JPH11501325A

JPH11501325A - グリコサミノグリカン合成促進のための、特に化粧品におけるエリオボトリャ・ジャポニカ抽出物の使用

Info

Publication number: JPH11501325A
Application number: JP9508997A
Authority: JP
Inventors: ボンテフレデリック; デュママルク
Original assignee: LVMH Recherche GIE
Current assignee: LVMH Recherche GIE
Priority date: 1996-01-03
Filing date: 1997-01-03
Publication date: 1999-02-02
Also published as: NL1004939A1; BE1010042A3; GB2314272A; NL1004939C2; DE19780092T1; ES2129014A1; IT1290991B1; US5955083A; FR2742987A1; WO1997006659A3; DE19780092B3; ES2129014B1; FR2742987B1; WO1997006659A2; AU1181097A; CH692902A5; ITTO970001A1; GB9718684D0

Abstract

(57)【要約】本発明は、特に化粧学又は薬学における、エリオボトリャ・ジャポニカ抽出物の新規な使用に関する。本抽出物によれば、グリコサミノグリカン合成、特にヒアルロン酸合成を促進し、従って、本抽出物を含む化粧組成物に、肌の張りと柔軟性を向上させ、しわを防止し又はその深さを減少させ、引き締め効果によって皮膚表面をなめらかにし、又は、皮膚の水分調節を行う機能を付与できる。本発明は更に、細胞、特に繊維芽細胞又は表皮ケラチン細胞の培地における、グリコサミノグリカン合成を促進するためのこれらの抽出物の使用にも関する。

Description

【発明の詳細な説明】グリコサミノグリカン合成促進のための、特に化粧品におけるエリオボトリャ・ジャポニカ抽出物の使用本発明は、グリコサミノグリカン合成促進剤としての、特に化粧分野におけるエリオボトリャ・ジャポニカ（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａ）抽出物の新規な使用に関する。エリオボトリャ・ジャポニカは、９月と２月の間に開花する、無毛の枝と、厚くて、細長い互い違いになった葉を持つ高さ５〜７ｍの樹木である。葉は、ベトナム薬局方において、鎮咳及び鎮痙性を持つものとして認識されている。その煎じ汁は、傷の洗浄にも使用されている。文献によると、この植物は抗炎症作用を持つことも報告されている。髪又は皮膚に対する化粧的作用も記載されている。薬学分野において、すでに公知のエリオボトリャ・ジャポニカの適用について、より正確に記載されているものには、以下のものがある： −特に、鎮咳薬及び胃薬としての適用を示している、チャイニーズ・ハーバル・メディシン（ＣｈｉｎｅｓｅＨｅｒｂａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ）２９６頁のこの植物に関する研究論文、 −鎮咳及び鎮痙薬としての治療をも記載した、マニラの世界保健機構及びハノイ薬物研究所の後援を受けて出版されたメディシナル・プランツ・イン・ベトナム（ＭｅｄｉｃｉｎａｌＰｌａｎｔｓｉｎＶｉｅｔｎａｍ）の１７１頁の研究論文、 −鎮咳及び鎮吐薬としての本植物の適用を１６４〜１６５頁に記載したチャイニーズ・マテリ・メディカ・ベジタブル・キングダム（ＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉＭｅｄｉｃａＶｅｇｅｔａｂｌｅＫｉｎｇｄｏｍ）のチャイニーズ・メディシン・シリーズ１（ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＳｅｒｉｅｓ１）、 −消炎剤の調製を目的としたこの植物の葉の適用に関するＪＰ５６−０７３０２７号公報（帝人(株)）。より最近の報告では、この植物の抽出液の化粧分野での適用、特にスキンケア又はヘアケアのための適用がある。ＪＰ０５−０１７２０６号公報では、きめの荒い肌の場合、表皮の剥脱の防止剤又は処理剤としてこの植物の抽出液を適用することが記載されており、皮膚細胞の再生に対する活性を持つことが示されている。ＪＰ６２−２４９９０７号公報では、特に血液の微小循環の向上を目的とした化粧剤の調製のためのエリオボトリャ・ジャポニカの葉の使用が記載されている。ＪＰ０３−１８８００８号公報では、非常に広い科の植物、即ち、バラ科についての化粧分野における適用が記載されており、これらの植物によって、皮膚の柔軟性及び潤いが向上し、吹き出物の治療ができることが記載されている。ＪＰ０３−１８８０１４号公報では、特に髪の治療を目的として、非常に広い科であるバラ科由来の種々の植物の抽出液を含む化粧組成物が記載されている。この植物の抽出液には、２種の特定の界面活性剤、即ち、陰イオン性界面活性剤、及び、窒素を含有する少なくとも一種の界面活性剤が混合されている。エリオボトリャ・ジャポニカの抽出物が、繊維芽細胞及び表皮ケラチン細胞、特に真皮、中でもヒト真皮の繊維芽細胞及びヒト表皮ケラチン細胞によるグリコサミノグリカンの産生促進という性質を持つ点において、化粧学及び薬学、特に皮膚科学において非常に価値があることが発見された。さて、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）は、二糖単位からなる重合体であることは当業者に公知である。ヒアルロン酸は、ヒトの皮膚に最も頻繁に発見されるＧＡＧのなかで最初に挙げられ、最も多量に存在するものである。また、コンドロイチン４−硫酸及び６−硫酸、デルマタン硫酸、並びに、少量ではあるがヘパリン及びヘパラン硫酸も存在する。ＧＡＧの二糖単位は、ウロン酸（Ｄ−グルクロン酸又はＬ−イズロン酸）が１つ置きに配置され、かなりの割合で硫酸化されているヘキソサミン（Ｄ−グルコサミン又はＤ−ガラクトサミン）からなるものである。ＧＡＧは、一般的にタンパク質に共有結合しており、プロテオグリカンを形成している。公知のＧＡＧのなかで、上記ヒアルロン酸だけは、中心タンパク質に結合して合成されない。プロテオグリカンの構造については、Ｅ．Ｄ．ヘイ（Ｅ．Ｄ．ＨＡＹ）著、プレナム・プレス（ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ）出版、ニューヨーク、１９９１年の「セル・バイオロジー・オブ・エクストラセルラー・マトリックス（ＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙｏｆＥｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＭａｔｒｉｘ）、及び、Ｊ．Ｅ．シルバート（Ｊ．Ｅ．ＳＩＬＢＥＲＴ）著、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１９８２年、７９、３１〜３７頁、「ストラクチャー・アンド・メタボリズム・オブ・プロテオグリカンズ・アンド・グリコサミノグリカン（ＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆＰｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓａｎｄＧｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓ）」に記載がある。プロテオグリカンは、特に、皮膚及びその付属器官を含むすべての哺乳類の組織に存在する（Ｊ．Ｒ．コーチマン（Ｊ．Ｒ．ＣＯＵＣＨＭＡＮ）著、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１９９３年、７月、１０１（Ｓｕｐｐｌ．１）６０Ｓ〜６４Ｓ）。プロテオグリカンは、現在では、種々の過程を通して、組織の成長、保存及び修復に寄与していることが知られている。細胞接着や細胞膜を介した伝達の媒介物質としてのプロテオグリカンもあれば、細胞外マトリックスの他の構成因子と作用し合うプロテオグリカンもあることが示されている。上述のように、プロテオグリカンは、１以上のグリコサミノグリカン鎖が共有結合している中心タンパク質からなる。グリコサミノグリカンは真皮に存在し、細胞外マトリックスの構成成分である。Ｊ．Ｅ．スコット（Ｊ．Ｅ．ＳＣＯＴＴ）著、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．、１９９１年、１３、１５７〜１６１頁には、コラーゲン繊維のある特定部位に結合していることを発見したことの記載がある。Ｊ．Ｇ．ハガーティ（Ｊ．Ｇ．ＨＡＧＧＥＲＴＹ）ら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１９９２年、９９、３７４〜３８０頁には、表皮のケラチン細胞間にも確認されたことが記載されている。最終的には、グリコサミノグリカンは毛嚢の真皮の小乳頭状突起の細胞外マトリックスに発見されている。その量は髪の周期とともに変化し、髪の成長期に相当する再生期に最大となる。毛嚢のプロテオグリカン及びグリコサミノグリカンに関しては、特に上記のＪ．Ｒ．コーチマン著の文献、及び、Ｍ．テイラー（Ｍ．ＴＡＹＬＯＲ）ら、Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９２年（５月）、１２６（５）、４７９〜８４頁の「グリコサミノグリカン・シンテシス・バイ・カルチャード・ヒューマン・ヘア・フォリクル・ダーマル・パピラ・セルズ：コンパリスン・ウイズ・ノンフォリクラー・ダーマル・フィブロブラスト（Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓｂｙｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｄｅｒｍａｌｐａｐｉｌｌａｃｅｌｌｓ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｗｉｔｈｎｏｎ−ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｄｅｒｍａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）」の文献がある。髪の成長と再生に確実な活性を有する公知の物質であるミノキシジルによって、グリコサミノグリカンの生合成が促進されることが示されている（Ｙ．モリ（Ｙ．ＭＯＲＩ）ら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９９１年（１２月２６日）６４２、４７３〜５）。上記著者による、他の臨床試験と組み合わせた結果によれば、グリコサミノグリカンは髪の成長の調節に寄与していることが示唆されている。水分子と強く会合し、ゲルを形成するというＧＡＧの主要な機能を通して、ＧＡＧは真皮と表皮の水分を調節している。潤いが充分な皮膚は、特に優れた機械的機能を伴う、よい外観と、充分な生理的及び機能的状態が担保できる。ＧＡＧが皮膚の加齢とともに減少するという事実は、多数の著者によって示されている（例えば：スミス（ＳＭＩＴＨ）ら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１９６２年、３９、３４７〜３５０頁；フライシュメイジャー（ＦＬＥＩＳＣＨＭＡＪＥＲ）ら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．、１９７２年、２７９、２６５〜２７５頁；又は、ロンガス（ＬＯＮＧＡＳ）ら、カーボハイドレイト・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．、１９８７年、１５９、１２７〜１３６頁）。従って、特に機能的特性や水分の障壁のために脱水等の欠乏を示している皮膚や老年の皮膚に、通常の若年者の皮膚の質と機能を付与するために、髪の成長障害の防止や治療のために、又は、髪の輝きとしなやかさの回復や向上のために、グリコサミノグリカン合成を促進することは興味あることである。本発明の主要な目的は、グリコサミノグリカン合成が化粧学的又は薬学的治療薬、特に皮膚科学的治療薬の製造の点から特に価値のある、皮膚細胞、特に繊維芽細胞及び表皮ケラチン細胞のようなヒト皮膚細胞によるそのグリコサミノグリカン合成を促進するための解決策を提供するという新規な技術的課題を解決することである。本発明は、エリオボトリャ・ジャポニカ抽出物が皮膚細胞、特に繊維芽細胞及び表皮ケラチン細胞によるグリコサミノグリカン合成を促進するという予期できない発見に基づいており、従って、化粧学的又は薬学的治療薬、特に皮膚科学的治療薬の製造に特に有用である。特に、エリオボトリャ・ジャポニカ抽出物が、繊維芽細胞及び表皮ケラチン細胞によるヒアルロン酸合成を促進することが発見された。従って、本発明の必須の特徴の一つによれば、皮膚細胞、特に繊維芽細胞及び／又は表皮ケラチン細胞によるグリコサミノグリカン合成を促進するための、エリオボトリャ・ジャポニカ抽出物の、化粧学的に許容される賦形剤中に配合される化粧剤としての使用に関する。本発明は、特に上記化粧剤が繊維芽細胞及び／又は表皮ケラチン細胞によるヒアルロン酸合成を促進することを目的とするものであり、上皮の水分調節を促進するのに特に価値のあることが証明されているような適用に関する。本発明で使用することができるエリオボトリャ・ジャポニカ抽出物としては、市販の抽出物、特に丸善製薬、広島、日本の目録に掲載されているこの植物の葉の水性エタノール抽出液がある。本発明の有利な一態様では、抽出物は、エリオボトリャ・ジャポニカの地上部分、好ましくは葉、花、茎、樹皮又は果実から得られるものである。他の有利な態様では、上記抽出物は、エリオボトリャ・ジャポニカの地上部分の葉からの抽出物である。更に他の有利な態様では、上記エリオボトリャ・ジャポニカの抽出物は、一種又は二種以上の極性溶媒による抽出によって得られたものである。メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、プロピレングリコール若しくはブチレングリコール等のアルコール、これらアルコールの混合液又は水性アルコール混合液を使用することが好ましい。１，３−ブチレングリコール、又は、これと水との混合液、好ましくは体積比で５０：５０の混合液は、上記抽出を行うための溶媒として好適に使用される。抽出操作としては、当業者に広く知られた通常の方法によって行うことができる。特に、地上の原料、好ましくは葉、花、茎、樹皮又は果実等の空中に存在する部分について抽出を行うことができる。葉からの抽出が好ましい。地上の植物原料を抽出溶媒、好ましくは上記極性溶媒又は極性溶媒の混合液からなる溶媒に入れる。抽出は、当業者に公知の方法において実施されるように、原料が抽出され尽くすまで数回繰り返すことができる。抽出は、室温又は加熱下、特に溶媒の還流点で行うことができる。抽出される原料に対する溶媒の重量比は、広い範囲内で変えることができる。特に１：１〜５０：１、好ましくは５：１〜２０：１である。更に、グリコサミノグリカン合成に対する促進は、皮膚、特に真皮を少し膨張させる効果があり、その結果として、肌の張りの向上、しわの防止又はその深さの減少、及び、基礎となる引き締め効果による皮膚表面のなめらかさ等の種々の化粧の効果が好適に得られることが観察される。更に、ＧＡＧ合成の向上は、皮膚の水分調節の向上に寄与する。従って、他の必須の特徴によれば、本発明は、更に、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）合成、特にヒアルロン酸合成を促進するための、化粧学的又は薬学的、特に皮膚科学的治療方法であって、上記合成を促進するために、化粧学的又は薬学的に許容される賦形剤、特に皮膚科学的に許容される賦形剤に含有されたエリオボトリャ・ジャポニカの抽出物の化粧学的又は薬学的有効量、特に皮膚科学的有効量を適用することからなることを特徴とする治療方法に関する。従って、本発明によると、皮膚の張りと柔軟性を向上させ、しわの形成を抑え若しくはその深さを減少させ、引き締め効果によって皮膚表面を滑らかにし、又は、皮膚の水分調節を向上させることができる。本発明は、更にグリコサミノグリカン合成、特にヒアルロン酸合成の促進が望まれている皮膚の治療方法にも関する。本発明は、更にグリコサミノグリカン合成、特にヒアルロン酸合成が不充分であることによる悪影響を矯正するため、特に皮膚の張りと柔軟性を向上させ、しわの形成を抑え若しくはその深さを減少させ、引き締め効果によって皮膚表面を滑らかにし、又は、皮膚の水分調節を向上させるために、上記不充分な合成による被害を被っている対象物の治療のための、薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物の調製のためのエリオボトリャ・ジャポニカ抽出物の使用に関する。これらの抽出物及び組成物は、ＧＡＧ合成の促進が望まれている化粧学的又は治療方法に使用することができる。これらの方法は、上記抽出物が所望により化粧学的又は薬学的に許容される媒体に含有されており、上記合成を促進するために、処置すべき皮膚組織に、上記抽出物、又は、それが存在する組成物の化粧学的又は薬学的有効量を適用することにある。種々の配合形態によって調製することができる。最も広く使用されている配合形態の一つは、皮膚及び外部又は内部粘膜を含む皮膚組織への適用に適した局所的適用である。局所的な配合形態の適切なものとしては、特に限定されず、乳状液、クリーム、乳液、香膏、ジェル、ローション、膣座薬、並びに、マスカラ及び口紅等の化粧用組成物が含まれ、これらの種々の配合例としては当業者に公知のものである。これらの組成物は、組成物全重量に対して、０．００１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜５重量％の上記抽出物を含み、好ましくは上記抽出物は化粧学的又は薬学的に許容される賦形剤中に配合される。上記組成物には、更に種々の添加剤、特にレチノイド、湿潤剤又はモイスチャライザー、ビタミン、セラミド、コラーゲン合成促進剤及びアミノ酸からなる群より選択される添加剤を含有することができる。上記態様では、上記レチノイドは、レチノイン酸及びその塩やエステル、レチナルデヒド、並びに、レチノール及びそのエステル（プロピオネート、パルミテート及びアセテート等）から選択される；上記湿潤剤又はモイスチャライザーは、グリセロール、ポリエチレングリコール及びヒアルロン酸から選択される；上記ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＣ及びその誘導体、特にそのナトリウム又はマグネシウム塩、ビタミンＥ、ビタミンＰＰ、並びに、ビタミンＢ群、特にＢ６及びＢ１２から選択される；上記コラーゲン合成促進剤は、センテラ・アシアチカ（Ｃｅｎｔｅｌｌａａｓｉａｔｉｃａ）、マデカソサイド（ｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅ）、マデカシン酸（ｍａｄｅｃａｓｓｉｃａｃｉｄ）、アシアチン酸（ａｓｉａｔｉｃａｃｉｄ）及びアシアチコサイド（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ）から選択される；並びに、アミノ酸は、セリン、アスパラギン酸、リジン、プロリン及びヒドロキシプロリンから選択される。本発明の組成物において、エリオボトリャ・ジャポニカの抽出物は、１以上の以下の有効成分とも好適に組み合わせることができる： −エチナセア・アングスチフォリア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）抽出物等のヒアルロニダーゼ阻害剤、 −大豆抽出物又はアオサイン（ａｏｓａｉｎｅ）と呼ばれる藻抽出物等のエラスターゼ阻害剤、 −グルコサミン又はガラクトサミン等のアミノ糖、 −フォスコリン、コレオス・フォスコリ（Ｃｏｌｅｕｓｆｏｒｓｋｈｏｌｉｉ）抽出物又はテフロシァ（Ｔｅｐｈｒｏｓｉａ）抽出物等のＡＭＰ_c合成を促進するアデニル酸シクラーゼ活性化物質、 −ＡＭＰ_c、又は、タイソ（Ｔａｉｓｏｈ）抽出物等のＡＭＰ_cを含有する抽出物、 −カフェイン又はテオフィリン等のＡＭＰ_cの分解を阻害するフォスフォジエステラーゼ阻害剤。本発明の最後の特徴によれば、本発明は更に、グリコサミノグリカン合成、特にヒアルロン酸合成を促進するために、有効濃度のエリオボトリャ・ジャポニカ抽出物により、培地中の細胞、特に繊維芽細胞及び／又は表皮ケラチン細胞を処理する方法に関する。従って、例えば、人工皮膚、特に人工的な真皮の調製の点において、当業者に広く知られた技術を使った細胞培養によって、本発明の方法は、特に生体力学的特性に関して優れた品質の人工の皮膚又は真皮を提供する。上記方法の好ましい一態様は、培養細胞を０．３〜３０μｇ／ｍｌの濃度のエリオボトリャ・ジャポニカ抽出物で処理する。別の有利な態様では、培地にグルコサミン、ガラクトサミン、Ｌ−プロリン及び４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンの１以上の物質を含有させ、各物質の濃度が２〜１０ｍＭの濃度で存在しうるようにするか、又は、代わりに、培地にアスコルビン酸又はその誘導体の１つを、細胞毒性のない濃度、特に０．００１〜０．５ｍＭの濃度で含有させる。本発明の他の目的、特徴及び効果は、実施例についての以下の説明から当業者には明らかとなるが、これらは単に例示されているだけで、本発明の範囲を限定するものではない。実施例の百分率は、特に記載がない限り、重量％で表される。実施例Ｉ−エリオボトリャの地上部位の抽出物の調製実施例１抽出物Ａの調製１ｋｇの葉を粉砕し、還流下の１０Ｌのメタノールに入れた。抽出物を濾過した。次いで、植物の残渣は同様の方法によって２回再抽出した。濾液を集め、濃縮して、乾燥抽出物Ａを得た。実施例２抽出物Ｂの調製抽出溶媒として５０／５０（ｖ／ｖ）の水−エタノール混合液を用いたこと以外は、実施例１と同様に操作した。実施例３抽出物Ｃの調製抽出層は以下のようにして調製した。１ｋｇの葉を粉砕し、１５Ｌのメタノールに入れた。次いで、溶液を３０分間還流させ、濾過した。植物の残渣は、実施例１と同様にして１５Ｌのメタノールで２回再抽出した。濾液を回収して、最小の溶液量となるように濃縮した。次に、濃縮物を５倍量のアセトンと混合した。沈殿物は、目視で色が消えるまでアセトンで洗浄した。次いで、得られた固体を水に懸濁させて、均一な乳状液を得、凍結乾燥させ、凍結乾燥物の抽出物Ｃを得た。実施例４抽出物Ｄの調製前もって粉砕した乾燥葉１ｋｇを、３５℃で攪拌下、１，３−ブチレングリコールと水の体積比５０／５０の混合溶液１５〜２０Ｌで１時間抽出した。懸濁液を回収し、濾過して、抽出物Ｄを得た。ＩＩ−グリコサミノグリカン合成活性化の証明実施例５実施例１の抽出物を用いた、ヒト繊維芽細胞によるグリコサミノグリカン合成活性化の証明繊維芽細胞によるＧＡＧ合成の活性化の証明に使用した試験は、以下に記載されている。この試験管内（ｉｎｖｉｔｒｏ）試験は、これ以外の点については、当業者には信頼性及び有意性のあるものとして認識されている。試験方法４９歳の女性に行われた乳房形成術由来の繊維芽細胞は、Ｒ．Ｉ．フレッシュニー（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）、カルチャー・オブ・アニマル・セルズ（Ｃｕｌｔｕｒｅｏｆａｎｉｍａｌｃｅｌｌｓ）；ア・マニュアル・オブ・ベーシック・テクニック（Ａｍａｎｕａｌｏｆｂａｓｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）、Ａ．Ｒ．リズ（Ａ．Ｒ．Ｌｉｓｓ）、ニューヨーク、１９８３年、１０４〜１０６頁に記載の方法によって、顕微解剖された真皮より調製した。多穴プレート（プレート当たり６ウェル）の培養ウェル当たり１００００個の繊維芽細胞を、１０％の牛胎児血清を含むＥ１９９Ｃ培地（ギブコ）中で、３７ ℃で２４時間培養した。２４時間後、培地を除いて、ＤＭＳＯに溶解した試験生成物、又は、コントロール培養の場合は同量のＤＭＳＯ、及び、４μＣｉの³Ｈ−グルコサミン（ＴＲＫ３９８アマシャム）を含む無血清のＥ１９９Ｃ培地１００μＬを入れた。４８時間、３７℃で培養を行った。次いで、培養上清を取り出して、２つずつ合わせ、スクリューキャップのエッペンドルフチューブに移した。０．０２％の窒化ナトリウムを含むＰＢＳ中にプロナーゼ（シグマＰ５１４３）０．２ｍｇ／ｍｌを含む溶液２００μｌを各チューブに加えた。３７℃で終夜反応させた。その後、沸騰水に５分間チューブを漬けることによって、プロナーゼを不活性化した。室温まで冷却した後、放射性ラベルされたＧＡＧを、ＣＰＣ（シグマＣ９００２）１００ｍｇ／ｍｌを含む溶液４０μｌによって、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸及びコンドロイチン硫酸の１／１／１混合物を８ｍｇ／ｍｌを含む水溶液とともに共沈させた。その混合液を振盪し、室温で３０分間放置した。沈殿物を遠心分離し、上清を吸い出し、残渣をＣＰＣ１０ｍｇ／ｍｌを含む溶液４００μ ｌに回収した。その溶液を５分間振盪し、残渣をメタノール５００μｌに溶解した。この溶液を振盪し、シンチレーション用瓶に移し、１０ｍｌの液体シンチレーターを加えて、放射活性を測定した。並行実験として、試験生成物の細胞毒性を、ロームＮ．Ｗ．（ＲｏｅｈｍＮ．Ｗ．）ら、ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ）、１９９１年、１４２、２５７〜２６５に記載されたＸＴＴ（テトラゾリウム塩）試験によって評価した。この試験によって、細胞生存度を測定した。その細胞生存度を変化させないような濃度においてのみ、結果として活性値を得るものとする。結果上記表より、試験抽出物はヒト真皮繊維芽細胞による全ＧＡＧ合成を活性化することが明瞭に示されている。実施例６市販の抽出物を用いた、ヒト繊維芽細胞によるグリコサミノグリカン合成活性化の証明実施例５に記載された実験を、丸善（日本）によって市販されているエタノール−水の体積比５０／５０の抽出物を使って行った。この抽出物についての試験は、予備知識なくブラインドで行った。凍結乾燥して、ＤＭＳＯに溶解して、１０ｍｇ／ｍｌの保存溶液とした。実施例５で使用したものと同じ繊維芽細胞株を用いて、同じ条件下で行った。１０μｇ／ｍｌ含有する溶液では、ｃｐｍで表した場合、２２．５％より大きくＧＡＧ合成を促進することが観察された。ＩＩＩ−配合例実施例７肌引き締め用化粧クリーム実施例３のエリオボトリャ葉のアルコール抽出物Ｃ２ｇセンテラ・アシアチカ抽出物０．５ｇ芳香性賦形剤合計で１００ｇこのクリームは、顔、首及び胸に局所的に塗布した。本組成物によって、肌の柔軟性を向上した。実施例８肌引き締め効果を持つジェル実施例４のエリオボトリャ・ジャポニカ葉のグリコール抽出物Ｄ３ｇアスコルビン酸マグネシウム塩１ｇアシアチコサイド０．１ｇ防腐剤を含有する芳香性ジェル賦形剤合計で１００ｇこのゲルは、顔に局所的に適用する。実施例９真皮の引き締めとしわの深さを減少させるためのローション実施例４のエリオボトリャ・ジャポニカ葉のグリコール抽出物Ｄ０．８ｇチョウセンニンジン抽出物０．２ｇトウガラシ抽出物０．０１ｇ防腐剤を含有する芳香性ジェル賦形剤合計で１００ｇこのローションは、洗顔後、予防剤としてスプレーする。実施例１０抗しわクリーム実施例４のエリオボトリャ・ジャポニカ葉のグリコール抽出物２ｇＡＭＰ_c ０．０５ｇタイソ抽出物１ｇテオフィリン０．１ｇ香料及び防腐剤を含有する乳化賦形剤合計で１００ｇこのクリームは毎日塗布すると、真皮の構造を向上させ、肌の張りと引き締めを回復した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．皮膚細胞、特に繊維芽細胞及び／又は表皮ケラチン細胞によるグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）合成を促進するための、エリオボトリャ・ジャポニカ（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａ）抽出物の、化粧学的に許容される賦形剤からなる化粧組成物中に配合される化粧剤としての使用。２．化粧剤は、表皮ケラチン細胞によるヒアルロン酸合成を促進することを目的とするものであることを特徴とする請求項１記載の使用。３．エリオボトリャ・ジャポニカ抽出物は、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）合成を促進する化粧組成物の調製のために使用されるものであり、しわの防止又はその深さの減少を目的とするものであることを特徴とする請求項１又は２いずれか１項に記載の使用。４．エリオボトリャ・ジャポニカ抽出物は、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）合成を促進する化粧組成物の調製のために使用されるものであり、肌の張りと柔軟性の向上、又は、引き締め効果による皮膚表面をなめらかにすることを目的とするものであることを特徴とする請求項１又は２いずれか１項に記載の使用。５．エリオボトリャ・ジャポニカ抽出物は、皮膚の水分調節を向上させることを目的とする化粧組成物の調製のために使用されることを特徴とする請求項１又は２いずれか１項に記載の使用。６．抽出物は、葉、花、茎、樹皮又は果実のようなエリオボトリャ・ジャポニカの地上部分からの抽出物であることを特徴とする請求項１〜５いずれか１項に記載の使用。７．抽出物は、エリオボトリャ・ジャポニカの地上の葉からの抽出物であることを特徴とする請求項１〜５いずれか１項に記載の使用。８．抽出物は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、プロピレングリコール若しくはブチレングリコール等のアルコールのような極性溶媒、前記アルコールの混合液又は水性アルコール混合液による抽出によって得られたものであることを特徴とする請求項１〜７いずれか１項に記載の使用。９．組成物は、化粧学的又は薬学的に許容される賦形剤中に、前記組成物全重量に対して、抽出物を０．００１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜５重量％を含むことを特徴とする請求項１〜８いずれか１項に記載の使用。１０．組成物は、更に、レチノイド、湿潤剤又はモイスチャライザー、ビタミン、セラミド、コラーゲン合成促進剤及びアミノ酸からなる群より選択される少なくとも１種の添加剤を含有してなることを特徴とする請求項１〜９いずれか１項に記載の使用。１１．レチノイドは、レチノイン酸並びにその塩及びエステル、レチナルデヒド、並びに、レチノール及びそのエステル（プロピオネート、パルミテート及びアセテート）から選択され；湿潤剤又はモイスチャライザーは、グリセロール、ポリエチレングリコール及びヒアルロン酸から選択され；ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＣ及びその誘導体、特にそのナトリウム又はマグネシウム塩、ビタミンＥ、ビタミンＰＰ、並びに、ビタミンＢ群、特にＢ６及びＢ１２から選択され；コラーゲン合成促進剤は、センテラ・アシアチカ（Ｃｅｎｔｅｌｌａａｓｉａｔｉｃａ）、マデカソサイド（ｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅ）、マデカシン酸（ｍａｄｅｃａｓｓｉｃａｃｉｄ）、アシアチン酸（ａｓｉａｔｉｃａｃｉｄ）及びアシアチコサイド（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ）から選択され；並びに、アミノ酸は、セリン、スレオニン、ロイシン、プロリン及びヒドロキシプロリンから選択されることを特徴とする請求項１０記載の使用。１２．エリオボトリャ・ジャポニカの抽出物は、１以上の下記の有効成分と組み合わせることを特徴とする請求項１〜１１いずれか１項に記載の使用： −ヒアルロニダーゼ阻害剤、 −エラスターゼ阻害剤、 −アミノ糖、 −ＡＭＰ_c合成を促進するアデニル酸シクラーゼ活性化物質、 −ＡＭＰ_c又はそれを含有する抽出物、 −ＡＭＰ_cの分解を阻害するフォスフォジエステラーゼ阻害剤。１３．ヒアルロニダーゼ阻害剤は、エチナセア・アングスチフォリア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）抽出物であり；エラスターゼ阻害剤は、大豆抽出物又はアオサイン（ａｏｓａｉｎｅ）と呼ばれる藻抽出物であり；アミノ糖は、グルコサミン又はガラクトサミンであり；ＡＭＰ_c合成を促進するアデニル酸シクラーゼ活性化物質は、フォスコリン、コレオス・フォスコリ（Ｃｏｌｅｕｓｆｏｒｓｋｈｏｌｉｉ）抽出物又はテフロシァ（Ｔｅｐｈｒｏｓｉａ）抽出物であり；ＡＭＰ_c又はそれを含有する抽出物は、タイソ（Ｔａｉｓｏｈ）抽出物であり；ＡＭＰ_cの分解を阻害するフォスフォジエステラーゼ阻害剤は、カフェイン又はテオフィリンであることを特徴とする請求項１２記載の使用。１４．グリコサミノグリカン合成、特にヒアルロン酸合成が不充分であることによる悪影響を矯正するため、特に皮膚の張りと柔軟性を向上させ、しわの形成を抑え若しくはその深さを減少させ、引き締め効果によって皮膚表面を滑らかにし、又は、皮膚の水分調節を向上させるために、前記不充分な合成による被害を被っている対象物の治療のための、薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物の調製のためのエリオボトリャ・ジャポニカ（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａ）抽出物の使用。１５．グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）合成、特にヒアルロン酸合成を促進するための、化粧学的又は薬学的、特に皮膚科学的治療方法であって、前記合成を促進するために、化粧学的又は薬学的に許容される賦形剤、特に皮膚科学的に許容される賦形剤に含有されたエリオボトリャ・ジャポニカ（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａ）の抽出物の化粧学的又は薬学的有効量、特に皮膚科学的有効量を適用することからなることを特徴とする治療方法。１６．抽出物は、組成物中に、前記組成物全重量に対して、０．００１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜５重量％の濃度で含まれていることを特徴とする請求項１５記載の方法。１７．肌の張りと柔軟性を向上させ、しわを防止し若しくはその深さを減少させ、又は、引き締め効果により皮膚表面をなめらかにするための化粧学的治療方法であることを特徴とする請求項１５又は１６いずれか１項に記載の方法。１８．グリコサミノグリカン合成、特にヒアルロン酸合成を促進するための培地中の細胞、特に繊維芽細胞及び／又は表皮ケラチン細胞の処理方法であって、前記合成を促進するために培地中に有効濃度のエリオボトリャ・ジャポニカ（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａ）抽出物を入れることからなることを特徴とする処理方法。１９．細胞は、培地中に０．３〜３０μｇ／ｍｌの濃度で存在するエリオボトリャ・ジャポニカ抽出物によって処理されることを特徴とする請求項１８記載の方法。２０．培地中に下記のものを含有することを特徴とする請求項１８又は１９いずれか１項に記載の方法：２〜１０ｍＭの濃度のグルコサミン、ガラクトサミン、Ｌ−プロリン及び４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、並びに、細胞毒性のない濃度、特に０．００１〜０．５ｍＭの濃度のアスコルビン酸又はその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の物質。２１．人工の皮膚又は真皮を調製するものであることを特徴とする請求項１８〜２０いずれか１項に記載の方法。