JPH11335396A

JPH11335396A - 新規抗菌性ペプチド

Info

Publication number: JPH11335396A
Application number: JP10176466A
Authority: JP
Inventors: Rikumasa Hirata; 陸正平田
Original assignee: Seikagaku Corp
Current assignee: Seikagaku Corp
Priority date: 1998-03-25
Filing date: 1998-06-23
Publication date: 1999-12-07
Anticipated expiration: 2018-06-23
Also published as: DE69932281T2; EP0955312B1; EP0955312A3; EP0955312A2; DE69932281D1; CA2264258A1; JP4037525B2; US6040291A; CA2264258C; ATE332922T1

Abstract

(57)【要約】【課題】ヒト由来であり、かつＬＰＳ結合活性、抗菌
活性及びＬＰＳ中和活性が非常に高いペプチドを提供す
る。【解決手段】下記アミノ酸配列（配列番号１）を少な
くとも含むペプチド。Lys Xa1 Phe Lys Arg Ile Val Xa
2 Arg Ile Xaa Xa2 Phe Leu Arg Xa2 Leu Val（但し、X
a1は疎水性アミノ酸残基を、Xa2は親水性アミノ酸残基
を、Xaaは任意のアミノ酸残基を示す）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規な抗菌性ペプチ
ドに関し、詳しくは、ヒト由来の抗菌性タンパク質の部
分ペプチドの一部アミノ酸残基を置換した抗菌性ペプチ
ドに関する。また本発明は、前記抗菌性ペプチドを有効
成分とする抗菌剤、並びに、細菌感染症治療剤及びエン
ドトキシンショック抑制剤などの医薬に関する。さら
に、本発明は、不溶性担体に固着された前記抗菌性ペプ
チドからなる、エンドトキシン除去剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】CAP18(Cationic antimicrobial protein
of 18kDa)は、ヒト及びウサギの顆粒球から見いだされ
た抗菌性タンパク質である。

【０００３】特表平８−５０４０８５号公報には、ヒト
由来のCAP18の、シグナルペプチド部分を含む全アミノ
酸配列が記載されている。また、一部の配列がウサギ由
来の配列で置換されているヒト由来のCAP18のＣ末端側
３７アミノ酸残基からなる部分ペプチドも記載されてい
る。

【０００４】「ミノファーゲン・メディカル・レビュー
(MINOPHAGEN MEDICAL REVIEW)」第43巻第１号 pp1-15
(1998)には、ヒト由来のCAP18の全アミノ酸配列が記載
されている。またヒト由来のCAP18のＣ末端領域の３
４、３２、３０、２７、２４又は２２アミノ酸残基から
なる部分ペプチドも記載されている。またこれらペプチ
ドの、大腸菌、サルモネラ菌、メチシリン感受性黄色ブ
ドウ球菌(MSSA)及びメチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRS
A)に対する抗菌活性についてのデータが示されている。

【０００５】「現代医療」第28巻(増刊III) pp2367-237
5 (1996)には、ヒト由来のCAP18の全アミノ酸配列が記
載されている。またヒト由来のCAP18のＣ末端領域の３
４、３０、２７、２４又は２２アミノ酸残基からなる部
分ペプチドも記載されている。またこれらペプチドによ
るリポポリサッカライド（ＬＰＳ；エンドトキシンとも
呼ばれる）活性の抑制についてのデータが記載されてい
る。

【０００６】SHOCK；From Molecular and Cellular Lev
el to Whole Body (Proceedings ofthe Third Internat
ional Shock Congress-Shock'95, Hamamatsu, Japan, 2
1-23 October, 1995), Okada,K., Ogata,H. eds. Elsev
ier Science B.V. pp109-115, (1996)には、ヒト由来の
CAP18の全アミノ酸配列が記載されている。またヒト由
来のCAP18のＣ末端領域の３４、３０、２７又は２４ア
ミノ酸残基からなる部分ペプチドも記載されている。ま
たこれらペプチドのＬＰＳへの結合活性についてのデー
タが記載されている。

【０００７】Bacterial Endotoxins；Lipopolysacchari
des From Genes to Therapy. Levin,J., Alving,C.R, M
unford,R.S., Redl,H. eds. Wiley-Liss, Inc, New Yor
k, pp317-326, (1995)には、ヒト由来のCAP18のＣ末端
領域の３７又は３２アミノ酸残基からなる部分ペプチド
が記載されている。またこれらペプチドの、ＬＰＳによ
る組織因子産生に与える影響、エンドトキシンショック
による致死の抑制及び抗菌活性についてのデータが記載
されている。

【０００８】しかしながら、CAP18の公知の部分ペプチ
ドに共通する部分において特定の位置のアミノ酸残基を
他の特定のアミノ酸残基に置換したペプチドについて
は、記載もないし示唆もない。また、このように特定の
アミノ酸残基を置換した部分ペプチドが、公知の部分ペ
プチドよりも顕著に高いＬＰＳ結合活性、抗菌活性及び
ＬＰＳ中和活性を示すことについての記載もないし示唆
もない。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】ヒト由来であり、かつ
ＬＰＳ結合活性、抗菌活性及びＬＰＳ中和活性が非常に
高いペプチドが得られれば、ヒトに対して安全な抗菌
剤、細菌感染症治療剤、エンドトキシンショック抑制
剤、エンドトキシン除去剤などを、極めて安価に提供す
ることができる。

【００１０】本発明は上記観点からなされたものであ
り、ＬＰＳ結合活性、抗菌活性及びＬＰＳ中和活性が顕
著に高いヒト由来のペプチド、並びに当該ペプチドを有
効成分とする抗菌剤、細菌感染症治療剤、エンドトキシ
ンショック抑制剤及びエンドトキシン除去剤などを提供
することを課題とする。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者は上記課題を解
決するために鋭意研究を行った結果、ヒト由来のCAP18
の部分ペプチドの特定の位置のアミノ酸残基を他の特定
のアミノ酸残基に置換したペプチドが、公知の部分ペプ
チドよりも顕著に高いＬＰＳ結合活性、抗菌活性及びＬ
ＰＳ中和活性を示すことを見出し、さらにこのペプチド
が抗菌剤、細菌感染症治療剤、エンドトキシンショック
抑制剤及びエンドトキシン除去剤として利用可能である
ことを確認し、本発明に至った。

【００１２】すなわち本発明は、下記アミノ酸配列（配
列番号１）を少なくとも含むペプチド（以下、本発明ペ
プチドともいう）を提供する。 Lys Xa1 Phe Lys Arg Ile Val Xa2 Arg Ile Xaa Xa2 Phe Leu Arg Xa2 Leu Val （但し、Xa1は疎水性アミノ酸残基を、Xa2は親水性アミ
ノ酸残基を、Xaaは任意のアミノ酸残基を示す）

【００１３】本発明ペプチドは、好ましくは、下記(a)
〜(f)のいずれかのアミノ酸配列からなる。 (a) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号２） (b) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号３） (c) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Phe Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Phe Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号４） (d) Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号５） (e) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号６） (f) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Leu Lys Phe Leu Arg Lys Leu Val （配列番号７）

【００１４】さらに本発明は、本発明ペプチドを有効成
分とする抗菌剤（以下、本発明抗菌剤という）、並び
に、細菌感染症治療剤（以下、本発明細菌感染症治療剤
という）、及びエンドトキシンショック抑制剤（以下、
本発明エンドトキシンショック抑制剤という）を包含す
る医薬（以下、本発明医薬という）、並びに、エンドト
キシン除去剤（以下、本発明エンドトキシン除去剤とい
う）を提供する。

【００１５】

【発明の実施の形態】以下に本発明の実施の形態につい
て説明する。＜１＞本発明ペプチド本発明ペプチドは、下記アミノ酸配列（配列番号１）を
少なくとも含むペプチドである。 Lys Xa1 Phe Lys Arg Ile Val Xa2 Arg Ile Xaa Xa2 Phe Leu Arg Xa2 Leu Val （但し、Xa1は疎水性アミノ酸残基を、Xa2は親水性アミ
ノ酸残基を、Xaaは任意のアミノ酸残基を示す）

【００１６】本発明ペプチドには、下記(a)〜(f)のいず
れかのアミノ酸配列からなるペプチドが包含される。 (a) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号２） (b) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号３） (c) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Phe Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Phe Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号４） (d) Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号５） (e) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号６） (f) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Leu Lys Phe Leu Arg Lys Leu Val （配列番号７）

【００１７】なお、本発明においてアミノ酸とは、特に
ことわらない限りＬ−アミノ酸を意味する。また、本発
明において疎水性アミノ酸残基は、疎水性のアミノ酸残
基である限りにおいて特に限定されないが、グリシン、
アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニ
ン、プロリン、フェニルアラニン及びトリプトファンか
らなる群から選ばれる残基が好ましい。より好ましい疎
水性アミノ酸残基は、フェニルアラニンまたはロイシン
である。

【００１８】また、本発明において親水性アミノ酸残基
は、親水性のアミノ酸残基である限りにおいて特に限定
されないが、セリン、トレオニン、システイン、チロシ
ン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グル
タミン酸、リジン、アルギニン及びヒスチジンからなる
群から選ばれる残基が好ましい。より好ましい親水性ア
ミノ酸残基はリジンである。

【００１９】また本発明において任意のアミノ酸残基と
は、上記の疎水性アミノ酸残基及び親水性アミノ酸残基
から選ばれる任意のアミノ酸残基を意味する。具体的に
は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイ
シン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリ
プトファン、セリン、トレオニン、システイン、チロシ
ン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グル
タミン酸、リジン、アルギニン及びヒスチジンからなる
群から選ばれる残基が好ましい。さらに好ましいのは疎
水性アミノ酸残基であり、極めて好ましいのはフェニル
アラニンまたはロイシンである。

【００２０】本発明ペプチドは、そのアミノ酸配列が本
発明により開示されたので、その配列に基づいてペプチ
ドの公知の化学合成法（例えば液相合成法や固相合成法
等；泉屋信夫、加藤哲夫、青柳東彦、脇道典、「ペプ
チド合成の基礎と実験」1985、丸善（株）参照）により
製造することが可能である。例えば、配列番号１で示さ
れるアミノ酸配列からなるペプチドを、固相合成法で製
造する場合、アミノ酸配列の１８位がバリン残基のとき
は、α-アミノ基(Nα)-保護-バリンのカルボキシル基を
直接、或いは場合によりスペーサーを介して、クロロメ
チル基あるいはオキシメチル基を有する不溶性樹脂に結
合させた後、Nα-保護基を除去し、アミノ酸配列の１７
位から１位までの各保護アミノ酸（Nα-及び側鎖官能基
保護アミノ酸を、単に「保護アミノ酸」と略称する）を
固相合成法に従って順次結合し、次いで不溶性樹脂およ
びアミノ酸のNα-及び側鎖官能基の保護基を脱離させ
て、配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるペプチ
ドを得ることができる。

【００２１】本発明ペプチドを合成する場合に使用され
る前記のクロロメチル基あるいはオキシメチル基を有す
る不溶性樹脂及びスペーサー、場合により保護アミノ酸
を該不溶性樹脂に結合した保護アミノ酸樹脂等は、公知
の方法で調製でき、各種のものが市販されている。

【００２２】該不溶性樹脂としては、Ｃ末端の保護アミ
ノ酸のカルボキシル基と直接、或いは場合によりスペー
サーを介して、結合可能であり、かつ、その後脱離可能
なものであれば如何なるものでもよい。かかる不溶性樹
脂としては、例えば、Boc（t-ブチルオキシカルボニ
ル）ストラテジーの場合は、クロロメチル樹脂（クロロ
メチル化スチレン-ジビニルベンゼン共重合体）、オキ
シメチル樹脂あるいはスペーサーを導入した４−オキシ
メチル−Ｐａｍ（フェニルアセタミドメチル）−樹脂
が、Ｆmoc（９−フルオレニルメチルオキシカルボニ
ル）ストラテジーの場合は、オキシメチルフェノキシメ
チル樹脂（Ｗａｎｇ）樹脂及びこれらの誘導体等が好ま
しい。

【００２３】保護アミノ酸とは、官能基を公知の方法に
より保護基で保護したアミノ酸であり、各種の保護アミ
ノ酸が市販されている。本発明ペプチドを合成する場合
には、以下に示す保護基のいずれかを選択するのが好ま
しい。まず、アミノ酸のα−アミノ基の保護基はＢｏｃ
（t-ブチルオキシカルボニル）又はＦｍｏｃ (９−フル
オレニルメチルオキシカルボニル）である。アルギニン
（Ａｒｇ）のグアニジノ基の保護基は、Ｔｏｓ（トシ
ル）、ＮＯ ₂（ニトロ）、Ｍｔｒ（４−メトキシ−２,
３,６−トリメチルベンゼンスルホニル）又はＰｍｃ
（２, ２, ５, ７, ８- ペンタメチルクロマン−６−ス
ルホニル）である。リジン（Ｌｙｓ）のε−アミノ基の
保護基は、Ｚ（ベンジルオキシカルボニル）、Ｃl・Ｚ
（２−クロロベンジルオキシカルボニル）、Ｂｏｃ、Ｎ
ｐｙｓ（３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）であ
る。ヒスチジン（Ｈｉｓ）のイミダゾリル基の保護基
は、Ｔｏｓ、Ｚ、Ｐａｃ（フェナシル）、Ｂｏｍ（ベン
ジルオキシメチル）、Ｄｎｐ（ジニトロフェニル）又は
Ｔｒｔ（トリチル）である。システイン（Ｃｙｓ）のメ
ルカプト基の保護基としてはＢｚｌ (ベンジル）、ＭＢ
ｚｌ (４−メトキシベンジル）、４−ＭeＢｚｌ（４−
メチルベンジル）、Ａｃｍ（アセタミドメチル）、Ｔｒ
ｔ、Ｎｐｙｓ、t-Ｂｕ (t-ブチル）、t-ＢｕＳ（t-ブチ
ルチオ）が挙げられるが、ＭＢｚｌ、４−ＭeＢｚｌ、
Ｔｒｔ、Ａｃｍ、Ｎｐｙｓが好ましい。チロシン（Ｔｙ
ｒ）の水酸基の保護基は、Ｂｚｌ、Ｃl₂・Ｂｚｌ（２,
６−ジクロロベンジル）、t-Ｂｕであるか、あるいは保
護しなくてもよい。トリプトファン（Ｔｒｐ）のインド
ール基の保護基はＣＨＯ（フォルミル）であるか、ある
いは保護しなくてもよい。メチオニン（Ｍｅｔ）のチオ
メチル基の保護基は、メチルスルホキシドであるか、あ
るいは保護しなくてもよい。セリン（Ｓｅｒ）およびト
レオニン（Ｔｈｒ）の水酸基の保護基は、Ｂｚｌ又はｔ
−Ｂｕである。アスパラギン酸（Ａｓｐ）およびグルタ
ミン酸（Ｇｌｕ）のカルボキシル基の保護基は、ＯＢｚ
ｌ（ベンジルエステル）、ＯｔＢｕ（ｔ−ブチルエステ
ル）、ＯｃＨｅｘ（シクロヘキシルエステル）、ＯＰａ
ｃ（フェナシルエステル）等が挙げられる。アスパラギ
ン（Ａｓｎ）およびグルタミン（Ｇｌｎ）のカルバミド
基の保護基は、ＴｒｔまたはＸａｎ（キサンチル）であ
る。

【００２４】各保護基は、ペプチドの合成条件に応じ適
当なものをそれ自体公知の中から選択することが好まし
い。保護アミノ酸の結合は、通常の縮合法、例えば、Ｄ
ＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）法、ＤＩＰＣ
ＤＩ（ジイソプロピルカルボジイミド）法［Tartar,A.
ら；J.Org.Chem.，44、5000（1979）］、活性エステル
法、混合あるいは対称酸無水物法、カルボニルジイミダ
ゾール法、ＤＣＣ−ＨＯＮＳu(N-ヒドロキシスクシンイ
ミド)法[Weygand, F.ら、Z.Naturforsch.,B,21,426(196
6)]、ＤＣＣ-ＨＯＢt(１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル）法［Koenig,W.ら；Chem.Ber.,103、788 、2024、20
34（1970）］、ジフエニルホスホリルアジド法、ＢＯＰ
試薬（ベンゾトリアゾリル−Ｎ−ヒドロキシトリスジメ
チルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩）を
用いるＢＯＰ−ＨＯＢｔ法（Hudson, D., J.Org.Chem.,
53, 617(1988))、ＨＢＴＵ（2-(1H-ベンゾトリアゾール
-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート）−ＨＯＢｔ法（Knorr,R.ら, Tetr
ahedron Lett., 30, 1927 (1989)）、ＴＢＴＵ（2-(1H-
ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウ
ロニウムテトラフルオロボレイト）−ＨＯＢｔ法（Kn
orr, R. ら, Tetrahedron Lett., 30, 1927 (1989)）等
に従って行なうことができる。しかしこれらのうち、Ｄ
ＣＣ法、ＤＣＣ−ＨＯＢt法、ＢＯＰ−ＨＯＢｔ法、Ｈ
ＢＴＵ−ＨＯＢｔ法、対称酸無水物法が好ましい。

【００２５】これらの縮合反応は、通常、ジクロロメタ
ン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロ
リドン（ＮＭＰ）等の有機溶媒又はそれらの混合溶媒中
で行なわれる。

【００２６】α-アミノ基の保護基の脱離試薬として
は、トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン、ＨＣl ／ジオ
キサン、ピペリジン／ＤＭＦ又はピペリジン／ＮＭＰ等
が用いられ、該保護基の種類により適宜選択する。

【００２７】また、合成の各段階における縮合反応の進
行の程度はＥ．カイサーらの方法[Anal. Biochem., 34,
595(1970) ］（ニンヒドリン反応法）によって検査さ
れる。

【００２８】以上のようにして、所望のアミノ酸配列を
有する保護ペプチド樹脂を得ることができる。保護ペプ
チド樹脂は、フッ化水素、ＴＦＭＳＡ（トリフルオロメ
タンスルホン酸）［Academic Press 発行、E. Gross編
集、Yajima,Hら; "The Peptides"５、65(1983)］、ＴＭ
ＳＯＴf（トリメチルシリルトリフラート）［Fujii,N.
ら； J.Chem．Soc., Chem. Commun., 274 (1987)］、Ｔ
ＭＳＢr(トリメチルシリルブロミド）[Fujii,N.ら； Ch
em. Pharm. Bull.,35、3880 (1987)］、またはトリフル
オロ酢酸などで処理することにより、該樹脂および保護
基を同時に脱離させることができる。上記の脱離試薬
は、用いたストラテジー（Ｂoc又はＦmoc)、樹脂および
保護基の種類により適宜選択する。これら一連の方法に
よって本発明ペプチドを製造することができる。

【００２９】また本発明ペプチドのアミノ酸配列に対応
するポリヌクレオチド（ＤＮＡあるいはＲＮＡ）を製造
し、当該ポリヌクレオチドを用いた遺伝子工学的手法に
より製造することもできる。

【００３０】製造した本発明ペプチドは、タンパク質化
学の分野において一般に知られているタンパク質の単
離、精製方法によって精製することができる。具体的に
は、例えば抽出、再結晶、硫酸アンモニウム（硫安）や
硫酸ナトリウム等による塩析、遠心分離、透析、限外濾
過法、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグ
ラフィー、疎水性クロマトグラフィー、順相クロマトグ
ラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲル濾過法、ゲル
浸透クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラ
フィー、電気泳動法、向流分配等や、これらの組合せ等
の処理操作が挙げられるが、逆相高速液体クロマトグラ
フィーによる方法が最も効果的である。

【００３１】製造された本発明ペプチドは、例えば塩酸
やメタンスルホン酸等の酸で加水分解して公知の方法で
アミノ酸組成を調べることができ、これによって本発明
ペプチドが正しく製造されたか否かを推定することがで
きる。

【００３２】より厳密には、製造されたペプチドのアミ
ノ酸配列を、公知のアミノ酸配列決定法（例えばエドマ
ン分解法等）により決定し、本発明ペプチドが正しく製
造されたか否かを確認することができる。

【００３３】なお、本発明ペプチドには塩の形態も包含
される。後述するように、本発明ペプチドは医薬用途と
して特に有用であることから、本発明ペプチドの塩は、
薬学的に許容される塩であることが好ましい。

【００３４】本発明ペプチドは、酸付加により塩を形成
しうる。このような塩としては、例えば無機酸（塩酸、
臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸など）または有機カル
ボン酸（酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、コハク酸、
リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、サリチル酸など）、グル
クロン酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、アスコルビン
酸等の酸性糖、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸塩
類、アルギン酸等の酸性多糖、または有機スルホン酸
（メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸など）等
が例示される。これらの塩のうち、薬学的に許容される
塩が好ましい。

【００３５】また本発明ペプチドは、塩基性物質との塩
を形成しうる。このような塩としては、例えば、アルカ
リ金属塩（ナトリウム塩、リチウム塩、カリウム塩
等）、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩等の無機塩
基との塩、又はジエタノールアミン塩、シクロヘキシル
アミン塩等の有機塩基との塩のうち、薬学的に許容され
る塩が例示される。

【００３６】本発明ペプチドは、後述する実施例の記載
から明らかなように、顕著に高い抗菌活性、エンドトキ
シン結合活性及びエンドトキシン中和活性を示すことか
ら、以下に詳述するような本発明抗菌剤、本発明細菌感
染症治療剤、本発明エンドトキシンショック抑制剤及び
本発明エンドトキシン除去剤の有効成分として用いるこ
とができる。

【００３７】本発明ペプチドが、顕著に高い抗菌活性、
エンドトキシン（ＬＰＳ）結合活性及びエンドトキシン
（ＬＰＳ）中和活性を有する理由は以下のように推定さ
れる。

【００３８】ヒト由来のCAP18のＬＰＳ結合ドメインの
ペプチドはα−ヘリックス構造をもっており、このα−
ヘリックス構造を軸方向に投影して見ると（ヘリカルホ
イール表示を図１、図３に示す）、親水性の部分（アル
ギニン、リジンなどの親水性アミノ酸残基(塩基性アミ
ノ酸残基)の多い部分）と疎水性の部分（フェニルアラ
ニン、ロイシン、イソロイシンなどの疎水性アミノ酸残
基の多い部分）とが認められる。そして、ペプチドの親
水性の部分とＬＰＳのリピドＡ部分のリン酸基の部分と
がイオン結合し、疎水性の部分とリピドＡの脂肪酸部分
とが疎水結合し、この結果、抗菌活性やＬＰＳ中和活性
が導かれるものと思われる。本発明による、特定の部位
のアミノ酸残基の他の特定のアミノ酸残基への置換によ
って、親水性部分と疎水性部分との間のバランスが変化
し（図２、図４）、この変化が抗菌活性、ＬＰＳ結合活
性及びＬＰＳ中和活性の上昇に関与すると考えられる。

【００３９】本発明ペプチドは、α−ヘリックス構造を
軸方向に投影したヘリカルホイールにおける親水性部分
と疎水性部分とのバランスを考慮してアミノ酸配列を設
計することにより、抗菌活性、ＬＰＳ結合活性及びＬＰ
Ｓ中和活性を高めるという基本的思想に基づきなされた
ものである。このように本発明ペプチドの抗菌活性、Ｌ
ＰＳ結合活性及びＬＰＳ中和活性には、ヘリカルホイー
ルにおける親水性部分と疎水性部分とのバランスが重要
と考えられることから、本発明ペプチドにはヘリカルホ
イールにおける親水性部分と疎水性部分とが図２や図４
の如きバランスを有しているペプチド（例えば、本明細
書中にアミノ酸配列が開示されている本発明ペプチドの
逆のアミノ酸配列を有するペプチド、Ｄ−アミノ酸を含
むペプチド、及び通常タンパク質を構成しないアミノ酸
（例えばβ−アラニン、γ−アミノ酪酸、ホモシステイ
ン、オルニチン、５−ヒドロキシトリプトファン、３,
４−ジヒドロキシフェニルアラニン、トリヨードチロニ
ン、チロキシン等）を含むペプチド）も包含される。

【００４０】また、本発明ペプチドを修飾したペプチド
も本発明ペプチドに包含される。このようなペプチドと
しては、例えばα−アミノ基やα−カルボキシル基を修
飾したペプチドや、側鎖官能基を修飾したペプチド等が
挙げられるが、本発明ペプチドのＮ末端をアセチル化し
Ｃ末端をアミド化したペプチドが好ましい。

【００４１】＜２＞本発明抗菌剤本発明抗菌剤は、本発明ペプチドを有効成分とする抗菌
剤である。本発明抗菌剤は、種々のグラム陽性菌及びグ
ラム陰性菌に対し強力な抗菌作用を有する。

【００４２】本発明抗菌剤は少なくとも本発明ペプチド
が含有されていればよい。例えば本発明抗菌剤は、本発
明ペプチドのみから構成されていてもよく、また本発明
ペプチドおよび適宜の担体からなる組成物の形態であっ
てもよい。

【００４３】本発明抗菌剤は、医薬に使用することがで
きる他、食品の細菌汚染防止や防腐を目的として食品に
添加するなど、従来の抗菌剤に代えて、または、従来の
抗菌剤と併用して使用することができる。

【００４４】また、本発明抗菌剤を適当な素材の表面に
付着させたり、あるいは適当な素材と混合することによ
り、抗菌性素材を製造することができる。このような抗
菌性素材は、ビーズ、フィルム、プレート、モノフィラ
メント、不織布、スポンジ、織物、編物、短繊維、チュ
ーブ、中空糸等の種々の形状で使用できる。具体的に
は、抗菌性医用複合材料として人工臓器、カテーテル、
手術用縫合糸、透析膜等に用いることができ、また衛生
用品、抗菌フィルター等にも利用することができる。

【００４５】なお本発明抗菌剤に用いる本発明ペプチド
のうち、下記(a)〜(f)のいずれかのアミノ酸配列からな
るペプチドは、後述の実施例において具体的にその抗菌
活性が示されているように抗菌活性が高いことから好ま
しいものである。 (a) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号２） (b) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号３） (c) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Phe Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Phe Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号４） (d) Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号５） (e) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号６） (f) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Leu Lys Phe Leu Arg Lys Leu Val （配列番号７）

【００４６】また上記(a)〜(f)のいずれかのアミノ酸配
列からなるペプチドのうち、特に(e)又は(f)のアミノ酸
配列からなるペプチドは、グラム陰性菌及びグラム陽性
菌のいずれに対しても極めて高い抗菌活性を示すことか
ら、特に好ましいものである。

【００４７】＜３＞本発明医薬本発明医薬は、本発明ペプチドを有効成分とする医薬で
ある。本発明医薬は、上述のような、顕著に高い抗菌活
性、エンドトキシン結合活性及びエンドトキシン中和活
性などの本発明ペプチドの活性に基づき、種々の医薬用
途に使用できる。

【００４８】本発明医薬は少なくとも本発明ペプチドが
含有されていればよい。例えば本発明医薬は、本発明ペ
プチドのみから構成されていてもよく、また本発明ペプ
チドおよび医薬担体からなる組成物の形態であってもよ
い。用いることができる医薬担体も特に限定されず、医
薬分野で用いることができる賦形剤、結合剤、滑沢剤、
着色剤、崩壊剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、無痛化剤
等を用いることができる。

【００４９】本発明医薬は、処置の目的に応じて、注射
（皮下、皮内、静脈内、腹腔内等）、点眼、点入、経
皮、経口、吸入等、適宜投与方法を選択することができ
る。また投与方法に応じて注射剤（溶液、懸濁液、乳濁
液、用時溶解用固形剤等）、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、液剤、リポ化剤、軟膏剤、ゲル剤、外用散
剤、スプレー剤、吸入散剤、点眼剤、眼軟膏剤、座剤、
ペッサリー等の剤形を適宜選択し、製剤化することがで
きる。

【００５０】本発明医薬の投与量は、投与の目的（予
防、維持(悪化防止)、軽減(症状の改善)または治療）、
疾患の種類、患者の症状、性別、年令、投与方法等によ
って個別に設定されるべきものであり特に限定されな
い。

【００５１】以下、代表的な医薬について説明する。

【００５２】＜３−１＞抗菌薬本抗菌薬は、本発明抗菌剤を含む医薬（以下、本発明抗
菌薬という）であり、本発明ペプチドを有効成分とす
る。

【００５３】本発明抗菌剤は、上述のようにグラム陽性
菌及びグラム陰性菌に対し強力な抗菌作用を有する。従
って、本発明抗菌薬は、種々のグラム陽性菌及びグラム
陰性菌に対して適用できる。適用対象となる細菌は特に
限定されないが、グラム陰性菌としては大腸菌、Klebsi
ella、Salmonella等が好ましく、グラム陽性菌としては
黄色ブドウ球菌等が好ましい。

【００５４】また本発明抗菌薬は、多剤耐性グラム陽性
菌（例えば、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)、メ
チシリン感受性黄色ブドウ球菌(MSSA)、バンコマイシン
耐性腸球菌等）や多剤耐性グラム陰性菌（多剤耐性のヘ
リコバクター、赤痢菌、サルモネラ菌等）に対しても用
いることができる。

【００５５】本発明抗菌薬は、大腸菌の中でも「病原性
大腸菌O-157」や、黄色ブドウ球菌の中でも「メチシリ
ン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)」や「メチシリン感受性黄
色ブドウ球菌(MSSA)」に対して強い抗菌活性を示すこと
から、これらの細菌を適用対象とすることがより好まし
い。

【００５６】本発明抗菌薬は、本発明ペプチドのみから
構成されていてもよく、また本発明ペプチドおよび医薬
担体からなる組成物の形態であってもよい。用いること
ができる医薬担体も特に限定されず、医薬分野で用いる
ことができる賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、崩壊
剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、無痛化剤等を用いるこ
とができる。またリゾチームや抗生物質等、他の抗菌薬
と併用してもよい。

【００５７】本発明抗菌薬は、例えば生体外部の微生物
感染部の処置、あるいは生体内部の微生物感染の処置等
に用いることができ、処置の目的に応じて、注射（皮
下、皮内、静脈内、腹腔内等）、点眼、点入、経皮、経
口、吸入等、適宜投与方法を選択することができる。

【００５８】また投与方法に応じて注射剤（溶液、懸濁
液、乳濁液、用時溶解用固形剤等）、錠剤、カプセル
剤、顆粒剤、散剤、液剤、リポ化剤、軟膏剤、ゲル剤、
外用散剤、スプレー剤、吸入散剤、点眼剤、眼軟膏剤、
座剤、ペッサリー等の剤形を適宜選択し、製剤化するこ
とができる。

【００５９】本発明抗菌薬の投与量は、細菌の種類、感
染の状況、患者の症状、性別、年令、投与方法等によっ
て個別に設定されるべきものであり特に限定されない
が、成人１人１回あたり概ね、本発明ペプチドとして５
〜１５(mg/kg体重)程度を投与することができる。

【００６０】なお本発明抗菌薬に用いる本発明ペプチド
のうち、下記(a)〜(f)のいずれかのアミノ酸配列からな
るペプチドは、後述の実施例において具体的にその抗菌
活性が示されているように抗菌活性が高いことから好ま
しいものである。 (a) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号２） (b) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号３） (c) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Phe Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Phe Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号４） (d) Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号５） (e) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号６） (f) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Leu Lys Phe Leu Arg Lys Leu Val （配列番号７）

【００６１】また上記(a)〜(f)のいずれかのアミノ酸配
列からなるペプチドのうち、特に(e)又は(f)のアミノ酸
配列からなるペプチドは、グラム陰性菌及びグラム陽性
菌のいずれに対しても極めて高い抗菌活性を示すことか
ら、特に好ましいものである。

【００６２】＜３−２＞本発明細菌感染症治療剤本発明細菌感染症治療剤は、本発明ペプチドを有効成分
とする細菌感染症治療剤である。

【００６３】本発明細菌感染症治療剤は、その有効成分
である本発明ペプチドがグラム陽性菌及びグラム陰性菌
に対し強力な抗菌作用を有することから、グラム陽性菌
及びグラム陰性菌に起因する細菌感染症に対して適用で
きる。細菌感染症の原因となる細菌は特に限定されない
が、グラム陰性菌感染症としては大腸菌、Klebsiella、
Salmonella等に起因する細菌感染症が好ましく、グラム
陽性菌感染症としては黄色ブドウ球菌等に起因する細菌
感染症が好ましい。

【００６４】また本発明細菌感染症治療剤は、多剤耐性
グラム陽性菌（例えば、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌
(MRSA)、メチシリン感受性黄色ブドウ球菌(MSSA)、バン
コマイシン耐性腸球菌等）や多剤耐性グラム陰性菌（多
剤耐性のヘリコバクター、赤痢菌、サルモネラ菌等）に
起因する細菌感染症に対しても用いることができる。

【００６５】本発明細菌感染症治療剤は、大腸菌に起因
する細菌感染症の中でも「病原性大腸菌O-157」に起因
する細菌感染症や、黄色ブドウ球菌に起因する細菌感染
症の中でも「メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)」に
起因する細菌感染症を適用対象とすることがより好まし
い。本発明細菌感染症治療剤は少なくとも本発明ペプチ
ドが含有されていればよい。例えば本発明細菌感染症治
療剤は、本発明ペプチドのみから構成されていてもよ
く、また本発明ペプチドおよび医薬担体からなる組成物
の形態であってもよい。本発明細菌感染症治療剤は、前
述の本発明抗菌薬と同様に適宜投与方法を選択すること
ができるが、注射（皮下、皮内、静脈内、腹腔内等）が
好ましい。

【００６６】また投与方法に応じて、前述の本発明抗菌
薬と同様に適宜剤形を選択することができるが、注射剤
（溶液、懸濁液、乳濁液、用時溶解用固形剤等）として
製剤化することが好ましい。

【００６７】本発明細菌感染症治療剤の投与量は、細菌
の種類、感染の状況、患者の症状、性別、年令、投与方
法等によって個別に設定されるべきものであり特に限定
されないが、成人１人１回あたり概ね、本発明ペプチド
として５〜１５(mg/kg体重)程度を投与することができ
る。

【００６８】なお本発明細菌感染症治療剤に用いる本発
明ペプチドのうち、下記(a)〜(f)のいずれかのアミノ酸
配列からなるペプチドは、後述の実施例において具体的
にその抗菌活性が示されているように抗菌活性が高いこ
とから好ましいものである。 (a) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号２） (b) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号３） (c) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Phe Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Phe Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号４） (d) Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号５） (e) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号６） (f) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Leu Lys Phe Leu Arg Lys Leu Val （配列番号７）

【００６９】また上記(a)〜(f)のいずれかのアミノ酸配
列からなるペプチドのうち、特に(e)又は(f)のアミノ酸
配列からなるペプチドは、グラム陰性菌及びグラム陽性
菌のいずれに対しても極めて高い抗菌活性を示すことか
ら、特に好ましいものである。

【００７０】＜３−３＞本発明エンドトキシンショック
抑制剤本発明エンドトキシンショック抑制剤は、本発明ペプチ
ドを有効成分とするエンドトキシンショック抑制剤であ
る。

【００７１】本発明エンドトキシンショック抑制剤は、
敗血症に伴うエンドトキシンショック、グラム陰性菌感
染症に伴うエンドトキシンショック等に対して優れた抑
制効果を有し、このようなエンドトキシンショックによ
る致死抑制効果も有する。

【００７２】本発明エンドトキシンショック抑制剤は少
なくとも本発明ペプチドが含有されていればよい。例え
ば本発明エンドトキシンショック抑制剤は、本発明ペプ
チドのみから構成されていてもよく、また本発明ペプチ
ドおよび医薬担体からなる組成物の形態であってもよ
い。用いることができる医薬担体、投与方法、剤形、投
与量等は、前述の本発明細菌感染症治療剤と同様であ
る。

【００７３】なお、本発明エンドトキシンショック抑制
剤として好ましい本発明ペプチドは、下記(a)〜(d)及び
(f)のいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドであ
る。 (a) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号２） (b) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号３） (c) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Phe Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Phe Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号４） (d) Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号５） (f) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Leu Lys Phe Leu Arg Lys Leu Val （配列番号７）

【００７４】また本発明エンドトキシンショック抑制剤
としてより好ましい本発明ペプチドは上記(b)〜(d)およ
び(f)のいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドであ
り、さらに好ましい本発明ペプチドは、上記(b)、(c)お
よび(f)のいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドで
ある。

【００７５】＜４＞本発明エンドトキシン除去剤本発明エンドトキシン除去剤は、不溶性担体に固着され
た本発明ペプチドからなるエンドトキシン除去剤であ
る。本発明エンドトキシン除去剤は、本発明ペプチドが
有する高いエンドトキシン結合活性をエンドトキシン吸
着及び除去の目的に応用したものである。

【００７６】本発明ペプチドが固着される不溶性担体の
形状は特に限定されないが、膜状（フィルター形、中空
糸形、チューブ形、平膜形等）、粒状、ラテックス、チ
ップ状、粉末形、マイクロプレート状等の形態を有する
ものを挙げることができる。

【００７７】不溶性担体の材質も特に限定されないが、
ポリスチレン系、ポリプロピレン系、ポリアミド系、セ
ルロース系、アガロース系、ポリアクリルアミド系、デ
キストラン系、ビニルポリマー系等の材質を挙げること
ができる。

【００７８】不溶性担体に本発明ペプチドを固着させる
方法も特に限定されず、物理的吸着法、イオン結合法、
共有結合法、包括法など固定化酵素の調製法として一般
的な方法（固定化酵素、１９７５年、講談社発行、第９
〜７５頁参照）を利用して、不溶性担体に本発明ペプチ
ドを固着させることができる。

【００７９】例えばポリスチレン系やポリプロピレン系
の不溶性担体には、物理的に本発明ペプチドを固着させ
ることができる。また、例えばポリアミド系、セルロー
ス系、アガロース系、ポリアクリルアミド系、デキスト
ラン系、ビニルポリマー系の不溶性担体には、化学的に
本発明ペプチドを固着させることができる。化学的な固
着(結合)方法としては、不溶性担体の芳香族アミノ基を
利用してジアゾカップリングさせるジアゾ化法、不溶性
担体の水酸基をＣＮＢｒで活性化してペプチド結合させ
るＣＮＢｒ法、不溶性担体のヒドラジン誘導体等を用い
てペプチド結合させる酸アジド法、ハロゲン等の反応性
に富む不溶性担体の官能基を利用してペプチドをアルキ
ル化するアルキル化法、グルタルアルデヒドのような遊
離のアミノ基と反応する架橋試薬によって不溶性担体と
ペプチドの遊離のアミノ基との間を架橋する方法、カル
ボジイミド法、エポキシ活性化法、さらにこれらの方法
を用いてスペーサーを介して結合させる方法等が挙げら
れる。これらの公知の結合法から、不溶性担体の種類に
応じて適宜選択して本発明ペプチドの結合に利用するこ
とができる。

【００８０】本発明ペプチドが固着された不溶性担体
を、エンドトキシン除去を望む溶液に接触させて、該溶
液中のエンドトキシンと本発明ペプチドが固着された不
溶性担体との複合体を形成させ、次いで該複合体を分離
除去することによって、前記溶液中のエンドトキシンを
除去することができる。

【００８１】本発明ペプチドが固着された不溶性担体と
エンドトキシン除去を望む溶液との接触方法は、公知の
固液接触手段によればよく、特に限定されない。例え
ば、フィルター状、中空糸状又は平膜状の不溶性担体に
溶液を通液させる方法、粒状の不溶性担体を充填したカ
ラムに溶液を通液させる方法、マイクロプレート状のウ
ェルに溶液を入れて一定時間放置した後に溶液を分離す
る方法、任意の形状の不溶性担体を溶液に添加して一定
時間振とうするか、又は静置して、通常の固液分離手段
（濾過、遠心分離、吸引、デカンテーション等）によっ
てエンドトキシンが除去された溶液を得る方法等を挙げ
ることができる。

【００８２】エンドトキシン除去を望む溶液も特に限定
されず、例えば医薬品製造工場や医療施設等で用いる溶
液、具体的には人工透析液、輸液、血液、医薬品、超純
水等を例示することができるが、これらに限定されるも
のではない。

【００８３】なお、本発明ペプチドが固着される不溶性
担体は、エンドトキシンフリーであることが好ましい。

【００８４】

【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説
明する。

【００８５】

【実施例１】＜１＞本発明ペプチドの調製株式会社ペプチド研究所に委託し、下記(a)〜(f)の本発
明ペプチドを固相合成法により製造した。 (a)（２７量体置換体） Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号２） (b)（２７量体置換体） Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号３） (c)（２７量体置換体） Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Phe Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Phe Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号４） (d)（２２量体置換体） Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号５） (e)（１８量体置換体） Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号６） (f)（１８量体置換体） Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Leu Lys Phe Leu Arg Lys Leu Val （配列番号７）

【００８６】また比較実験に用いるため、株式会社ペプ
チド研究所に委託し、アミノ酸を置換していない下記A
1、A3、A5、A6およびA7のペプチド（公知；非置換体）
を固相合成法により製造した。 A1（２７量体非置換体） Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号８） A3（２２量体非置換体） Glu Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号９） A5（２４量体非置換体） Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号１０） A6（２３量体非置換体） Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val（配列番号１１） A7（１８量体非置換体） Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号１２）

【００８７】なお、本発明ペプチド(a)〜(f)並びに公知
ペプチドA1、A3、A5、A6およびA7の関係を表１に示す。
なお表１において、アミノ酸残基は１文字記号で示し
た。また置換したアミノ酸残基には下線を付した。

【００８８】

【表１】表１ ──────────────────────────────────── （２７量体） A1 FRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLV （配列番号８） (a) FRKSKEKIGKLFKRIVQRIKDFLRNLV （配列番号２） (b) FRKSKEKIGKLFKRIVQRILDFLRNLV （配列番号３） (c) FRKSKEKIGKFFKRIVQRIFDFLRNLV （配列番号４）（２４量体） A5 SKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLV （配列番号１０）（２３量体） A6 KEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLV （配列番号１１）（２２量体） A3 EKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLV （配列番号９） (d) EKIGKLFKRIVQRILDFLRNLV （配列番号５）（１８量体） A7 KEFKRIVQRIKDFLRNLV （配列番号１２） (e) KLFKRIVQRILDFLRNLV （配列番号６） (f) KLFKRIVKRILKFLRKLV （配列番号７） ────────────────────────────────────

【００８９】また、製造した上記ペプチドのうち、A1、
(b)、A3、(d)、A5およびA6について、(1)アミノ酸分析
値（加水分解条件：6N HCl、110℃、22時間）および(2)
純度（％；高速液体クロマトグラフィーにより算出）を
表２に示す。またこれらのペプチドの高速液体クロマト
グラフィー(逆相クロマトグラフィー)の溶出パターンで
は単一のピークが認められた。なおクロマトグラフィー
の条件は下記の通りである。

【００９０】・カラム：YMC Pak ODS-AM (4.6mmI.D.x 150mm)（株
式会社ワイエムシイ製）・溶離液：A1については20〜70％アセトニトリル／0.
1％トリフルオロ酢酸；25分それ以外は、30〜80％アセ
トニトリル／0.1％トリフルオロ酢酸；25分・流速：1.0mL／分・温度：A1、A3、A5およびA6については２５℃それ
以外は、５０℃ ・検出波長：220nm

【００９１】

【表２】

【００９２】製造したペプチドは、いずれも白色の凍結
乾燥体であった。これらの結果から、製造したペプチド
はいずれも純度が９７％以上で、高速液体クロマトグラ
フィー(逆相クロマトグラフィー)において単一ピークを
示すと考えられる。また、アミノ酸分析値がアミノ酸配
列から求めた理論値とよく一致することが示され、この
ことから、ペプチドが正しく製造されていることが分か
る。

【００９３】また本発明ペプチド(a)〜(f)は、いずれも
下記アミノ酸配列を少なくとも含むペプチドである点に
おいて共通しており、さらに後述するようにＬＰＳ結合
活性、抗菌活性およびエンドトキシン中和活性を有して
いる点においても共通している。よって本発明ペプチ
ドは、下記アミノ酸配列（配列番号１）を少なくとも含
むペプチドとして総括できる。 Lys Xa1 Phe Lys Arg Ile Val Xa2 Arg Ile Xaa Xa2 Phe Leu Arg Xa2 Leu Val （但し、Xa1は疎水性アミノ酸残基を、Xa2は親水性アミ
ノ酸残基を、Xaaは任意のアミノ酸残基を示す）

【００９４】＜２＞ＬＰＳ結合活性ＬＰＳ結合活性の測定方法：１％ヒツジ赤血球浮遊液1.
0mLに、サルモネラ・ミネソタ(Salmonella minnesota)
由来のRe型ＬＰＳ(Re-LPS；List Lab社製)溶液(100μg/
mL)を0.2mL加え、37℃で30分間インキュベートし、リン
酸緩衝食塩水(ＰＢＳ)で遠心洗浄して１％のＬＰＳ感作
赤血球を調製した。２倍段階希釈した検体(ペプチド)50
μLにＬＰＳ感作赤血球50μLを加え、Ｕ型マイクロプレ
ート(γ線滅菌済み；Nunc社製)中、37℃で１時間インキ
ュベートした。凝集反応を示す検体の最高希釈倍数を求
め、これから算出される濃度を最小凝集濃度(ＭＡＣ；m
inimum agglutinating concentration)とした。ＭＡＣ
の数値が低いほど、検体のＬＰＳ結合活性は強い。

【００９５】２−１．アミノ酸残基の置換による効果
(1) A1、本発明ペプチド(b)、A3または本発明ペプチド(d)を
検体とし、上記の測定方法によってＬＰＳ結合活性を調
べた。結果を表３に示す。

【００９６】

【表３】

【００９７】表３より、本発明ペプチド（置換体）は非
置換体（公知）に比して約１５〜３１倍ＬＰＳ結合活性
が高いことが示された。

【００９８】２−２．アミノ酸残基の置換による効果
(2) A1、本発明ペプチド(b)、本発明ペプチド(a)または本発
明ペプチド(c)を検体とし、上記の測定方法によってＬ
ＰＳ結合活性を調べた。結果を表４に示す。

【００９９】

【表４】

【０１００】表４より、本発明ペプチド（置換体）は非
置換体（公知）に比して約８〜１６倍ＬＰＳ結合活性が
高いことが示された。

【０１０１】２−３．修飾ペプチドのＬＰＳ結合活性ペプチドのＮ末端をアセチル化しＣ末端をアミド化した
ペプチド（A7、本発明ペプチド(e)、または本発明ペプ
チド(f)）を検体とし、上記の測定方法によってＬＰＳ
結合活性を調べた。結果を表５に示す。

【０１０２】

【表５】

【０１０３】表５より、修飾された本発明ペプチド（置
換体）は修飾された非置換体（公知）に比して約３１〜
１２５倍ＬＰＳ結合活性が高いことが示された。またＬ
ＰＳ結合活性は、ペプチドの修飾による影響を受けなか
った。

【０１０４】＜３＞薬効薬理試験３−１．抗菌活性抗菌活性の測定方法：抗菌活性の測定には、大腸菌[E.c
oli O157：H7(岡山県、神奈川県および岩手県盛岡市の
E.coli O157患者より採取]、Klebsiellaまたはメチシリ
ン耐性黄色ブドウ球菌(methicillin resistant Staphyl
ococcus aureus；MRSA)を用いた。

【０１０５】これらの細菌を液体培地(Tryptosoy brot
h；栄研化学製)中で増殖させた。対数増殖期の細菌を集
め、ＰＢＳ(pH7.2)で洗浄し、終濃度5x10³〜1x10⁴細胞
／mLとなるように調整した。450μLの細菌懸濁液に種々
の濃度の50μLの検体(ペプチド)を添加し、37℃で１時
間インキュベートした。インキュベート後、100μLの反
応液をアガロース培地(Nutrient agar；栄研化学製)に
塗抹した。37℃で24時間インキュベートし、コロニー形
成単位(colony-forming units；ＣＦＵ)をカウントし、
50％阻害濃度(IC₅₀)を求めた。

【０１０６】３−１−１．大腸菌(E.coli O157)に対す
る抗菌活性(1) ポリミキシンＢ(公知の抗菌剤)、A1、本発明ペプチド
(b)、A3、本発明ペプチド(d)、A5またはA6を検体とし、
上記の測定方法によって大腸菌[E.coli O157：H7(岡山
県、神奈川県および岩手県盛岡市のE.coli O157患者よ
り採取]に対する抗菌活性を調べた。結果を表６に示
す。

【０１０７】

【表６】（表中、NTは測定していないことを示す）

【０１０８】表６より、本発明ペプチド（置換体）は非
置換体（公知）に比して約４〜１５倍、E.coli O157：H
7に対する抗菌活性が高いことが示された。この結果は
ポリミキシンＢと同等であるが、ポリミキシンＢは毒性
が強いため、本発明ペプチドの方が有利である。

【０１０９】３−１−２．大腸菌(E.coli O157)に対す
る抗菌活性(2) A1、本発明ペプチド(b)、本発明ペプチド(a)または本発
明ペプチド(c)を検体とし、上記の測定方法によって大
腸菌[E.coli O157：H7(岡山県のE.coli O157患者より採
取]に対する抗菌活性を調べた。結果を表７に示す。

【０１１０】

【表７】

【０１１１】表７より、本発明ペプチド（置換体）は非
置換体（公知）に比して約８〜１４倍、E.coli O157：H
7に対する抗菌活性が高いことが示された。

【０１１２】３−１−３．種々のグラム陰性菌およびグ
ラム陽性菌に対する抗菌活性（１）ポリミキシンＢ(公知の抗菌剤)、A1、本発明ペプチド
(b)、A3、または本発明ペプチド(d)（いずれも濃度２０
μg/mL）を検体とし、上記の抗菌活性測定方法によって
グラム陰性菌[E.coli O157：H7またはKlebsiella]およ
びグラム陽性菌[メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)]
のコロニー形成単位(CFU)をカウントした。検体無添加
(濃度０μg/mL)時のＣＦＵを１００％としたときのＣ
ＦＵの相対値を求め、「１００％−ＣＦＵの相対値」の
値を算出し、抗菌活性の値とした。結果を図５に示す。

【０１１３】なお図５中の＊は、検体(ペプチド)のかわ
りにＰＢＳを用いた結果に対してp＜0.05で有意差があ
ることを示す。図５より、本発明ペプチド（置換体）は
非置換体（公知）に比して顕著に抗菌活性が高く、グラ
ム陰性菌およびグラム陽性菌のいずれに対しても抗菌活
性を示すことが示された。また、本発明ペプチド(b)及
び(d)は、特にグラム陰性菌に対して強力な抗菌活性を
有することが示された。

【０１１４】３−１−４．種々のグラム陰性菌およびグ
ラム陽性菌に対する抗菌活性（２） A7、本発明ペプチド(e)または本発明ペプチド(f)(いず
れも濃度２０μg/mL)を検体とし、上記の抗菌活性測定
法と同様にしてグラム陰性菌[E.ColiまたはSalmonella
typhimurium]およびグラム陽性菌[メチシリン感受性黄
色ブドウ球菌(MSSA)またはメチシリン耐性黄色ブドウ球
菌(MRSA)]のコロニー形成単位(CFU)をカウントした。検
体無添加(濃度０μg/mL)時のＣＦＵを１００％とした
ときのＣＦＵの相対値を求め、「１００％−ＣＦＵの相
対値」の値を算出し、抗菌活性の値とした。結果を図６
に示す。

【０１１５】図６より、本発明ペプチド（置換体）は非
置換体（公知）に比して顕著に抗菌活性が高いことが示
された。また本発明ペプチド(e)および(f)は、グラム陰
性菌およびグラム陽性菌のいずれに対しても強力な抗菌
活性を示すことが示された。

【０１１６】また種々の濃度のA7、本発明ペプチド(e)
または本発明ペプチド(f)を検体とし、同様にコロニー
形成単位(CFU)をカウントした。グラム陰性菌に対する
結果を図７に、グラム陽性菌に対する結果を図８に示
す。なお図７および図８中、横軸は検体の濃度を示し、
縦軸は、検体(ペプチド)のかわりにＰＢＳ(検体濃度０
μg/mL)を用いた時のＣＦＵを１００％としたときの、
ＣＦＵの相対値を示す。また図７および図８中の＊は、
検体(ペプチド)のかわりにＰＢＳ(検体濃度０μg/mL)
を用いた結果に対してｐ＜0.05で有意差があることを示
す。

【０１１７】図７および図８より、本発明ペプチド（置
換体）の抗菌活性は用量依存的であり、また非置換体
（公知）に比して抗菌活性が高いことが示された。また
図７および図８の結果に基づき、検体（A7、本発明ペプ
チド(e)または本発明ペプチド(f)）の抗菌活性(IC₅₀)を
求めた。結果を表８に示す。

【０１１８】

【表８】

【０１１９】表８より、本発明ペプチド（置換体）は非
置換体（公知）に比して少なくとも約３〜２５倍、グラ
ム陰性菌およびグラム陽性菌に対する抗菌活性が高いこ
とが示された。

【０１２０】３−２．ＬＰＳ中和活性（致死抑制活性）ＬＰＳ中和活性の測定方法：マウス１匹あたり、20μg
または40μgの検体(ペプチド)、0.1μgのＬＰＳおよび2
5mgのガラクトサミンを腹腔内注射した。マウスの生死
を観察し（３０日間）、生存率(％)を求めた。

【０１２１】３−２−１．ＬＰＳ中和活性(1) A1、本発明ペプチド(b)、A3または本発明ペプチド(d)を
検体とし、上記の測定方法によってＬＰＳ中和活性を調
べた。結果を表９に示す。なお用いたマウスの数は表中
に示した。

【０１２２】

【表９】（表中の＊は、ＬＰＳおよびガラクトサミンのみを投与した結果に対してp＜0.0 1で有意差があることを示す(χ²検定)）

【０１２３】表９より、本発明ペプチド（置換体）は非
置換体（公知）に比して８倍以上のＬＰＳ中和活性を有
しており、ＬＰＳによる致死を抑制することが示され
た。

【０１２４】３−２−２．ＬＰＳ中和活性(2) A1、本発明ペプチド(b)、本発明ペプチド(a)または本発
明ペプチド(c)を検体とし、上記の測定方法によってＬ
ＰＳ中和活性を調べた。結果を表１０に示す。なお用い
たマウスの数は表中に示した。

【０１２５】

【表１０】（表中の＊は、ＬＰＳおよびガラクトサミンのみを投与した結果に対してp＜0.0 1で有意差があることを示す(χ²検定)）

【０１２６】表１０より、本発明ペプチド（置換体）は
非置換体（公知）に比して４〜８倍のＬＰＳ中和活性を
有しており、ＬＰＳによる致死を抑制することが示され
た。なお、上記ＬＰＳ中和活性(1)及び(2)の試験におい
て、マウスには、ＬＰＳの投与により通常に生じる症状
以外は認められなかった。従って、本発明ペプチドに急
性の毒性はないものと思われる。

【０１２７】３−２−３．修飾ペプチドのＬＰＳ中和活
性ペプチドのＮ末端をアセチル化しＣ末端をアミド化した
ペプチド（A7、本発明ペプチド(e)、または本発明ペプ
チド(f)）を検体とし、上記の測定方法によってＬＰＳ
中和活性を調べた。結果を表１１に示す。なお用いたマ
ウスの数は表中に示した。

【０１２８】

【表１１】（表中の＊は、ＬＰＳおよびガラクトサミンのみを投与した結果に対してp＜0.0 1で有意差があることを示す(χ²検定)）

【０１２９】表１１より、修飾された本発明ペプチド
（置換体）の(f)は修飾された非置換体（公知）に比し
て約２〜３倍のＬＰＳ中和活性を有しており、ＬＰＳに
よる致死を抑制することが示された。またこの活性は、
ペプチドの修飾による影響を受けなかった。

【０１３０】＜４＞エンドトキシン除去試験エンドトキシンフリーの担体（Sepharose 4B(ファルマ
シア製)）１００ｍＬをガラスフィルター(#2)に移し、
２リットルの注射用蒸留水で吸引洗浄した後、１リット
ル容量のビーカーに入れ、注射用蒸留水２００ｍＬを加
えた。マグネチックスターラーで攪拌しながら、10Ｍ N
aOHによってｐＨ１１〜１２に調整し、注射用蒸留水５
００ｍＬに溶解した臭化シアン(CNBr) ２５ｇを徐々に
添加して、ｐＨが変化しなくなった時点で反応を終了さ
せた。このCNBr活性化担体をガラスフィルターで濾過
し、冷水２リットル、0.1Ｍ NaHCO₃ １リットルの順で
洗浄した。このCNBr活性化担体１０mLに、0.2mg/mLと
なるように本発明ペプチド(b)の凍結乾燥物を加え、ロ
ーテーターで攪拌しながら４℃で２４時間処理した。反
応後、残存する不純物（イミドカーボネート体）を不活
化するために、0.2Ｍトリス−塩酸緩衝液(pH8.0)中で５
時間放置した。

【０１３１】これによって得られた本発明ペプチド固定
化担体（本発明ペプチドが固定化された担体）1.0ｇ
に、エンドトキシン含有溶液５mL（0.1、1.0、10 また
は100ng/mL）を加え、マルチシェイカーで３０分間連続
攪拌することにより処理した。処理後、本発明ペプチド
の固定化担体を遠心により沈殿させて上清を回収した。
この上清５０μLにエンドトキシン特異的合成基質試薬
（エンドスペシーＥＳ−５０Ｍ、生化学工業(株)製）5
0μLを加え、溶液中のエンドトキシン濃度を測定した。
また、「（処理前のエンドトキシン濃度−処理後のエン
ドトキシン濃度）／処理前のエンドトキシン濃度×１０
０」の値を算出し、エンドトキシン除去率(％)とした。
結果を表１２に示す。

【０１３２】

【表１２】

【０１３３】表１２より、本発明ペプチド固定化担体に
よりエンドトキシン含有溶液を処理すると、当該溶液中
のエンドトキシンが非常によく除去されることが示され
た。

【０１３４】

【実施例２】以下に本発明抗菌薬、本発明細菌感染症治
療剤および本発明エンドトキシンショック抑制剤の製剤
例を示すが、これらはあくまで例示であり、本発明各剤
の剤形がこれらに限定されるものではない。

【０１３５】（１）本発明抗菌薬（軟膏剤）本発明ペプチド(d) １０ｍｇモノステアリン酸ソルビタン７ｍｇモノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン７ｍｇパルミチン酸イソプロピル３７ｍｇワセリン３７ｍｇ流動パラフィン３７ｍｇセタノール５０ｍｇグリセリン７０ｍｇステアリン酸マグネシウム２ｍｇ上記成分に精製水を加えて、１ｇのクリームとした。

【０１３６】（２）本発明抗菌薬（錠剤）本発明ペプチド(c) １００ｍｇ乳糖６７０ｍｇバレイショデンプン１５０ｍｇ結晶セルロース６０ｍｇ軽質無水ケイ酸５０ｍｇ上記成分を混合し、ヒドロキシプロピルセルロースを３
０ｍｇをメタノールに溶解した溶液（ヒドロキシプロピ
ルセルロース１０重量％）を加えて混練したのち造粒し
た。これを径０．８ｍｍのスクリーンで押し出して顆粒
状にし、乾燥した後、ステアリン酸マグネシウム１５ｍ
ｇを加え２００ｍｇづつ打錠して錠剤を得た。

【０１３７】（３）本発明細菌感染症治療剤（カプセル
剤）本発明ペプチド(b) １００ｍｇ乳糖８０ｍｇ上記成分を均一に混合し、硬カプセルに充填してカプセ
ル剤を得た。

【０１３８】（４）本発明細菌感染症治療剤（注射剤）本発明ペプチド(e) ３０ｍｇ上記成分を５％マンニトール水溶液２ｍＬに溶解し、こ
れを無菌濾過した後、アンプルに入れて密封した。

【０１３９】（５）本発明エンドトキシンショック抑制
剤（用時溶解用注射剤） (A)本発明ペプチド(f)（凍結乾燥体）３０ｍｇ（アンプ
ルに封入した） (B)無菌濾過したＰＢＳ２ｍＬ（アンプルに封入した）上記(A)および(B)を１セットとして、用時溶解用注射剤
を製造した。使用時には(A)を(B)で溶解して用いること
ができる。

【０１４０】

【発明の効果】本発明ペプチドは、ヒト由来の抗菌性タ
ンパク質(CAP18)の公知の部分ペプチドの特定のアミノ
酸残基を置換した部分ペプチドであり、公知の部分ペプ
チドに比して顕著に高いエンドトキシン結合活性、抗菌
活性及びエンドトキシン中和活性等を示すので、抗菌
剤、細菌感染症治療剤、エンドトキシンショック抑制剤
及びエンドトキシン除去剤等の有効成分として極めて有
用である。

【０１４１】また本発明ペプチドは上記した通り非常に
高い薬理活性を有するので、本発明ペプチドを有効成分
とする本発明抗菌薬、本発明細菌感染症治療剤および本
発明エンドトキシンショック抑制剤等の医薬中の有効成
分量を減ずることができ、これにより安全かつ安価な本
発明医薬を提供することができる。また本発明ペプチド
はヒト由来の部分ペプチドをベースにしているので、本
発明医薬は特にヒトに対する安全性が高い薬剤として極
めて有用である。

【０１４２】また、本発明ペプチドの非常に高いエンド
トキシン結合活性を利用して、不溶性担体に固着された
本発明ペプチドからなるエンドトキシン除去剤を提供す
ることができ、本発明ペプチドを含有するエンドトキシ
ン測定剤も提供しうる。

【０１４３】

【配列表】配列番号：１配列の長さ：18 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴存在位置：2 その他の情報：疎水性アミノ酸存在位置：8, 12, 16 その他の情報：親水性アミノ酸存在位置：11 その他の情報：任意のアミノ酸配列 Lys Xaa Phe Lys Arg Ile Val Xaa Arg Ile Xaa Xaa Phe Leu Arg Xaa 1 5 10 15 Leu Val

【０１４４】配列番号：２配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val 1 5 10 15 Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val 20 25

【０１４５】配列番号：３配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val 1 5 10 15 Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val 20 25

【０１４６】配列番号：４配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Phe Phe Lys Arg Ile Val 1 5 10 15 Gln Arg Ile Phe Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val 20 25

【０１４７】配列番号：５配列の長さ：22 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp 1 5 10 15 Phe Leu Arg Asn Leu Val 20

【０１４８】配列番号：６配列の長さ：18 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn 1 5 10 15 Leu Val

【０１４９】配列番号：７配列の長さ：18 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Leu Lys Phe Leu Arg Lys 1 5 10 15 Leu Val

【０１５０】配列番号：８配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val 1 5 10 15 Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val 20 25

【０１５１】配列番号：９配列の長さ：22 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Glu Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp 1 5 10 15 Phe Leu Arg Asn Leu Val 20

【０１５２】配列番号：１０配列の長さ：24 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile 1 5 10 15 Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val 20

【０１５３】配列番号：１１配列の長さ：23 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys 1 5 10 15 Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val 20

【０１５４】配列番号：１２配列の長さ：18 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn 1 5 10 15 Leu Val

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で製造したペプチド（A1）のヘリカル
ホイール表示を示す。

【図２】実施例１で製造したペプチド（(b)）のヘリカ
ルホイール表示を示す。

【図３】実施例１で製造したペプチド（A3）のヘリカル
ホイール表示を示す。

【図４】実施例１で製造したペプチド（(d)）のヘリカ
ルホイール表示を示す。

【図５】ポリミキシンＢおよび実施例１で製造したペプ
チド（A1、(b)、A3および(d)）の、種々の細菌に対する
抗菌活性を示す。

【図６】実施例１で製造したペプチド（A7、(e)および
(f)）の、種々の細菌に対する抗菌活性を示す。

【図７】実施例１で製造したペプチド（A7、(e)および
(f)）の、種々のグラム陰性菌に対する、用量と抗菌活
性との関係を示す。

【図８】実施例１で製造したペプチド（A7、(e)および
(f)）の、種々のグラム陽性菌に対する、用量と抗菌活
性との関係を示す。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記アミノ酸配列（配列番号１）を少な
くとも含むペプチド。 Lys Xa1 Phe Lys Arg Ile Val Xa2 Arg Ile Xaa Xa2 Phe Leu Arg Xa2 Leu Val （但し、Xa1は疎水性アミノ酸残基を、Xa2は親水性アミ
ノ酸残基を、Xaaは任意のアミノ酸残基を示す）
【請求項２】下記(a)〜(f)のいずれかのアミノ酸配列
からなる、請求項１に記載のペプチド。 (a) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号２） (b) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号３） (c) Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Phe Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Phe Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号４） (d) Glu Lys Ile Gly Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号５） (e) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Leu Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val （配列番号６） (f) Lys Leu Phe Lys Arg Ile Val Lys Arg Ile Leu Lys Phe Leu Arg Lys Leu Val （配列番号７）
【請求項３】請求項１又は２に記載のペプチドを有効
成分とする抗菌剤。
【請求項４】請求項１又は２に記載のペプチドを有効
成分とする医薬。
【請求項５】請求項１又は２に記載のペプチドを有効
成分とする細菌感染症治療剤。
【請求項６】請求項１又は２に記載のペプチドを有効
成分とするエンドトキシンショック抑制剤。
【請求項７】不溶性担体に固着された請求項１又は２
に記載のペプチドからなる、エンドトキシン除去剤。