JP4528745B2 - チロシナーゼ産生抑制剤 - Google Patents
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Description
1−1.方法
ヒト正常メラノサイトを96穴プレートに播種し、24時間後各試料を含むMedium254(クラボウ)に交換しさらに48時間継続培養した。PBS(−)で洗浄し試料除去後、0.5% Triotn X−100含有リン酸緩衝液(100mM、pH6.8)にて細胞破砕しこれをチロシナーゼ粗酵素液とした。細胞破砕液にL−ドーパを添加し、37℃で2時間反応させた後Abs.405nmを測定し、市販のメラニン(シグマ社製)で作成した検量線より合成されたメラニン量を算出した。また同時に細胞破砕液のタンパク質量を測定し、単位タンパク質あたりのメラニン産生量として表したチロシナーゼ比活性を指標とした。
1−2.試料
ウルソール酸
1−3.結果
6.25μM以上のウルソール酸処理により、細胞内チロシナーゼ活性の有意な減少が認められた(表1)。以上より、ウルソール酸にはチロシナーゼ産生抑制作用がある。
2−1.方法
B16マウスメラノーマF0株(B16F0)に5%仔牛血清(FBS)含有ダルベッコ変法MEM(DMEM/5)を6穴プレートに播種した。培養24時間後に所定の濃度の試料を含有したDMEM/5と交換した。このとき目視判定で細胞ペレットの色調をスコア化(5段階スコア:1白−5黒)した。
次にメラニン生成量をアルカリ可溶化法にて測定した。細胞ペレットを5%トリクロロ酢酸、エタノール/ジエチルエーテル溶液、ジエチルエーテルで洗浄した後、1N水酸化ナトリウムを添加して加熱溶解(100℃、5分)した。マイクロプレートリーダーを用いて430nmの吸光度を測定した。メラニン量は、合成メラニン(シグマ社製)を標準品として作成した検量線から算出した。同時にタンパク量を定量した。全細胞のタンパク量でメラニン量を除することによって単位タンパク量あたりのメラニン量を算出した。それぞれのメラニン産生量はStudent t検定を用いて有意差検定を行ない、コントロールとの差を評価した。
2−2.試料
ウルソール酸
2−3.結果
ウルソール酸処理により、細胞色調の白色化およびメラニン産生量の減少が認められた(表2、3)。従って、ウルソール酸にはメラニン産生抑制作用がある。
美容液
(処方) 質量%
ウルソール酸 0.1
スクワラン 1.0
べヘニルアルコール 4.0
ワセリン 3.0
流動パラフィン 15.0
モノラウリン酸デカグリセリル 1.0
モノステアリン酸POE(20)ソルビタン
3.0
キサンタンガム 0.1
1,3−ブチレングリコール 10.0
防腐剤 適量
香料 適量
精製水 残部
(調製方法)
水中油型乳化組成物の製法の常法に従い調製した。
化粧水
(処方) 質量%
ウルソール酸ナトリウム 1.0
スクワラン 0.2
モノラウリン酸デカグリセリル 2.0
ヒアルロン酸ナトリウム 0.2
1,3−ブチレングリコール 3.0
エチルアルコール 10.0
防腐剤 適量
香料 適量
精製水 残部
(調製方法)
全ての成分を50℃で均一になるまで混合し、調製した。
クリーム2(エモリエントタイプ)
(処方) 質量%
ウルソール酸 1.0
スクワラン 10.0
ミリスチン酸イソセチル 6.0
トリ2−エチルヘキサン酸グリセリル 3.0
マカデミアナッツ油 1.0
ジメチルポリシロキサン(6cs) 0.2
セタノール 5.0
POE(20)セチルエーテル 1.0
テトラオレイン酸POE(40)ソルビット
0.5
モノステアリン酸グリセリル 1.0
水素添加大豆レシチン 0.2
1,3−ブチレングリコール 5.0
キサンタンガム 0.1
ヒアルロン酸ナトリウム 0.01
クエン酸 0.1
クエン酸ナトリウム 0.4
防腐剤 適量
精製水 残部
(調製方法)
水中油型乳化組成物の製造方法の常法に従い調製した。
美容オイル
(処方) 重量%
オレアノール酸 0.5
ミリスチン酸イソセチル 10.0
ホホバ油 5.0
天然ビタミンE 0.1
スクワラン 残部
(調製方法)
全ての成分を50℃で均一になるまで混合し、調製した。
スキンローション
(処方) 質量%
トリ(カプリル酸・カプリン酸)グリセリル
0.1
POP(4)POE(20)セチルエーテル
0.6
プロピレングリコール 10.0
ウルソール酸及びその類縁体を含むシソエキス
2.0
ヒアルロン酸ナトリウム 0.1
防腐剤 適量
精製水 残部
(調製方法)
水中油型乳化組成物の製造方法の常法に従い調製した。
乳液
(処方) 質量%
d−δ−トコフェロール 0.1
スクワラン 5.0
2−エチルヘキサン酸セチル 5.0
ジメチルポリシロキサン(100cs) 0.5
パルミチン酸セチル 0.5
ベヘニルアルコール 1.5
ステアリン酸 0.5
親油型モノステアリン酸グリセリル
1.0
モノステアリン酸POE(20)ソルビタン
1.0
テトラオレイン酸POE(40)ソルビタン
1.5
プロピレングリコール 7.0
ウルソール酸及びその類縁体を含むシソエキス
2.0
ウルソール酸及びその類縁体を含むリンゴエキス
2.0
キサンタンガム 0.1
防腐剤 適量
精製水 残部
(調製方法)
水中油型乳化組成物の製造方法の常法に従い調製した。
クリーム3(油中水型エモリエントタイプ)
(処方) 質量%
ウルソール酸 1.0
オレアノール酸 1.0
ジメチコンコポリオール 0.5
デカメチルシクロペンタシロキサン 5.0
トリ(カプリル・カプリン酸)グリセリル
15.0
ミツロウ 2.0
ペンタヒドロキシ酸デカグリセリル 2.0
イソステアリン酸 1.0
グリセリン 4.5
ヒアルロン酸ナトリウム 0.01
防腐剤 適量
精製水 残部
(調製方法)
油中水型乳化組成物の乳化法の常法に従い、乳化組成物を調製した。
サンスクリーンクリーム
(処方) 質量%
ウルソール酸 0.1
流動パラフィン 7.0
デカメチルシクロペンタシロキサン 3.0
セチルアルコール 4.0
縮合リシノール酸ヘキサグリセリル 0.5
POE(20)セチルエーテル 1.0
パラメトキシ桂皮酸オクチル 7.0
酸化チタン 3.0
セチル硫酸ナトリウム 1.0
ステアロイルメチルタウリンナトリウム 0.3
1,3−ブチレングリコール 5.0
キサンタンガム 0.3
防腐剤 適量
精製水 残部
(調製方法)
粉体相を油相中に添加した後、油中水型乳化組成物の乳化法の常法に従い、乳化組成物を調製した。
外用剤(軟膏製剤)
ウルソール酸 0.5
POE(30)セチルエーテル 2.0
モノステアリン酸グリセリル 10.0
流動パラフィン 10.0
白色ワセリン 5.0
セタノール 6.0
プロピレングリコール 10.0
防腐剤 適量
精製水 残部
(調整方法)
軟膏組成物の製造方法の常法に従い、乳化組成物を調製した。
外用剤(乳剤)
オレアノール酸 0.2
白色ワセリン 41.0
マイクロクリスタリンワックス 3.0
ラノリン 10.0
モノオレイン酸ソルビタン 4.75
モノオレイン酸POE(20)ソルビタン 0.25
防腐剤 適量
精製水 残部
(調整方法)
乳剤組成物の製造方法の常法に従い、乳化組成物を調製した。
Claims (1)
- オレアノール酸を有効成分とするチロシナーゼ産生抑制剤。
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