JPS5823796A - 人潜血の検出方法 - Google Patents

人潜血の検出方法

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JPS5823796A
JPS5823796A JP57123753A JP12375382A JPS5823796A JP S5823796 A JPS5823796 A JP S5823796A JP 57123753 A JP57123753 A JP 57123753A JP 12375382 A JP12375382 A JP 12375382A JP S5823796 A JPS5823796 A JP S5823796A
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 当該発明は人の糞便標体中の人潜血を検出するための方
法に関する。
大便中の潜血の検出は結脹癌の早期診断法として認めら
れた方法である。大便中の潜血の化学的検出は、古くす
でに試みられている単純な検査方法である。この場合、
試験の原理は、ヘモグロビンのペルオキシダーゼ作用に
基いており、それによれば、過酸化水素の存在下に指示
薬（ベンツジン、オルト−トルイジン、グアイアクム）
が酸化されて青い発色をみる。これはもちろん非特異的
反応である。なぜならば、ヘモグロビン以外に食物、主
として豚の血をまぜたソーセージ、赤味の肉ならびに野
菜の構成分のごときその他の大便成分や繰向細菌もまた
ペルオキシダーゼ作用をもつからである。テストスライ
ドの形で人手できる大便中潜血検出用の市販の諸テスト
では患者はテスト開始前３日間とテスト期間中に生肉お
よび半生間ならびにソーセージ（たとえばタルタル、ス
テークレバー、サラィ、血液入りソーセーゾフの消費を
ヤめる必要がある。
これらの諸注意は患者にとりわずられしく、また必ずし
も完全に偽のポジティブ反応を除外することができず、
そのため、Ｍ脹鏡あるいは直脹鏡のような時間と費用の
かかる検査をその後に必要とする。
この理由から、グアイアクムを飽和させた従来のテスト
期間中げの場合に、グアイアクムを充満させていない附
加的なサンプル受容部位を用いて、グアイアクムがポジ
ティブのサンプルの場合にこの附加的サンプル受容部位
の内容について免疫学的方法を用いてヒトのヘモグロビ
ンの存在を検索することもまたすでに提案されてきた（
　１３０ｎｇ＠ｔ＠ｒ。
Ｃ，Ｌ、ら、アメリカ癌学会（Ａｍ＠ｒｉｏａｎ　（：
ａｎｃｅｒ８０Ｃ１・ｔｙ　）　１０９９頁以下参照、
１９８０）。
しかしながら、この方法は、附加的大便サンダルが、グ
アイアクムテストに用いられた大便サンゾルと絶対的に
同一ではなく、たとえば、それは別の排便からとられた
ものかあるいは、その大便の別の部分からとられたもの
であるために、再び不確実性にみちびくという欠点をも
っている。
したがって、ペルオキシダーゼテストに用いられた大便
のサンプルにつ′いて、正常では人糞中に存在しない人
体起源の成分が存在するか否かを検査する必要がある。
過酸化法は、エタノール性過酸化物溶液を用いて実施さ
れるので、これまでこの方法は、それら人体起源成分の
免疫学的性質を破壊すると考えられていた。
これに反し、当該発明の範ｓにおいてはこの考えは正し
くなくて、以前にペルオキシダーゼ法Ｋかけられた大便
サンプルにおいて人糞中に正常では存在しない人体起源
の成分を免疫学的検出することが容易に可能であること
が今やおどろくべき、ニドに！ｉ！見されたのである。
したがって、当該発明は、ペルオキシダーゼ法を実施後
に正常では人糞中に存在しない人体起源の成分を、同一
大便サンダルにおいて免疫学的に検出することを含むペ
ルオキシダーゼ法にしたがうヒトの大便サンプル中の人
潜血の検出法に関するものである。
すでに述べたように、ペルオキシダーゼ法の場合には、
たとえばベンゾジン、オルト−トルイジン、グアイアク
ムが指示薬として用いられる方法が考慮される。
正常では人糞中に存在しない人体起源の免疫学的成分で
分析されるべきものとしては、たとえば、ヒトのへそグ
四ピン、ヒトのアルブミンあるいはヒトのグロブリンが
適している。ヒトのグロブリンとしては免疫グロブリン
Ｇ、免疫グロブリンＭ。
または免疫グロブリンＡが考えられる。
これらの成分の免疫学的検出は、免疫学で既知のいかな
る方法にしたがっても実施できる。サンげウィッチ法は
、特に選ばれる方法であることが発見された。この方法
では、検出されるべき成分が、固体相に結合された特異
的抗体と標識化されているものとの２種の特異的抗体の
助けにより測定される。この用いられる抗体は、ことな
る動物の血清から得ることができるが、ことなる巣りｐ
−ン性抗体を用いることもできる０合成物質のビーズは
、固体相として特に適していることが示された。標識と
しては、＃１素が脣に逼しているが、免疫学において既
知のすべての４１ｉｖＩ＆化手段が考えられる。
しかしながら、これらの構成分の免疫学的検出はラテッ
クス凝集反応テストを用いて実施することもできる。
以下の例は本発明を例証する。
例　　１ ヒトの大便を、１００Ｆの新鮮な便につきＱ＊ｔ。
１　ｙｄ、、　　２ｗａＬ、４ｒ＊ｔ−８ｗｄ、、１６
ｍｓ！、の人血液で処理し、均質化させる。これらの大
便サンプルの各各をへらの先にとり、テストスライドＪ
　（’０１０−ｆｉｅｃｔａｌ−Ｒｏｃｈｅ−’ｌ”ｅ
ｇｔ■町の２つの室に入れて、このスライドを封じ、室
温で２日間保存する。
大便中の潜血を検出するために、［医師のみが開封すべ
きこと」というたれぶたをとりのぞき、まず最１Ｋ２０
％のエタノール（ｐ）ｉ５）を含む０．１Ｍクエン酸緩
衝溶液を１１ＩＬ続いてエタノール中３％のＨｚＯ□溶
液なｉｓ大便サンプルへ添加し、３０秒後に生ずる色彩
の強度（Ｏかも４十）を測定評価する。
引き続く、大便中ヒトグロブリンの＃素−免疫学的検出
のために、２点の大便のしみをつけた９ｍ馬巾の細片を
テストスライドからきりとり、この細片を６７℃でｐｉ
（９，５００−Ｉ　Ｍ　ＮａＨＣＯ２５社中にて３０分
間保ｉ層養する。よく混合したのち、置明で無臭、黄褐
色の抽出液を合成試験管（φ＝１ｃｔｍ）の中ヘビペッ
トでとり入れ、−６，５の０．２Ｍ燐酸ナトリウム緩衝
溶液を０．１１ＩＬｔを混和し、抗ヒトグロブリン（゛
ヒツジ）で感作したポリスチレンビーズ（４−６，５５
ｍｍｇ　）な加え、その混合物を６７℃で１時間保温培
養する。！Ｉ８合しない物質を分離したのち、この−一
ズな再び３７℃で１時間２０％のヤギ血清および２１／
ｌのウシ血清アルブミンとともに−６，５の（Ｊ、２Ｍ
＠ｇｌナトリウムー倫濤液中に溶解させた（ヤギ〕抗ヒ
トグロデリンペルオ中シダーゼ０．２．ｍＡと共に保温
培養する。
蒸溜水で６Ｎに洗滌後、免疫学的に？Ｉ８合したペルオ
キシダーゼを検出するために、このビーズを室温・で６
θ分間０．５ｄの基質緩衝ｍ液（０，１Ｍの−５，０の
クエン酸緩衝溶液と６鴫ＭのＥ１２０□および４０購Ｍ
の０−フェニレンシア建ンン中で保温培養する。Ｉ　Ｎ
ＨＣ’ｌを２ＨＬＬ加えることによって酵素反応を中止
させたのちに、ヒトグキプリン含量を確かめるために、
波長４９２　ｎｕ　（ΔＡ４９２ｎｍ／ＲＴ／３０分〕
で吸収差な測光学的に測定する・その結果は第１表に集
めである。
車供給源　ホ７マンラ　ロツシエ社、ディアグノステイ
カ、ｏ−７８８９グレンツ アツハーグアイレン（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬＩＬ　Ｒｏ
ｃｈａ　ＡＧ　［）ｉａｇｎｏｓｔｉａａ　Ｄ−７ｆ３
８９Ｇｒｅｎｚａｃｈ　−Ｗｙｈｌｅｎノ 第１表 ＃素免疫学的潜血テストの感度は、第１表から明らかで
ある。なぜならば、吸収差は人血液濃度に依存して有意
に増加しているからである。
例　　２ 人糞を１０Ｏｆの新鮮な大便につき１０ｘｆの西洋わさ
びのペルオキシダーゼおよび各側とも４ｄの（＆）人血
、ψ）ヤギの血液、（Ｑ）クシの血液、（ｄ）ウサギの
血液、（・）りマの血液で処理し、均質化する。
これらの大便サンプルをへらの先にとり、テストスライ
Ｐ　［ＣＱＩＯ−Ｈａｃｔａｌ−Ｒｏｃｈｅ−’１”ｅ
ｓｔ■」の２つのｍＫ入れて、スライｐｔｔ財じ３ｉ１
温で１日保存する。
大便中の潜血を検出するために、「医師のみが開封すべ
きこと」とあるたれぶたを散りのぞき、先ず最初ｒ−２
０％のエタノール（ｐＨ５１ｔｔｒ０．１Ｍのクエン酸
緩ａＳ液の１滴を、次にエタノール中ｆ）３％Ｈ２Ｏ２
＃液の１９を大便テンプル中に添加し、６０秒後に生成
する色彩の強度（０から４＋）を測定評価する。
大便サンプル中のヒトグロブリンのその後の酵素免疫学
的検出のために、２点の大便のじみをつけた９購調巾の
細片をテストスライ？かう切り出し、この細片を６７℃
でｐＨ９，５の０．Ｉ　Ｍ　ＮａＨＣＯ３の５　ｗｓＬ
中で３０分間保温培養する。よ（混合したのちＱ、１ｓ
ｔの澄明で赤褐色の抽出液を試験管中にピペットでとり
、ｐＨ６，５の０．２Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液の０．１
ｓｔと混和し、（ヒツジ）抗ヒトグロブリンで感作した
ポリスチレンビーズを加えて、その混合物を６７℃で１
時間保温培養する。
結合しない物質を分離した後に、このビーズを２０％の
ヤギ血清と２　ｆ／ｌのウシ血清アルデンンを含むＦ！
４６．５の燐酸ナトリウム緩衝溶液０．２Ｍ中に＃解さ
せた（ヤギ）抗−ヒドーグ四プリンペルオキシダーゼと
６７℃で１時間保温培養する。
結合しない物質を分離し、ビーズを蒸溜水で３回洗滌し
、続いて、免疫学的に結合したベルオキシダーぜの定量
分析のために！ｆｆｌで３０分間、０．５ｗｒＬの基質
緩衝溶液（６１１１ＭのＨ２Ｏ２と４０　肩Ｍの０−）
ユニしンゾアンンを含む−５，０の０．１Ｍクエン酸緩
衝溶液）の中で保温培養する。２Ｔｍｔ０１ＮＨＣ１を
加えることにより＃素反応を中止させた後に、ヒトのグ
ロブリンの含量を確かめるために波長４９２ｎ１ｍで吸
収差を測光学的に測定する。その結果は第１表に集めら
れている。
第　璽　表 ＃素免疫学的潜血テストの特異性は第１表から明白であ
る。なぜならば、人血液を含むサンプルのみが吸収差の
有意の増加を示しているのに対し、動物の血液またはペ
ルオ中７ダーゼ（人血液を含まぬ）を含むサンダルは、
そのような増加を示さず、それでも色調上の強度だけは
示しているからである。
代理人　浅　村　　　　皓 外４名

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）　　ペルオ中シダーゼ法を実施後に、人糞中に正
    常では存在しない人体起源の成分を同一糞便標本におい
    て免疫学的に検出することからなるペルオキシダーゼ法
    による人糞標本中の人潜血の検出方法。
  2. （２）ペルオ中シダーゼ法がベンゾジン、０−トルイジ
    ン、あるいはグアイアクムを指ボ薬として用いて実施さ
    れる４＃詐請求の範囲第１項に従う方法。
  3. （３）　　ヒトのヘモグロビン、ヒトのアルブミンある
    いはヒトのグロブリンが正常では人糞中に存在しない成
    分として、免疫学的（検出される特許請求の範囲第１項
    に従う方法。
  4. （４）　　ヒトのグロブリンが免疫グロブリンＧ、免疫
    グロブリンＭあるいは免疫グロブリンＡである特許請求
    の範囲第３項に従う方法。
  5. （５）　　正常では人糞中に存在しない成分の免疫学的
    検出がサンドウィッチ法にしたがって実施される特許請
    求の範囲＠１項から第４項までのいずれか一つに従う方
    法。
  6. （６）　　サンドウィッチ法において、ことなる動物を
    免疫することにより得られた２種の特異的抗体を用い、
    その１つは固体相に結合しており、他の１つはｌ１ｌｌ
    Ｉ化されている特許請求の範囲第５項に従う方法。
  7. （７）その固体相が合成物質のビーズからなる特許請求
    の範囲第６項に従う方法。
  8. （８）その抗体が酵素で標識化されている特＃ｆ＃ＩＩ
    求の範囲第６項に従う方法。
  9. （９）　　その酵素がペルオキシダーゼである特許請求
    の範囲第８項に従う方法。
JP57123753A 1981-07-16 1982-07-15 人潜血の検出方法 Granted JPS5823796A (ja)

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CH4673/81-6 1981-07-16
CH467381 1981-07-16

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JPS5823796A true JPS5823796A (ja) 1983-02-12
JPH0132947B2 JPH0132947B2 (ja) 1989-07-11

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JP (1) JPS5823796A (ja)
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AU (1) AU541099B2 (ja)
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