JPS58107192A - 発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法Info
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- JPS58107192A JPS58107192A JP56204577A JP20457781A JPS58107192A JP S58107192 A JPS58107192 A JP S58107192A JP 56204577 A JP56204577 A JP 56204577A JP 20457781 A JP20457781 A JP 20457781A JP S58107192 A JPS58107192 A JP S58107192A
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- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
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- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/24—Proline; Hydroxyproline; Histidine
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/839—Bacillus subtilis
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は発酵法１こよるし一ヒスチジンの製造法に関
するものである。
するものである。
発酵法ｅこよるし一ヒスチジンの製造法ンこりぃてはブ
レビバクテリウム属（特公昭５１−２３５９３、同５ｌ
−２３５９４）、バチルス属（特公昭５Ｏ−１３３５８
）等の突然変異株を用いる方法が知られている。
レビバクテリウム属（特公昭５１−２３５９３、同５ｌ
−２３５９４）、バチルス属（特公昭５Ｏ−１３３５８
）等の突然変異株を用いる方法が知られている。
本発明者らは上述の様な従来のＬ−ヒスチジンの製造法
Ｖこ対し、ヒスチジンアンタゴニストｅこ耐性を有する
バチルス属の変異株の染色体より得たヒスチジンアンタ
ゴニスト耐性に関与する遺伝子領域が組み込まれている
ベクターを含有しているバチルス属の細菌が、高い収率
でＬ−ヒスチジンを生産することを知った。
Ｖこ対し、ヒスチジンアンタゴニストｅこ耐性を有する
バチルス属の変異株の染色体より得たヒスチジンアンタ
ゴニスト耐性に関与する遺伝子領域が組み込まれている
ベクターを含有しているバチルス属の細菌が、高い収率
でＬ−ヒスチジンを生産することを知った。
ヒスチジンアンタゴニストとけ、バチルス属の微生物の
増殖を抑制するようなものであるがその抑制はＬ−ヒス
チジンが培地中に共存すれば全体的または部分的ｅこ解
除されるようなものである。例えば、１，２．４−１−
リアゾールアラニン、２−チア／−ルアラニン、α−メ
チルヒスチジン、３−アミノ−Ｉ、２．４−）リアゾー
ルなどがある。
増殖を抑制するようなものであるがその抑制はＬ−ヒス
チジンが培地中に共存すれば全体的または部分的ｅこ解
除されるようなものである。例えば、１，２．４−１−
リアゾールアラニン、２−チア／−ルアラニン、α−メ
チルヒスチジン、３−アミノ−Ｉ、２．４−）リアゾー
ルなどがある。
ヒスチジンアンタゴニスト耐性？こ関与スる遺伝子の供
与歯はバチルス属のヒスチジンアンタゴニストに耐性を
有する変異株ならどのような菌株でもよいが耐性のより
高いものが望ましい。また多くの場合Ｌ−ヒスチジン生
産能がより高いものを遺伝子供参画として用いればより
よい結果が得られる。遺伝子供４菌より染色体ＤＮＡを
抽出する方法は、例えばＪ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、＋
８９ 、 １０６５（＋９６ｓ）ｒこ記載されてい
るような通常の方法で行うことがてきる。ベクターＤＮ
Ａとしては、どのようなものでもよい。例えばスフフィ
ロフッカス属微生物由来のｐＴ］２７．ｐｃｉ、９４
、ｐＣ２２］。
与歯はバチルス属のヒスチジンアンタゴニストに耐性を
有する変異株ならどのような菌株でもよいが耐性のより
高いものが望ましい。また多くの場合Ｌ−ヒスチジン生
産能がより高いものを遺伝子供参画として用いればより
よい結果が得られる。遺伝子供４菌より染色体ＤＮＡを
抽出する方法は、例えばＪ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、＋
８９ 、 １０６５（＋９６ｓ）ｒこ記載されてい
るような通常の方法で行うことがてきる。ベクターＤＮ
Ａとしては、どのようなものでもよい。例えばスフフィ
ロフッカス属微生物由来のｐＴ］２７．ｐｃｉ、９４
、ｐＣ２２］。
ｐＣ２２３，ｐＵＢ１１２ （以ｊｌ Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、 ＡｃａｄＳｃｉ、ＵＳＡ、７４．１６８０
（１９７７）参照）、ｐＵＢ］］＋１（Ｊ、 Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌ、、 １３４． ３１８（１９７８）参照）
、ｐＴＰ４．ｐＴＰ５ （以Ｊ１Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
Ｌｅｔｔ、ｅｒｓ、 、５． ５５（１９７８）参照）
、枯草菌由来のｐＬＳ］５．ｐＬＳ２８ （以ｊｌ Ｊ
、 Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ、＋Ｌ凪、６９（１（１９７７
） 参照）、ｐＬｓ１３（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
、、 １２９．１４８７（１９７７）参照）、ＰＰＬＩ
、ｐＰＬ２ （以」１ Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。
Ｎａｔｌ、 ＡｃａｄＳｃｉ、ＵＳＡ、７４．１６８０
（１９７７）参照）、ｐＵＢ］］＋１（Ｊ、 Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌ、、 １３４． ３１８（１９７８）参照）
、ｐＴＰ４．ｐＴＰ５ （以Ｊ１Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
Ｌｅｔｔ、ｅｒｓ、 、５． ５５（１９７８）参照）
、枯草菌由来のｐＬＳ］５．ｐＬＳ２８ （以ｊｌ Ｊ
、 Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ、＋Ｌ凪、６９（１（１９７７
） 参照）、ｐＬｓ１３（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
、、 １２９．１４８７（１９７７）参照）、ＰＰＬＩ
、ｐＰＬ２ （以」１ Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。
、山、４８４（１９７５）参照）等がある。
染色体１） Ｎ Ａ及びベクターＤＮＡはそれぞれ制限
エンドヌクレアーゼを用いて切断する。それぞれのベク
ターＰこけ適した制限エンドヌクレアーゼがあるが、そ
れは−に記ベクターｅこついての記載力は制限エンドヌ
クレアーゼによる切断が部分的に行なわれるように反応
条件を調節すれば多くの種類の制限酵素が使用できる。
エンドヌクレアーゼを用いて切断する。それぞれのベク
ターＰこけ適した制限エンドヌクレアーゼがあるが、そ
れは−に記ベクターｅこついての記載力は制限エンドヌ
クレアーゼによる切断が部分的に行なわれるように反応
条件を調節すれば多くの種類の制限酵素が使用できる。
かくｌ−で得られた染色体ＤＮＡ断片と、切断されたベ
クターＤＮＡとを連結せしめる方法はりガーゼを用いる
通常の方法が使用できる。一方、ターミナルトランスフ
ェラーゼを用いて染色体ＤＮＡ断片と開裂したベクター
ＤＮＡとに、デオキシアデニル酸とデオキシシチジル酸
をそれぞれ付加し、混合した後アニーリングして連結せ
しめる方法も利用しうる。
クターＤＮＡとを連結せしめる方法はりガーゼを用いる
通常の方法が使用できる。一方、ターミナルトランスフ
ェラーゼを用いて染色体ＤＮＡ断片と開裂したベクター
ＤＮＡとに、デオキシアデニル酸とデオキシシチジル酸
をそれぞれ付加し、混合した後アニーリングして連結せ
しめる方法も利用しうる。
かくして得られた染色体ＤＮＡ断片とベクターの結合物
の受容菌はバチルス属の微生物ならばどのようなもので
もよいが、Ｌ−ヒスチジン要求菌を用いれば形質転換株
を選択する際に好都合である。もちろんよりＬ−ヒスチ
ジン生産能が高い菌株より誘導したし一ヒスチジン要求
菌を用いればより好ましい結果が得られる。組換えＤＮ
Ａを上記のようなりＮＡ受容菌に導入するには、例えば
Ｍｏ１ｅｃ、 Ｇｅｙｃ、 Ｇｅ藺ｔ、、 １６８．１
１１（＋９７９）に記載されているような通常の形質転
換法が使用できる。
の受容菌はバチルス属の微生物ならばどのようなもので
もよいが、Ｌ−ヒスチジン要求菌を用いれば形質転換株
を選択する際に好都合である。もちろんよりＬ−ヒスチ
ジン生産能が高い菌株より誘導したし一ヒスチジン要求
菌を用いればより好ましい結果が得られる。組換えＤＮ
Ａを上記のようなりＮＡ受容菌に導入するには、例えば
Ｍｏ１ｅｃ、 Ｇｅｙｃ、 Ｇｅ藺ｔ、、 １６８．１
１１（＋９７９）に記載されているような通常の形質転
換法が使用できる。
形質転換株のうちよりＬ−ヒスチジン生産能を有しヒス
チジンアンタゴニスト耐性ｅこ閏年ｔ６遺伝子領域が組
み込まれているベクターを含有する形質転換株を選択す
るｅこは例えばＩ） Ｎ Ａ受容菌としてＬ−ヒスチジ
ン要求菌を用いヒスチジンアンクゴニストを含有し、Ｌ
−ヒスチジンを含有しな選別できるような培地を用いれ
ばより選別が容易である。このようにこして一旦選別さ
れたヒスチジンアンタゴニスト耐性ｅこ関与する遺伝子
領域が組み込まれている組換えベクターはＤＮＡ受容菌
より抽出移住のＤＮＡ受容菌、例えばＬ−ヒスチジン生
産能を有する受容菌に導入する事ができる。
チジンアンタゴニスト耐性ｅこ閏年ｔ６遺伝子領域が組
み込まれているベクターを含有する形質転換株を選択す
るｅこは例えばＩ） Ｎ Ａ受容菌としてＬ−ヒスチジ
ン要求菌を用いヒスチジンアンクゴニストを含有し、Ｌ
−ヒスチジンを含有しな選別できるような培地を用いれ
ばより選別が容易である。このようにこして一旦選別さ
れたヒスチジンアンタゴニスト耐性ｅこ関与する遺伝子
領域が組み込まれている組換えベクターはＤＮＡ受容菌
より抽出移住のＤＮＡ受容菌、例えばＬ−ヒスチジン生
産能を有する受容菌に導入する事ができる。
かくして得られたし一ヒスチジン生産菌を用いてＬ−ヒ
スチジンを製造する方法は従来のし一ヒスチジン生産菌
の培養方法と特に変らない。即ち＝ ５− 培地としては炭素源、窒素源、無機イオン更に必要ｔこ
応してアミノ酸、ビタミン等の有機微量要素を含有する
通常のものである。炭素源としてはグルコース、シュー
クロース等及びこれらを含有スる澱粉加水分解物等が用
いられる。窒素源としてはアンモニアガス、アンモニア
水、アンモニウム塩その他が使用できる８培養は好気的
条件下で培地のｐＴ（及び温度を適宜調節しつつ実質的
ンこＬ −ヒスチジンの生成蓄積が停止するまで行なわ
れる、カくシて培養液中ンこけ著量のＬ−ヒスチジンが
生成蓄積される。培養液よりＬ−ヒスチジンを採取する
ｅこは通常の方法が適用できる。
スチジンを製造する方法は従来のし一ヒスチジン生産菌
の培養方法と特に変らない。即ち＝ ５− 培地としては炭素源、窒素源、無機イオン更に必要ｔこ
応してアミノ酸、ビタミン等の有機微量要素を含有する
通常のものである。炭素源としてはグルコース、シュー
クロース等及びこれらを含有スる澱粉加水分解物等が用
いられる。窒素源としてはアンモニアガス、アンモニア
水、アンモニウム塩その他が使用できる８培養は好気的
条件下で培地のｐＴ（及び温度を適宜調節しつつ実質的
ンこＬ −ヒスチジンの生成蓄積が停止するまで行なわ
れる、カくシて培養液中ンこけ著量のＬ−ヒスチジンが
生成蓄積される。培養液よりＬ−ヒスチジンを採取する
ｅこは通常の方法が適用できる。
実施例
バチルス・ズブチリスＡＪ１１７１１（アルギニン、ロ
イシン複要求株）からニトロソグアニジン変異処理ｅこ
よって誘導したヒスチジン生産能ＡＪｘ７３３（ＦｚＲ
Ｍ−ｐ６ｚ＜１ ）（ｔ。
イシン複要求株）からニトロソグアニジン変異処理ｅこ
よって誘導したヒスチジン生産能ＡＪｘ７３３（ＦｚＲ
Ｍ−ｐ６ｚ＜１ ）（ｔ。
２．４−ＤＬ−）リアゾールアラニン耐性、アルギニン
、ロイシン複要求性）を原株とし、これよ ６− り次の様な方法で新規ヒスチジン生産閏を造成した。
、ロイシン複要求性）を原株とし、これよ ６− り次の様な方法で新規ヒスチジン生産閏を造成した。
（１） 染色体Ｄ Ｎ Ａの調製
ＡＪ１１７３３株を１ｔの［Ｂａｃｔ −Ｐｅｎａｓｓ
ａｙＢｒｏｔｈ 」（商品名Ｄｉｆｃｏ製）中３０ｒで
約２時間振盪培養を行ない対数増殖期の菌体を集菌後通
常のＤＮＡ抽出法（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、
８ ！し］ ０６５ （］ ９６５ ） ） Ｉｃよ
り染色体ＤＮＡを抽出、精製し最終４．ｔｌｌｌｌｇを
得た。
ａｙＢｒｏｔｈ 」（商品名Ｄｉｆｃｏ製）中３０ｒで
約２時間振盪培養を行ない対数増殖期の菌体を集菌後通
常のＤＮＡ抽出法（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、
８ ！し］ ０６５ （］ ９６５ ） ） Ｉｃよ
り染色体ＤＮＡを抽出、精製し最終４．ｔｌｌｌｌｇを
得た。
（２） 染色体ＤＮＡ断片のベクターへの挿入Ｌ−ヒ
スチジン生産能を支配する遺伝子領域をクローニングす
るため、そのベクターとなる自己増殖ＤＮＡとしてカナ
マイシン耐性、不オマインン耐性プラスミドの１ｆｉＴ
ＨＴＩＵＢＩ １０ を用いた。（１）て得た染色体
ＤＮＡ］０７１９とベクターＤＮＡ５１ｉｆをそれぞれ
とり、各々ンこ制限エンドヌクレアーゼの１種ＥｃｏＲ
ｌ を３７Ｃ】時間作用させてＴ） Ｎ ｐ、 ｊｌ
を切断した。６５ｔ？、】０分の熱処理後筒反応液を混
合しＡＴＰ及びジチオスライトール存在下、Ｔ４ファー
ジ由来のＤＮＡリガーゼＰこて１０Ｃにて２４時間、Ｄ
ＮＡ璋の連結反応を行なった。
スチジン生産能を支配する遺伝子領域をクローニングす
るため、そのベクターとなる自己増殖ＤＮＡとしてカナ
マイシン耐性、不オマインン耐性プラスミドの１ｆｉＴ
ＨＴＩＵＢＩ １０ を用いた。（１）て得た染色体
ＤＮＡ］０７１９とベクターＤＮＡ５１ｉｆをそれぞれ
とり、各々ンこ制限エンドヌクレアーゼの１種ＥｃｏＲ
ｌ を３７Ｃ】時間作用させてＴ） Ｎ ｐ、 ｊｌ
を切断した。６５ｔ？、】０分の熱処理後筒反応液を混
合しＡＴＰ及びジチオスライトール存在下、Ｔ４ファー
ジ由来のＤＮＡリガーゼＰこて１０Ｃにて２４時間、Ｄ
ＮＡ璋の連結反応を行なった。
（３） ヒスチジン生産遺伝子を担ったプラスミドによ
る形質転換 バチルス・ズブチリスＡＪ１１７１］（アルギニン、ロ
イシン複要求性）からニトロソグア（Ｄｉｆｃｏ ）
ｆこ接種して３０Ｃにて一晩振盪培養を行ない第１培養
培地（グルコースａ、５ｖ／ｄｅ。
る形質転換 バチルス・ズブチリスＡＪ１１７１］（アルギニン、ロ
イシン複要求性）からニトロソグア（Ｄｉｆｃｏ ）
ｆこ接種して３０Ｃにて一晩振盪培養を行ない第１培養
培地（グルコースａ、５ｖ／ｄｅ。
（ＮＨ４）、、Ｓｏ、 ０．２ ｆ／ｄｅ、 ＫＴ（
、、Ｐｏ、 ０．６９／ｄｌ、Ｋ２Ｔ（ＰＯ４１，４
ｆ／ｄｅ、 ＭｇＳＯ４・７Ｔ（、ＯＯ，０２９７ｄｌ
！、クエン酸ナトリウム０．１９７ｄｅ、酵母エキス０
．２ ？／ｄｅ１Ｌ −ヒフ、チジン］ Ｏｒｎｇ／ｄ
ｅ、 Ｌ −アルギニン２５ ｍ９／ ｄｅ及びＬ−ロ
イシン５ｍν／ｄｅを含む）に接秤し３７ Ｕ）こて４
時間振盪培養を行なった後、さらｅこ第１培養培地（グ
ルコース０．５ ｆ ／ ｄｌ、 （ＮＴ（４）２ＳＯ
４０，２ｆ ／ ｄ／！、ＫＴ（２ＰＯ４０，６ｙ／ｌ
ｉｅ、Ｋ、、ＨＰＯ４１，４’ｙ ／ｄｅ。
、、Ｐｏ、 ０．６９／ｄｌ、Ｋ２Ｔ（ＰＯ４１，４
ｆ／ｄｅ、 ＭｇＳＯ４・７Ｔ（、ＯＯ，０２９７ｄｌ
！、クエン酸ナトリウム０．１９７ｄｅ、酵母エキス０
．２ ？／ｄｅ１Ｌ −ヒフ、チジン］ Ｏｒｎｇ／ｄ
ｅ、 Ｌ −アルギニン２５ ｍ９／ ｄｅ及びＬ−ロ
イシン５ｍν／ｄｅを含む）に接秤し３７ Ｕ）こて４
時間振盪培養を行なった後、さらｅこ第１培養培地（グ
ルコース０．５ ｆ ／ ｄｌ、 （ＮＴ（４）２ＳＯ
４０，２ｆ ／ ｄ／！、ＫＴ（２ＰＯ４０，６ｙ／ｌ
ｉｅ、Ｋ、、ＨＰＯ４１，４’ｙ ／ｄｅ。
Ｍｇ５ｏ、１７Ｔ（２００，１２ｙ／ｒｔｅ、 りｚン
酸ナトリウム０．１ｙ／ｄｅ、酵母エキス０．０２９
／ｄｅ、 Ｌ−アルギニン５ ｍｇ ／ ｄｅ及びＬ−
ロイシン０５ｒｎｙ／ ｄｌを含む）へ接種し３７′ｃ
にて１５時間振盪培養を行なうことｅこよっていわゆる
コンピテントな（ＤＮＡ取込能を有する）細胞を調製し
た（参考文献； Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 ８
１ ＋ ７４１（１９６］’））。 このコンピテン
ト細胞懸濁液ｔｔこ（２）で得たＤＮＡの溶液を加えて
３７ｔＺ’でさらｅこ２時間振盪培養を行なって形質転
換反応を完了させた後、細胞懸濁液をカナマイシン５μ
ｙ７−＋ｉ含有最小培地プレート（ＫＷ、ＰＯ４０，６
ｙ ／ｄ７！、Ｋ２Ｔ（ＰＯ４１，４９／ｄｌ！１（Ｎ
）Ｔ４）、、Ｓｏ４＋１．２ ｆ／ｄｅ、クエン酸す１
・’） ’） Ａ Ｏ，Ｉ Ｖ ／ ｄｅ、 ＭｇＳＯ
４−７Ｈ，，００，０２ｙ ／ｄｅ、及びグルコ−ス０
．５９ ／ ｔｉｌｌを含みｐ）Ｔ７．２ｒこ調節した
培地）を基本最小培地とし、これｅこ寒天２％及び使用
菌の栄養要求物質Ｌ−アルギニン、Ｌ−ロイシンヲ各々
１ａｒｎｇ／ｄｅさら）ｎｌ、２．４−）リアゾールア
ラニンを５０ｔ？ｇ ／ ｄｅ添加した１、）にこ塗抹
し３７ｒで培養した。
酸ナトリウム０．１ｙ／ｄｅ、酵母エキス０．０２９
／ｄｅ、 Ｌ−アルギニン５ ｍｇ ／ ｄｅ及びＬ−
ロイシン０５ｒｎｙ／ ｄｌを含む）へ接種し３７′ｃ
にて１５時間振盪培養を行なうことｅこよっていわゆる
コンピテントな（ＤＮＡ取込能を有する）細胞を調製し
た（参考文献； Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 ８
１ ＋ ７４１（１９６］’））。 このコンピテン
ト細胞懸濁液ｔｔこ（２）で得たＤＮＡの溶液を加えて
３７ｔＺ’でさらｅこ２時間振盪培養を行なって形質転
換反応を完了させた後、細胞懸濁液をカナマイシン５μ
ｙ７−＋ｉ含有最小培地プレート（ＫＷ、ＰＯ４０，６
ｙ ／ｄ７！、Ｋ２Ｔ（ＰＯ４１，４９／ｄｌ！１（Ｎ
）Ｔ４）、、Ｓｏ４＋１．２ ｆ／ｄｅ、クエン酸す１
・’） ’） Ａ Ｏ，Ｉ Ｖ ／ ｄｅ、 ＭｇＳＯ
４−７Ｈ，，００，０２ｙ ／ｄｅ、及びグルコ−ス０
．５９ ／ ｔｉｌｌを含みｐ）Ｔ７．２ｒこ調節した
培地）を基本最小培地とし、これｅこ寒天２％及び使用
菌の栄養要求物質Ｌ−アルギニン、Ｌ−ロイシンヲ各々
１ａｒｎｇ／ｄｅさら）ｎｌ、２．４−）リアゾールア
ラニンを５０ｔ？ｇ ／ ｄｅ添加した１、）にこ塗抹
し３７ｒで培養した。
３日後に上記培地上に３個のコロニーが出現し ９−
たのでこれを釣菌し各クローンをそれぞれ純粋ｅこ分離
した。
した。
得られた形質転換株はいずれも用いた受容菌ＡＪ１１７
３２と異なってヒスチジン非要求性かつ１，２．４−）
リアゾールアラニン耐性である。このことは染色体ＤＮ
ＡＪ−のヒスチジン生合成及びヒスチジンアンタゴニス
ト耐性Ｐこ関与する遺伝子領域がｐＵＢ１］、０ プ
ラスミド上のＤＮＡに挿入されて生じた新規プラスミド
ＤＮＡを取込んだ細胞のみがコロニーとして選択されて
きたことを意味する。
３２と異なってヒスチジン非要求性かつ１，２．４−）
リアゾールアラニン耐性である。このことは染色体ＤＮ
ＡＪ−のヒスチジン生合成及びヒスチジンアンタゴニス
ト耐性Ｐこ関与する遺伝子領域がｐＵＢ１］、０ プ
ラスミド上のＤＮＡに挿入されて生じた新規プラスミド
ＤＮＡを取込んだ細胞のみがコロニーとして選択されて
きたことを意味する。
（４） ヒスチジン生合成系遺伝子領域を担うｐＵＢ
ｌｌｏの抽出 （３）で得られたクローンのうちＡＪ１１７３４（ＦＥ
ＲＭ−Ｐ ｇｚ＜ｃ７ ）を用いてＣ，１，Ｋａｄｏ
らの方法（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 １４
５ 、 １３６５（１９８１） ）ｔこ基づいたフェ
ノールによるＤＮＡ抽出法により菌体のＤＮＡを抽出し
アガローヌゲル電気泳動１こよりプラスミドＤＮＡと染
色体ＤＮＡを分離しプラスミドＤＮＡを含むアガロ−Ｉ
Ｏ− −スゲルよりヒスチジン生合成系遺伝子領域を担うｐＵ
ＢＩＩＱ を抽出した後透析して精製した。
ｌｌｏの抽出 （３）で得られたクローンのうちＡＪ１１７３４（ＦＥ
ＲＭ−Ｐ ｇｚ＜ｃ７ ）を用いてＣ，１，Ｋａｄｏ
らの方法（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、 １４
５ 、 １３６５（１９８１） ）ｔこ基づいたフェ
ノールによるＤＮＡ抽出法により菌体のＤＮＡを抽出し
アガローヌゲル電気泳動１こよりプラスミドＤＮＡと染
色体ＤＮＡを分離しプラスミドＤＮＡを含むアガロ−Ｉ
Ｏ− −スゲルよりヒスチジン生合成系遺伝子領域を担うｐＵ
ＢＩＩＱ を抽出した後透析して精製した。
こうして得られた新規プラスミドを（３）で述べたのと
同様の方法ｅこよって今度は原材のＡＪｌ１７３３（Ｆ
ｌ＋ 新規ヒスチジン生産菌Ｐこよるヒスチジン生産
（４）で得られたＡＪ］］７３４、ＡＪ１］７３５ 株
を培養した結果を第１表ｅこ示す。培養は５００７・ｅ
肩付フラスコ中にヒスチジン生産培地（グルコ−ｙ、８
ｆ／ｄ／、ＮＨ，ｃｌ］ ｙ／ｒｔｅＸＫＣＩ Ｏ，
２ｆ／ｄｅＳＫＨ，ＰＯ４０，］ ？／ｄｅ、 ＭｇＳ
Ｏ４・７Ｈ２Ｏｎ、ｏ＜ｙ／ｄ１２、「カザミノ酸Ｊ
（Ｄｉｆｃｏ ） ０．４２／ｄ４、Ｆｅ３Ｏ４’４Ｔ
（，２０ｘｍｇ／ｄｅ、Ｍｎ５ｏ、・４Ｈ，、。
同様の方法ｅこよって今度は原材のＡＪｌ１７３３（Ｆ
ｌ＋ 新規ヒスチジン生産菌Ｐこよるヒスチジン生産
（４）で得られたＡＪ］］７３４、ＡＪ１］７３５ 株
を培養した結果を第１表ｅこ示す。培養は５００７・ｅ
肩付フラスコ中にヒスチジン生産培地（グルコ−ｙ、８
ｆ／ｄ／、ＮＨ，ｃｌ］ ｙ／ｒｔｅＸＫＣＩ Ｏ，
２ｆ／ｄｅＳＫＨ，ＰＯ４０，］ ？／ｄｅ、 ＭｇＳ
Ｏ４・７Ｈ２Ｏｎ、ｏ＜ｙ／ｄ１２、「カザミノ酸Ｊ
（Ｄｉｆｃｏ ） ０．４２／ｄ４、Ｆｅ３Ｏ４’４Ｔ
（，２０ｘｍｇ／ｄｅ、Ｍｎ５ｏ、・４Ｈ，、。
１ ”／ｄｅ、 Ｌ−フルキ＝ ７、Ｌ−ロイシン各
２ａｍｇ／ｄｅ及びＣａＣ０４ｙ ／ｄｅを含む（ｐＨ
７、ｏ ） ）を２０ｍｅずつ分注し菌体を接種後３０
℃、９６時間振盪培養して行なった。尚、ＡＪｌ ］、
７３４とＡＪ１１７３５のときはカナマイシン５μ？
／ ｍｅを生産培地に添加しである。対照として原材
ＡＪ］］７３３を同様の条件で発酵を行なった。
２ａｍｇ／ｄｅ及びＣａＣ０４ｙ ／ｄｅを含む（ｐＨ
７、ｏ ） ）を２０ｍｅずつ分注し菌体を接種後３０
℃、９６時間振盪培養して行なった。尚、ＡＪｌ ］、
７３４とＡＪ１１７３５のときはカナマイシン５μ？
／ ｍｅを生産培地に添加しである。対照として原材
ＡＪ］］７３３を同様の条件で発酵を行なった。
第 １ 表
５３６
Claims (1)
- バチルス属のヒスチジンアンタボニストンこ面］性を有
する変異株より得たヒスチジンアンタゴニスト耐性ｅこ
関与する遺伝子領域が組み込まれているベクターを、バ
チルス属の微生物に含有せしめたし一ヒスチジン生産性
微生物を培養し、培地中ｅこ蓄積したし一ヒスチジンを
採取する事を特徴とするし一ヒスチジンの製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56204577A JPS58107192A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | 発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法 |
| EP82306559A EP0082637A3 (en) | 1981-12-18 | 1982-12-09 | L-histidine-producing microorganisms |
| US06/448,792 US4504581A (en) | 1981-12-18 | 1982-12-10 | Method for producing L-histidine by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56204577A JPS58107192A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | 発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58107192A true JPS58107192A (ja) | 1983-06-25 |
| JPH0511960B2 JPH0511960B2 (ja) | 1993-02-16 |
Family
ID=16492767
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56204577A Granted JPS58107192A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | 発酵法によるｌ−ヒスチジンの製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4504581A (ja) |
| EP (1) | EP0082637A3 (ja) |
| JP (1) | JPS58107192A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06189783A (ja) * | 1983-07-06 | 1994-07-12 | Gist Brocades Nv | 工業バチルス微生物種によるタンパク質又はポリペプチドの製造 |
| WO2006038695A1 (ja) | 2004-10-07 | 2006-04-13 | Ajinomoto Co., Inc. | 塩基性物質の製造法 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2319283A1 (en) | 1999-09-20 | 2001-03-20 | Kuniki Kino | Method for producing l-amino acids by fermentation |
| JP4245746B2 (ja) | 1999-09-20 | 2009-04-02 | 協和発酵バイオ株式会社 | 発酵法によるアミノ酸の製造法 |
| CN111534474B (zh) * | 2020-03-30 | 2022-06-10 | 江南大学 | 重组枯草芽孢杆菌及其在生产ε-聚赖氨酸中的应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5037279B2 (ja) * | 1973-06-18 | 1975-12-01 | ||
| JPS565099A (en) * | 1979-06-25 | 1981-01-20 | Ajinomoto Co Inc | Production of l-histidine through fermentation process and microorganism used therefor |
-
1981
- 1981-12-18 JP JP56204577A patent/JPS58107192A/ja active Granted
-
1982
- 1982-12-09 EP EP82306559A patent/EP0082637A3/en not_active Withdrawn
- 1982-12-10 US US06/448,792 patent/US4504581A/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AGR.BIOL CHEM=1971 * |
| J.BACTERIOL=1979 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06189783A (ja) * | 1983-07-06 | 1994-07-12 | Gist Brocades Nv | 工業バチルス微生物種によるタンパク質又はポリペプチドの製造 |
| WO2006038695A1 (ja) | 2004-10-07 | 2006-04-13 | Ajinomoto Co., Inc. | 塩基性物質の製造法 |
| EP2818556A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
| EP2818554A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
| EP2818555A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4504581A (en) | 1985-03-12 |
| EP0082637A3 (en) | 1984-02-22 |
| EP0082637A2 (en) | 1983-06-29 |
| JPH0511960B2 (ja) | 1993-02-16 |
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