JPS61137064A - 大腸癌の予備スクリ−ニング方法 - Google Patents
大腸癌の予備スクリ−ニング方法Info
- Publication number
- JPS61137064A JPS61137064A JP25883484A JP25883484A JPS61137064A JP S61137064 A JPS61137064 A JP S61137064A JP 25883484 A JP25883484 A JP 25883484A JP 25883484 A JP25883484 A JP 25883484A JP S61137064 A JPS61137064 A JP S61137064A
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- JP
- Japan
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- antibody
- sensitized
- carrier particles
- human
- stool
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57446—Specifically defined cancers of stomach or intestine
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は大腸癌の予備スクリーニング方法に関するもの
である。
である。
（従来の技術）
大腸癌の診断は内視鏡検査及び組織の採取検査を含む精
密検査によって行なわれるが、この検査はコストと手間
を要するところから、通例集団検診においては、まず予
備スクリーニングとして便潜血の検査が行なわれていた
。
密検査によって行なわれるが、この検査はコストと手間
を要するところから、通例集団検診においては、まず予
備スクリーニングとして便潜血の検査が行なわれていた
。
この便潜血の検査方法にはペンチノン法、グアヤツク法
、オルトトリノン法など種々の便潜血反応幹開発されて
いるが、原理的にはいずれもヘモグロビンの有するペル
オキシダーゼ様活性を利用した呈色反応が用いられてい
た。
、オルトトリノン法など種々の便潜血反応幹開発されて
いるが、原理的にはいずれもヘモグロビンの有するペル
オキシダーゼ様活性を利用した呈色反応が用いられてい
た。
（発明が解決しようとする問題点）
ところが、肉や生野菜などもイルオキシダーゼ活性を有
しているところから、この従来法で検査する場合には採
便前に食餌制限が必要であり、それにもかかわらず偽陽
性及び偽陰性が非常に多いという問題があった。その結
果、精検される者の、。
しているところから、この従来法で検査する場合には採
便前に食餌制限が必要であり、それにもかかわらず偽陽
性及び偽陰性が非常に多いという問題があった。その結
果、精検される者の、。
数が非常に多くなり、労力及びコストの両面で大。
きな問題になっていた。
（問題点を解決するための手段）
本発明者らは、このような問題点を解決して精度が高く
かつ簡便な大腸癌の予備スクリーニング方法を開発する
べく種々検討の結果、逆受身凝集反応を利用した便潜血
の検査方法を案出するに至り、この方法が大腸癌の予備
スクリーニング方法として適当であることを見出して本
発明を完成した。
かつ簡便な大腸癌の予備スクリーニング方法を開発する
べく種々検討の結果、逆受身凝集反応を利用した便潜血
の検査方法を案出するに至り、この方法が大腸癌の予備
スクリーニング方法として適当であることを見出して本
発明を完成した。
すなわち、本発明は、ヒト糞便から得た検体を、ヒトヘ
モグロビンに対する抗体を感作した担体粒子と混合し、
該混合物を静置後膣担体粒子の凝集状態を判定すること
を特徴とする大腸癌の予備スクリーニング方法に関する
ものである。
モグロビンに対する抗体を感作した担体粒子と混合し、
該混合物を静置後膣担体粒子の凝集状態を判定すること
を特徴とする大腸癌の予備スクリーニング方法に関する
ものである。
検体はヒト糞便から得たものであり、通常は糞便をＰ紙
などに塗抹してこれを一定寸法に切り取り抽出する方法
あるいは糞便を緩衝液等に溶解して上澄を採取する方法
等によって調製される。
などに塗抹してこれを一定寸法に切り取り抽出する方法
あるいは糞便を緩衝液等に溶解して上澄を採取する方法
等によって調製される。
抗体を発現させるためのヒトヘモグロビンは充分に精製
したものを用いることが重要である。この精製方法とし
ては、例えば、遠心などを利用して粗製を行なった後陰
イオン交換クロマトグラフィーを行なうのがよ、い。ヒ
トヘモグロビンにはいくつかのタイプがあるが、例えば
ヒトヘモグロビンＡを利用すればよい。
したものを用いることが重要である。この精製方法とし
ては、例えば、遠心などを利用して粗製を行なった後陰
イオン交換クロマトグラフィーを行なうのがよ、い。ヒ
トヘモグロビンにはいくつかのタイプがあるが、例えば
ヒトヘモグロビンＡを利用すればよい。
抗体は、兎、山羊、馬、モルモット、ニワ） ＩＪなど
の温血動物に体重】ゆあたり０．３〜２■程度の上記ヒ
トヘモグロビンを１〜数回背中皮下、フットノぐラド、
大腿筋等にアノ−パントとともに注射して当該動物の体
内に形成させる。抗体は充分に精製して用いるのがよく
、この精製方法としてはアフィニティークロマトグラフ
ィーが特に有効である。
の温血動物に体重】ゆあたり０．３〜２■程度の上記ヒ
トヘモグロビンを１〜数回背中皮下、フットノぐラド、
大腿筋等にアノ−パントとともに注射して当該動物の体
内に形成させる。抗体は充分に精製して用いるのがよく
、この精製方法としてはアフィニティークロマトグラフ
ィーが特に有効である。
一方、この抗体はモノクローナル抗体として取得するこ
ともできる。その場合には、マウスに前記のいずれかの
抗原をアノ−パントとともに数回腹腔等に注射し、肺臓
細胞を取り出してポリエチレングリコール等を用いてマ
ウスミエローマ細胞と融合させる。そして、この融合細
胞のなかから当°該抗体を産生ずるものをクローニング
によってモノクローン細胞として増殖させ、マウス腹腔
中で増殖させることによって単一抗体、すなわちモノク
ローナル抗体を大量に製造することができる。
ともできる。その場合には、マウスに前記のいずれかの
抗原をアノ−パントとともに数回腹腔等に注射し、肺臓
細胞を取り出してポリエチレングリコール等を用いてマ
ウスミエローマ細胞と融合させる。そして、この融合細
胞のなかから当°該抗体を産生ずるものをクローニング
によってモノクローン細胞として増殖させ、マウス腹腔
中で増殖させることによって単一抗体、すなわちモノク
ローナル抗体を大量に製造することができる。
担体粒子は間接凝集反応用のものを用いればよく、羊、
ニワトリ等の動物の赤血球、セラチア菌などの微生物菌
体、ゼラチン粒子（特開昭５７−１５３６５８号など）
、ポリスチレンラテックス、カオリン、炭末などを使用
することができる。
ニワトリ等の動物の赤血球、セラチア菌などの微生物菌
体、ゼラチン粒子（特開昭５７−１５３６５８号など）
、ポリスチレンラテックス、カオリン、炭末などを使用
することができる。
ヒトヘモグロビンに対する抗体を担体粒子に感作する方
法も一般の抗体を感作する公知の方法によればよく、例
えば、タンニン酸、ゲルタールアルデヒド、ビスノアゾ
ペンノジン、トリレンジインシアナート、ノフロロ・ジ
ニトロベンゼン、カルボソイミド類、キノン類、及び塩
化クロム等のいわゆるカッブリング剤を使用する方法あ
るいは物理吸着させる方法などによって行なうことがで
きる。
法も一般の抗体を感作する公知の方法によればよく、例
えば、タンニン酸、ゲルタールアルデヒド、ビスノアゾ
ペンノジン、トリレンジインシアナート、ノフロロ・ジ
ニトロベンゼン、カルボソイミド類、キノン類、及び塩
化クロム等のいわゆるカッブリング剤を使用する方法あ
るいは物理吸着させる方法などによって行なうことがで
きる。
こうして得られた感作粒子は通常は常法により凍結乾燥
し、復元液、希釈用液、未感作担体、非特異反応吸収剤
などと組合せて測定に供される。
し、復元液、希釈用液、未感作担体、非特異反応吸収剤
などと組合せて測定に供される。
このような試薬を用いて便潜血を測定する方法も逆受身
凝集反応を利用した測定方法の常法によればよく、例え
ばマイクロプレートのウェルに被検検体を入れてその希
釈列をつくり、各ウェルに前記の感作粒子を加えて混合
し、通常１〜２時間程度静置してこの感作粒子の凝集像
を観察し判定すればよい。この方法のほか、例えば被検
検体と感作粒子をスライド板上で混ぜ合わせ、１〜２分
後の凝集状態を判定することもできる。また、この凝集
状態は光電管を利用して自動的に判定させることもでき
る。
凝集反応を利用した測定方法の常法によればよく、例え
ばマイクロプレートのウェルに被検検体を入れてその希
釈列をつくり、各ウェルに前記の感作粒子を加えて混合
し、通常１〜２時間程度静置してこの感作粒子の凝集像
を観察し判定すればよい。この方法のほか、例えば被検
検体と感作粒子をスライド板上で混ぜ合わせ、１〜２分
後の凝集状態を判定することもできる。また、この凝集
状態は光電管を利用して自動的に判定させることもでき
る。
この判定で陽性になった被検者に対しては精密検査を行
なう。
なう。
（作用）
検体中に潜血が含まれて−るとそのへモグロビンが担体
粒子に感作された抗体と抗原−抗体反応して該担体粒子
を凝集させる。
粒子に感作された抗体と抗原−抗体反応して該担体粒子
を凝集させる。
（実施例）
抗体感作担体粒子の製造例
ＡＣＤ加ヒト血液４Ｑａｕを生理食塩水で洗浄し、白血
球層を除去した。２倍量のトリス−塩酸緩衝液（μ＝０
．０５ 、 ＰＨ８，０）を加えて溶血させ、１０００
０Ｘｇで３０分間遠心して血球及び血球破壊物を除去し
、ヘモグロビンの濃厚画分を分取した。この画分を予め
トリス−塩酸緩衝ｉ（μ＝０．０５ 、 、、）Ｉ８．
０ ）で平衡化しておいたＤＥＡＥセファデックスＡ−
５０に流してクロマトグラフィーを行ない、ヘモグロビ
ンＡ画分を分取した。
球層を除去した。２倍量のトリス−塩酸緩衝液（μ＝０
．０５ 、 ＰＨ８，０）を加えて溶血させ、１０００
０Ｘｇで３０分間遠心して血球及び血球破壊物を除去し
、ヘモグロビンの濃厚画分を分取した。この画分を予め
トリス−塩酸緩衝ｉ（μ＝０．０５ 、 、、）Ｉ８．
０ ）で平衡化しておいたＤＥＡＥセファデックスＡ−
５０に流してクロマトグラフィーを行ない、ヘモグロビ
ンＡ画分を分取した。
この画分を兎に１羽あたりヘモグロビンＡ。の量として
０．５ｍ９７回を５回注射して免疫させ、抗血清を得た
。
０．５ｍ９７回を５回注射して免疫させ、抗血清を得た
。
リン酸緩衝生理食塩水で予め平衡化したニワトリヘモグ
ロビン−セファロース４Ｂカラムにこの抗血清を流して
その未吸着画分を得た。これをヒトヘモグロビンＡ −
セファロース４Ｂカラムに流して吸着成分を溶出させた
。この溶出液をセフ了デックスＧ−１００カラムに流し
、低、Ｈ溶液で溶出した。溶出させる抗体画分を集めて
０．０１ Ｍ ＩＪン酸緩衝生理食塩水に対して透析し
た。次に、ニワトリ固定血球を加えて遠心し、遠心上清
を感作源の抗体とした。
ロビン−セファロース４Ｂカラムにこの抗血清を流して
その未吸着画分を得た。これをヒトヘモグロビンＡ −
セファロース４Ｂカラムに流して吸着成分を溶出させた
。この溶出液をセフ了デックスＧ−１００カラムに流し
、低、Ｈ溶液で溶出した。溶出させる抗体画分を集めて
０．０１ Ｍ ＩＪン酸緩衝生理食塩水に対して透析し
た。次に、ニワトリ固定血球を加えて遠心し、遠心上清
を感作源の抗体とした。
この抗体をタンニン酸法によりニワトリ固定血球に感作
し、凍結乾燥した。
し、凍結乾燥した。
実施例１
８５９人について集団検診を行なった。
各被検者の糞便をＦ紙（東洋２紙Ｎ００７）に塗抹し、
パンチャーにて円板状に切り取った。これを０，０１
Ｍリン酸緩衝液ＰＨ７，２に浸漬し、２ 希釈列を調装
した。この希釈列に前記製造例で得た抗体感作血球を加
え、室温で２０分間放置後凝集状態を判定して、希釈倍
率が２３以上でまだ凝集する検体を陽性とした。
パンチャーにて円板状に切り取った。これを０，０１
Ｍリン酸緩衝液ＰＨ７，２に浸漬し、２ 希釈列を調装
した。この希釈列に前記製造例で得た抗体感作血球を加
え、室温で２０分間放置後凝集状態を判定して、希釈倍
率が２３以上でまだ凝集する検体を陽性とした。
その結果、８５９例中９例が陽性となり、この陽性とな
った被検者について精検を行なったところ、大腸癌患者
２例及びポリープ保有者４例が含まれていた。
った被検者について精検を行なったところ、大腸癌患者
２例及びポリープ保有者４例が含まれていた。
一方、同じ検体について従来法であるヘモカルト■法で
測定したところ、８５９例中７１例が陽性になり、この
７１例について精検を行なったとごろ、太陽癌患者０例
、ポリープ保有者８例であった。
測定したところ、８５９例中７１例が陽性になり、この
７１例について精検を行なったとごろ、太陽癌患者０例
、ポリープ保有者８例であった。
本発明法による陽性者９例及び従来法によるポリープ保
有者８例の精検結果を下記に示す。
有者８例の精検結果を下記に示す。
本発明法陽性例
ポリープ Ｓ ６〜７ ｒｒａ
ｍ ＋ｔｔ Ｒ７〜８槙
■ −未 定
な し痔 −−ｍ− ポリープ ＲＳ 米粒大 ■
−／／ Ｓ ５〜６闘
−癌 Ｃ約３ｃｒｎ ボールマン２
型 −正 常 −−−什 癌 Ｓ 約４ｃｆｎ ボールマン
２型 −従来法ポリープ例 診断 部位 サイズ タイプ 本発明法結
果 ポリープ Ｒ米粒大 ■ −〃
Ｓ ６〜７■ ｍ ＋〃 Ｓ〜Ｄ
３順 ｒ −〃 Ｓ ２〜３
＋ｎｍ −〃 Ｓ 約５ｍ
［１− ／／ Ｒ約２ｍ Ｖ ± １／ Ｓ 米粒大 −〃
Ｒ〃
一実施例２ 外来患者２３９例について実施例１と同様にして検査を
行なったところ、本発明法では１２例がそして従来法の
へモカルト■法では１７例が陽性になった。
ｍ ＋ｔｔ Ｒ７〜８槙
■ −未 定
な し痔 −−ｍ− ポリープ ＲＳ 米粒大 ■
−／／ Ｓ ５〜６闘
−癌 Ｃ約３ｃｒｎ ボールマン２
型 −正 常 −−−什 癌 Ｓ 約４ｃｆｎ ボールマン
２型 −従来法ポリープ例 診断 部位 サイズ タイプ 本発明法結
果 ポリープ Ｒ米粒大 ■ −〃
Ｓ ６〜７■ ｍ ＋〃 Ｓ〜Ｄ
３順 ｒ −〃 Ｓ ２〜３
＋ｎｍ −〃 Ｓ 約５ｍ
［１− ／／ Ｒ約２ｍ Ｖ ± １／ Ｓ 米粒大 −〃
Ｒ〃
一実施例２ 外来患者２３９例について実施例１と同様にして検査を
行なったところ、本発明法では１２例がそして従来法の
へモカルト■法では１７例が陽性になった。
この湯性者全員に精検を行なった結果を下記に示す。
本発明法 従来法 診 断
＋（２９） 大腸癌
＋ （２’） 十 直腸癌
＋（２１０） 十 胃 潰 瘍（アクテ
ィブ）＋ （２’） −）−ｕ
ｔｔ＋ （２） ＋ ｔｔ
ｔｔ＋（２３） 大腸ポ
リープ＋（２２）＋〃 ＋ （２） 直腸肛門炎＋（２６）
出血性大腸炎＋（２）
外痔核 ＋（２） 十 胃腸出血 ＋（２３） 〜 異常なし −十 大腸ポリープ −十〃 −士 オスシー病 −士 異常なし 一十〃 一＋〃 一＋〃 一＋〃 −± 〃 一＋〃 一十〃 実施例３ 約５０００人について集団検診を行ない、従来法のへモ
カルト法で便潜血を調べたところ１１１５人が陽性にな
った。この１１１５人について実施例１と同様にして本
発明法で検査したところ陽性になったのは５４人のみで
あった。
ィブ）＋ （２’） −）−ｕ
ｔｔ＋ （２） ＋ ｔｔ
ｔｔ＋（２３） 大腸ポ
リープ＋（２２）＋〃 ＋ （２） 直腸肛門炎＋（２６）
出血性大腸炎＋（２）
外痔核 ＋（２） 十 胃腸出血 ＋（２３） 〜 異常なし −十 大腸ポリープ −十〃 −士 オスシー病 −士 異常なし 一十〃 一＋〃 一＋〃 一＋〃 −± 〃 一＋〃 一十〃 実施例３ 約５０００人について集団検診を行ない、従来法のへモ
カルト法で便潜血を調べたところ１１１５人が陽性にな
った。この１１１５人について実施例１と同様にして本
発明法で検査したところ陽性になったのは５４人のみで
あった。
（発明の効果）
本発明の方法によれば、便潜血を高感度でかつ正確に検
出することができ、再現性も良好である。
出することができ、再現性も良好である。
ま・た、偽陽性、偽陰性の問題もなく、測定結果に信頼
性が高い。その結果、精検者の数を大巾に少なくでき、
労力及びコストを軽減できるとともに、多くの者に不要
の精検を受ける苦痛から解放することができる。従来法
と異なり事前の食餌制限も不要であるので視検者に負担
を負わせることもない。本発明の方法は操作も簡単であ
り、短時間に大量の検体を測定できるものである。
性が高い。その結果、精検者の数を大巾に少なくでき、
労力及びコストを軽減できるとともに、多くの者に不要
の精検を受ける苦痛から解放することができる。従来法
と異なり事前の食餌制限も不要であるので視検者に負担
を負わせることもない。本発明の方法は操作も簡単であ
り、短時間に大量の検体を測定できるものである。
手続補正音（１泌）
昭和５９年１２月２４日
特許庁長官 志 賀 学 殿
２発明の名称
大腸癌の予備スクリーニング方法
３補正をする者
事件との関係 特許出願人
名称 富士レビオ株式会社
４代 理 人
居所 〒１０４東京都中央区八丁堀三丁目２１番３−
６０７号電話 （０３） ５５５−００２２ 焙 氏名 弁理士 （８５１０） １）中 政 活５補正
の対象 ６補正の内容 明細書第４頁第３行の「である。」の後に次の記載を加
入する。
６０７号電話 （０３） ５５５−００２２ 焙 氏名 弁理士 （８５１０） １）中 政 活５補正
の対象 ６補正の内容 明細書第４頁第３行の「である。」の後に次の記載を加
入する。
「このアフィニティークロマトグラフィーの展開層には
ニワトリ、牛、豚、馬、魚等の食用動物のヘモグロビン
を吸着させあるいは固定したものを使用する。」 以上
ニワトリ、牛、豚、馬、魚等の食用動物のヘモグロビン
を吸着させあるいは固定したものを使用する。」 以上
Claims (1)
- ヒト糞便から得た検体を、ヒトヘモグロビンに対する抗
体を感作した担体粒子と混合し、該混合物を静置後該担
体粒子の凝集状態を判定することを特徴とする大腸癌の
予備スクリーニング方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25883484A JPS61137064A (ja) | 1984-12-07 | 1984-12-07 | 大腸癌の予備スクリ−ニング方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25883484A JPS61137064A (ja) | 1984-12-07 | 1984-12-07 | 大腸癌の予備スクリ−ニング方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61137064A true JPS61137064A (ja) | 1986-06-24 |
Family
ID=17325668
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25883484A Pending JPS61137064A (ja) | 1984-12-07 | 1984-12-07 | 大腸癌の予備スクリ−ニング方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61137064A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6358262A (ja) * | 1986-08-29 | 1988-03-14 | Yatoron:Kk | 特異モノクロ−ナル抗体を用いた生体成分の分析方法 |
| JPS6390764A (ja) * | 1986-10-03 | 1988-04-21 | Yatoron:Kk | 特異モノクロ−ナル抗体を用いたヒト・ヘモグロビンの高感度分析方法 |
| JPH02141665A (ja) * | 1988-11-24 | 1990-05-31 | Godo Shiyusei Kk | 糞便中のヘモグロビンの検出方法 |
| JPH0313863A (ja) * | 1989-06-08 | 1991-01-22 | Eiken Chem Co Ltd | 免疫学的ラテックス凝集反応をもちいた糞便中のα１‐アンチトリプシンの測定方法および該方法に使用する試薬 |
| JP2009537798A (ja) * | 2006-05-19 | 2009-10-29 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 結腸直腸癌のマーカーとしてのタンパク質ｓ１００ａ１２の使用 |
| WO2017209001A1 (ja) | 2016-05-30 | 2017-12-07 | 栄研化学株式会社 | 抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体若しくは抗体キット、抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体固定化不溶性担体粒子、及びこれらを用いた測定試薬若しくは測定方法 |
Citations (2)
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| JPS59125064A (ja) * | 1983-01-05 | 1984-07-19 | Eiken Kagaku Kk | 免疫学的ラテツクス凝集反応をもちいた糞便中のヘモグロビンの検出方法および該方法に使用する試薬 |
-
1984
- 1984-12-07 JP JP25883484A patent/JPS61137064A/ja active Pending
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| WO2017209001A1 (ja) | 2016-05-30 | 2017-12-07 | 栄研化学株式会社 | 抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体若しくは抗体キット、抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体固定化不溶性担体粒子、及びこれらを用いた測定試薬若しくは測定方法 |
| US11175292B2 (en) | 2016-05-30 | 2021-11-16 | Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha | Anti-human hemoglobin monoclonal antibody or antibody kit, insoluble carrier particle to which anti-human hemoglobin monoclonal antibody is immobilized, and measurement reagent and measurement method using same |
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