JPH11503999A - ヘリコバクター ピロリ抗原 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 新規なヘリコバクター ピロリ由来の抗原を提供する。ヘリコバクター ピロリ感染の診断におけるその使用、該診断方法、およびそのような方法に使用されるキット、もまた開示される。さらに、抗原の新規な抗原断片、さらには該抗原または一以上の抗原断片のいずれかからなるワクチンが提供される。

Description

【発明の詳細な説明】 ヘリコバクター ピロリ抗原 本発明は、ヘリコバクター ピロリ(Helicobacter pylori)の新規な抗原、ま たはその抗原断片、ヘリコバクター ピロリ(Helicobacter pylori)の検出にお ける該抗原若しくはその断片の使用およびこれからなるキット、さらには該抗原 若しくはその断片からなるワクチンおよび該抗原の単離方法に関するものである 。 哺乳動物、特にヒトの腸内感染は、一般的な粘膜の免疫システムの活性化を通 して、唾液等の粘液分泌物における免疫反応を刺激する。この反応は、通常Ｉｇ Ａ抗体の存在によって特徴付けられるが、初期の段階では血清中の抗体反応に対 応することが多い。しかしながら、唾液等の分泌物中の免疫反応は、抗原（例え ば、細菌またはウィルス）が体内から除去された後に迅速に消失する。したがっ て、粘液分泌物中に抗体が存在するということは、現行の感染(current infecti on)、つまりその時点で感染している(contemporary infection)ことを示してい る。例えば、微生物の感染の場合には、粘液分泌物中に抗体（以降、分泌抗体(s ecretious antibody)と称する）があるということは、腸内等に微生物がその時 点でコロニーを形成していることを意味しており、このためその時点で感染して いるかを検査するのに有用である。これに対して、血清中の抗体は、微生物が体 内から除去された後一定期間存在し続ける。したがって、血清抗体試験が陽性で あるということは、過去および現在の両方において抗原に接していることを示す ため、臨床医にとっては余り有用ではない。これに対して、分泌抗体試験が陽性 であるということは、微生物に現在感染(present infection)またはその時点で 感染(con temporary infection)していることを示すものである。 ヘリコバクター ピロリ(H．pylori)の感染の診断は、顕微鏡検査、胃粘膜の 生検における微生物の培養若しくはウレアーゼの検出、尿素呼吸試験(urea brea th test)によってまたは血清ＥＬＩＳＡにおける特異的な抗体の存在によってな される。ヘリコバクター ピロリ（H．pylori）の感染は、胃粘膜の感染であり 、胃の分泌物中のＩｇＡ抗体反応を誘導すると考えられる。しかしながら、胃の 分泌物中のヘリコバクター ピロリに特異的な抗体はＩｇＧクラスのものであり 、考えられていたようなＩｇＡクラスのものではないことが発見された。検出さ れても、ほとんどＩｇＡ抗体は検出されない。したがって、ＡＵ−Ａ−９０６７ ６７６号は、ヘリコバクター ピロリ抗原に特異的な粘液分泌物中のＩｇＧの検 出に関するものであり、このため、哺乳動物の上記微生物による現行の感染、つ まりその時点における感染を検査する手段を提供するものである。相当する文献 は、ウィット(Witt)ら、フロンティアーズイン ムコサル イムノロジー(Front iers in Mucosal Immunology)、１巻、ページ６９３〜６９６（１９９１年）で ある。 ヘリコバクター ピロリ(Helicobacter pylori)が陽性である患者の唾液にお けるＩｇＧ抗体の存在は、アニュアル ミーティングス オブ ザ アメリカン ガストロエンテロロジカル アソシエーション(Annual Meetings of the Amer ican Gatroenterological Association)において幾らか注目を浴びた。１９８９ 年の会報において上記したような抗体の存在がチン(Czinn)らによって開示され た後、ラーセンら(Larsen)らは、１９９１年５月の会報において唾液のＩｇＧ量 は抗体による治療中の治療による応答(therapeutic response)の実用的な非侵襲 マーカーとなると結論付けた。１９９２年４月の会報において、ランデス(Lande s)らは、先の観察を確認し、ヘリコバクター ピロリに対する唾液のＩ ｇＧの測定は、特に他の試験が実用的でない多くのまたは小児の集団における、 ヘリコバクター ピロリが陽性である患者を検出するための簡単な、非侵襲試験 であると考えた。 ＷＯ−Ａ−９３２２６８２号には、ヘリコバクター ピロリに関する簡便なか つ信頼性の高いイン ビトロ試験が開示される。この試験は、試験する哺乳動物 の粘液分泌物におけるＩｇＧ抗体との反応に抗原製剤を利用するものである。 したがって、診断試験に使用できるヘリコバクター ピロリ由来の新規な抗原 を同定、単離および提供する必要性がある。これらの抗原は、特異的であり、容 易に精製可能でなければならず、また、良好な特異性によって特性が明らかにさ れ、上記したような試験に使用される際に偽陽性の結果がでないものでなければ ならない。加えて、これらの抗原は、ヘリコバクター ピロリの感染の処置また は予防に有用なワクチンの基礎を形成するものである。 したがって、第一の概念によると、本発明は、ヘリコバクター ピロリ抗原で あり、変性及び還元条件下で測定される際に、５５〜６５ｋＤａの範囲の分子量 を有するタンパク質を提供するものである。 好ましくは、上記抗原タンパク質は、そのアミノ末端に、下記アミノ酸配列： またはそれと実質的に相同性のある配列を有する。 アミノ酸レベルで、タンパク質配列は、有意な数の構成アミノ酸が相同性を有 する際には、他のタンパク質配列と実質的に相同性を有するとみなされる。少な くとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％ （数が大きいほど好ましい）のアミノ酸が相 同性を有する。 全タンパク質の一部がそれ自身抗原性を有することも発見した。したがって、 第二の概念によると、本発明は、本発明のタンパク質の抗原断片(antigenic fra gment)を提供するものである。 本発明の上記概念の一つの好ましい実施態様によると、抗原断片は下記配列： を有するペプチドである。 抗原特性を維持する限りは上記断片の配列をある程度変更することが可能であ ることは、当業者には予想される。このような変異体もまた本発明の一部をなす 。 本発明の抗原タンパク質、またはその断片は、精製された若しくは単離された 調製物として、または他のヘリコバクター ピロリ抗原タンパク質との混合物の 一部として、単独で提供できる。 したがって、第三の概念によると、本発明は、本発明のタンパク質および／ま たはその一以上の抗原断片からなる抗原組成物を提供するものである。このよう な組成物は、ヘリコバクター ピロリの検出および／または診断に使用できる。 一実施態様によると、上記組成物は一以上のヘリコバクター ピロリ抗原をさら に有する。 第四の概念によると、本発明は、下記よりなるヘリコバクター ピロリの検出 および／または診断方法を提供するものである： （ａ）本発明の抗原タンパク質、またはその抗原断片、または抗原組成物を被 試験サンプルと接触させ；および （ｂ）ヘリコバクター ピロリに対する抗体の存在を検出する。 特に、本発明の上記タンパク質、その抗原断片、または抗原組成物は、 ＩｇＧ抗体を検出するのに使用できる。好ましくは、被試験サンプルは、生物学 的なサンプル、例えば、血液または唾液のサンプルである。粘液分泌サンプルを 用いた適当なヘリコバクター ピロリの検出方法の一例は、ＷＯ−Ａ−９３２２ ６８２号に記載されるものである。 第五の概念によると、本発明は、ヘリコバクター ピロリの検出および／また は診断における本発明の抗原タンパク質、またはその抗原断片、または抗原組成 物の使用を提供するものである。好ましくは、該検出および／または診断はイン ビトロで行われる。 第六の概念によると、本発明は、下記段階からなる、本発明の抗原タンパク質 の単離方法を提供するものである： （ａ）ヘリコバクター ピロリの培養物を調製し、適当な条件下で該培養物を 成長させこれらを集めた後、洗浄して洗浄細胞ペレットを得る； （ｂ）該洗浄細胞を適当な緩衝液中に再懸濁した後、細胞を破壊する； （ｃ）遠心分離して細胞破片を除去し、可溶性細胞タンパク質を含む上清を得 る； （ｄ）得られた溶液を勾配溶出によるイオン交換クロマトグラフィーにかけて 、得られた画分をウレアーゼの存在に関してアッセイする； （ｅ）ウレアーゼを含む画分をプールし、該プールをゲル浸透クロマトグラフ ィーにかける； （ｆ）適当なピークを選択する；および （ｇ）単離物における５５〜６５ｋＤａの分子量を有する特定のタンパク質の 存在を確認し、該タンパク質を単離する。 本発明の抗原タンパク質、その抗原断片または抗原組成物は、ヘリコバクター ピロリのインビトロの検出および／または診断に使用される キットの一部として提供できる。したがって、第七の概念によると、本発明は、 本発明の抗原タンパク質、その抗原断片または抗原組成物からなるヘリコバクタ ー ピロリの検出および／または診断に使用されるキットを提供するものである 。 さらに、本発明の抗原タンパク質またはその抗原断片は、ヘリコバクター ピ ロリに対する免疫反応を誘導するのに使用できる。したがって、さらなる概念に よると、本発明は、本発明のタンパク質または一以上のその抗原断片からなる被 験者の免疫反応を誘発することができる組成物を提供するものである。好ましく は、該組成物は、ワクチン組成物であり、必要であれば、一または他の適当なア ジュバントを有していてもよい。このようなワクチン組成物は、予防用のまたは 治療用のワクチン組成物のいずれかであってもよい。 本発明のワクチン組成物は、一以上のアジュバントを含んでいてもよい。当該 分野において既知のアジュバントの例としては、水酸化アルミニウム等の無機ゲ ルまたは不完全フロインドアジュバント等の油中水形乳濁液が挙げられる。他の 使用できるアジュバントは当業者には既知である。 さらなる他の概念によると、本発明は以下を提供するものである： （ａ）免疫原性組成物、好ましくはワクチンの調製における本発明のタンパク 質または一以上のその抗原断片の使用； （ｂ）被験者の免疫反応の誘導におけるこのような免疫原性組成物の使用；お よび （ｃ）有効量の本発明のタンパク質、少なくとも一の抗原断片または抗原組成 物を、好ましくはワクチンとして、被験者に投与する段階からなる、被験者のヘ リコバクター ピロリ感染の処置または予防方法。 本発明の各概念の好ましい態様は、必要であれば変更を加えて(mutat is mutandis)、各他の概念と同様である。 本発明を下記実施例を参照しながら説明するが、下記実施例は本発明を何等制 限するものではない。実施例１ （ａ）ヘリコバクター ピロリの培養物を適当な条件下で生育させ、細胞をリン 酸緩衝生理食塩水中に集めた。次に、繰り返し遠心して細胞破片や他の混入物、 例えば、寒天、を除去し、新鮮なＰＢＳを３回添加して洗浄細胞ペレットを得た ； （ｂ）この洗浄細胞を０．１Ｍ ＴＲＩＳ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．２）中に再 懸濁し、イオン交換クロマトグラフィー段階に使用した。次に、この細胞懸濁液 を細胞を破壊するのに十分な強度及び時間で超音波処理（１００枚の寒天プレー トからの細胞を含む１０ｍｌサンプルについて、３０秒間６μ、６０秒間オフ、 これを２５回繰り返す）した； （ｃ）次に、この懸濁液を遠心し、細胞破片を除去し、可溶性細胞タンパク質を 含む上清を得た； （ｄ）さらに、段階（ｃ）の溶液を、所定の方法で０〜１．０Ｍの溶出緩衝液の 塩化ナトリウム濃度を上げることを基礎とした勾配溶出を用い シア(Pharmacia)製）等の強陰イオン樹脂によるイオン交換クロマトグラフィー によって分画した。次に、画分をウレアーゼの存在に関してアッセイした； （ｅ）続いて、ウレアーゼを含む画分をプールし、球状タンパク質のカットオフ (cut-off)範囲が５×１０³〜５×１０⁶である樹脂を用いたゲル浸透クロマトグ ラフィーにかけた； （ｆ）適当なピークを下記により選択した： （ｉ）すべての画分についてウレアーゼアッセイを行い、ウレアーゼ 活性を有するタンパク質のピークを同定し；さらに （ｉｉ）ウレアーゼ陽性を示す画分及びウレアーゼピークのすぐ近くにありか つ低分子量を有するタンパク質含有ピークをすべて、１μｇのこれらの画分のタ ンパク質をニトロセルロースまたはその等価物上にスポットし、乾燥した後、ヘ リコバクター ピロリ陽性患者の血清または唾液サンプル中のヘリコバクター ピロリに特異的な抗体との反応能を測定することによって分析する； （ｇ）単離物における特異的なタンパタ質の存在を、ポリアクリルアミドゲル電 気泳動（ＰＡＧＥ）及びウェスタンブロッティングを行い、ヘリコバクター ピ ロリ陽性患者から集めたヒト血清から調製されたプール由来のＩｇＧを用いてブ ロットを分析することによって確認した。ＰＡＧＥは変性条件下で行い、５５〜 ６５ｋＤａの範囲の分子量を有すると同定されたタンパク質を単離した。実施例２ ウサギにペプチド ＭＶＴＬＩＮＮＥ を接種した。血液サンプルを下記のよ うにしてアッセイし、抗体反応を試験した。アッセイ方法 血液サンプルに、１ｍｌの血液当たり２５μｌの１％チオメルサル(Thiomersa l)溶液（即ち、２５μｌ／ｍｌの濃度）を添加した後、サンプルを試験まで−４ ０℃で貯蔵した。 各ウェルが１００μｌの５μｇ／ｍｌのヘリコバクター ピロリ抗原（ＷＯ− Ａ−９３／２２６８２号に記載されたのと同様の抗原調製物）で、さらにポスト コート(post coat)として３００μｌの１％バイコエー溶液(Byco A solution)で 被覆されたプレートを用いて、アッセイを行った。 血液サンプルをＣＤＬ洗浄緩衝液を用いて希釈し、一連の希釈液を作 製した。 ＣＤＬ洗浄緩衝液 １ｄｍ³当たりの量 Ｔｒｉｓ １２．１１ｇ ５Ｍ ＨＣｌ １５ｍｌ 蒸留水 ４００ｍｌ ＮａＣｌ ８７．６６ｇ チオメルサル(Thiomersal) ０．１ｇ ツィーン８０(Tween 80) ５０ｇ （ｉ） トリス(tris)を蒸留水に加え： （ｉｉ） ２０℃でのｐＨが７．８０になるまで５Ｍ ＨＣｌを添加し； （ｉｉｉ）チオメルサル(Thiomersal)を加え； （ｉｖ） ＮａＣｌを加え； （ｖ） ツィーン８０(Tween 80)を加え； （ｖｉ） 最終容量になるまで蒸留水で調節する。 基質としてのペルオキシダーゼクエン酸塩緩衝液(Peroxidase Citrate Buffer )で１／２５に希釈されたＡＢＴＳ（２，２−アジノ−ジ−［３−エチル−ベン ズチアゾリンースルフォネート］(2,2-azino-di-[3-ethyl-benzthiazolin-sulfo nate)]）とのブタの抗ウサギ西洋ワサビのペルオキシダーゼ結合体(conjugate) を用いて、結合抗体を検出した（緑色が陽性の結果を示す）。 ペルオキシダーゼクエン酸塩緩衝液 （Peroxidase Citrate Buffer） １ｄｍ³当たりの量 蒸留水 ７００ｍｌ クエン酸 ２３．０ｇ ＮａＯＨ １００ｍｌ ３０％ Ｈ₂Ｏ₂ ０．５ｍｌ １Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．０に調節する。 アッセイのプロトコルは下記のとおりであった： １）１００μｌの希釈サンプルを各ウェルに添加する； ２）（振盪しながら）３０分間インキュベートする； ３）ＣＤＬ洗浄緩衝液で５回洗浄し、プレートを乾燥する； ４）１００μｌのブタの抗ウサギＨＲＰを各ウェルに添加する； ５）（振盪しながら）３０分間インキュベートする； ６）５回洗浄し、プレートを乾燥する； ７）１００μｌのＡＢＴＳを各ウェルに添加する； ８）３０分間インキュベートする；および ９）＠４１４ｎｍでプレートを読み取る。結果 ピークの抗体反応は接種してから６カ月付近で生じた。下記表１はペプチドを 接種された２匹のウサギからの血液サンプルに関する経時的な結果を示すもので ある。データは１／１００倍希釈サンプルに関するものである。 これらの結果を図１に示す。 明らかに、本ペプチドは抗ヘリコバクター ピロリ抗体反応を誘発することが 分かる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年２月５日 【補正内容】 請求の範囲 １．アミノ末端に、下記アミノ酸配列： Met-Val-Thr-Leu-Ile-Asn-Asn-Glu-Asp-Asp またはそれと実質的に相同性のある配列を有する、ヘリコバクター ピロリ抗原 であり、変性及び還元条件下で測定される際に、５５〜６５ｋＤａの範囲の分子 量を有するタンパク質。 ２．請求の範囲第１項に記載のタンパク質の抗原断片。 ３．下記配列： またはそれと実質的に相同性のある配列を有する、請求の範囲第２項に記載の抗 原断片。 ４．請求の範囲第１項に記載のタンパク質または請求の範囲第２項または第３ 項に記載の少なくとも一の抗原断片からなる抗原組成物。 ５．一以上の他のヘリコバクター ピロリ抗原をさらに有する、請求の範囲第 ４項に記載の抗原組成物。 ６．ヘリコバクター ピロリの検出および／または診断に使用される請求の範 囲第１項に記載のタンパク質、請求の範囲第２項または第３項に記載の抗原断片 または請求の範囲第４項または第５項に記載の抗原組成物。 ７．以下よりなるヘリコバクター ピロリの検出および／または診断方法： （ａ）請求の範囲第１項に記載のタンパク質、請求の範囲第２項または第３項 に記載の少なくとも一の抗原断片または請求の範囲第４項または第５項に記載の 抗原組成物を被試験サンプルと接触させ；および （ｂ）ヘリコバクター ピロリに対する抗体の存在を検出する。 ８．該サンプルが唾液サンプルである、請求の範囲第７項に記載の方法。 ９．ヘリコバクター ピロリの検出および／または診断における請求の範囲第 １項に記載のタンパク質、請求の範囲第２項または第３項に記載の少なくとも一 の抗原断片または請求の範囲第４項または第５項に記載の抗原組成物の使用。 １０．該検出および／または診断がイン ビトロで行われる、請求の範囲第７項 または第８項に記載の方法または請求の範囲第９項に記載の使用。 １１．以下よりなる請求の範囲第１項に記載のタンパク質の単離方法： （ａ）ヘリコバクター ピロリの培養物を調製し、適当な条件下で該培養物を 成長させこれらを集めた後、洗浄して洗浄細胞ペレットを得る； （ｂ）該洗浄細胞を適当な緩衝液中に再懸濁した後、細胞を破壊する； （ｃ）遠心分離して細胞破片を除去し、可溶性細胞タンパク質を含む上清を得 る； （ｄ）得られた溶液を勾配溶出によるイオン交換クロマトグラフィーにかけて 、得られた画分をウレアーゼの存在に関してアッセイする； （ｅ）ウレアーゼを含む画分をプールし、該プールをゲル浸透クロマトグラフ ィーにかける； （ｆ）適当なピークを選択する；および （ｇ）単離物における５５〜６５ｋＤａの分子量を有する特定のタンパク質の 存在を確認し、該タンパク質を単離する。 １２．請求の範囲第１項に記載のタンパク質、請求の範囲第２項または 第３項に記載の少なくとも一の抗原断片または請求の範囲第４項または第５項に 記載の抗原組成物からなるヘリコバクター ピロリの検出および／または診断に 使用するキット。 １３．請求の範囲第１項に記載のタンパク質、請求の範囲第２項または第３項に 記載の少なくとも一の抗原断片または請求の範囲第４項または第５項に記載の抗 原組成物からなる被験者の免疫反応を誘発できる組成物。 １４．必要であればさらに一以上のアジュバントを有する、ワクチン組成物であ る請求の範囲第１３項に記載の組成物。 １５．免疫原性組成物、好ましくはワクチンの調製における請求の範囲第１項に 記載のタンパク質、請求の範囲第２項または第３項に記載の少なくとも一の抗原 断片または請求の範囲第４項または第５項に記載の抗原組成物の使用。 １６．被験者の免疫反応の誘導における請求の範囲第１５項に記載の免疫原性組 成物の使用。 １７．有効量の請求の範囲第１項に記載のタンパク質、請求の範囲第２項または 第３項に記載の少なくとも一の抗原断片または請求の範囲第４項または第５項に 記載の抗原組成物を被験者に投与する段階からなる、被験者のヘリコバクター ピロリ感染の処置または予防方法。 １８．該タンパク質、一以上の抗原断片または抗原組成物がワクチンの形態で投 与される、請求の範囲第１７項に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，Ｕ Ｇ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ )，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ， ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，Ｋ Ｇ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 クランシー，ロバート，レウェリン オーストラリア国，ニューサウスウェール ズ州 2300，ニューカッスル，ロイヤル ニューカッスル ホスピタル，デビッド マディソン クリニカル サイエンセス ビルディング，レベル ３，パソロジー, ザ ユニヴァーシティ オブ ニューカッ スル (72)発明者 クリップス，アラン オーストラリア国，エーシーティ 2616, ベルコネン，ピー．オー．ボックス １, ユニヴァーシティ オブ キャンベラ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ヘリコバクター ピロリ抗原であり、変性及び還元条件下で測定される際 に、５５〜６５ｋＤａの範囲の分子量を有するタンパク質。 ２．アミノ末端に、下記アミノ酸配列： Met-Val-Thr-Leu-Ile-Asn-Asn-Glu-Asp-Asp またはそれと実質的に相同性のある配列を有する、請求の範囲第１項に記載のタ ンパク質。 ３．請求の範囲第１項または第２項に記載のタンパク質の抗原断片。 ４．下記配列： またはそれと実質的に相同性のある配列を有する、請求の範囲第３項に記載の抗 原断片。 ５．請求の範囲第１項または第２項に記載のタンパク質または請求の範囲第３ 項または第４項に記載の少なくとも一の抗原断片からなる抗原組成物。 ６．一以上の他のヘリコバクター ピロリ抗原をさらに有する、請求の範囲第 ５項に記載の抗原組成物。 ７．ヘリコバクター ピロリの検出および／または診断に使用される請求の範 囲第１項または第２項に記載のタンパク質、請求の範囲第３項または第４項に記 載の抗原断片または請求の範囲第５項または第６項に記載の抗原組成物。 ８．以下よりなるヘリコバクター ピロリの検出および／または診断方法： （ａ）請求の範囲第１項または第２項に記載のタンパク質、請求の範 囲第３項または第４項に記載の少なくとも一の抗原断片または請求の範囲第５項 または第６項に記載の抗原組成物を被試験サンプルと接触させ；および （ｂ）ヘリコバクター ピロリに対する抗体の存在を検出する。 ９．該サンプルが唾液サンプルである、請求の範囲第８項に記載の方法。 １０．ヘリコバクター ピロリの検出および／または診断における請求の範囲第 １項または第２項に記載のタンパク質、請求の範囲第３項または第４項に記載の 少なくとも一の抗原断片または請求の範囲第５項または第６項に記載の抗原組成 物の使用。 １１．該検出および／または診断がイン ビトロで行われる、請求の範囲第８項 または第９項に記載の方法または請求の範囲第１０項に記載の使用。 １２．以下よりなる請求の範囲第１項または第２項に記載のタンパク質の単離方 法： （ａ）ヘリコバクター ピロリの培養物を調製し、適当な条件下で該培養物を 成長させこれらを集めた後、洗浄して洗浄細胞ペレットを得る； （ｂ）該洗浄細胞を適当な緩衝液中に再懸濁した後、細胞を破壊する； （ｃ）遠心分離して細胞破片を除去し、可溶性細胞タンパク質を含む上清を得 る； （ｄ）得られた溶液を勾配溶出によるイオン交換クロマトグラフィーにかけて 、得られた画分をウレアーゼの存在に関してアッセイする； （ｅ）ウレアーゼを含む画分をプールし、該プールをゲル浸透クロマトグラフ ィーにかける； （ｆ）適当なピークを選択する；および （ｇ）単離物における５５〜６５ｋＤａの分子量を有する特定のタンパク質の 存在を確認し、該タンパク質を単離する。 １３．請求の範囲第１項または第２項に記載のタンパク質、請求の範囲第３項ま たは第４項に記載の少なくとも一の抗原断片または請求の範囲第５項または第６ 項に記載の抗原組成物からなるヘリコバクター ピロリの検出および／または診 断に使用するキット。 １４．請求の範囲第１項または第２項に記載のタンパク質、請求の範囲第３項ま たは第４項に記載の少なくとも一の抗原断片または請求の範囲第５項または第６ 項に記載の抗原組成物からなる被験者の免疫反応を誘発できる組成物。 １５．必要であればさらに一以上のアジュバントを有する、ワクチン組成物であ る請求の範囲第１４項に記載の組成物。 １６．免疫原性組成物、好ましくはワクチンの調製における請求の範囲第１項ま たは第２項に記載のタンパク質、請求の範囲第３項または第４項に記載の少なく とも一の抗原断片または請求の範囲第５項または第６項に記載の抗原組成物の使 用。 １７．被験者の免疫反応の誘導における請求の範囲第１６項に記載の免疫原性組 成物の使用。 １８．有効量の請求の範囲第１項または第２項に記載のタンパク質、請求の範囲 第３項または第４項に記載の少なくとも一の抗原断片または請求の範囲第５項ま たは第６項に記載の抗原組成物を被験者に投与する段階からなる、被験者のヘリ コバクター ピロリ感染の処置または予防方法。 １９．該タンパク質、一以上の抗原断片または抗原組成物がワクチンの形態で、 好ましくはワクチンとして、投与される、請求の範囲第１８項 に記載の方法。