JPH11511727A - 新規ペプチド、その製造方法及び使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）：

Description

【発明の詳細な説明】 新規ペプチド、その製造方法及び使用 本発明は、新規ペプチド、その製造方法及び疾患の制圧の際のその使用に関す る。 心拍障害は主な先進国の最も頻繁な死因のひとつであることは公知である。こ の場合、特に不整脈は冠状動脈性心疾患、虚血及び高齢との関連で著しく重要で ある。この場合、不整脈を引き起こすメカニズムは著しく多様であり、部分的に はなお不明である。例えば梗塞部中で生き残ったプルキンエ線維が外部ペースメ ーカー（foci）として不整脈を維持できるのは確かである。同様に、心臓虚血の 領域内で流出するカリウムによりこの線維の脱分極が生じ、この脱分極が部分的 に興奮不可能にし、その結果、興奮伝播の１方向性ブロックを生じさせる。多数 の他のメカニズムの他に、梗塞の範囲内で活動電位期間（分散）の局所的な差異 が生じ、これがリエントリーサークル（Reentry-Kreise）を引き起こす。このよ うな循環する興奮から、心室粗動又は心室細動に発展する。活動電位期間のこの 種の分散を引き起こすもう一つのメカニズムは、細胞の結合解除（Circ．Res．6 5，1426，(1989)）であり、細胞間の電位差がもはや調整できないためである。 この結合解除は一方で年齢の増加と共に例えば 結合組織沈着（Circ．Res．62，811(1988)）により生じ、他方で、梗塞の領域内 で細胞間結合の形成（ギャップ結合チャンネル）により、例えばｐＣＯ₂の上昇 及びｐＨ値及びＡＴＰ含有量の低下に基づき生じる（Am．J．Physiol．248，H75 3-H764(1985)，Circ．Res 45，324(1979)）。 今までに抗不整脈剤としては、既に急性で生じている心拍障害の治療のために 適しているトランスメンブランイオンチャンネル（ナトリウムチャンネル、カル シウムチャンネル及び／又はカリウムチャンネル）を遮断するイオンチャンネル 遮断剤が使用される。 しかしながら、この物質を不整脈の予防のために使用すべき場合に問題が生じ る。少なくとも予防的投与の際にこのイオンチャンネル遮断剤は高い前不整脈的 危険性（proarrhythmisches Risiko）を示す（Drugs 29，Suppl．4 33-34(1985) ，New England J．Med．324，781(1991)）。このことは、典型的な抗不整脈剤の 投与により逆に不整脈を誘発してしまうということを意味する。従って、これら の物質は予防のためにはあまり適していない。 従って、この前不整脈的作用を示さない新規の作用原理を有する予防的に適用 可能な物質が探される。新規の原理は細胞結合の改善である。 慣用の抗不整脈剤を用いた臨床的及び実験的結果は、高い前不整脈的副作用の ために、不整脈の予防がほ とんど不可能であることを示した。この副作用は試験管内試験においても検出す ることができた（New England J．Med．324，781(1991)，Circulation 87，617( 1993)）。 新規の原則として、抗不整脈性のペプチドＡＡＰ１０が提案され（Naunyn Sch miedeberg's Arch．Pharmacol．350，174(1994)）、このペプチドは細胞結合の 改善を生じさせ、活動電位期間中の局所的な差異を減少させ、心外膜の興奮パタ ーンを安定化させる。切除したウサギの心臓に関する試験管内試験において、こ の物質は実際に前不整脈的危険性を示さず、虚血に関連する不整脈に対して有効 である。この物質の初期作用は電位期間の分散の低下にある。 本発明の対象は、式Ｉ： ［式中、 ＲはＨ又はＯＨ、 ＸはＡｌａ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ又はＶａｌ、 ＹはＰｒｏ又はＨｉｓ、及び ＺはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩを表し、 その際、ＸがＧｌｙ、ＹがＰｒｏ及びＲがＯＨである場合に、ＺはＨではない］ で示される化合物並びにこのペプチドの疾患を制圧するための使用である。Ｈｙ ｐは上記式中４−ヒドロキシプロリンを表す。 式Ｉ中、Ｘは有利にグリシン基を表す。Ｙは有利にプロリン基である。Ｚは特 にハロゲン原子、有利にヨウ素を表し、これは２位及び有利に３位にある。 化合物Ｉはペプチド化学において通常の方法により製造することができる。特 に、この製造のために次の方法が適している： E．Atherston & R.C．Streppard（1989；"Solid phase peptide synthesis，I RL-Press，Oxford）による、Ｆｍｏｃ法の使用下での改良メリフィールド法によ る不溶性樹脂上での固相合成。 この場合、アミノ酸活性化は酸無水物、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールエ ステル、又はペンタフルオロフェニルエステルの形成を介して行うことができる 。 新規のペプチドの特別な作用は、この物質の影響下に、例えば心筋梗塞の領域 内で又は年齢の増加と共に生じるような作動電位時間における局所的差異及び興 奮伝播の不規則性を抑制することにある。 本発明は、虚血に関連する及び年齢に関連する心拍障害の予防的治療を可能に する。この場合、この物質は、従来の抗不整脈剤とは反対に、試験管内試験にお いてわずかな前不整脈的危険を有するにすぎない。公知の物質と比較して、この 新規のペプチドはより高い効力及びより高い達成可能な最大作用を示す。 実施例 １． フルオレニルメトキシカルボニル−ヨード−チロシンの製造 ガブリエル合成（Gabriel-Synthese）に従って、チロシン及び無水フタル 酸を相互に酢酸中で２０ｈ反応させ、この反応混合物をヨウ素及び酢酸−Ｈｇ（ ＩＩ）と反応させてＮ−フタリル−Ｌ−モノヨードチロシンにした。引き続きこ の保護基をフェニルヒドラジンで分解した。この反応混合物をＮａ₂ＣＯ₃、水及 びアセトンの存在で、フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ−ヒドロキシスクシ ンイミドと反応させた。ＨＣｌで酸性にした後、所望のＦｍｏｃ−ヨード−チロ シンが得られた。 ２． ペプチド（１） Ｈ₂Ｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｐｒｏ−３ −ヨードチロシンアミドの合成 公知の合成プロトコルにより、Atherton & SheppardによるＦｍｏｃ法で 方法を実施した。０．５５ｍｍｏｌ／ｇの負荷度でリンク−樹脂（Rink-Harz） ２７２．７ｍｇを装入し、ジメチルホルムアミドで前膨潤し、その後この保護基 をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％のピペリジンで分解した。Ｆｍｏ ｃ−ヨード−チロシン０．９ｍｍｏｌをＤＭＦですすいだ後、ＤＭＦ中 のジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）と共に添加した。ＤＭＦ及びメタ ノールですすいだ後、保護基をＤＭＧ中２０％のピペリジンで分解し、さらにす すいだ後に次のアミノ酸と連結した。このために、Ｆｍｏｃ−プロリン−ＯＨを Ｏ−（（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ＮＮＮＮ−テトラメチルウロ ミウム−テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾ ール（ＨＯＢＴ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）と一緒にＤＭＦ 中でペプチドと反応させた。すすいだ後に、保護基をピペリジン、ＤＭＦで分解 し、さらにすすいだ後にこの反応生成物を上記したようにＦｍｏｃ−ヒドロキシ プロリン−ＯＨと反応させた。そのつどすすぎかつ分解した後、この方法で順番 にＦｍｏｃ−グリシン−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−アラニン−ＯＨ及びＦｍｏｃ−グリシ ン−ＯＨを連結させた。最後に、保護基をＤＭＦ中２０％のピペリジンで分解し 、すすぎ、６ｈにわたり０．１ｍｂａｒで乾燥させた。最後に樹脂をトリフルオ ロ酢酸及び５％の水の添加により２ｈにわたり分解し、生成物をすすぎ、回転蒸 発させ、酢酸中に溶かしジエチルエーテルを用いて再沈殿させた。この沈殿物を 取り ）で公知の方法で生成した。新規のペプチド７． ６ｍｇが得られた（分子量：７０１．６）。 例１及び２と同様に次のペプチドが得られた： （２） Ｈ₂Ｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｐｒｏ-３−フルオロチ ロシンアミド （３） Ｈ₂Ｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｐｒｏ-３−クロロチロ シンアミド （４） Ｈ₂Ｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｐｒｏ−３−ブロモチ ロシンアミド （５） Ｈ₂Ｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｐｒｏ−チロシンアミ ド （６） Ｈ₂Ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｐｒｏ−チロシンアミ ド （７） Ｈ₂Ｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｐｒｏ−チロシンアミ ド （８） Ｈ₂Ｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｈｉｓ−チロシンアミ ド （９） Ｈ₂Ｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｐｒｏ−フェニルアラ ニンアミド。 適用： ペプチド（１）を単離し、ランゲンドルフ技術（Langendorff-Technik）によ り一定圧力で（７０ｃｍ Ｈ₂Ｏ）タイロード溶液で潅流したウサギの心臓を、 冠状内（intracoronar）に上昇する濃度（１０^-10、１０^-9、１０^-8、１０^-7ｍ ｏｌ／ｌ）で注入し、同時に心外膜の電位マッピングを実施した（J．Phar macol．Methods 22，197(1989)，Circulation 87，617(1993)参照）。 この試験の際に、心外膜の心臓表面の２５６箇所で同時に単極心電図を記録し 、それにより全ての２５６箇所で局所的心外膜の活動電位期間を測定することが できた。このデータから活動電位期間の平均値に対する分布及びＡＡＰ１０と比 較してこの物質によるこの分布の変化を試験した。両方の物質に対して増大する 幅ほその曲線（zunehmende Leptocurtosis der Kurve）が示された、つまり：Ａ ＡＰ１０の影響下でも新規のペプチドの影響下でも、濃度に依存して増加する多 くの値が平均値付近にあった。対照条件下では全ての値の５０％が平均値の±５ ｍｓの範囲内に見出され、それに対してＡＡＰ１０のもとでは最大７４％まで（ １０^-8ｍｏｌ／ｌ）、新規ペプチドのもとでは９０％（１０^-7ｍｏｌ／ｌ）まで が見出された。このことは、新規ペプチドが心外膜の活動電位期間の分散を明ら かに低下させ、この低下はＡＡＰ１０により達成される低下よりも優れているこ とを意味する。 心外膜の電位期間（ＡＲＩ）についての、平均値から５ｍｓより少ない偏差の 値の数が観察される場合に、新規のペプチドの改善された作用が特に明らかであ る。平均値に対して±５ｍｓの間隔中で、新規ペプチドの場合に対照条件のもと でＡＲＩ値の５４％が平均値の±５ｍｓの間隔内にあったが、それに対して、１ ０^-10ｍｏｌ／ｌではＡＲＩ値の７１％、１０^-9ｍｏｌ／ｌでは７３％、１０^-8 ｍｏｌ／ｌでは７５％、１０^-7ｍｏｌ／ｌでは９０％が平均値の±５ｍｓの間隔 内にあった。ＡＡＰ１０の場合、１０^-8ｍｏｌ／ｌより高い濃度においてようや く７０％を上回る値が達成され、７４％の最大値は上回ることはなかった。 この新規の物質は、ＡＡＰ１０と比較して、既により低い濃度で作用が示され 、ＡＡＰ１０の場合７４％であるのに対して９０％までの達成可能なより大きな 最大の作用が示される（％値：心外膜の活動電位のｎ％は平均値に対して±５ｍ ｓの範囲内でばらつく時間であり、これは分散の減少に相当する）。従って、こ の新規のペプチドはＡＡＰ１０よりも有効であるばかりか、最大作用に関しても より効果があり、従ってＡ ＡＰ１０と比較して進歩を示している。 前不整脈的危険性 新規物質並びにＡＡＰ１０は、両方とも、従来の抗不整脈剤と比較して特にわ ずかな前不整脈的危険性を示す（表２）。 の値が低くなればそれだけ、物質の前不整脈的作用が高まる。全ての濃度は通常 の治療的な遊離血漿濃度に相当する。通常のクラスＩ抗不整脈剤の中で、リドカ インは定評通りになお比較的低い前不整脈的危険を有するものに属するが、フレ カイニドは一般的定評によ り著しく高い前不整脈的危険性を有する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｃ Ａ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＭＸ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＫ，ＴＲ，ＵＡ， ＵＳ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 式Ｉ： ［式中、 ＲはＨ又はＯＨ、 ＸはＡｌａ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ又はＶａｌ、 ＹはＰｒｏ又はＨｉｓ及び ＺはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩを表し、 その際、ＸがＧｌｙ、ＹがＰｒｏ及びＲがＯＨの場合に、ＺはＨではない］ で示される化合物。 ２． Ｈ₂Ｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｐｒｏ−３−ヨードチロシン アミド。 ３． 疾患を制圧する際に使用するための請求項１記載の式Ｉの化合物。