JPS58179356A

JPS58179356A - インラインフラクシヨンコレクタ

Info

Publication number: JPS58179356A
Application number: JP6212382A
Authority: JP
Inventors: Toshinori Saito; 斉藤　利徳; Makoto Takeuchi; 誠竹内
Original assignee: Jeol Ltd; Nihon Denshi KK
Current assignee: Jeol Ltd
Priority date: 1982-04-14
Filing date: 1982-04-14
Publication date: 1983-10-20
Also published as: JPH0245824B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】この発明は液体クロマトグラフ装置におけるインライン
フラクションコレクタに関するものである。

ポストラベリング法における液体クロマトグラフ装置に
おいて、発色試薬が混入される前に、分離系によって分
離された成分を個別に分取する場合、感度や分離能を損
うことなく自動的に行うために、これまでにいくつがの
方法が提案実施されている。

その−例として、分離カラムの出力系に分岐を設け、一
方を抵抗管を経由して通常のフラクションコレクタに接
続し、他方を二連の定流量ポンプにより発色試薬とのミ
キシング部を介して反応槽、検出セル、抵抗管を通して
排出されるように構成し、これにより分離条件に拘りな
く発色条件を一定に保つようにしている。

しかしながら、上記のような従来の装置においては、微
量の試料により、分離系の単位時間あたりの分離能を高
くして分離を行う場合、分離系外における分散が大きく
影響してくるため、もはやポンプの挿入は分離能を低下
させる結果となり使用できない。まだ上記のような分離
と分析を同時に行う方法では、分取に多くをさけば分析
用信号は弱くなり、逆に分析用に多くをさけば分取量が
少なくなる。さらにフラクションコレクタへの流出タイ
ミングと検出器で検出されるピークのタイミングは一致
しないため、カットアンドトライで決めなければならな
いなどの問題点があった。

この発明はこのような従来のものの問題点を改善するだ
めになされたもので、フラクションのサンプリングと短
絡とを切換える回転切換器を液体クロマトグラフ装置の
出力系に挿入することにより、必要とするピークの全量
を正確に分取し、しかも分析に対して悪影響を及ぼさな
いインラインフラクションコレクタを提供することを目
的としている。

この発明は固定ブロックに挾まれて回転する回転体を有
する゛回転切換器と、上記回転体に設けられたサンプリ
ング流路および短絡流路と、上記回転体が間欠回転した
ときに上記サンプリング流路およ′び短絡流路に接続す
るように、両側の固定ブロックに設けられた複数組の接
続端子とを備え、この接続端子の少なくとも一組を液体
クロマトグラフ装量の出力系に接続し、上記回転体の回
転により、フラクションの分取時にはサンプリング流路
によりサンプリングし、非分取時には短絡流路によシ短
絡させ、サンプリング流路をサンプリング、押出、洗浄
、バッファ充填の順序で切換えるようにしたことを特徴
とするインラインフラクションコレクタである。

以下、図面により、この発明の一実施例について説明す
る。この実施例はポストラベリング液体クロマトグラフ
の代表例であるアミノ酸分析装置に適用したものである
。第１図は実施例の系統図、第２図は回転切換器の斜視
図、第６図はその■−■断面図、第４図は別の実施例に
おける回転切換器の斜視図、第５図はそのＶ−Ｖ断面図
である。

第１図において、１ａ・・・１ｇはバッファタンク、１
ｈは再生液タンクであり、順次切換パルプ２ａ。

２ｂの端子ａ　　ｈに接続している。切換パルプ２１Ｌ
、２ｂはそれぞれバッファポンプ３ａ、３ｂを介してプ
レカラム４ａ、４ｂに接続している。

プレカラム４ａ、４ｂはアンモニアを除去するだめのも
ので、イオン交換樹脂が充填されている。

プレカラム４ａ、４ｂの出口からサンプル送液系５ａ、
５ｂおよび展開液送液系６ａ、６ｂが分岐し、サンプル
送液系５ａ、５ｂはサンプリングパルプ７を介して分析
カラム８ａ、８ｂの中心ノズル９ａ、９ｂに接続し、展
開液送液系６ａ、６ｂは分析カラム８ａ、８ｂのサイド
インレツ）１０ａ。

１０ｂに接続している。分析カラム８ａ、８ｂにはイオ
ン交換樹脂等の展開用の充填剤が充填されている。

サンプリングパルプ７にはサンプル送液系５ａ。

５ｂおよびサンプル導入系７ａ、７ｂに接続するように
切換わるサンプリングループ７ｃが設けられている。サ
ンプル導入系７ａにはサンプリングポンプ１１、切換器
１２、サンプルウォッシュポンプ１６、洗浄水槽１４が
設けられ、サンプル導入系７ｂには導入ノズル１５が設
けられて、ターンテーブル１６および洗浄器１７間を往
復できるようになっている。

分析カラム８ａ、８ｂの出力系１８ａ、ｉａｂは切換器
１９を介して１つの出力系１８ｃ、１８ｄとなり、その
間に回転切換器２０が挿入されている。出力系１８ｄに
はニンヒドリン注入系２１が合流し、反応器２２を介し
て検出器２６に接続している。

ニンヒドリン注入系２１にはニンヒドリンポンプ２４が
設けられ、切換器２５を介してニンヒドリンタンク２６
′ｉ！たけ純水タンク２７に接続している。

回転切換器２０の詳細は第２図および第６図に示されて
おり、上部固定ブロック２８および下部固定ブロック２
９間に回転体６０が間欠回転可能に設けられている。上
部および下部固定ブロック２８．２９はテフロン系の樹
脂で作られ、また回転体６０はセラミックで作られ、そ
れぞれ円筒２８ａ、２９ａ、３０ａの内側に嵌め込まれ
、これらは３つの円柱体を重ね、接合面を密着保持する
構造になっている。

回転体３０には、その接合面に開口するように、サンプ
リング流路６１および短絡流路３２が９００の角度で交
互に２組設けられている。サンプリング流路６１はフラ
クションの分取に必要な容積を持つように、側面の接続
部により異なった長さのものが交換できるようになって
いる。短絡流路６２は単にフラクションを短絡するため
のもので小容量でよく、第２図および第６図のものでは
側面の接続部により取付けられ、サンプリング流路と交
換できるようになっているが、第４図および第５図のよ
うに内部に形成されていてもよい。

サンプリング流路６１および短絡流路６２は流系圧損失
がほぼ等しくなるように設定される。実施例では、サン
プリング流路６１は内径１＋＋ＩＴｎφ×長さ１１１１
ｍｍで、全容量８７６μ！、短絡流路６２は内径Ｑ、３
　ｍｌ　Ｘ長さ１００間で、全容量７．１μ〃である。

回転体６０はジエネバ機構３０ｂによって、正確に１ス
テツプ９０°で間欠回転するようになっている。

上部固定ブロック２８および下部固定ブロック２９には
、回転体６０が間欠回転したときに、それぞれ接合面を
介してサンプリング流路３１および短絡流路６２に順次
接続するように、９００の角度で接続端子３３ａ・・・
３３ａおよび６４ａ、　３４’ｂ・・・が設けられてお
り、このうち接続端子３５ａ、３４ａは出力系１８ｃ、
１８ｄに接続している。また接続端子３３ｂは圧縮空気
管６５に接続し、接続端子３４ｂはフラクションパイプ
６６を介してターンテーブル式フラクションコレクタ６
７に接続する。接続端子３３ｃは洗浄水管６８に接続し
、これに対応する接続端子６４ｃ（図示せず）は廃液管
６９に接続する。さらに接続端子３３ｄはバイパスライ
ン４０に接続し、これに対応する接続端子３４ａ（図示
せず）は廃液管４１に接続する。バイパスライン４０に
は抵抗管４２が設けられており、切換器４６を介して分
岐管４４ａおよび４４ｂに接続し、廃液管４１には定流
量ポンプ４５が設けられている。

以上のように構成されたアミノ酸分析装置においては、
第１回のランとして、通常の分析が行われる。このとき
、接続端子３３ａ、３４ａには短絡流路６２が接続する
ように回転体６０を回転させておく。

分析操作はまずサンプリングパルプ７のサンプリングル
ープ７ｃをサンプル導入系７ａ、７ｂに接続し、サンプ
リングポンプ１１により吸引して、ターンテーブル１６
から導入ノズル１５を通してサンプリングループ７Ｃに
試料を導入する。そしてサンプリングループ７Ｃをサン
プル送液系５ａに切換え、また切換パルプ２ａを端子ａ
に切換えて、バッファタンク１ａからバッファポンプ６
ａにより送液する。プレカラム４ａでアンモニアを除去
されたバッファは、サンプル送液系５ａからサンプリン
グループ７Ｃ内の試料を分析カラム８ａに、中心ノズル
９ａを通して注入する。

次いで切換パルプ２ａを順次端子ｂ・ｇに切換えて、バ
ッファタンク１ｂ・・１ｇからバッファを送り、分析カ
ラム８ａにおいて展開を行う。図示の状態でサンプル送
液系５ａと展開液送液系６ａの流量比は２：８であるの
で、そのまま送液して展開を行ってもよいが、この間に
サンプリングループ７ｃをサンプル導入系７ａ、７ｂ側
に切換えて、サンプル導入系７ａ、７ｂおよびサンプリ
ングループ７ｃの洗浄を行ってもよい。洗浄はサンプル
ウォッシュポンプ１３により、洗浄水槽１４から洗浄水
を送り、導入ノズル１５を洗浄器１７側に切換えて排液
し、系全体を洗浄する。

一方分析カラム８ａではサイドインレット１０ａより供
給される展開液によって展開が行われ、成分毎に出力系
１８ａに流出し、出力系１８ｃから回転切換器２０の短
絡流路６２に入り、出力系１８ｄに短絡する。ここでニ
ンヒドリン注入系２１を通して、ニンヒドリンポンプ２
４によシニンヒドリンクンク２６からニンヒドリンが注
入され、反応器２２で反応して発色し、検出器２６によ
って検出され、記録される。純水タンク２７の純水は、
サンプル注入時等において、ニンヒドリンを注入する必
要のないときに、ニンヒドリンに代えて送液するための
ものである。

展開の期間中、バッファの一部は分岐管４４ａからバイ
パスライン４０に流れ、回転切換器２０の接続端子３３
ａからサンプリング流路６１に入り、廃液管４１から流
出する。この送液は定流量ポンプ４５によって定流量で
行われ、分析系への影響はなくされている。

以上の操作中、切換パルプ２ｂは端子りに切換わって、
再生液タンク１ｈから再生液をバッファポンプ６ｂによ
り、プレカラム４ｂおよび分析カラム８ｂに供給して再
生し、さらに端子ａに切換えてバッファタンク１ａがら
バッファを送液してコンディショニングが行われる。

第６図体）は上記第１回のランによって得られるクロマ
トグラムであって、Ｐ１＊Ｐ２・・・はピークで、この
うち斜線部分は分取すべきピークを示し、ＴＳｌｓ　Ｔ
Ｓ２・・・はスタートタイミング、ＴＥ１＋　ＴＥ２・
・・はストップタイミングを示す。このように、第１回
のクロマトグラムからどのピークを分取するかを決め、
切換タイミングを決めてフラクションの分取を行う。こ
の際分取するピークの数は１ないし必要な数だけ設定で
きる。

フラクションの分取を行うには前記と同様の操作により
、同一試料により第２回のランを行う。

第２回のランは分析カラム８ｂで行うこともできるが、
同一の分析カラム８ａで行ってもよい０分析カラム８ｂ
で行う場合はサンプリングループ７ｃをサンプル送液系
５ｂに接続し、切換パルプ２ｂを切換えてバッファポン
プ３ｂにより送液し、試料の注入、展開を行う。この間
に分析カラム８ａは前記と同様の操作で再生される。

そしてフラクションを分取する場合は、ＴＳｌのタイミ
ングで回転切換器２００回転体３０を１ステップ回転さ
せ、サンプリング流路６１を接続端子３３ａ、３４ａに
接続すると、分析カラム８ａの出力はサンプリング流路
６１に入って、ピークＰλを含むフラクションがサンプ
リングされ、代りにサンプリング流路６１に充填されて
いたバッファが出力系１８ｄに流出する。このバッファ
は、頂度分析に使用されているバッファがバイパスライ
ン４０から供給されているため、またサンプリング流路
６１と短絡流路６２との間の流系圧損失が等しいため、
流系切換時のショックを除くと、出力系のクロマトグラ
ムのベースラインの変動は起こらない。

次にＴＥｌのタイミングで再び短絡流路６２が接続端子
３３ａ、３４ａに接続し、短絡流路６２内のわずかなバ
ッファが流出し終ると、正常のクロマトグラムが再び現
われ、ピークＰ１が記録される。第６図（Ｂ）はこのよ
うな操作による第２回のランのクロマトグラムであり、
正確な分取が行われたかどうかのモニターとして使用で
きる。

一方フラクションを分取したサンプリング流路３１は接
続端子３３ｂ、３４ｂに接続し、ピークＰ２を含むフラ
クションは圧縮空気管６５からのエアフラッシュにより
コレクター６７の所定のカップに移される。

以上の状態でクロマトグラムが展開し、２番目の分取ピ
ークＰｉの分取タイミングＴＳ２になると。

再び回転体３０が回転し、別のサンプリング流路６１が
接続端子３３ａ、　　６４ａに接続し、前記と同様にフ
ラクションのサンプリングが行われる。

そして先にフラクションの押出を終ったサンプリング流
路３１は接続端子３３ｃ、３４ｃに接続し、洗浄水管３
８からの洗浄水により洗浄される。このサンプリング流
路６１は次のタイミングで接続端子３３ｄ、３４ｄに接
続し、バイパスライン４０からバッファが供給されて充
填される。

上記の操作を繰返えすことによシ、分取すべきピークＰ
Ｉ　＋　Ｐｇ　＋　Ｐｓ・・はコレクタ６７に分取され
、他のピークＰ１　＊　Ｐ３　＋　Ｐ◆・・・は出力系
１８ｄに流出して検出器２６により検出され、クロマト
グラムとして表わされる。このためこのクロマトグラム
をモニターとして観測することにより、フラクションの
分取を正確に行ったかどうかをチェックすることができ
る。

なお回転切換器２０は縦型に限らず、横型でもよく、そ
の構造も図示のものに限定されない。またサンプリング
流路６１および短絡流路６２の構造もパイプ状に限らず
、容器状その他の構造でもよく、必ずしも交換可能でな
くてもよい。さらにサンプリング流路６１および短絡流
路６２の配置は交互でなくてもよく、分取するピークに
合わせて適宜配置することができる。またこの発明はア
ミノ酸分析装置に限らず、他の液体のクロマトグラフ装
置にも適用可能である。

以上のとおり、この発明によれば、フラクションのサン
プリングと短絡とを切換える回転切換器を液体クロマト
グラフの出力系に挿入するように構成したので、次のよ
うな効果が得られる。

■分析ライン中に挿入されたシステムであるため、ピー
クの全量を分取することができる。

■切換時に分析に使用しているのと同じバッファに置換
されるため、モニタークロマトダラムのベースラインの
変動が生じない。

■切換時の短時間を除いて、流系圧損失を一定に保つと
、分析条件は一定に保たれる。

■モニタースはクトルにはどのピークを分取したかが明
確に表われ、間違ったピークを分取することはない。

■モニターピークは分取部分およびその前後の切換ショ
ックによるノイズを除けば、Ｓ／Ｎは通常分析と同様に
良いＳ／Ｎで観測される。

■分取ピーク数は、ピーク間隔がΔ’ｒ＝’ｒＥ−’ｒ
ｓより太きい限り、制限なく、連続して何ピークでも分
取可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図はこめ発明の一実施例を示す系統図、第２図は回
転切換器の斜視図、第６図はその■−■断面図、第４図
は別の実施例における回転切換器の斜視図、第５図はそ
のＶ−Ｖ断面図、第６図（Ａ）は第１回のランにおける
クロマトグラム、（Ｂｌは第２回のランにおけるクラマ
ドグラムである。各図中、同一符号は同一または相当部分を示し、１ａ・
・１ｇはバッファタンク、１ｈは再生液タンク、２ａ、
２ｂは切換バルブ、５ａ、６ｂはバッファポンプ、４ａ
、４ｂはプレカラム、７はサンプリングパルプ、８ａ、
８ｂは分析カラム、１１はサンプリングポンプ、１６は
サンプルウォッシュポンプ、１４は洗浄水槽、１６はタ
ーンテーブル、２０は回転切換器、２２は反応器、２６
は検出］２４ｉｄニンヒドリンポンプ、２６ｉニンヒド
リンタンク、２７は純水タンク、２８は上部固定ブロッ
ク、２９は下部固定ブロック、３ｏは回転体、３１はサ
ンプリング流路、３２は短絡流路である。代理人　弁理士　　柳　原　　　成

Claims

【特許請求の範囲】（１）固定ブロックに挾まれて回転する回転体を有する
回転切換器と、上記回転体に設けられたサンプリング流
路および短絡流路と、上記回転体が間欠回転したときに
上記サンプリング流路および短絡流路に接続するように
、両側の固定ブロックに設けられた複数組の接続端子と
を備え、この接続端子の少なくとも一組を液体クロマト
グラフ装置の出力系に接続し、上記回転体の回転により
、フラクションの分取時にはサンプリング流路によりサ
ンプリングし、非分取時には短絡流路によシ短絡させ、
サンプリング流路をサンプリング、押出、洗浄、バッフ
ァ充填の進序で切換えるようにしたことを特徴とするイ
ンラインフラクションコレクタ（２）サンプリング中、サンプリング流路のバッファを
出力系へ送出するようにした特許請求の範囲第１項記載
のインラインフランクジョンコレクタ（６）サンプリン
グ流路および短絡流路は流系圧世失がほぼ等しくされた
特許請求の範囲第１項まだは第２項記載のインラインフ
ラクションコレクタ（４）サンプリング流路および短絡
流路は容量の異なったものに交換可能とされている特許
請求の範囲第１項ないし第６項のいずれかに記載のイン
ラインフラクションコレクタ（５）サンプリング流路および短絡流路は交互に配置さ
れている特許請求の範囲第１項ないし第４項のいずれか
に記載のインラインフラクションコレクタ