CN107796945B - 粪便样品处理、大便隐血检测方法及试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及粪便样品处理、大便隐血检测方法及试剂盒。粪便样品处理方法包括用便纸采集粪便，并使便纸上带有的残留粪便与蛋白液或蛋白粉或表面活性剂混合的步骤。在提供待检测粪便样品的过程中，使粪便与蛋白液或蛋白粉或表面活性剂混合使得粪便中可能存在的血液尽可能地处于游离状态，而不受样品混合物中其它物质的影响，从而使得检测灵敏度得以提高。

Description

粪便样品处理、大便隐血检测方法及试剂盒
技术领域
本发明一般涉及肠道疾病检测领域。
背景技术
多种肠道疾病尤其是消化道恶性肿瘤(如大肠癌、息肉和腺瘤)可能引起大便隐血。大便隐血是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。发现大便隐血可初步确定肠道疾病的存在，结合其它检测手段可具体诊断所患肠道疾病。但是，由于大便隐血的上述特点，需采用灵敏度较高的手段来进行大便隐血检测，例如化学方法或免疫化学方法。
大肠癌是世界上的高发及高死亡率的癌症之一。由于生活水平的提高和西方化，近年在中国大肠癌的发病率和死亡率都在迅速增长，致使大肠癌成为中国三大癌症之一。其发病率正以4.2％的速度螺旋递增，远超2％的国际水平。有研究表明，中国大肠癌发病年龄以40至60岁之间居多，平均发病年龄为48.3岁，比西方人足足早了10至15年，青年患者比欧美更为多见，30岁以下的大肠癌患者并不少见。为此中国国家癌症预防和控制发展计划把大肠癌的早期预防与控制制定为最紧迫的项目之一。
大肠癌的治疗成功率与分期有密切关系。早期肿瘤局限在肠壁的患者术后5年的生存率达91％，已有淋巴结转移或周围组织转移时为70％，有远处转移者5年生存率降至11％。所以提高早期珍断率是减少死亡率及延长生存时间的重要因素之一。大肠癌生长很慢，潜伏期较长。绝大多数的大肠癌由早期的良性病变腺瘤开始到恶性肿瘤的形成需要数年甚至十年的漫长过程，这给大肠癌提供了早期诊断、早期治疗的机会。北美、欧洲及其它地区的实践证明大肠癌普查可以有效地降低由大肠癌引起的死亡率。
在过去的几十年中，多种可以用于大规模人群的大肠癌早期检测方法被人们应用。最常用的检测方法是结肠镜检查和大便隐血检测。结肠镜检查是目前诊断大肠癌最准确和最可靠的检查方法，但结肠镜检查技术要求 高，病人在检查前要清洗肠道(很痛苦)和接受麻醉，致使病人的接受率低。结肠镜检查的另一缺点是费用高。目前结肠镜检查只在美国用作大肠癌的普查方法。其它国家都采用大便隐血检测。
美国研究表明，每年进行大便隐血检测，可使大肠癌死亡率降低33％。除大肠癌，一些肠胃疾病也会引起出血，所以大便隐血检测阳性后需要用结肠镜做进一步检查。但大便隐血检测方便便宜，所以被世界大多地区用为大肠癌普查方法，在中国个别省市(如上海和广州)也开始用大便隐血检测推广大肠癌的早期检测。
大便隐血检测的第一步是粪便的采集。由于需要避免尿液的干扰，通常的采样方法是将一张塑料膜或一容器放置于便器之上或地上，排便后用采样棒在三个不同的部位取样或用采样刷在粪便表面刷动取样。这样的采样方式不仅需要事先安排和特殊装置使尿便分开，而且还需要和粪便有近距离接触，这对人的视觉、嗅觉和心理都产生极大的排斥力。加之大便隐血检测一般要求重复1到2次，这使人们参与筛查的积极性大大降低，阻止了大便隐血检测的广泛应用。
本领域仍然需要改进的从粪便中提取肉眼和显微镜下均不能证实的出血的方法和试剂盒。
发明内容
本发明人出人意料地发现，在提供待检测粪便样品的过程中，使粪便与蛋白液、蛋白粉或表面活性剂混合可以阻止其它物质(特别是便纸)对血液的吸收，使得粪便中可能存在的血液尽可能地处于游离状态，从而提高检测的灵敏度。同时，试验表明，蛋白粉、蛋白液或表面活性剂本身不会对检测结果产生不利影响。在此基础上，完成了本发明。
因此，根据本发明的第一方面，提供了提供待检测粪便样品的方法，其包括用便纸采集粪便，并使便纸上带有的残留粪便与蛋白液、蛋白粉或表面活性剂混合的步骤。
根据本发明的第二方面，提供了大便隐血检测方法，其包括：
1)根据本发明第一方面所述的方法提供待检测粪便样品；和
2)采用选自以下的检测方法进行大便隐血检测：化学大便隐血检测(如愈创木脂测试)、免疫化学大便隐血检测(如胶体金法、胶乳凝集免 疫比浊法(Latex AgglutinationImmuno-turbidimetry)或磁性凝集法(Magnetic Agglutination))、转铁蛋白检测及血红蛋白检测。
根据本发明的第三方面，提供了用于提供待检测粪便样品的试剂盒，其包含蛋白液、蛋白粉或表面活性剂和任选地大便隐血检测装置。当包含大便隐血检测装置时，本发明的试剂盒为大便隐血检测试剂盒。
根据本发明的有利的方面，大便隐血检测装置为采用选自以下的检测方法进行大便隐血检测的大便隐血检测装置：化学大便隐血检测(如愈创木脂测试)、免疫化学大便隐血检测(如胶体金法、胶乳凝集免疫比浊法或磁性凝集法)、转铁蛋白检测及血红蛋白检测。
根据本发明的第四方面，提供了蛋白液、蛋白粉或表面活性剂在制备用于提供待检测粪便样品的试剂盒中的用途。
本发明提供待检测粪便样品的方法可以实现以下至少一种有益效果：
1)使得粪便中可能存在的血液尽可能地处于游离状态，而不受样品混合物中其它物质的影响，从而使得检测灵敏度得以提高；
2)简化检测过程中的采样手续；
3)降低由与粪便的直接接触所引起的厌恶感及排斥力；
4)即使粪便样品经过了一段时间的干燥，仍能进行大便隐血检测，亦即，省去了必须在检测前规定时间内获取粪便样品的必要性。
附图说明
下文将仅以举例的方式并参照附图描述本发明的实施方案，其中：
图1示出了根据本发明一优选实施方案的家用大便隐血检测试剂盒的组成。
图2示出了根据本发明一实施方案进行大便隐血检测的示意图。
图3示出了根据本发明另一实施方案进行大便隐血检测的示意图。
具体实施方式
在以下的说明中，包括某些具体的细节以对各个公开的实施方案提供全面的理解。然而，相关领域的技术人员会认识到，不采用一个或多个这 些具体的细节，而采用其它方法、部件、材料等的情况下可实现实施方案。
除非本公开内容中另外要求，在整个说明书和其后的权利要求书中，词语“包含”、“包括”应解释为开放式的意义，即“包括但不限于”。
在整个本说明书中提到的“一个实施方案”或“实施方案”或“在另一个实施方案中”或“在某些实施方案中”意指在至少一个实施方案中包括与该实施方案所述的相关的具体参考要素、结构或特征。因此，在整个说明书中不同位置出现的短语“在一个实施方案中”或“在实施方案中”或“在另一个实施方案中”或“在某些实施方案中”不必全部指同一实施方案。此外，具体要素、结构或特征可以任何适当的方式在一个或更多个实施方案中结合。
应当理解，在本说明书和附加的权利要求书中用到的没有数量词修饰的名词包括多个所指对象，除非文中另外明确地规定。因此，例如提到的包括“FIT检测试纸”的反应包括一个/种FIT检测试纸，或两个/种或更多个/种FIT检测试纸。还应当理解，术语“或”通常以其包括“和/或”的含义而使用，除非文中另外明确地规定。
下面，参照附图对本发明的实施方式进行描述。
大便隐血检测分两种：化学大便隐血检测(Fecal Occult Blood Test，FOBT)和免疫化学大便隐血检测(Fecal Immunochemical Test，FIT)。FOBT发明得早，最先被用于大肠癌的早期检测。大量的临床实验表明以FOBT大肠癌的早期检测为先，而后FOBT阳性者接受结肠镜检查可以降低由大肠癌引起的死亡率15％至33％。因此欧洲和美国的健康机构推荐每年一次FOBT为大肠癌早期筛查方法之一。FOBT也被亚太工作组(APWGCG)推荐为财力有限国家与地区大肠癌早期筛查方法的首选。在中国，卫生部提出了一个以FOBT和危险因素问卷为首、阳性者接受结肠镜检查为辅的大肠癌早期筛查方案。虽然FOBT在大肠癌早期筛查中十分有效，但其灵敏度和准确度相对较低，测试前有食品药物禁忌要求(不能吃红肉、萝卜等蔬菜水果、维生素C和阿司匹林等药物)。较新的FIT检测方法的灵敏度和准确度比FOBT提高了不少，而且没有食品药物忌食要求。美国的最新研究表明，在资源有限的环境下，参与FIT检测的人群比参与结肠镜检查的人群多八倍。为此而减少的大肠癌死亡人数为结肠镜检查组的四倍。因此，FIT在逐步取代FOBT成为大便隐血检测的首选。
改善FOBT和FIT过程中的粪便采集方式以降低排斥力可以大大提高 人们参与筛查的积极性。
本发明的第一方面提供了提供待检测粪便样品的方法，其包括用便纸采集粪便，并使便纸上带有的残留粪便与蛋白液、蛋白粉或表面活性剂混合的步骤。
本发明人出人意料地发现，在提供待检测粪便样品的过程中，使粪便与蛋白液、蛋白粉或表面活性剂混合可以阻止其它物质(特别是便纸)对血液的吸收，使得粪便中可能存在的血液尽可能地处于游离状态，从而提高检测的灵敏度。同时，试验表明，蛋白粉、蛋白液或表面活性剂本身不会对检测结果产生不利影响。
在一个实施方案中，直接将乳汁用作蛋白液。哺乳动物的乳汁均可用于本发明。示例性的哺乳动物包括牛、羊、马、驴、狗、猪等。
在一个实施方案中，通过将乳汁与含水液体混合来配制蛋白液。哺乳动物的乳汁均可用于本发明。示例性的哺乳动物包括牛、羊、马、驴、狗、猪等。
在一个实施方案中，直接将血清用作蛋白液。动物的血清均可用于本发明。示例性的动物包括牛、羊、马、驴、狗、猪、鸡、鸭、鹅、兔、鼠等。
在一个实施方案中，通过将血清与含水液体混合来配制蛋白液。动物的血清均可用于本发明。示例性的动物包括牛、羊、马、驴、狗、猪、鸡、鸭、鹅、兔、鼠等。
在一个具体的实施方案中，所使用的含水液体为纯净水。
在另一个具体的实施方案中，所使用的含水液体为盐水。
在一个具体的实施方案中，所使用的乳汁为牛奶。
在另一个具体的实施方案中，所使用的乳汁为羊奶。
在另一个实施方案中，通过将蛋白粉与含水液体混合来配制蛋白液。在该实施方案中，蛋白粉可以是动物蛋白粉、植物蛋白粉或其混合物。
在一个具体的实施方案中，动物蛋白粉由动物的血清制得。
在另一个具体的实施方案中，动物蛋白粉由动物的血清白蛋白制得。
在另一个具体的实施方案中，动物蛋白粉由明胶制得。可用于本发明的明胶可由动物的皮或骨头制得。
示例性的动物包括牛、羊、马、驴、狗、猪、鸡、鸭、鹅、兔、鼠等。
在另一个具体的实施方案中，动物蛋白粉由哺乳动物的乳汁制得。示例性的哺乳动物包括牛、羊、马、驴、狗、猪等。
在另一个具体的实施方案中，植物蛋白粉由豆类种子制得。示例性的豆类种子包括大豆、绿豆、豌豆、赤豆和黑豆。含有蛋白质的其它植物的种子也可用于制备本发明所用的蛋白粉，例如蚕豆、芸豆、刀豆、小麦、糙米、瓜子、花生、核桃、菜籽、大麻、奇亚籽等。
在一个实施方案中，当通过将蛋白粉与含水液体混合来配制蛋白液时，蛋白粉按重量计大于蛋白液的0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％。蛋白粉的浓度上限没有限制，但是按重量计可以低于蛋白液的20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％或10％。在一些具体的实施方案中，蛋白粉的浓度按重量计还可以低于蛋白液的9％、8％、7％、6％或5％。
在一个实施方案中，当通过将乳汁或血清与含水液体混合来配制蛋白液时，乳汁或血清的添加量按体积计大于含水液体的0.8％、0.9％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％、5.0％、6.0％、7.0％、8.0％或9.0％。乳汁的浓度上限没有限制，因为本领域技术人员能够理解，乳汁的固体含量通常为12％左右，向含水液体中加入无论多少乳汁，所得到的蛋白液的固体含量也不会超过该值。血清的浓度上限也没有限制，但是按体积计可以低于蛋白液的20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％或10％。
通过采用便纸上带有的残留粪便提供待检测粪便样品，与传统的粪便采集方法相比，简化了检测过程中的采样手续，而且降低了由与粪便的直接接触所引起的厌恶感及排斥力。这种采样方式获得的样品量可能较少，但是采用本发明的处理方法仍能进行检测，原因在于本发明的处理方法可以提高检测的灵敏度。
在这样的实施方案中，直接利用人类正常排便过程中便纸上残留的粪便提供待检测粪便样品。具体地，可将用过的带有残留粪便的便纸放入含有配制好的提取液(含蛋白质或表面活性剂)的容器中，然后可以通过搅拌或快速摇晃将粪便中的血液释放至提取液中以用于大便隐血检测。或者，可将用过的带有残留粪便的便纸放入容器中，先加入蛋白粉、乳汁、血清或表面活性剂，然后加入含水液体，再通过搅拌或快速摇晃将粪便中的血液释放至提取液中以用于大便隐血检测。也可以先将蛋白粉、乳汁、血清或表面活性剂加入容器中，再放入带有残留粪便的便纸，然后加入含 水液体。简言之，蛋白粉、乳汁、血清或表面活性剂，带有残留粪便的便纸和含水液体的加入顺序不受限制，对检测结果没有不利影响。蛋白粉、乳汁、血清或表面活性剂，带有残留粪便的便纸和含水液体的加入顺序包括在本发明的使粪便与蛋白液、蛋白粉或表面活性剂混合的步骤中。
在一个具体的实施方案中，所使用的表面活性剂为阴离子表面活性剂。可用于本发明的阴离子表面活性剂的实例为脂肪酸盐表面活性剂，如肥皂、N-油酰基多缩氨基酸钠(或称为N-烷酰基多肽)等；磺酸盐型阴离子表面活性剂，如烷基苯磺酸盐(如烷基苯磺酸钠，如四聚丙烯苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠等)、α-烯烃磺酸盐、烷基磺酸盐、α-磺基单羧酸酯(如α-磺基脂肪酸甲酯)、脂肪酸磺烷基酯(如油酰氧基乙磺酸钠)、脂肪酸磺烷基酰胺(如N-油酰基N-甲基牛磺酸钠)、琥珀酸酯磺酸盐(包括琥珀酸单酯磺酸盐和双酯磺酸盐，如琥珀酸二异辛酯磺酸钠)、烷基萘磺酸盐(如二丁基萘磺酸钠)或烷基萘磺酸盐的甲醛缩合物、石油磺酸盐、木质素磺酸盐、烷基甘油醚磺酸盐、对甲氧基脂肪酰胺基苯磺酸钠等；硫酸酯盐型阴离子表面活性剂，包括脂肪醇硫酸酯盐(如十二烷基硫酸钠、脂肪醇硫酸酯单乙醇胺盐)、仲烷基硫酸酯盐、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸酯盐、脂肪酸衍生物的硫酸酯盐(如土耳其红油)、不饱和醇的硫酸酯盐；磷酸酯盐型阴离子表面活性剂，如烷基磷酸单/双酯盐和醇醚、酚醚的磷酸酯盐。
在一个更具体的实施方案中，所使用的阴离子表面活性剂为脂肪醇硫酸酯盐。
在一个更具体的实施方案中，所使用的阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠。
在一个具体的实施方案中，所使用的表面活性剂为非离子表面活性剂。可用于本发明的非离子表面活性剂的实例为烷基酚聚氧乙烯醚(如壬基酚的聚氧乙烯醚和辛基酚的聚氧乙烯醚)、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸甲酯聚氧乙烯醚(如月桂醇聚氧乙烯醚、12-14碳伯醇聚氧乙烯醚、12-14碳仲醇聚氧乙烯醚、支链化13碳格尔伯特醇聚氧乙烯醚、支链化10碳格尔伯特醇聚氧乙烯醚、直链的10碳醇聚氧乙烯醚、直链的8碳辛醇聚氧乙烯醚、直链的8碳异辛醇聚氧乙烯醚)、脂肪酸甲酯聚氧乙烯醚、斯潘系列、吐温系列(如吐温20(TWEEN-20)、吐温21(TWEEN-21)、吐温40(TWEEN-40)、吐温60(TWEEN-60)、吐温61(TWEEN-61)、吐温80(TWEEN-80)、吐温81(TWEEN-81)、吐温85(TWEEN-85))、脂肪酸聚氧乙烯醚系列。
在一个更具体的实施方案中，所使用的非离子表面活性剂为吐温系列。
在一个更具体的实施方案中，所使用的非离子表面活性剂为吐温20。
本领域技术人员能够理解，在本发明的提供待检测粪便样品的方法中，各种材料和试剂(粪便，蛋白液、蛋白粉或表面活性剂，以及任选的含水液体)向容器中的加入顺序对于检测结果不会产生不利影响。
在表面活性剂为固体的实施方案中，表面活性剂的浓度按重量计大于含水液体的0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％。固体表面活性剂的浓度上限没有限制，但是按重量计可以低于含水液体的5.0％、4.0％、3.0％、2.0％、1.0％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％或0.4％。
在表面活性剂为液体的实施方案中，表面活性剂的浓度按体积计大于含水液体的0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％。液体表面活性剂的浓度上限没有限制，但是按体积计可以低于含水液体的5.0％、4.0％、3.0％、2.0％、1.0％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％或0.4％。
本发明人还出人意料地发现，即使是排便后经过一段时间，便纸上的粪便已经干燥，也能通过在提取时添加表面活性剂来促使粪便中的血液处于游离状态。因此，通过在提取时添加表面活性剂，可以使得待检测粪便的采样方式更加多样化，也避免了必须在临检测前规定时间内采样所带来的不便，从而提高公众进行大便检测的顺应性和积极性。
在一个具体的实施方案中，便纸为经上文所述的蛋白液或表面活性剂预处理的便纸。与未经预处理的便纸相比，经蛋白液或表面活性剂预处理的便纸本身就阻止了粪便中血液对便纸的吸附，检测灵敏度得以进一步提高。可以使用本领域技术人员公知的方式对便纸进行预处理，如经蛋白液和含表面活性剂的含水液体浸渍或喷洒然后干燥。或者，可以将蛋白粉和固体表面活性剂置于两层或更多层便纸之间。
本发明的第二方面提供了大便隐血检测方法，其包括：
1)根据本发明第一方面的方法提供待检测粪便样品；和
2)采用选自以下的检测方法进行大便隐血检测：化学大便隐血检测(如愈创木脂测试)、免疫化学大便隐血检测(如胶体金法、胶乳凝集免疫比浊法(Latex AgglutinationImmuno-turbidimetry)或磁性凝集法 (Magnetic Agglutination))、转铁蛋白检测及血红蛋白检测。
在一个实施方案中，大便隐血检测装置为FOBT检测试纸或仪器。
在另一个实施方案中，大便隐血检测装置为FIT检测试纸或仪器。
本发明的第三方面提供了用于提供待检测粪便样品的试剂盒，其包含蛋白液、蛋白粉或表面活性剂。该试剂盒中所含的蛋白液、蛋白粉或表面活性剂如上文所述。
在一个实施方案中，用于提供待检测粪便样品的试剂盒还包含采用选自以下的检测方法进行大便隐血检测的大便隐血检测装置：化学大便隐血检测(如愈创木脂测试)、免疫化学大便隐血检测(如胶体金法、胶乳凝集免疫比浊法或磁性凝集法)、转铁蛋白检测及血红蛋白检测。在一个具体的实施方案中，大便隐血检测装置为FOBT检测试纸或仪器。在另一个实施方案中，大便隐血检测装置为FIT检测试纸或仪器。当试剂盒包含大便隐血检测装置时，试剂盒为大便隐血检测试剂盒。
在一个实施方案中，用于提供待检测粪便样品的试剂盒还包含便纸。在一个具体的实施方案中，便纸为经上文所述的经预处理的便纸。
在一个实施方案中，用于提供待检测粪便样品的试剂盒还包含用于盛装含水液体的容器。该容器可以装有含水液体，或者不装含水液体而在测试时另行加入含水液体。容器中自带或另行加入的含水液体的体积可以为5至40毫升。如实施例5所证实的，可以通过适当减小容器中含水液体的体积来提高检测的灵敏度。在一个具体的实施方案中，所使用的含水液体为纯净水。在另一个具体的实施方案中，所使用的含水液体为盐水。
如图1所示，家用大便隐血检测试剂盒可以包含1至3个带有盖子的容器、1至3张便纸、1至3袋蛋白粉以及1至3条FIT检测试纸。当然，图1中的蛋白粉也可以替换为表面活性剂或者蛋白粉与表面活性剂的混合物。
在使用上述图1所示的试剂盒进行大便隐血检测时，无需特殊装置，也无需事先安排粪便采集。使用时，如图2所示，将蛋白粉倒入含有含水液体的容器，正常排便后，用试剂盒里提供的便纸正常清理肛门，并将带有残留粪便的便纸放入容器，混匀后用FIT检测试纸检测即可。
在上述试剂盒中，容器中可以直接装入通过将蛋白粉与含水液体混合而配制的提取液。
作为实例，医院用或专业用大便隐血检测试剂盒可以包含卡片、便纸和信封。
在使用上述医院用或专业用试剂盒进行大便隐血检测时，如图3所示，使用者可将含有残留粪便的便纸及填好的卡片放入信封后送交或寄送至医院。在医院，检测人员将带有残留粪便的便纸放入提取液(即上文所述蛋白液或包含表面活性剂的含水液体)的容器。检测人员可借用搅拌棒将便纸和提取液完全混合或将盖严的容器快速摇晃使便纸和提取液完全混合，然后将容器盖打开，使用FIT检测试纸或自动检测仪器进行隐血检测。
搅拌棒可以是直的或L型或T型，容易使用，小巧容易包装，大约10至20厘米长。
容器内提取液的体积可以为3至40毫升，用于调节检测的灵敏度。容量越大灵敏度越低。
试剂盒的包装包括外盒和内衬以防止邮寄运输时外部挤压导致试剂破损。外盒顶部有卡口，卡口可以自身扣紧密。
本发明的试剂盒(包括家用和专业用)使大便采集和提取变得简洁干净，极大地降低了由于和粪便近零距离接触而引起的厌恶感和排斥力，从而可以大大提高大众参与肠道疾病尤其是大肠癌筛查的意愿。家用试剂盒的使用从头到尾可以在使用者的家里进行，既可保护使用者的隐私，又能极大地降低医疗系统的负担。因此，本发明的试剂盒(包括家用和专业用)非常适用于肠道疾病尤其是大肠癌的大规模筛查。
本发明的第四方面提供了蛋白液、蛋白粉或表面活性剂在制备用于提供待检测粪便样品的试剂盒中的用途。
在一个实施方案中，蛋白液或蛋白粉为如上文所述的蛋白液或蛋白粉。
在一个实施方案中，表面活性剂为如上文所述的表面活性剂。
在一个具体的实施方案中，试剂盒为上文所述的试剂盒。
下文中，本发明将通过如下实施例进行详细解释以便更好地理解本发明的各个方面及其优点。然而，应当理解，以下的实施例是非限制性的，而且仅用于说明本发明的实施方案。
实施例
实验材料
以下实施例中所用的人血由深圳市福田区人民医院提供，牛奶粉为伊利学生营养奶粉，购自内蒙古伊利实业集团股份有限公司，大豆粉购自合肥九陌农业科技有限公司，便纸为市售纸抽产品并经过适当裁剪，FIT试纸购自安徽深蓝医疗科技有限公司，纯净水购自杭州娃哈哈集团有限公司，吐温20购自江苏省海安石油化工厂，十二烷基硫酸钠购自深圳市思美泉生物科技有限公司，牛血清购自北京平睿生物科技有限公司，牛血清白蛋白购自上海金穗生物科技有限公司，由猪皮制备的明胶购自上海北诺生物科技有限公司。
实施例1
为了确定蛋白液本身是否影响大便隐血检测的结果，发明人在不同的血液浓度和牛奶粉浓度下进行了测试。取人血、牛奶粉和10ml纯净水，按照下表1配制成含各种浓度的人血和牛奶粉的混合物，然后采用FIT检测试纸进行测试。检测结果见表1。
表1.不同的牛奶粉和血液浓度对FIT检测结果的影响
上表中，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
从表1的数据可以看出，牛奶液的存在对于大便隐血检测的结果没有产生任何不利影响。
实施例2
为了进一步确定蛋白液本身是否影响大便隐血检测的结果，发明人进一步在不同的血液浓度和大豆粉浓度下进行了测试。取人血、大豆粉和10ml纯净水，按照下表2配制成含各种浓度的人血和大豆粉的混合物，然后采用FIT检测试纸进行测试。检测结果见表2。
表2.不同的大豆粉和血液浓度对FIT检测结果的影响
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000121
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
从表2的数据可以看出，豆奶液的存在对于大便隐血检测的结果没有产生任何不利影响。
实施例3
为了确定不同浓度的蛋白粉对便纸存在下大便隐血检测结果的影响，发明人进一步测试了存在便纸、提取液中含各种浓度牛奶粉时的大便隐血检测结果。取人血、牛奶粉和10ml纯净水，按照表3配制成含各种浓度的人血、牛奶粉的混合物，放入便纸(双层，尺寸为10x20cm)，搅拌3分钟，然后采用FIT检测试纸进行测试。检测结果见下表3。
表3.便纸和各种浓度牛奶粉存在下的检测结果
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000131
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
从表3的数据可以看出：当存在便纸但提取液不合牛奶粉时，即使血液浓度高达1x10-3(v/v)也无法检出；而当存在便纸且提取液含有牛奶粉(即使浓度低至0.25％(w/v))时，血液浓度低至1x10-5(v/v)也能检出，表明牛奶粉可以阻止便纸对血液的吸收。
实施例4
实验条件同实施例3，差别仅在于蛋白粉为大豆粉。结果见下表4。
表4.便纸和各种浓度大豆粉存在下的检测结果
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000132
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000141
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
从表4的数据可以看出：当存在便纸但提取液不含大豆粉时，即使血液浓度高达1x10-3(v/v)也无法检出；而当存在便纸且提取液含有大豆粉(即使浓度低至0.25％(w/v))时，血液浓度低至1x10-5(v/v)也能检出，表明大豆粉可以阻止便纸对血液的吸收。
实施例5
实验条件同实施例3，差别仅在于由牛血清制备蛋白液。结果见下表5。
表5.便纸和各种浓度牛血清存在下的检测结果
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000142
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
从表5的数据可以看出：当存在便纸但提取液不含牛血清时，即使血液浓度高达1x10-3(v/v)也无法检出；而当存在便纸且提取液含有牛血清(即使浓度低至1％(v/v))时，血液浓度低至1x10-5(v/v)也能检出，表明牛血 清可以阻止便纸对血液的吸收。
实施例6
实验条件同实施例3，差别仅在于蛋白粉为牛血清白蛋白。结果见下表6。
表6.便纸和各种浓度牛血清白蛋白存在下的检测结果
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000151
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
从表6的数据可以看出：当存在便纸但提取液不含牛血清白蛋白时，即使血液浓度高达1x10-3(v/v)也无法检出；而当存在便纸且提取液含有牛血清白蛋白(即使浓度低至0.25％(w/v))时，血液浓度低至1x10-5(v/v)也能检出，表明牛血清白蛋白可以阻止便纸对血液的吸收。
实施例7
实验条件同实施例3，差别仅在于蛋白粉为明胶(由猪皮制备)。结果见下表7。
表7.便纸和各种浓度明胶存在下的检测结果
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000161
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
从表7的数据可以看出：当存在便纸但提取液不合明胶时，即使血液浓度高达1x10-3(v/v)也无法检出；而当存在便纸且提取液含有明胶(即使浓度低至0.25％(w/v))时，血液浓度低至1x10-5(v/v)也能检出，表明明胶可以阻止便纸对血液的吸收。
实施例8
发明人进一步研究了测试液体积对检测结果的影响。先分别将不同体积的人血(0、0.05、0.1、0.5和1.0μl)点在便纸(双层，尺寸为10x20cm)上，然后分别放入用牛奶粉和纯净水配制的含不同体积2％牛奶粉的容器，搅拌3分钟混匀后用FIT试纸进行测试。结果见下表8。
表8.测试液体积对检测结果的影响
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000162
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000171
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
可以看出，采用小体积的测试液可以提高检测的灵敏度。
实施例9
为了确定不同浓度的表面活性剂吐温20对便纸存在下大便隐血检测结果的影响，发明人进一步测试了存在便纸、提取液中含各种浓度吐温20的大便隐血检测结果。取人血、吐温20和10ml纯净水，按照表9配制成含各种浓度的人血、吐温20的混合物，放入便纸(双层，尺寸为10x20cm)，搅拌3分钟，然后采用FIT检测试纸进行测试。检测结果见下表9。
表9.便纸和各种浓度吐温20存在下的检测结果
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000172
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
从表9的数据可以看出：当存在便纸但提取液不含吐温20时，即使血液浓度高达1x10-3(v/v)也无法检出；而当存在便纸且提取液含有吐温20(即使浓度低至0.1％(v/v))时，血液浓度低至1x10-5(v/v)也能检出，表明吐温20可以阻止便纸对血液的吸收。
实施例10
实验条件同实施例9，差别仅在于表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS)。结果见下表10。
表10.便纸和各种浓度SDS存在下的检测结果
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000181
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
从表10的数据可以看出：当存在便纸但提取液不含SDS时，即使血液浓度高达1x10-3(v/v)也无法检出；而当存在便纸且提取液含有SDS(即使浓度低至0.1％(w/v))时，血液浓度低至1x10-5(v/v)也能检出，表明SDS可以阻止便纸对血液的吸收。
实施例11
发明人进一步研究了表面活性剂对干燥粪便检测结果的影响。先将0.05μl人血点在便纸(双层，尺寸为10x20cm)上，然后在室温下干燥下表11中指定的时间。然后分别放入10ml含有不同浓度的吐温20的2％牛奶粉的容器中，搅拌3分钟混匀后用FIT检测试纸进行测试。结果见下表11。
表11.吐温20对检测结果的影响
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000182
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
可以看出，即使干燥时间长达15天，在牛奶液中添加浓度低至0.1％(v/v)的吐温20也能够检测出沾在便纸上的血液，表明含吐温20的牛奶液可以提取便纸上干燥的血液。
实施例12
实验条件同实施例11，差别仅在于表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS)。结果见下表12。
表12.SDS对检测结果的影响
Figure DEST_PATH_GDA0001127697080000191
上表中，与实施例1相同，如果用FIT检测试纸检测不到血，则结果表示为阴性，反之，如果检测到血，则结果表示为阳性。
可以看出，即使干燥时间长达15天，在牛奶液中添加浓度低至0.1％(w/v)的SDS也能够检测出沾在便纸上的血液，表明含SDS的牛奶液可以提取便纸上干燥的血液。
从前述中可以理解，尽管为了示例性说明的目的描述了本发明的具体实施方案，但是在不偏离本发明的精神和范围的条件下，本领域所述技术人员可以作出各种变形或改进。这些变形或修改都应落入所附权利要求的范围。

Claims (22)

1.一种用于提供待检测粪便样品的方法，其包括用便纸正常清理肛门，并使便纸上带有的残留粪便与蛋白液、蛋白粉或表面活性剂混合的步骤，
其中所述蛋白液为血清或来自哺乳动物的乳汁，或者通过将血清或来自哺乳动物的乳汁或者所述蛋白粉与含水液体混合来配制，所述蛋白粉为动物蛋白粉、植物蛋白粉或其混合物，其中所述动物蛋白粉由血清、血清白蛋白、明胶或来自哺乳动物的乳汁制得，所述植物蛋白粉由豆类种子制得，
其中当通过将所述蛋白粉与含水液体混合来配制所述蛋白液时，所述蛋白粉为所述含水液体的0.25％至5％w/v；当通过将所述乳汁或血清与含水液体混合来配制所述蛋白液时，所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的1％至20％；
其中所述表面活性剂为脂肪醇硫酸酯盐或吐温系列，其中如果所述表面活性剂为固体，则所述表面活性剂的浓度为所述含水液体的0.1％至0.4％w/v；如果所述表面活性剂为液体，则所述表面活性剂的浓度按体积计为所述含水液体的0.1％至0.4％。
2.权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物为牛、羊、马、驴、狗或猪，所述豆类种子为大豆、绿豆、豌豆、赤豆或黑豆。
3.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白粉为所述含水液体的0.3％至5％w/v。
4.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白粉为所述含水液体的0.4％至5％w/v，所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的2.0％至20％。
5.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白粉为所述含水液体的0.5％至5％w/v，所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的3.0％至20％。
6.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白粉为所述含水液体的0.6％至5％w/v，所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的4.0％至20％。
7.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白粉为所述含水液体的0.7％至5％w/v，所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的5.0％至20％。
8.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白粉为所述含水液体的0.8％至5％w/v，所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的6.0％至20％。
9.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白粉为所述含水液体的0.9％至5％w/v，所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的7.0％至20％。
10.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白粉为所述含水液体的1.0％至5％w/v，所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的8.0％至20％。
11.权利要求1所述的方法，其中所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的9.0％至20％。
12.权利要求1所述的方法，其中所述脂肪醇硫酸酯盐为十二烷基硫酸钠，所述吐温系列为吐温20。
13.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述便纸为经所述蛋白液或表面活性剂预处理的便纸，或者在两层或更多层便纸之间具有所述蛋白粉或表面活性剂的便纸。
14.一种大便隐血检测方法，其包括：
1)根据权利要求1至13中任一项所述的方法提供待检测粪便样品；和
2)采用选自以下的检测方法进行大便隐血检测：化学大便隐血检测、免疫化学大便隐血检测、转铁蛋白检测及血红蛋白检测。
15.权利要求14所述的方法，其中所述化学大便隐血检测为愈创木脂测试，所述免疫化学大便隐血检测为胶体金法、胶乳凝集免疫比浊法或磁性凝集法。
16.一种用于提供待检测粪便样品的试剂盒，其包含蛋白液、蛋白粉或表面活性剂和采用选自以下的检测方法进行大便隐血检测的大便隐血检测装置：化学大便隐血检测、免疫化学大便隐血检测、转铁蛋白检测及血红蛋白检测，
其中，当包含所述大便隐血检测装置时，所述试剂盒为大便隐血检测试剂盒，
其中所述试剂盒还包含正常清理肛门的便纸；
其中所述蛋白液为血清或来自哺乳动物的乳汁，或者通过将血清或来自哺乳动物的乳汁或者所述蛋白粉与含水液体混合来配制，所述蛋白粉为动物蛋白粉、植物蛋白粉或其混合物，其中所述动物蛋白粉由血清、血清白蛋白、明胶或来自哺乳动物的乳汁制得，所述植物蛋白粉由豆类种子制得；
其中所述表面活性剂为脂肪醇硫酸酯盐或吐温系列；
其中当通过将所述蛋白粉与含水液体混合来配制所述蛋白液时，所述蛋白粉为所述含水液体的0.25％至5％w/v；当通过将所述乳汁或血清与含水液体混合来配制所述蛋白液时，所述乳汁或血清的添加量按体积计为所述含水液体的1％至20％；
其中所述表面活性剂为脂肪醇硫酸酯盐或吐温系列，其中如果所述表面活性剂为固体，则所述表面活性剂的浓度为所述含水液体的0.1％至0.4％w/v；如果所述表面活性剂为液体，则所述表面活性剂的浓度按体积计为所述含水液体的0.1％至0.4％。
17.权利要求16所述的试剂盒，其中所述化学大便隐血检测为愈创木脂测试，所述免疫化学大便隐血检测为胶体金法、胶乳凝集免疫比浊法或磁性凝集法。
18.权利要求16所述的试剂盒，其中所述便纸为经所述蛋白液或表面活性剂预处理的便纸，或者在两层或更多层便纸之间具有所述蛋白粉或表面活性剂的便纸。
19.权利要求16所述的试剂盒，其中所述哺乳动物为牛、羊、马、驴、狗或猪，所述豆类种子为大豆、绿豆、豌豆、赤豆或黑豆。
20.权利要求16所述的试剂盒，其中所述脂肪醇硫酸酯盐为十二烷基硫酸钠，所述吐温系列为吐温20。
21.权利要求16至20中任一项所述的试剂盒，其还包含用于盛装含水液体的容器。
22.蛋白液、蛋白粉或表面活性剂在制备用于提供待检测粪便样品的试剂盒中的用途，所述试剂盒为权利要求16至21中任一项所述的试剂盒。
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