FR2932086A1 - Methode de soin cosmetique anti-age par stimulation de l'expression de la survivine - Google Patents

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Abstract

L'invention concerne une méthode de soin cosmétique comprenant la délivrance d'une quantité efficace d'au moins un agent cosmétiquement acceptable activant ou stimulant l'expression de la survivine au niveau des cellules souches de la couche basale de l'épiderme. L'invention permet notamment de prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou de les traiter.

Description

Méthode de soin cosmétique anti-âge par stimulation de l'expression de la survivine. La présente invention concerne une méthode de soin cosmétique anti-âge par stimulation de l'expression de la survivine. Plus particulièrement, l'invention a pour objet des molécules ou extraits, en particulier d'origine végétale stimulant l'expression de la survivine au niveau cutané, leur utilisation en tant qu'agents actifs dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques, et les méthodes de soin cosmétique ou de traitement dermatologique utilisant lesdites compositions. Arrière plan technologique L'apoptose est un processus biologique actif d'élimination par fragmentation, de certaines cellules de l'organisme.
Elle constitue une élimination programmée de cellules au niveau des tissus biologiques, et sous contrôle génétique. L'élimination peut être naturelle (cellules surnuméraires dans un tissu) ou induite par différents stress. La cascade biologique de l'apoptose est connue et met en oeuvre nombre d'effecteurs tels que les caspases, notamment les caspases effectrices 3 ou 7, qui vont réaliser le programme d'apoptose, et les caspases initiatrices 8 et/ou 9, qui vont le déclencher. On connaît également un certain nombre d'inhibiteurs de l'apoptose (Deveraux et al, Genes Dev. 13 (1999), pp. 239-252), parmi lesquels la survivine. Ces inhibiteurs régulent donc la survie des cellules participant ainsi à l'homéostasie cellulaire dans les tissus biologiques. La survivine, seul membre de la famille des IAPs (Inhibitor of Apoptosis Protein), est une protéine bi-fonctionnelle, capable à la fois de pondérer l'apoptose des cellules et de réguler leur cycle cellulaire.
La survivine inhibe en particulier l'activation de certaines caspases, notamment les caspases 3, 7 et 9. Cette protéine est exprimée dans les tissus embryonnaires à forte croissance, mais ne l'est pas dans les tissus différenciés adultes, excepté dans les tissus ayant un renouvellement cellulaire physiologique et/ou engagés dans un processus de réparation. Ainsi au niveau cutané, elle est tout particulièrement exprimée par les kératinocytes de la couche basale de l'épiderme qui assurent la formation et le renouvellement de ce dernier.
C'est dans cette couche basale que se trouvent les kératinocytes souches de l'épiderme, cellules à haut potentiel de régénération de ce tissu dont il a été démontré qu'elles étaient les plus efficaces à former un épiderme complet (JL Xie et al, J. Piast. Reconstr, Aesthet. Surg. 2007;60 (9):983-90).
Or il a été montré que la survivine est principalement exprimée dans les cellules souches de l'épiderme (Marconi A, Dallaglio K, Lotti R, Vaschieri C, Truzzi F, Fantini F, Pincelli C, Stem ces 2007: 25 : 149-155). A l'inverse une surexpression de la survivine montre une diminution significative du nombre de cellules apoptotiques dans l'épiderme après une exposition au rayonnement ultraviolet (Grossman et al., 2001, J Clin Invest 108:991-999). Il a aussi été démontré que l'inactivation des intégrines béta-1, abolit complètement l'expression cellulaire de la survivine (MarconiA et al, Stem cells 2007: 25 : 149-155) et conduit les cellules à l'apoptose.
Les intégrines béta-1 sont des protéines d'adhésion par lesquelles les kératinocytes de la couche basale épidermique adhèrent aux protéines de la jonction dermo-épidermique. Les intégrines béta-1 sont exprimées plus fortement par les cellules souches de l'épiderme (P Jones, Cet/ 1993, 73: 713-724, Kaur J Invest Dermatol 2006, 126, 1450-1458) ce qui corrobore l'observation d'une expression plus forte de la survivine dans ces cellules.
Or au cours du vieillissement on observe une baisse de l'expression des intégrines béta-1 dans les kératinocytes (B Le Var/et et a/ J Investig Dermatol Symp Proc. 1998, 3:172-179) et dans les zones cutanées photoexposées ridées (5 Basset et a/ British J Dermatol 2003, 148 :7770-778). Ainsi les protéines assurant au niveau des cellules basales de l'épiderme le maintien de la survivine, diminuent avec l'âge et l'on observe parallèlement une augmentation de la sensibilité à l'apoptose de ces cellules ainsi qu'une diminution de cellules cyclantes (Zut/an/ et al, J.
Invest. Dermatol. 2004, 123:2, A50, 302), observations convergeant pour indiquer un probable déficit en survivine dans les peau âgées. Outre son rôle régulateur de l'apoptose, la survivine a été identifiée comme un constituant du chromosomal passenger complex qui coordonne les chromosomes avec le cytosquelette au cours de la mitose ( Vader et a/ EMBO reports 2006 7, 1, 85û92) ; elle joue donc un rôle essentiel dans la division normale des cellules, division altérée au cours du vieillissement avec pour corollaire, un moindre renouvellement de l'épiderme, son affinement, et le développement des rides. La survivine est donc un régulateur de la survie et de la résistance des kératinocytes ; elle agit en modulant la sensibilité à l'apoptose des kératinocytes localisées au niveau de la couche basale de l'épiderme dont les cellules souches, Elle régule aussi leur capacité de renouvellement et de régénération de l'épiderme. Elle permet ainsi d'épargner le capital cellulaire de l'épiderme et 25 de maintenir un renouvellement cellulaire épidermique efficace. État de la technique Le document WO 2006/069192 (GILLE//E Co) divulgue l'utilisation en cosmétique d'agents inhibiteurs de la survivine pour un effet 30 de réduction de la pousse des poils et des cheveux.
A ce jour, il n'a pas été décrit de composés agissant en tant que stimulant de l'expression de la survivine, pour des applications en dermatologie ou cosmétique. Les inventeurs de la présente invention ont mis en évidence que des molécules isolées ou des extraits, plus particulièrement des extraits obtenus à partir d'un matériel d'origine végétal, stimulent l'expression de la survivine dans des cultures de kératinocytes humains normaux. Ces agents actifs jouent ainsi un rôle protecteur vis-à-vis des cellules régénératrices de l'épiderme humain et tout particulièrement des cellules souches de la couche basale de l'épiderme Ces molécules ou extraits peuvent être utilisés en tant qu'agent actif dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques visant notamment à prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou en atténuer les effets, ou encore à favoriser la longévité cellulaire ou tissulaire ; à favoriser la reconstruction d'un épiderme endommagé ainsi que la cicatrisation de plaies cutanées de la peau normale et des plaies ulcéreuses cicatrisant mal ; à prévenir ou ralentir la chute des cheveux, à en favoriser la repousse ou le renforcement; en tant qu'adjuvant prolongateur de cultures de cellules in vitro à des fins de production d'épiderme de culture (épidermes reconstruits) dans un but thérapeutique, par exemple dans des greffes ou encore dans le maintien de populations purifiées de cellules souches épidermiques ou de follicule pileux in vitro a des fin thérapeutiques ou de recherche.
Buts de l'invention L'invention a pour but principal de fournir des molécules ou extraits, en particulier d'origine végétale, stimulant l'expression de la survivine au niveau cutané, leur utilisation en tant qu'agents actifs dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques, et les méthodes de soin cosmétique ou de traitement dermatologique utilisant lesdites compositions.
L'invention a encore pour but principal de fournir une méthode de soin cosmétique anti-vieillissement par stimulation de l'expression de la survivine au niveau cutané. L'invention a pour but principal de proposer l'utilisation de molécule(s) ou extrait végétal cosmétiquement ou dermatologique acceptable obtenu à partir de plantes, comme agent cosmétique ou dermatologique. L'invention a également pour but l'utilisation de la dite molécule ou dudit extrait en tant qu'agent cosmétique ou dermatologique, ou comme agent actif dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques, et les méthodes de soin cosmétique ou dermatologiques utilisant lesdites compositions : a) pour prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou en ralentir les effets ; et/ou b) pour la reconstruction de l'épiderme ou de son stratum corneum endommagé, notamment par les rayonnements ultraviolets, et/ou c) pour restaurer le fonctionnement du cycle pilaire, pour prévenir ou ralentir la chute des cheveux, pour accélérer ou en favoriser la repousse, notamment en cas d'alopécie ou pour renforcer les cheveux fragiles, et/ou d) pour favoriser la croissance de l'ongle et/ou renforcer sa résistance. L'invention a encore pour but principal de fournir une méthode de soin cosmétique, utilisant un extrait végétal cosmétiquement acceptable, notamment pour réaliser les soins cosmétiques ou dermatologiques indiqués ci-dessus. L'invention a enfin pour but principal de fournir une méthode de culture in-vitro de cellules souches et/ou de cellules à haut potentiel clonogénique à des fins d'études fondamentales ou de production d'épiderme de culture, tel que de l'épiderme reconstruit, dans un but thérapeutique, par exemple, comme dans le cas de greffe, suite à des brûlures ou des plaies ulcéreuses qui cicatrisent mal, comprenant l'utilisation d'un extrait végétal acceptable avec ladite culture de cellules, obtenu à partir de plantes.
Description de l'invention: Un premier objet de l'invention est une méthode de soin cosmétique pour prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou en atténuer les effets, ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comprend la délivrance sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps, d'une quantité efficace d'au moins un agent cosmétiquement acceptable activant ou stimulant l'expression de la survivine au niveau cutané. Selon une première mise en oeuvre de l'invention, ladite méthode de soin cosmétique comprend l'application sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps présentant ou susceptible de présenter des signes de vieillissement cutané, d'une composition cosmétique comprenant, comme l'un de ses agents actifs, au moins un agent activant ou stimulant l'expression de la survivine, en vue d'obtenir un effet antiride, par un phénomène de re-densification cellulaire de l'épiderme particulièrement au creux des rides, et par l'accélération ou le maintien de son renouvellement. Selon une autre mise en oeuvre de l'invention, ladite méthode de soin cosmétique comprend l'application sur des zones cutanées exposées au soleil d'au moins une partie de la peau du visage ou du corps, d'une composition comprenant comme l'un de ses agents actifs, au moins un agent activant ou stimulant l'expression de la survivine, pour renforcer la résistance des kératinocytes de la couche basale de l'épiderme de façon à réduire la perte de cellules au niveau basal qui résulte de cette exposition au soleil, et limiter ainsi le photo vieillissement.
Un deuxième objet de l'invention porte sur une méthode de soin cosmétique ou dermatologique pour la reconstruction de l'épiderme ou de son stratum corneum endommagé, notamment par les rayonnements ultraviolets ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comprend la délivrance sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps d'une quantité efficace d'au moins un agent cosmétiquement acceptable activant ou stimulant l'expression de la survivine au niveau cutané. Ladite méthode comprend l'application sur au moins une partie de la zone endommagée de la peau du visage ou du corps, d'une composition cosmétique ou dermatologique comprenant comme l'un de ses agents actifs, au moins un agent activant ou stimulant l'expression de la survivine, en vue d'accélérer ou de favoriser la cicatrisation de la peau. Un troisième objet de l'invention porte sur une méthode de soin cosmétique visant à restaurer le fonctionnement du cycle pilaire, pour ralentir ou prévenir la chute des cheveux, favoriser ou accélérer leur repousse, notamment en cas d'alopécie, ou renforcer les cheveux fragiles, ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comprend la délivrance sur au moins une partie du cuir chevelu d'une quantité efficace d'au moins un agent cosmétiquement acceptable activant ou stimulant l'expression de la survivine au niveau cutané. Selon une variante de l'invention, ladite méthode de soin comprend l'application sur au moins une partie de la peau du cuir chevelu, d'une composition cosmétique comprenant comme l'un de ses agents actifs, au moins un agent activant ou stimulant l'expression de la survivine, en vue d'obtenir l'effet recherché. Un quatrième objet de l'invention porte sur une méthode de soin cosmétique pour favoriser la croissance de l'ongle et/ou renforcer sa résistance, ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comprend la délivrance sur l'ongle ou au moins une partie de la zone environnante d'une quantité efficace d'au moins un agent cosmétiquement acceptable activant ou stimulant l'expression de la survivine.
Selon une variante de réalisation de l'invention, ladite méthode comprend l'application sur l'ongle ou la zone environnante, d'une composition cosmétique comprenant comme l'un de ses agents actifs, au moins un agent activant ou stimulant l'expression de la survivine, en vue d'obtenir l'effet recherché. Un cinquième objet de l'invention porte sur une méthode de culture in-vitro de cellules souches et/ou de cellules à haut potentiel clonogénique à des fins d'études fondamentales ou à de production d'épiderme de culture, tel que de l'épiderme reconstruit, dans un but thérapeutique, comme, par exemple, dans le cas de greffes suite à des brûlures ou des plaies ulcéreuses qui cicatrisent mal, caractérisé en ce qu'il comprend l'ajout dans le milieu de culture d'une quantité efficace d'un agent activant ou stimulant l'expression de la survivine pour le maintien en culture desdites cellules.
L'agent actif cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable selon l'invention activant ou stimulant l'expression de la survivine peut être une molécule purifiée, d'origine naturelle ou synthétique ou bien être le produit d'un procédé d'extraction à partir d'une matière première d'origine végétale, minérale ou animale. Cet agent actif peut en particulier être un extrait ou une huile essentielle. Selon une mise en oeuvre particulière de l'invention, l'agent actif stimulant l'expression de la survivine est la forskoline ou un extrait en contenant, en particulier un extrait de Co/eus forskolii. La présente invention vise ainsi également l'utilisation de la forskoline ou d'un extrait en contenant en tant qu'agent cosmétique pour prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou les traiter.
Les autres espèces végétales dont le produit d'extraction permet d'obtenir l'effet recherché de stimulation de l'expression de la survivine sont plus particulièrement choisies dans le groupe comprenant Nostoc commune, Scenedesmus dimorphus, Curcuma Tonga, Crocus sativus, Dante/lia oliveri, Lepechinia caulescens et Limnophila conferta. L'agent actif selon l'invention peut être un extrait végétal obtenu à partir d'un matériel végétal formé d'une seule espèce végétale ou d'un mélange d'espèces végétales appartenant au même genre ou des genres différents, et se trouvant à l'état fraîchement récolté ou séché. Ledit extrait végétal peut être obtenu par tout procédé d'extraction connu de l'homme du métier, notamment en mettant en oeuvre les procédés d'extraction décrits plus loin ainsi que dans les exemples 2 et 3. Le matériel végétal utilisé pour la préparation de l'extrait peut être la plante entière ou une partie de la plante telle que la racine, le rhizome ou une partie aérienne, notamment la tige, les feuilles, les fleurs les graines ou les boutons floraux. Préalablement à l'étape d'extraction elle-même, le matériel végétal peut avoir été séché et/ou broyé. Selon une mise en oeuvre préférée de l'extraction, le matériel végétal se trouve à l'état sec et broyé.
L'extrait peut être préparé par différents procédés d'extraction connus de l'Homme du Métier. Toutefois, l'extraction est en particulier réalisée par mise en contact du matériel végétal sélectionné avec un solvant polaire ou un mélange de solvants polaires.
Selon la présente invention, l'expression solvant polaire signifie que le solvant a une valeur d'indice de polarité P' qui est égale ou supérieure à une valeur de 4. L'indice de polarité est une grandeur calculée sur la base de grandeurs thermodynamiques (de solubilité et de changement d'état) qui met en évidence le caractère plus ou moins polaire d'une molécule. On se reportera, pour les indices de polarité des solvants, à l'article de L.R. SNYDER ; Classification of the solvent properties of common tiquids ; Journal of Chromatography, 92 (1974), 223-230, qui est inclus par référence à la présente demande. A titre de solvant polaire ou de mélange de solvants polaires utilisable pour l'étape d'extraction, on choisira avantageusement un solvant choisi parmi l'eau, un alcool en C1-C4, choisi préférentiellement parmi l'éthanol ou le butanol, un glycol choisi préférentiellement parmi le glycérol, le butylène glycol et le propylène glycol et leurs mélanges en toutes proportions. Selon une mise en oeuvre préférée de l'invention, les extraits obtenus à partir des espèces végétales Coleus forskolii, Nostoc commune, Scenedesmus dimorphus, Curcuma longa, Crocus sativus, Daniel/1a oliveri, Lepechinia caulescens et Limnophila conferta sont des extraits à base d'un solvant polaire ou d'un mélange de solvants polaires, avantageusement choisis parmi l'eau, un alcool en C1-C4, en particulier l'éthanol ou le butanol, un glycol choisi préférentiellement parmi le glycérol, le butylèneglycol et le propylèneglycol et leurs mélanges. Les mélanges préférés sont des mélanges d'au moins un alcool et d'eau ou d'au moins un glycol et d'eau, comprenant au moins 10% v/v d'alcool ou de glycol, le solde étant constitué d'eau.
Selon une mise en oeuvre préférée du procédé d'extraction à partir de ces espèces végétales, l'étape d'extraction proprement dite est réalisée par reflux à chaud, pendant au moins 30 minutes. L'extraction peut aussi comprendre, de façon optionnelle, une étape supplémentaire consistant en un traitement du matériel végétal ou de l'extrait végétal, visant à le décolorer partiellement ou complètement, ou à le purifier. Cette étape de décoloration peut, par exemple, consister en un traitement du matériel végétal ou de l'extrait par une solution d'un solvant ou d'un mélange de solvant apolaires ou par un traitement consistant en une mise en contact de l'extrait avec des particules de charbon actif, ou bien encore par un traitement à l'aide du CO2 à l'état supercritique.
L'extraction peut être complétée par une étape d'élimination partielle ou totale des solvants d'extraction. Dans le premier cas, on concentre généralement l'extrait jusqu'à obtenir un concentré aqueux dépourvu de quantités significatives de solvant organique, dans le second cas on obtient un résidu sec. De façon alternative, le produit de l'étape d'extraction peut être, lyophilisé ou atomisé pour se présenter sous la forme d'une poudre. La poudre peut être utilisée en l'état dans une composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention ou être re-dispersée dans un solvant ou un mélange de solvants. De façon générale, le produit de l'étape d'extraction peut être dissous ou dispersé dans un solvant ou un mélange de solvants, pour être utilisé à titre d'agent actif dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques de l'invention. Le solvant ou le mélange de solvants dans lequel l'extrait est dissous ou dispersé peut être identique ou différent de celui ayant servi à l'extraction. L'extrait de l'invention peut également être adsorbé sur un support avantageusement choisi parmi les poudres de nylon, poreuses ou non poreuses et les micas ou toute substance minérale lamellaire. Dans ce cas, l'extrait utilisé est préférentiellement un extrait aqueux. Selon une variante de réalisation de la présente invention, l'agent activant ou stimulant l'expression de la survivine est délivré par voie topique sous la forme d'une composition cosmétique contenant comme l'un de ses agents actifs, ledit agent stimulant l'expression de la survivine, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable, par application de cette composition sur la peau du corps ou du visage, ou les phanères. La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention comprend une quantité efficace d'extrait de l'invention pour obtenir l'effet recherché. Par "quantité efficace", pour tout aspect de l'invention, on entend une quantité qui est au moins égale à la quantité nécessaire : a) pour prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou en ralentir les effets ; et/ou b) pour la reconstruction de l'épiderme ou de son stratum corneum lorsqu'il est endommagé, notamment par les rayonnements ultraviolets, et/ou c) pour restaurer le fonctionnement du cycle pilaire, pour ralentir ou prévenir la chute des cheveux, accélérer ou favoriser leur repousse, notamment en cas d'alopécie ou pour renforcer les cheveux fragiles, et/ou d) pour favoriser la croissance de l'ongle et/ou renforcer sa résistance e) le maintien en culture des cellules souches et/ou des cellules à haut potentiel clonogénique, afin de permettre de conserver ces cultures pendant un temps suffisant et pour les réaliser dans de bonnes conditions, ainsi que pour réaliser la production d'épiderme, lorsqu'il y a lieu. En pratique, cette quantité est aisément déterminable par l'homme de l'art. A titre d'exemple, on peut indiquer que la concentration en agent activant et/ou stimulant la production de survivine dans la composition ou le milieu de culture sera comprise entre 0,001% et 5 % en poids. Le milieu de culture comprend de préférence entre 0,01 et 3 0/0 en poids du milieu de culture, en agent activant et/ou stimulant la production de survivine La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention comprend avantageusement de 1% à 3%, en en agent activant et/ou stimulant la production de survivine, La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention peut également comprendre un ou plusieurs autres agent cosmétiquement 30 ou dermatologiquement acceptables.
Comme démontré par des essais spécifiques qui ont été réalisés et rapportés aux exemples 1 à 3, l'agent cosmétique ou dermatologique selon l'invention est efficace notamment en stimulant de manière inattendue l'expression de la survivine au niveau des cellules souches de la couche basale de l'épiderme. Les essais réalisés par les inventeurs ont aussi montré que les propriétés d'un agent actif cosmétique ou dermatologique stimulant l'expression de la survivine selon l'invention peuvent être également obtenues ou améliorées dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques, dans lesquelles ledit agent est associé avec d'autres agents actifs présentant des effets cosmétiques similaires et/ou complémentaires de l'extrait de l'invention. L'efficacité activatrice d'un agent actif cosmétique ou dermatologique stimulant l'expression de la survivine selon l'invention sera notamment avantageusement améliorée par des molécules ou extraits stimulant l'expression des protéines d'adhésion telles que les intégrines bêta 1 des kératinocytes épidermiques, et l'adhésion elle même de ces cellules (aspartate de magnésium, sels de manganèse et dérivés), certains peptides reconnus par l'intégrine comme la séquence arginine-glycine- acide aspartique, certains facteurs de croissance tels que le KGF. L'efficacité activatrice d'un agent actif cosmétique ou dermatologique stimulant l'expression de la survivine selon l'invention pourra également être avantageusement améliorée par des molécules ou extraits inhibant les phosphodiesterases telles que les méthylxanthines et en particulier la cafeine, qui dégradent l'AMPc, et conduisent à une augmentation du taux intracellulaire d'AMPc. Les compositions cosmétique ou dermatologique selon l'invention peuvent en outre comprendre un ou plusieurs autres agents actifs pouvant être choisis parmi les substances ayant une activité éclaircissante de la peau ; les substances ayant une activité amincissante ; les substances ayant une activité hydratante ; les substances ayant une activité calmante, apaisante ou relaxante ; les substances ayant une activité stimulant la microcirculation cutanée pour améliorer l'éclat du teint, en particulier du visage ; les substances ayant une activité séborégulatrice pour le soin des peaux grasses ; les substances destinées à nettoyer ou purifier la peau ; les substances ayant une activité anti- radicalaire ; les substances destinées à atténuer ou retarder les effets du vieillissement de la peau, en particulier la formation de rides, par une activité visant à favoriser le maintien de la structure de la peau et/ou à limiter la dégradation de la matrice extracellulaire des couches superficielles du derme et de l'épiderme et/ou à obtenir un effet protecteur, correcteur ou restructurant de la peau ; les substances ayant une activité anti-inflammatoire. Outre l'extrait de l'invention, ladite composition cosmétique ou dermatologique comprend au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable qui peut être choisi parmi des pigments, des colorants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti-oxydants, des conservateurs, et leurs mélanges. La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention peut être par exemple un sérum, une lotion, une émulsion, par exemple une crème, ou bien encore un hydrogel, de préférence un masque, ou se présenter sous la forme d'un stick, ou encore d'un patch, ou encore un produit d'hygiène destiné au cuir chevelu tel qu'un shampooing ou un après-shampooing, ou bien encore un produit de maquillage, en particulier une composition destinée à être appliquée sur les ongles, par exemple un vernis à ongle. La présente invention concerne enfin une utilisation des agents actifs tels que définis ci-dessus en tant qu'agent cosmétique ou dermatologique destiné à prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou les traiter, ledit agent cosmétique ou dermatologique stimulant l'expression de la survivine au niveau des cellules souches de la couche basale de l'épiderme.
L'invention porte également sur une utilisation de l'agent actif de l'invention comme agent cosmétique ou dermatologique ou pour la fabrication d'une composition cosmétique destinée à prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou les traiter.
D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à partir de la description explicative qui va suivre faite en référence à plusieurs exemples de réalisation de l'invention donnés simplement à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention. Dans les exemples, la température est en degrés Celsius, la pression est la pression atmosphérique, les quantités ou les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire. EXEMPLES MATERIELS ET METHODES 1) Culture cellulaire Les kératinocytes humains normaux sont cultivés en flasques 75 cm2, dans un incubateur à 37°C sous une atmosphère humide contenant 5% CO2, dans du milieu pour kératinocytes sans sérum et complémenté d'EGF (Epidermal Growth Factor) et de BPE (Bovine Pituitary Extract) (KSFMc) (Gibco ref: 17005-034 + 37000-015). Les cellules sont ensemencées (jour 30) dans des microplaques 48 puits à raison de 50 000 cellules dans 500 pL de milieu par puits. Après 24 heures d'incubation (jour 31), les cellules sont devenues adhérentes et l'étape de traitement est alors réalisée. Le milieu d'ensemencement est retiré et le milieu de traitement contenant les ingrédients à évaluer aux différentes concentrations ou leur excipient (par exemple le DMSO) en même proportion est alors ajouté dans chaque puits de culture.
Un pic d'expression de la survivine par les cellules est observé après 16 heures de traitement. Les puits sont alors rincés au PBS. La moitié des puits de la microplaque est utilisée pour lyser les kératinocytes et doser la survivine intracellulaire. L'autre moitié des puits de la microplaque est utilisée pour doser les protéines totales par la méthode BCA, ce qui permet de ramener la quantité de survivin dosée à une quantité unitaire de protéine. Une phase de mesure de cytotoxicité de chaque agent actif testé est préalablement nécessaire pour être en mesure d'évaluer ensuite l'effet de l'agent actif à des doses non cytotoxiques. A cette fin, on détermine la dose cytotoxique de l'agent actif par le test XTT (réf : Cell Proliferation Kit II, Roche Diagnostic). Le sel de tétrazolium (réactif )(TT) est transformé en formazan par les déshydrogénases localisées au niveau de la chaîne respiratoire mitochondriale. Seules les cellules vivantes dont la chaîne respiratoire est fonctionnelle sont capables de produire le Formazan, composé orange détecté à 450 nm. Chaque agent actif testé est dilué pour préparer une gamme de dilution de raison 2, la concentration en agent actif des échantillons à tester allant de 50 mg/mL à 0,195 mg/mL. Chaque dilution préalablement préparée est finalement diluée au 1000ème dans le milieu KSFM-C et mise alors au contact des kératinocytes pendant 48h, moment auquel s'effectuera le test de cytotoxicité. 2) Dosage de la survivine Le dosage de la survivine est réalisé par un test 25 immunoenzymatique ELISA (ref : Duoset Survivin ELISA de chez R&D Systems) sur des cultures de kératinocytes humains normaux. Le dosage des protéines totales est effectué par un test colorimétrique BCA (référence : BC Assay Kit, Uptima Interchim), par mesure d'absorbante à 570 nm. 30 Pour le dosage ELISA de la survivine après 16 h de traitement, on effectue un rinçage des puits au PBS puis un ajout de 100 pl/puits de tampon de lyse incubé 10 minutes sous agitation douce. Ce tampon contient des anti-protéases, qui empêchent la dégradation des protéines dont la survivine lors de la lyse des cellules. On prépare la microplaque ELISA (référence Clear Microplate 5 R&D systems DY992) : Une gamme d'étalonnage avec la survivine humaine est préparée de 0 à 2000 pg/mL dans les mêmes conditions qu'avec les lysats cellulaires. Après blocage de la réaction enzymatique par de l'acide 10 sulfurique, la quantification de la survivine est réalisée par mesure de l'absorbance à 450 nm. Exemple 1 : activité de la forskoline sur l'expression de la survivine. 15 La forskoline, disponible dans le commerce auprès du fournisseur SIGMA, France est indiquée comme ayant été isolée à partir d'un extrait de la plante Co/eus forsko/i% La forskoline est tout d'abord diluée dans du DMSO pour préparer une solution à 4 mg/ml. 20 Lors du traitement sur cellules, la solution précédemment préparée est diluée dans le milieu de culture pour obtenir une concentration finale de 10pM, soit 4 pg/ml. On prépare également un témoin à l'aide de ce même solvant et dans les mêmes proportions. Le résultat, indiqué dans le tableau I ci-dessous, est comparé 25 au niveau basal d'expression de la survivine, représenté par un témoin solvant qui constitue le 100% : Tableau I Actif Dose Survivine d'activation (ug/ml) (pg/mg protéines) Témoin solvant -- 4,92 100 Forskoline 4 7,27 147,9 Conclusion : la forskoline augmente significativement l'expression de la survivine intrakératinocytaire, par rapport au niveau basal d'expression de la protéine (témoins). Exemple 2 : Préparation d'extrait de parties aériennes de Limnophila conferta et détermination de son activité vis-à-vis 10 de l'expression de la survivine. A ù Préparation de l'extrait, Le matériel végétal , disponible dans le commerce auprès du fournisseur IDVP, France, formé de parties aériennes comprenant les tiges 15 et feuilles de Limnophi/a conferta à l'état sec, est broyé extemporanément à l'aide d'un broyeur-mixeur de laboratoire, à une granulométrie moyenne de l'ordre de 0,1 à 1 mm. On introduit 10g de végétal broyé dans un ballon de 250 ml dans lequel on ajoute 150m1 d'un mélange éthanol/eau (90/10 v/v). 20 On met le ballon surmonté d'un réfrigérant à boule sous agitation magnétique dans un bain thermostaté, puis on chauffe jusqu'au reflux de solvant. Le reflux est maintenu 30 min sous agitation. Une fois le chauffage arrêté, on laisse refroidir le ballon à 25 température ambiante hors du bain.
Le mélange est ensuite filtré sous vide sur buchner avec un filtre GF/F Whatman 70pm et une fiole tarée ; obtient ainsi le filtrat 1. Le gâteau est lavé sur le buchner avec 50 ml du solvant d'extraction ; on obtient le filtrat 2.
Les 2 filtrats ont été réunis, pesés. Le filtrat ainsi obtenu est introduit dans un ballon préalablement taré, puis concentré à sec à l'évaporateur rotatif sous vide dans un bain d'eau à une température maximale de 50°C. Le résidu sec est quantifié pour déterminer le rendement 10 massique d'extraction exprimé en masse d'extrait sec obtenu pour 100 g de matière végétale à l'état broyé sec de départ. Le rendement d'extraction est de 21 %. B - Activité vis-à-vis de l'expression de la survivine 15 L'extrait sec préparé au paragraphe A est dilué à la concentration de 12,5 mg/ml ou de 25 mg/ml dans le DMSO. Lors du traitement sur cellules, l'extrait est ajouté dans le milieu de culture afin d'obtenir une concentration finale 0,1% v/v, soit 12,5 pg/ml pour la première solution d'extrait et 25 pg/mI pour la seconde 20 solution. On prépare également un témoin à l'aide de ce même solvant, de concentration finale 0,1% v/v. Le tableau I ci-dessous indique l'activité moyenne de l'extrait de l'exemple 1 vis-à-vis de l'expression de la survivine, exprimée en 25 picograrnmes de survivine par mg de protéines totales, puis comparée au niveau basal d'expression de cette même protéine, représenté par le témoin solvant, qui constitue le 100% : Le résultat obtenu est indiqué dans le tableau II ci-dessous: 30 Tableau II Plante Dose Survivine % (pg/ml) (pg/mg protéines) d'activation Témoin solvant -- 600 100 Limnophila conferta 12,5 776 129,3 Limnophila conferta 25 889 148,1 Conclusion : l'extrait de L/mnoph//a conferta augmente significativement l'expression de la survivine intrakératinocytaire, par rapport au niveau basal d'expression de la protéine (témoins). Exemple 3 : préparation d'extrait de parties aériennes de Lepechinia caulescens et détermination de son activité vis-à-10 vis de l'expression de la survivine. A û Préparation de l'extrait. L'extrait est préparé conformément à l'exemple 2-A en utilisant comme matériel végétal de départ, des feuilles de Lepechinia cau/escensà 15 l'état sec et broyé. Le solvant d'extraction utilisé dans le procédé est un mélange éthanol/eau 50/50 (v/v). Le résidu sec est quantifié pour déterminer le rendement massique d'extraction exprimé en masse d'extrait sec obtenu pour 100 g 20 de matière végétale à l'état broyé sec de départ. Le rendement massique d'extraction obtenu est de 29%.
B - Activité vis-à-vis de l'expression de la survivine L'extrait sec préparé au paragraphe A du présent exemple est dilués à la concentration de 3,125 mg/ml dans le DMSO. Lors du traitement sur cellules, l'extrait est ajouté dans le milieu de culture afin d'obtenir une concentration finale de 0,1% v/v, soit 3,125 pg/ml. On prépare également un témoin solvant (DMSO) de concentration finale 0,1% v/v. Le tableau III ci-dessous indique l'activité de l'extrait de Lepechinia caulescens testés vis-à-vis de la survivine, par rapport au niveau basal d'expression, représenté par le témoin solvant qui constitue le100%: Tableau III Plante Dose Survivine % (ug/ml) (pg/mg protéines) d'activation Témoin solvant -- 4,92 100 Lepechinia caulescens 3,125 6,57 133,7 Conclusion : l'extrait de Lepechinia caulescens augmente significativement l'expression de la survivine intrakératinocytaire, par rapport au niveau basal d'expression de la protéine (témoins). 20 Exemple 4: composition cosmétique comprenant un extrait de feuilles de Lepechinia caulescens. L'extrait sec obtenu à l'exemple 3A est solubilisé à 1% massique dans un mélange éthanol/eau. 25 On obtient une solution à 10/o massique d'extrait sec qui est utilisée dans la composition cosmétique ci-dessous :15 - Extrait végétal de Lepechinia cau/escens(EX3A) 0,1 - Tensio actif (Arlacel 165 VP) 5 - Alcool cétylique 95% 1 Alcool stéarylique 1 - Cire d'abeille 1,5 - Huile (Perleam ) 8,5 - Tri caprate/caprylate glycerides 3 % - Huile silicone (diméthicone 100 CS) 1 - Polymère (Keltrol ) 0,35 0/0 - Soude 0,04 °Io EDTA tetrasodique poudre 0,1 °fo - Conservateurs 0,5 °Io Eau qsp 100 La composition cosmétique est préparée de manière habituelle, 15 bien connue de l'homme de l'art, par mélange des divers composants en une ou plusieurs étapes. Cette composition peut être appliquée sur la peau ou le cuir chevelu ou encore les ongles journellement pendant plusieurs semaines pour obtenir les effets cosmétiques précédemment indiqués. 20 Exemple 5: composition cosmétique comprenant la forskoline. La forskoline de l'exemple 1 (origine SIGMA) isolée à partir d'un 25 extrait de Coleus forskolii, est utilisée dans la composition cosmétique ci-dessous : Forskoline (SIGMA, EX 1) 2 Steareth-21 (Brij 721) 2,5 Glycéryl stéarate (Tegrin) 1,1 30 - Alcool stéarylique 5 Tricaprate / caprilate glycérol 12,5 Butylène glycol 3 °la - Glycérine 2 Conservateur 0,5 Concentré de parfum 0,5 % - Filtre UV (méthoxycinnamate d'octyle) 7,5 Eau qsp 100 La composition cosmétique est préparée de manière habituelle, bien connue de l'homme de l'art, par mélange des divers composants en une ou plusieurs étapes.
Cette composition peut être appliquée sur les zones de la peau comprenant des rides journellement pendant plusieurs semaines pour obtenir un effet d'atténuation ou de disparition complète desdites rides. BEAUDELOMENIE 02/12/2008 16:19:40 PAGE 3/003 Fax Server

Claims (12)

  1. REVENDICATIONS1. Méthode de soin cosmétique pour prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou à en atténuer les effets, ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comprend la délivrance, sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps, d'une quantité efficace d'au moins un agent cosmétiquement acceptable activant ou stimulant l'expression de la survivine au niveau cutané,
  2. 2. Méthode de soin cosmétique pour le soin de l'épiderme ou de son stratum corneum endommagé, notamment par le rayonnement ultraviolet, ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comprend la délivrance, sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps, d'une quantité efficace d'un agent cosmétiquement acceptable, activant ou stimulant l'expression de la survivine au niveau cutané.
  3. 3. Méthode de soin cosmétique visant à restaurer le fonctionnement du cycle pilaire, pour accélérer ou favoriser la repousse des cheveux ou à renforcer les cheveux fragiles, ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comprend la délivrance, sur au moins une partie du cuir chevelu, d'une quantité efficace d'au moins un agent cosmétiquement acceptable activant ou stimulant l'expression de la survivine au niveau du cuir chevelu.
  4. 4. Méthode de soin cosmétique pour favoriser la croissance de l'ongle et/ou renforcer sa résistance, caractérisée en ce qu'elle comprend la délivrance sur l'ongle ou au moins une partie de la zone environnante, d'une quantité efficace d'au moins un agent cosmétiquement acceptable activant ou stimulant l'expression de la .survivine.
  5. 5, Méthode selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit agent est délivré topiquement sous la forme d'une composition cosmétique comprenant ledit agent comme l'un de ses agents actifs, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient cosmétiquement acceptable,Revendications modifiées- 1911 08. 25
  6. 6. Méthode selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'agent cosmétiquement actif est choisi parmi le groupe consistant en la forskoiine ou un extrait en contenant, en particulier un extrait de Cous Forskolil un extrait de Lepechinia cau/escens, un extrait de Limnophi/a conferta, un extrait de Daniellia oliveri, un extrait de Nostoc commune, un extrait de Scenedesmus dimorphus, un extrait de Curcuma longa, un extrait de Crocus sativus
  7. 7. Méthode selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'agent cosmétiquement actif comprend ou est constitué i0 essentiellement d'un extrait de Lepechinia cau/escens
  8. 8. Méthode selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l'agent cosmétiquement actif comprend ou est constitué essentiellement d'un extrait de Limnophi/a conferta.
  9. 9. Méthode selon l'une des revendications 5 à 8, caractérisée en 15 ce que la concentration en agent cosmétiquement actif est comprise entre 0,001% et 5%, de préférence de 1 % à 3 %, en poids de la composition.
  10. 10. Méthode selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que l'agent activant ou stimulant l'expression de la survivine précitée est associé à une molécule ou extrait stimulant l'expression des 20 protéines d'adhésion telles que les intégrines bêta 1 des kératinocytes épidermiques, et l'adhésion elle-même de ces cellules, par exemple l'aspartate de magnésium, un sel de manganèse et dérivés, des peptides reconnus par l'intégrine tels que la séquence arginine-glycine-acide aspartique, des facteurs de croissance tel que le KGF. 25
  11. 11. Méthode selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que l'agent activant ou stimulant l'expression de la survivine est associé à une molécule ou à un extrait inhibant les diphosphoesterases, de préférence la caféine.Revendications modifiées- 1911 08 26
  12. 12. Méthode selon l'une des revendications 5 à 11, caractérisée en ce que la composition cosmétique précitée est formulée sous la forme d'un sérum, d'une lotion, d'une émulsion, d'un hydrogel d'un stick, d'un patch ou sous la forme d'un produit d'hygiène destiné au cuir chevelu, tel qu'un shampooing ou un après-shampooing, ou encore sous la forme d'un produit de maquillage, en particulier une composition destinée à être appliquée sur les ongles par exemple un vernis à ongle.
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