加される窒素源としては、ペプトン。
大豆粉、コ〜ンステイープリカー、酵母、肉エキス、尿
素などの有機窒素源のほか、硫酸、硝酸。
素などの有機窒素源のほか、硫酸、硝酸。
ＮｍＪｅ酸ｆｋどのアムモニウム塩、アムモニアガス、
アムモニア水などの無機窒素源が、それぞれ単独で、も
しぐは混合して用いられる。その他該菌の生育に必要な
各種の無機塩類、たとえばカルシウム、カリウム、ナト
リウム、マグネシウム。
アムモニア水などの無機窒素源が、それぞれ単独で、も
しぐは混合して用いられる。その他該菌の生育に必要な
各種の無機塩類、たとえばカルシウム、カリウム、ナト
リウム、マグネシウム。
マンガン、鉄、銅、亜鉛などの硫酸塩、塩酸塩。
炭酸塩、ａ酸塩、燐酸塩、酢酸塩などを、また原画の生
育に必要なアミノ酸類、ビタミン類などを適宜癲択して
、それらを単独または組合せて添加して用いられる。さ
ら礪：必要に応じて、シリコーンオイル、ポリアルキレ
ングリコールエーテルなどの消泡剤や界面活性剤などを
添加してもよい。
育に必要なアミノ酸類、ビタミン類などを適宜癲択して
、それらを単独または組合せて添加して用いられる。さ
ら礪：必要に応じて、シリコーンオイル、ポリアルキレ
ングリコールエーテルなどの消泡剤や界面活性剤などを
添加してもよい。
また培地のＰＨは通常約６乃至８の範囲から選定される
が、好ましくはｐＨＰＪ６．５乃至７．６の範囲で培養
される。培養中に培地のｐＨの変動が観測されれば、こ
れを望ましい範囲に補正するため、たとえば、水酸化ア
ルカリ、炭酸カルシウム、アムモニアなどの水溶液、懸
濁液あるいはアムモニアガスなどを適宜補添してもよい
。培養の温度は、使用される微生物の生育に通した温度
を選択すればよく、通常約２０℃乃至６０″Ｃ奸ましく
ｙ又′千余白） くは２５°Ｃ乃至４５℃で培養するのが有利である。
が、好ましくはｐＨＰＪ６．５乃至７．６の範囲で培養
される。培養中に培地のｐＨの変動が観測されれば、こ
れを望ましい範囲に補正するため、たとえば、水酸化ア
ルカリ、炭酸カルシウム、アムモニアなどの水溶液、懸
濁液あるいはアムモニアガスなどを適宜補添してもよい
。培養の温度は、使用される微生物の生育に通した温度
を選択すればよく、通常約２０℃乃至６０″Ｃ奸ましく
ｙ又′千余白） くは２５°Ｃ乃至４５℃で培養するのが有利である。
培養の時間は、イノシンおよび／またはグアノシンの蓄
積量が最大に達するまで培養すればよく、通常２４時間
乃至１４４時間培養すれば、その目的を達成することが
できる。
積量が最大に達するまで培養すればよく、通常２４時間
乃至１４４時間培養すれば、その目的を達成することが
できる。
この方法で冗酵液中に生成されたイノシンおよび／また
はグアノシンは、すでに公知にされている通常の手段、
たとえばイオン交換樹脂や活性炭によるクロマトグラフ
ィー、沈澱法あるいは溶媒抽出法などの分離精製手段を
単独もしくは組合せて適用することによって、単独もし
くは混合物として容易に採取することができる。
はグアノシンは、すでに公知にされている通常の手段、
たとえばイオン交換樹脂や活性炭によるクロマトグラフ
ィー、沈澱法あるいは溶媒抽出法などの分離精製手段を
単独もしくは組合せて適用することによって、単独もし
くは混合物として容易に採取することができる。
本発明の方法によれば、イノシンおよび／またはグアノ
シンが培養物中に著量蓄積される。
シンが培養物中に著量蓄積される。
したがって、本発明方法を用いると、一定量の設備を用
いる場合であっても、目的物イノシンおよび／またはグ
アノシンの生産量が増大される。また、得られる培養物
はイノシンおよび／またはグアノシンの含量が高いので
、目的物の採取が容易である。
いる場合であっても、目的物イノシンおよび／またはグ
アノシンの生産量が増大される。また、得られる培養物
はイノシンおよび／またはグアノシンの含量が高いので
、目的物の採取が容易である。
上記等の点で、本発明は工業上有利な方法である。
以下に実施例を掲げて本発明をより具体的に説明するが
、これらはいずれも、本発明の範囲を限定するものでは
ない。なお、パーセント（％）は特にことわ染のないか
ぎり、〔重量／容量、パーセント〕を示す。
、これらはいずれも、本発明の範囲を限定するものでは
ない。なお、パーセント（％）は特にことわ染のないか
ぎり、〔重量／容量、パーセント〕を示す。
実施例 １゜
アデニン１ｏ０８９／ｌを含む栄養寒天培地トに生ＷＬ
＆パチルヌ・プミルスＮｕ１４８−８−１６（ＦＥＢＭ
ＢＰ−６，ＩＦＯ−１２４８８）をクルコース４％
、尿素０．．２％、塩化カリウム０．１％、硫酸マンガ
ン（約４水塩）ｏ、ｏｏｓ％、塩化カルシウム（２水塩
）０．２％、ヒスチジン０．０８％＊ビｔチン２００
ｐｉ／ｌ 、 ”ステイープリカー２％およびリポ核
酸（純度７５％）０．２５優からなる滅菌シード培地２
０＋ｓ／を含む２００ｓ／容三角フラスコ５本に接種し
、１８時間、８７℃で振とり培養した。このシード培養
液の全量を、グルコース２９６．硫安０，４％、Ｌ−グ
ルタミン酸ナトリウム０．６％、硫酸マクネシウム（７
水３４）０．２％、塩化カリウム０．１％、塩化カルシ
ウム（２水塩）０．２％、硫酸マンガン（約４水塩）０
．００８％、ヒスチジン０．０８％、ビオチン２００μ
ｌ／ｌ 、イノシン０ 、００５Ｌ３６およびコーンス
テイープリカー２゜５％ からなる培地にリポ核酸（純
度７５％）を表１に示す濃度に加えて滅醒した主発＃培
地２１ヲ含む５１容ジャーファーメンタ−に移植して、
温度Ｂ８°Ｃ９回転数１０００ Ｉｐ［１１テ主発酵ヲ
開始した。培養は空気（ｏ 、、 ｓ ＶＶＭ）だけを
通気した場合ト、空気（０、４ＹＶＭ）、！：４１１１
１（０、２ＷＭ）を同時に通気した場合の２通りについ
て実施しだ。１２時間目からは発酵液中のグルコース濃
度が０．２％以下に保持されるように、別に滅菌した８
０％グシコース液を連続的に添加しながら９２時間まで
発酵を継続した。発酵液の戸は２６％アン七ニア水を自
動的に添加して６．７に保持した。こうして得たそれぞ
れの発酵終了液のイノシンおよびグアノシンを高速液体
クロマトグツフィーを用いて測定し、第１表に示す結果
を得た。
＆パチルヌ・プミルスＮｕ１４８−８−１６（ＦＥＢＭ
ＢＰ−６，ＩＦＯ−１２４８８）をクルコース４％
、尿素０．．２％、塩化カリウム０．１％、硫酸マンガ
ン（約４水塩）ｏ、ｏｏｓ％、塩化カルシウム（２水塩
）０．２％、ヒスチジン０．０８％＊ビｔチン２００
ｐｉ／ｌ 、 ”ステイープリカー２％およびリポ核
酸（純度７５％）０．２５優からなる滅菌シード培地２
０＋ｓ／を含む２００ｓ／容三角フラスコ５本に接種し
、１８時間、８７℃で振とり培養した。このシード培養
液の全量を、グルコース２９６．硫安０，４％、Ｌ−グ
ルタミン酸ナトリウム０．６％、硫酸マクネシウム（７
水３４）０．２％、塩化カリウム０．１％、塩化カルシ
ウム（２水塩）０．２％、硫酸マンガン（約４水塩）０
．００８％、ヒスチジン０．０８％、ビオチン２００μ
ｌ／ｌ 、イノシン０ 、００５Ｌ３６およびコーンス
テイープリカー２゜５％ からなる培地にリポ核酸（純
度７５％）を表１に示す濃度に加えて滅醒した主発＃培
地２１ヲ含む５１容ジャーファーメンタ−に移植して、
温度Ｂ８°Ｃ９回転数１０００ Ｉｐ［１１テ主発酵ヲ
開始した。培養は空気（ｏ 、、 ｓ ＶＶＭ）だけを
通気した場合ト、空気（０、４ＹＶＭ）、！：４１１１
１（０、２ＷＭ）を同時に通気した場合の２通りについ
て実施しだ。１２時間目からは発酵液中のグルコース濃
度が０．２％以下に保持されるように、別に滅菌した８
０％グシコース液を連続的に添加しながら９２時間まで
発酵を継続した。発酵液の戸は２６％アン七ニア水を自
動的に添加して６．７に保持した。こうして得たそれぞ
れの発酵終了液のイノシンおよびグアノシンを高速液体
クロマトグツフィーを用いて測定し、第１表に示す結果
を得た。
実施例 ２
バチルス・プミルス凪１ｌ４８−８−１６（ＦＥＲＢＰ
−ａ、ＩＦＯ−１ｚ＋ｓａ）の代りにバチルス・ズブチ
リス ＡＴＣＣ−１９２２１ｕＦ０ １４１２８）を用
いて、実施料ｌと同様の条件の下に主発酵を開始した。
−ａ、ＩＦＯ−１ｚ＋ｓａ）の代りにバチルス・ズブチ
リス ＡＴＣＣ−１９２２１ｕＦ０ １４１２８）を用
いて、実施料ｌと同様の条件の下に主発酵を開始した。
ただし、リポ核酸（純度７５％）濃度は０．５％および
０．８％とし、発酵温度は８４°Ｃとした。１８時時間
上り、別に滅菌した８０％グ々コース液を、実施例１と
同様に添加しつつ７０時間目まで発酵を継続したところ
、第２表に示す結果が得られた。
０．８％とし、発酵温度は８４°Ｃとした。１８時時間
上り、別に滅菌した８０％グ々コース液を、実施例１と
同様に添加しつつ７０時間目まで発酵を継続したところ
、第２表に示す結果が得られた。
、以下金白）
実施例 ８゜
実施例１と同様の操作、培地で、バチルス・プミルス宛
１４８−８−１６（Ｆ’ＥＲＭ ＢＰ−６、ＩＦｏ
１２４８８）を用いて得られたシード培養液約１００
舅ｌを、滅菌し、たグルコース２％。
１４８−８−１６（Ｆ’ＥＲＭ ＢＰ−６、ＩＦｏ
１２４８８）を用いて得られたシード培養液約１００
舅ｌを、滅菌し、たグルコース２％。
Ｍ安０．８％、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム１％、硫酸
マグネシウム（７水塩）０．８条、塩化力！Ｊウム０．
１５％、塩化カルシウム（２水り０−８ ％ ＊ Ｆｄ
ｔＭ マンカン（約４水塩）０．００４５％、ヒスチジ
７０．０４５％、ビオチンａＯＯμＩ／ｌ 、イノシ
ン０．０７５％、コーンステイープリカー７％、リポ核
酸（純度７５％） ０ 、７９６および尿素１％からな
る培地２１を含む ５１容ジャーファーメンタ−に移植
して、空Ｋ（０，８ＶＶＭ ）と純酸素（ｏ 、 ｓ
ＶＶＭ ） を通５１１． ＬＪカｂ、実施例１と同様
の方法で９６時間まで＠養を継続した。この間に、８０
９６グルコーヌ液１．２１が消費され、最終的に８１の
培養物が得られた。この発酵終了液中のイノシンおよび
グアノシンヲ高速液体クロマトグラフィーで測定した所
、それぞれ、２５ 、８ ｆ／ｌ 、 ２ ｔ 、 ６
ｆ／ｌであった。
マグネシウム（７水塩）０．８条、塩化力！Ｊウム０．
１５％、塩化カルシウム（２水り０−８ ％ ＊ Ｆｄ
ｔＭ マンカン（約４水塩）０．００４５％、ヒスチジ
７０．０４５％、ビオチンａＯＯμＩ／ｌ 、イノシ
ン０．０７５％、コーンステイープリカー７％、リポ核
酸（純度７５％） ０ 、７９６および尿素１％からな
る培地２１を含む ５１容ジャーファーメンタ−に移植
して、空Ｋ（０，８ＶＶＭ ）と純酸素（ｏ 、 ｓ
ＶＶＭ ） を通５１１． ＬＪカｂ、実施例１と同様
の方法で９６時間まで＠養を継続した。この間に、８０
９６グルコーヌ液１．２１が消費され、最終的に８１の
培養物が得られた。この発酵終了液中のイノシンおよび
グアノシンヲ高速液体クロマトグラフィーで測定した所
、それぞれ、２５ 、８ ｆ／ｌ 、 ２ ｔ 、 ６
ｆ／ｌであった。
次にこの発酵液から一過によって菌体を除去し、えられ
たろ液を常法により脱色樹脂およびアニオン交換樹脂で
処理して、イノシンおよびグアノシン含有区分を得た。
たろ液を常法により脱色樹脂およびアニオン交換樹脂で
処理して、イノシンおよびグアノシン含有区分を得た。
これを減圧４翻してイノシンとグアノシンの混合粗結晶
を得た。次にこの混合粗結晶を水に溶解後、常法の活性
訳吸着法および晶 再ｉ凍によってさらに精製し、それぞれ６０．６ｆおよ
び６２．’ｌｆのイノシンおよびグアノシンの結晶を得
た。
を得た。次にこの混合粗結晶を水に溶解後、常法の活性
訳吸着法および晶 再ｉ凍によってさらに精製し、それぞれ６０．６ｆおよ
び６２．’ｌｆのイノシンおよびグアノシンの結晶を得
た。
Claims (1)
- 、生育にアデニンを要求しイノシンおよび／またはグア
ノシン生産能を有する微生物を培地に培養し培養物中に
イノシンおよび／またはグアノシンを生成蓄積せしめ培
養物からイノシンおよび／まだはグアノシンを採取する
方法において、イノクンおよび／またはグアノシンの蓄
積量が通常の空気による通気培養下で極大値を示すアデ
ニン量を越える過剰のアデニン源を培地中に存在せしめ
、かつ通常の空気よね酸素濃度を高めて酸素を培地に供
給しながら培養することを特徴とするイノシンおよび／
またはグアノシンの製造法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56191033A JPS5894397A (ja) | 1981-11-27 | 1981-11-27 | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
| US06/444,457 US4578336A (en) | 1981-11-27 | 1982-11-24 | Producing nucleosides |
| EP82306287A EP0080864B1 (en) | 1981-11-27 | 1982-11-25 | An improved method for the production of nucleosides |
| DE8282306287T DE3275388D1 (en) | 1981-11-27 | 1982-11-25 | An improved method for the production of nucleosides |
| KR8205332A KR880001455B1 (ko) | 1981-11-27 | 1982-11-26 | 뉴클레오시드 생산의 개량방법 |
| DK526882A DK162239C (da) | 1981-11-27 | 1982-11-26 | Fremgangsmaade til fremstilling af inosin og/eller guanosin |
| ES517702A ES517702A0 (es) | 1981-11-27 | 1982-11-26 | Un metodo de producir inosina y-o guanosina. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56191033A JPS5894397A (ja) | 1981-11-27 | 1981-11-27 | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5894397A true JPS5894397A (ja) | 1983-06-04 |
| JPS6336757B2 JPS6336757B2 (ja) | 1988-07-21 |
Family
ID=16267773
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56191033A Granted JPS5894397A (ja) | 1981-11-27 | 1981-11-27 | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4578336A (ja) |
| EP (1) | EP0080864B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5894397A (ja) |
| KR (1) | KR880001455B1 (ja) |
| DE (1) | DE3275388D1 (ja) |
| DK (1) | DK162239C (ja) |
| ES (1) | ES517702A0 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0757198B2 (ja) * | 1987-10-07 | 1995-06-21 | 味の素株式会社 | ジデオキシイノシンの製造方法 |
| US5204245A (en) * | 1991-05-15 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Extraction of thymidine and other nucleosides |
| DE19938853B4 (de) * | 1999-08-17 | 2005-09-29 | Air Liquide Gmbh | Verfahren zur Begasung einer Anlage für den anaeroben und/oder aeroben mikrobiellen Abbau und Umwandlung organischer Abfälle zu Gärrest und/oder Kompost sowie dazugehörige Anlage |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA662009A (en) * | 1963-04-23 | Tamagawa Yosio | Process for producing nucleosides by microorganisms | |
| US2038451A (en) * | 1934-03-14 | 1936-04-21 | Schattaneck Erich | Device for aerating fermentation liquids |
| US3111459A (en) * | 1959-10-19 | 1963-11-19 | Ajinomoto Kk | Method for preparation of inosine |
| IT1001452B (it) * | 1965-06-11 | 1976-04-20 | Ajinomoto Kk | Metodo per produrre inosina mediante fermentazione |
| GB1175979A (en) * | 1965-12-28 | 1970-01-01 | Takeda Chemical Industries Ltd | A method for the Production of 5'-Inosinic Acid and Inosine |
| GB1127544A (en) * | 1969-08-19 | 1968-09-18 | Ajinomoto Kk | Method of preparing ribonucleosides by microorganism |
| JPS5417033B2 (ja) * | 1973-06-14 | 1979-06-27 | ||
| US3846246A (en) * | 1974-01-09 | 1974-11-05 | Dainippon Ink & Chemicals | Cultivation process for micro-organisms |
| JPS5545199B2 (ja) * | 1974-03-30 | 1980-11-17 |
-
1981
- 1981-11-27 JP JP56191033A patent/JPS5894397A/ja active Granted
-
1982
- 1982-11-24 US US06/444,457 patent/US4578336A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-11-25 DE DE8282306287T patent/DE3275388D1/de not_active Expired
- 1982-11-25 EP EP82306287A patent/EP0080864B1/en not_active Expired
- 1982-11-26 DK DK526882A patent/DK162239C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-11-26 KR KR8205332A patent/KR880001455B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1982-11-26 ES ES517702A patent/ES517702A0/es active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6336757B2 (ja) | 1988-07-21 |
| ES8401527A1 (es) | 1983-12-16 |
| DK162239B (da) | 1991-09-30 |
| US4578336A (en) | 1986-03-25 |
| ES517702A0 (es) | 1983-12-16 |
| EP0080864B1 (en) | 1987-02-04 |
| EP0080864A3 (en) | 1984-09-12 |
| KR880001455B1 (ko) | 1988-08-10 |
| KR840002453A (ko) | 1984-07-02 |
| EP0080864A2 (en) | 1983-06-08 |
| DE3275388D1 (en) | 1987-03-12 |
| DK162239C (da) | 1992-03-02 |
| DK526882A (da) | 1983-05-28 |
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