JPH11169192A - Ｌ−ホモシステインの製造方法 - Google Patents
Ｌ−ホモシステインの製造方法Info
- Publication number
- JPH11169192A JPH11169192A JP25087098A JP25087098A JPH11169192A JP H11169192 A JPH11169192 A JP H11169192A JP 25087098 A JP25087098 A JP 25087098A JP 25087098 A JP25087098 A JP 25087098A JP H11169192 A JPH11169192 A JP H11169192A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- homocysteine
- microorganism
- cells
- agrobacterium
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 工業的に有利な方法でＬ−ホモシステインを
製造する。 【解決手段】 ホモシステインチオラクトンに、チオエ
ステルを立体選択的に不斉加水分解する能力を有する微
生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させて、立
体配置がＬである光学活性体を加水分解した後、反応液
よりＬ−ホモシステインを回収する。
製造する。 【解決手段】 ホモシステインチオラクトンに、チオエ
ステルを立体選択的に不斉加水分解する能力を有する微
生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させて、立
体配置がＬである光学活性体を加水分解した後、反応液
よりＬ−ホモシステインを回収する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、Ｌ−ホモシステイ
ンの製造方法に関し、詳細には医薬、農薬の重要な合成
中間体であるＬ−ホモシステインを、微生物反応を利用
して製造する方法に関するものである。
ンの製造方法に関し、詳細には医薬、農薬の重要な合成
中間体であるＬ−ホモシステインを、微生物反応を利用
して製造する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】Ｌ−ホ
モシステインは、医薬、農薬の分野における重要な合成
中間体である。これまでに知られているＬ−ホモシステ
インの製造方法は、Ｌ−メチオニンを原料とする化学的
な合成方法のみであった。しかしながらこの方法は、高
価なＬ−メチオニンを用いるなど、工業的には不利であ
った。
モシステインは、医薬、農薬の分野における重要な合成
中間体である。これまでに知られているＬ−ホモシステ
インの製造方法は、Ｌ−メチオニンを原料とする化学的
な合成方法のみであった。しかしながらこの方法は、高
価なＬ−メチオニンを用いるなど、工業的には不利であ
った。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記問題点
について検討を重ねた結果、特定の微生物の作用により
ホモシステインチオラクトンを立体選択的に加水分解
し、Ｌ−ホモシステインが製造できることを見出し、本
発明を完成するにいたった。即ち、本発明はホモシステ
インチオラクトンに、チオエステルを立体選択的に不斉
加水分解する能力を有する微生物の菌体及び／または該
菌体処理物を作用させて、立体配置がＬである光学活性
体を加水分解した後、反応液よりＬ−ホモシステインを
回収することを特徴とするＬ−ホモシステインの製造方
法に存する。
について検討を重ねた結果、特定の微生物の作用により
ホモシステインチオラクトンを立体選択的に加水分解
し、Ｌ−ホモシステインが製造できることを見出し、本
発明を完成するにいたった。即ち、本発明はホモシステ
インチオラクトンに、チオエステルを立体選択的に不斉
加水分解する能力を有する微生物の菌体及び／または該
菌体処理物を作用させて、立体配置がＬである光学活性
体を加水分解した後、反応液よりＬ−ホモシステインを
回収することを特徴とするＬ−ホモシステインの製造方
法に存する。
【０００４】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明においては、原料としてホモシステインチオラク
トンを用い、これに微生物の菌体又は該菌体処理物を作
用させて、Ｌ−ホモシステインを製造する。本発明にお
いて使用する微生物は、ホモシステインチオラクトンを
立体選択的に加水分解する能力を有するものであればい
ずれを用いても良いが、好ましい例としては例えばフザ
リウム属を挙げることが出来る。
本発明においては、原料としてホモシステインチオラク
トンを用い、これに微生物の菌体又は該菌体処理物を作
用させて、Ｌ−ホモシステインを製造する。本発明にお
いて使用する微生物は、ホモシステインチオラクトンを
立体選択的に加水分解する能力を有するものであればい
ずれを用いても良いが、好ましい例としては例えばフザ
リウム属を挙げることが出来る。
【０００５】また、好ましい種としては例えば、フザリ
ウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐ
ｏｒｕｍ）、フザリウム・ソラニ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｓｏｌａｎｉ）、フザリウム・パリドロセウム（Ｆｕｓ
ａｒｉｕｍ ｐａｌｌｉｄｏｒｏｓｅｕｍ）またはアグ
ロバクテリウム・ラジオバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）などを挙げること
が出来る。上記の微生物の具体的な菌株としては、フザ
リウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓ
ｐｏｒｕｍ）ＩＦＯ３０７０１、フザリウム・ソラニ
（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ）ＩＦＯ９９５５、
フザリウム・パリドロセウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐａ
ｌｌｉｄｏｒｏｓｅｕｍ）ＩＦＯ３０２００の菌株また
はアグロバクテリウム・ラジオバクター（Ａｇｒｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）ＭＣＩ３６
２４を挙げることが出来る。
ウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐ
ｏｒｕｍ）、フザリウム・ソラニ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｓｏｌａｎｉ）、フザリウム・パリドロセウム（Ｆｕｓ
ａｒｉｕｍ ｐａｌｌｉｄｏｒｏｓｅｕｍ）またはアグ
ロバクテリウム・ラジオバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）などを挙げること
が出来る。上記の微生物の具体的な菌株としては、フザ
リウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓ
ｐｏｒｕｍ）ＩＦＯ３０７０１、フザリウム・ソラニ
（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ）ＩＦＯ９９５５、
フザリウム・パリドロセウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐａ
ｌｌｉｄｏｒｏｓｅｕｍ）ＩＦＯ３０２００の菌株また
はアグロバクテリウム・ラジオバクター（Ａｇｒｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）ＭＣＩ３６
２４を挙げることが出来る。
【０００６】上記微生物は、野生株、変異株、あるいは
細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法に
より誘導される組換え株などのいずれの株であってもよ
い。また、上記の菌株のうちＩＦＯ３０７０１、ＩＦＯ
９９５５、ＩＦＯ３０２００は公知の菌株であり、
（財）発酵研究所（ＩＦＯ）から容易に入手することが
出来る。ＭＣＩ３６２４株は、本発明者らにより天然土
壌から分離された細菌であり、工業技術院生命工学技術
研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１６９３９として寄託されてい
る。ＭＣＩ３６２４株の菌学的性質は以下の通りであ
る。
細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法に
より誘導される組換え株などのいずれの株であってもよ
い。また、上記の菌株のうちＩＦＯ３０７０１、ＩＦＯ
９９５５、ＩＦＯ３０２００は公知の菌株であり、
（財）発酵研究所（ＩＦＯ）から容易に入手することが
出来る。ＭＣＩ３６２４株は、本発明者らにより天然土
壌から分離された細菌であり、工業技術院生命工学技術
研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１６９３９として寄託されてい
る。ＭＣＩ３６２４株の菌学的性質は以下の通りであ
る。
【０００７】ＭＣＩ３６２４株の同定結果 １．形態的性質 （１）細胞の形 桿状 （２）細胞の多形性 なし （３）運動性 なし （４）胞子の有無 なし
【０００８】２．培養的性質 （１）肉汁寒天平板培養 ３０℃ １〜２日間培養
後 円形、半レンズ状、うす黄、不透明、光沢のコロニ
ーを形成。コロニー表面は平滑 （２）肉汁液体培養 混濁が見られるが、液面
における膜の形成はない （３）肉汁ゼラチン穿刺培養 ゼラチン液化なし （４）リトマス・ミルク 弱いアルカリ
後 円形、半レンズ状、うす黄、不透明、光沢のコロニ
ーを形成。コロニー表面は平滑 （２）肉汁液体培養 混濁が見られるが、液面
における膜の形成はない （３）肉汁ゼラチン穿刺培養 ゼラチン液化なし （４）リトマス・ミルク 弱いアルカリ
【０００９】３．生理学的性質 （１）グラム染色 陰性 （２）硝酸塩の還元 陽性 （３）脱膣反応 陽性 （４）ＭＲテスト 陰性 （５）ＶＰテスト 陰性 （６）インドールの生成 陰性 （７）硫化水素の生成 陰性 （８）デンプンの加水分解 陰性 （１１）色素の生成 なし （１２）ウレアーゼ 陽性 （１３）オキシダーゼ 陽性 （１４）カタラーゼ 陽性 （１６）酸素に対する態度 嫌気条件下で生育せず （１７）Ｏ−Ｆテスト 酸化 （１８）糖類からの酸の生成 Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｄ−ガラクトース ＋ マルトース ＋ シュークロース ＋ ラクトース ＋ トレハロース ＋ Ｄ−ソルビトール ＋ Ｄ−マンニトール ＋ イノシトール ＋ グリセリン ± デンプン − Ｄ−アラビトール ＋ エリスリトール − ＋：酸を生成する、−：生成しない、±：どちらともい
えない （１９）その他の諸性質 アルギニンジヒドロラーゼ 陽性 エスクリンの分解 陽性 β−ガラクトシダーゼ 陽性 有機酸の利用 グルコン酸 陽性 ＤＬ−リンゴ酸 陽性 アジピン酸 陰性 ｎ−カプリン酸 陰性
えない （１９）その他の諸性質 アルギニンジヒドロラーゼ 陽性 エスクリンの分解 陽性 β−ガラクトシダーゼ 陽性 有機酸の利用 グルコン酸 陽性 ＤＬ−リンゴ酸 陽性 アジピン酸 陰性 ｎ−カプリン酸 陰性
【００１０】 ４．化学分類学的性質 （１）主要なイソプレノイドキノン ユビキノン Ｑ１０ （２）ＤＮＡ中のＧ＋Ｃ含量 ５９．７ モル％
【００１１】５．分類学的考察 （１）属の同定 本菌株ＭＣＩ３６２４株は１）グラム陰性桿菌、２）絶
対好気性、３）芽胞を形成しない、４）運動性なし、
５）Ｏ−Ｆテストは酸化型、６）硝酸塩還元能及び脱窒
素能を有する、７）硫化水素を生成しない、８）主要な
イソプレノイドキノンはユビキノンＱ１０を有する、
８）ＤＮＡ中のＧ＋Ｃ含量は５９．７モル％などの特徴
を持っている。これらの特徴から、本菌株はバージェイ
ズマニュアル・システマティック・バクテリオロジー
［Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ］第１巻、２３
４〜２５６頁（１９８４）に記載されているリゾビアシ
ーエ科（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ）に含まれる、アグ
ロバクテリウム属（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及び
リゾビウム属（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）に帰属することが
示唆された。
対好気性、３）芽胞を形成しない、４）運動性なし、
５）Ｏ−Ｆテストは酸化型、６）硝酸塩還元能及び脱窒
素能を有する、７）硫化水素を生成しない、８）主要な
イソプレノイドキノンはユビキノンＱ１０を有する、
８）ＤＮＡ中のＧ＋Ｃ含量は５９．７モル％などの特徴
を持っている。これらの特徴から、本菌株はバージェイ
ズマニュアル・システマティック・バクテリオロジー
［Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ］第１巻、２３
４〜２５６頁（１９８４）に記載されているリゾビアシ
ーエ科（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ）に含まれる、アグ
ロバクテリウム属（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及び
リゾビウム属（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）に帰属することが
示唆された。
【００１２】（２）種の同定 現在、１６Ｓ ｒＲＮＡ塩基配列の解析結果から、アグ
ロバクテリウム属とリゾビウム属は属レベルでまとまっ
た菌群であることが判明している。従って本菌株の種を
決定するため、１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列（１４４６
塩基）を決定した。得られた結果に基づいてデータベー
ス検索を行ったところ、本菌株はアグロバクテリウム
ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｒｉｕｍ ｔｕｍ
ｅｆａｃｉｅｎｓ）に最も近縁であることが判明した。
ロバクテリウム属とリゾビウム属は属レベルでまとまっ
た菌群であることが判明している。従って本菌株の種を
決定するため、１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列（１４４６
塩基）を決定した。得られた結果に基づいてデータベー
ス検索を行ったところ、本菌株はアグロバクテリウム
ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｒｉｕｍ ｔｕｍ
ｅｆａｃｉｅｎｓ）に最も近縁であることが判明した。
【００１３】インターナショナル ジャーナル オブ
システマティック バクテリオロジー［Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ］第４３巻、６９４−７０
２頁（１９９３）によると、アグロバクテリウム属には
アグロバクテリウム ツメファシエンス（Ａ．ｔｕｍｅ
ｆａｃｉｅｎｓ）、アグロバクテリウム ラディオバク
ター（Ａ．ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）、アグロバクテリ
ウム リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）、アグ
ロバクテリウム ビティス（Ａ．ｖｉｔｉｓ）及びアグ
ロバクテリウムルビ（Ａ．ｒｕｂｉ）の５種が知られて
いるが、アグロバクテリウム ツメファシエンスとアグ
ロバクテリウム ラディオバクターは１６Ｓ ｒＲＮＡ
の解析から同一種として統合され、アグロバクテリウム
ラディオバクターとなっている。従って本菌株はアグ
ロバクテリウム ラディオバクターと９９．６％の相同
値を示し、他種（相同値９４．５〜９７．８％）より高
い相同性を示した。さらに生理学的性質においても、
１）３７℃での生育、２）クエン酸の資化性、３）エリ
スリトール及びアラビトールの資化性、４）硝酸塩の還
元などの点で明らかに他種とは区別された。以上の結果
から、本菌株ＭＣＩ３６２４株をアグロバクテリウム
ラディオバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒａ
ｄｉｏｂａｃｔｅｒ）と同定した。
システマティック バクテリオロジー［Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ］第４３巻、６９４−７０
２頁（１９９３）によると、アグロバクテリウム属には
アグロバクテリウム ツメファシエンス（Ａ．ｔｕｍｅ
ｆａｃｉｅｎｓ）、アグロバクテリウム ラディオバク
ター（Ａ．ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）、アグロバクテリ
ウム リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）、アグ
ロバクテリウム ビティス（Ａ．ｖｉｔｉｓ）及びアグ
ロバクテリウムルビ（Ａ．ｒｕｂｉ）の５種が知られて
いるが、アグロバクテリウム ツメファシエンスとアグ
ロバクテリウム ラディオバクターは１６Ｓ ｒＲＮＡ
の解析から同一種として統合され、アグロバクテリウム
ラディオバクターとなっている。従って本菌株はアグ
ロバクテリウム ラディオバクターと９９．６％の相同
値を示し、他種（相同値９４．５〜９７．８％）より高
い相同性を示した。さらに生理学的性質においても、
１）３７℃での生育、２）クエン酸の資化性、３）エリ
スリトール及びアラビトールの資化性、４）硝酸塩の還
元などの点で明らかに他種とは区別された。以上の結果
から、本菌株ＭＣＩ３６２４株をアグロバクテリウム
ラディオバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒａ
ｄｉｏｂａｃｔｅｒ）と同定した。
【００１４】本発明の製造方法においては、上記微生物
の１種あるいは２種以上が菌体及び／または菌体処理物
として用いられる。具体的には、上記微生物を培養して
得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌
体を公知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理し
たもの、凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵
素的に破砕したもの等の菌体処理物を用いることができ
る。また、これらの菌体または菌体処理物から、ホモシ
ステインチオラクトンに作用しこれをＬ−ホモシステイ
ンへ変換する能力を有する酵素画分を粗製物あるいは精
製物として取り出して用いることも可能である。さらに
は、このようにして得られた菌体、菌体処理物、酵素画
分等をポリアクリルアミドゲル、カラギーナンゲル等の
担体に固定化したもの等を用いることも可能である。そ
こで本明細書において、「菌体及び／または該菌体処理
物」の用語は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、及
びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いられ
る。
の１種あるいは２種以上が菌体及び／または菌体処理物
として用いられる。具体的には、上記微生物を培養して
得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌
体を公知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理し
たもの、凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵
素的に破砕したもの等の菌体処理物を用いることができ
る。また、これらの菌体または菌体処理物から、ホモシ
ステインチオラクトンに作用しこれをＬ−ホモシステイ
ンへ変換する能力を有する酵素画分を粗製物あるいは精
製物として取り出して用いることも可能である。さらに
は、このようにして得られた菌体、菌体処理物、酵素画
分等をポリアクリルアミドゲル、カラギーナンゲル等の
担体に固定化したもの等を用いることも可能である。そ
こで本明細書において、「菌体及び／または該菌体処理
物」の用語は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、及
びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いられ
る。
【００１５】以下に、本発明の製造方法について具体的
に説明する。本発明の製造方法において微生物は、通
常、培養して用いられるが、この培養については定法通
り行うことができる。本微生物の培養の為に用いられる
培地には本微生物が資化しうる炭素源、窒素源、及び無
機イオン等が含まれる。炭素源としては、グルコース等
の炭水化物、グリセロール等のアルコール類、有機酸そ
の他が適宜使用される。窒素源としては、肉エキス、Ｎ
Ｚアミン、トリプトース、酵母エキス、ポリペプトン、
コーンスティープリカーその他が適宜使用される。無機
イオンとしては、リン酸イオン、マグネシウムイオン、
鉄イオン、マンガンイオン、モリブデンイオンその他が
必要に応じ適宜使用される。更に、イノシトール、パン
トテン酸、ニコチン酸アミドその他のビタミン類を必要
に応じ添加することは有効である。また、チオラクトン
やラクトン類を添加することも有効である。培養は、好
気的条件下に、ｐＨ約３〜８、温度約２０〜３５℃の適
当な範囲に制御しつつ１５〜１００時間行う。
に説明する。本発明の製造方法において微生物は、通
常、培養して用いられるが、この培養については定法通
り行うことができる。本微生物の培養の為に用いられる
培地には本微生物が資化しうる炭素源、窒素源、及び無
機イオン等が含まれる。炭素源としては、グルコース等
の炭水化物、グリセロール等のアルコール類、有機酸そ
の他が適宜使用される。窒素源としては、肉エキス、Ｎ
Ｚアミン、トリプトース、酵母エキス、ポリペプトン、
コーンスティープリカーその他が適宜使用される。無機
イオンとしては、リン酸イオン、マグネシウムイオン、
鉄イオン、マンガンイオン、モリブデンイオンその他が
必要に応じ適宜使用される。更に、イノシトール、パン
トテン酸、ニコチン酸アミドその他のビタミン類を必要
に応じ添加することは有効である。また、チオラクトン
やラクトン類を添加することも有効である。培養は、好
気的条件下に、ｐＨ約３〜８、温度約２０〜３５℃の適
当な範囲に制御しつつ１５〜１００時間行う。
【００１６】ホモシステインチオラクトンに上記微生物
を作用させてＬ−ホモシステインを製造する方法とし
て、本微生物を培養し、得られた菌体懸濁液にホモシス
テインチオラクトンを添加し反応させＬ−ホモシステイ
ンを得る方法、培地にホモシステインチオラクトンを添
加し培養と反応を同時に行う方法、あるいは培養終了
後、ホモシステインチオラクトンを添加して更に反応を
行う方法等を用いることができる。反応温度は１５〜４
０℃が好ましく、ｐＨ４〜１０の範囲である。ホモシス
テインチオラクトン濃度は０．１〜５０％の範囲が望ま
しく、必要ならばホモシステインチオラクトンは反応の
間、追補添加される。また、必要に応じて金属イオンを
添加することにより反応が促進される場合がある。培養
及び反応で得られたＬ−ホモシステインの採取方法とし
ては晶析などの通常の分離・精製方法により行うことが
できる。
を作用させてＬ−ホモシステインを製造する方法とし
て、本微生物を培養し、得られた菌体懸濁液にホモシス
テインチオラクトンを添加し反応させＬ−ホモシステイ
ンを得る方法、培地にホモシステインチオラクトンを添
加し培養と反応を同時に行う方法、あるいは培養終了
後、ホモシステインチオラクトンを添加して更に反応を
行う方法等を用いることができる。反応温度は１５〜４
０℃が好ましく、ｐＨ４〜１０の範囲である。ホモシス
テインチオラクトン濃度は０．１〜５０％の範囲が望ま
しく、必要ならばホモシステインチオラクトンは反応の
間、追補添加される。また、必要に応じて金属イオンを
添加することにより反応が促進される場合がある。培養
及び反応で得られたＬ−ホモシステインの採取方法とし
ては晶析などの通常の分離・精製方法により行うことが
できる。
【００１７】
【実施例】いかに実施例を挙げて本発明を更に具体的に
説明するが、その要旨を越えない限り本発明の技術分野
における通常の変更をすることができる。 実施例１ グルコース １０．０ｇ／Ｌ、ポリペプトン ５．０ｇ
／Ｌ、酵母エキス ５．０ｇ／Ｌ及びコーンスティープ
リカー ５．０ｇ／Ｌ（ｐＨ６．０）の組成からなる液
体培地５０ｍＬに、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕ
ｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ） ＩＦＯ３０７０１
を接種し、２７℃で７２時間好気的に培養した。培養終
了後、菌体を集め５０ｍＭ塩化カリウム水溶液で洗浄し
た。これに１０．０ｇ／Ｌのホモシステインチオラクト
ンを含む１００ｍＭＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）を加
え、全量を５０ｍＬとし３０℃で２４時間反応させた。
反応終了時のホモシステイン生成蓄積量は６．５ｇ／Ｌ
であり、得られたＬ−ホモシステインの光学純度は６０
％ｅ．ｅ．であった。
説明するが、その要旨を越えない限り本発明の技術分野
における通常の変更をすることができる。 実施例１ グルコース １０．０ｇ／Ｌ、ポリペプトン ５．０ｇ
／Ｌ、酵母エキス ５．０ｇ／Ｌ及びコーンスティープ
リカー ５．０ｇ／Ｌ（ｐＨ６．０）の組成からなる液
体培地５０ｍＬに、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕ
ｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ） ＩＦＯ３０７０１
を接種し、２７℃で７２時間好気的に培養した。培養終
了後、菌体を集め５０ｍＭ塩化カリウム水溶液で洗浄し
た。これに１０．０ｇ／Ｌのホモシステインチオラクト
ンを含む１００ｍＭＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）を加
え、全量を５０ｍＬとし３０℃で２４時間反応させた。
反応終了時のホモシステイン生成蓄積量は６．５ｇ／Ｌ
であり、得られたＬ−ホモシステインの光学純度は６０
％ｅ．ｅ．であった。
【００１８】実施例２ 第１表に示す微生物の菌体をそれぞれ、グルコース １
０．０ｇ／Ｌ、ポリペプトン ５．０ｇ／Ｌ、酵母エキ
ス ５．０ｇ／Ｌ、コーンスティープリカー５．０ｇ／
Ｌ（ｐＨ６．０）の組成からなる液体培地５０ｍＬに接
種し、２７℃で７２時間好気的に培養した。培養終了
後、菌体を集め５０ｍＭ塩化カリウム水溶液で洗浄し
た。これに１０．０ｇ／Ｌのホモシステインチオラクト
ンを含む１００ｍＭＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）を加
え、全量を５０ｍＬとし３０℃で２４時間反応させた。
得られた結果を表１に示す。
０．０ｇ／Ｌ、ポリペプトン ５．０ｇ／Ｌ、酵母エキ
ス ５．０ｇ／Ｌ、コーンスティープリカー５．０ｇ／
Ｌ（ｐＨ６．０）の組成からなる液体培地５０ｍＬに接
種し、２７℃で７２時間好気的に培養した。培養終了
後、菌体を集め５０ｍＭ塩化カリウム水溶液で洗浄し
た。これに１０．０ｇ／Ｌのホモシステインチオラクト
ンを含む１００ｍＭＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０）を加
え、全量を５０ｍＬとし３０℃で２４時間反応させた。
得られた結果を表１に示す。
【００１９】
【表１】 第１表 ホモシステイン 光学純度 絶対配置 微生物 （ｇ／Ｌ）（％ｅ．ｅ．） フザリウム・ソラニＩＦＯ９９５５ ３．１ ５０ Ｌ フザリウム・パリドロセウムＩＦＯ３０２００ ３．５ ４５ Ｌ
【００２０】実施例３ ニュートリエントブロス ８．０ｇ／ｌ、シュークロー
ス ５．０ｇ／ｌ、酵母エキス １．０ｇ／ｌの組成か
らなる液体培地１０ｍｌに、アグロバクテリウム・ラジ
オバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒａｄｉｏ
ｂａｃｔｅｒ）ＭＣＩ３６２４を接種し、２８度で２４
時間好気的に培養した。培養終了後、菌体を集め、０．
８５％塩化ナトリウムで懸濁し菌体懸濁液０．８ｍｌを
得た。この菌体懸濁液０．４ｍｌに２５０ｍＭのホモシ
ステインチオラクトンを０．４ｍｌ、ｐＨ７．０の１Ｍ
リン酸緩衝液０．２ｍｌを加え、３７度で２４時間反応
させた。反応終了時のホモシステインの蓄積量は５０ｍ
Ｍであり、得られたＬ−ホモシステインの光学純度は７
９．６％ｅ．ｅ．であった。
ス ５．０ｇ／ｌ、酵母エキス １．０ｇ／ｌの組成か
らなる液体培地１０ｍｌに、アグロバクテリウム・ラジ
オバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒａｄｉｏ
ｂａｃｔｅｒ）ＭＣＩ３６２４を接種し、２８度で２４
時間好気的に培養した。培養終了後、菌体を集め、０．
８５％塩化ナトリウムで懸濁し菌体懸濁液０．８ｍｌを
得た。この菌体懸濁液０．４ｍｌに２５０ｍＭのホモシ
ステインチオラクトンを０．４ｍｌ、ｐＨ７．０の１Ｍ
リン酸緩衝液０．２ｍｌを加え、３７度で２４時間反応
させた。反応終了時のホモシステインの蓄積量は５０ｍ
Ｍであり、得られたＬ−ホモシステインの光学純度は７
９．６％ｅ．ｅ．であった。
【００２１】
【発明の効果】本発明の微生物を用いたＬ−ホモシステ
インの製造方法は従来の方法に比べ安価な方法であるこ
とから、Ｌ−ホモシステインの工業的な生産を行う際に
非常に有効である。
インの製造方法は従来の方法に比べ安価な方法であるこ
とから、Ｌ−ホモシステインの工業的な生産を行う際に
非常に有効である。
Claims (3)
- 【請求項１】 ホモシステインチオラクトンに、チオエ
ステルを立体選択的に不斉加水分解する能力を有する微
生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させて、立
体配置がＬである光学活性体を加水分解した後、反応液
よりＬ−ホモシステインを回収することを特徴とするＬ
−ホモシステインの製造方法。 - 【請求項２】 微生物がフザリウム属に属する微生物で
あることを特徴とする請求項１記載の製造方法。 - 【請求項３】 微生物がアグロバクテリウム属に属する
微生物であることを特徴とする請求項１記載の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25087098A JP3743172B2 (ja) | 1997-10-07 | 1998-09-04 | Ｌ−ホモシステインの製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27428397 | 1997-10-07 | ||
| JP9-274283 | 1997-10-07 | ||
| JP25087098A JP3743172B2 (ja) | 1997-10-07 | 1998-09-04 | Ｌ−ホモシステインの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11169192A true JPH11169192A (ja) | 1999-06-29 |
| JP3743172B2 JP3743172B2 (ja) | 2006-02-08 |
Family
ID=26539960
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25087098A Expired - Fee Related JP3743172B2 (ja) | 1997-10-07 | 1998-09-04 | Ｌ−ホモシステインの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3743172B2 (ja) |
-
1998
- 1998-09-04 JP JP25087098A patent/JP3743172B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3743172B2 (ja) | 2006-02-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH067157A (ja) | シュードグルコノバクター属酸化菌 | |
| JP2001037469A (ja) | エピクロロヒドリンの微生物分解 | |
| JP2840722B2 (ja) | ４‐ハロ‐３‐ヒドロキシブチロニトリルの製造法 | |
| JP5022044B2 (ja) | 新規ウリカーゼの製造方法 | |
| JP2002233395A (ja) | 補酵素ｎａｄｈの再生方法 | |
| JP3743172B2 (ja) | Ｌ−ホモシステインの製造方法 | |
| DE3689181T2 (de) | Thermostabile Tryptophanase, Verfahren zu deren Herstellung und thermostabile Tryptophanase erzeugender Mikroorganismus. | |
| JP3514799B2 (ja) | リパーゼ及びこれを産生する微生物 | |
| JP3873512B2 (ja) | Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方法 | |
| JP2840723B2 (ja) | ４‐ハロ‐３‐ヒドロキシブチロニトリルの製造法 | |
| JP5053648B2 (ja) | 新規ウリカーゼの製造方法 | |
| JP4197778B2 (ja) | 光学活性なα−メルカプトカルボン酸の製造方法 | |
| JP2768473B2 (ja) | Ｎａｄｈオキシダーゼの製造法 | |
| WO1992018637A1 (en) | Method for the production of d-gluconic acid | |
| JPH1014591A (ja) | ２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物の製造方法 | |
| JP5010291B2 (ja) | 新規ウリカーゼの製造方法 | |
| JPH0515394A (ja) | 光学活性（ｓ）−３−フエニル−１，３−プロパンジオールの製造法 | |
| JP2800005B2 (ja) | デオキシリボ核酸の製造法 | |
| JPH0134036B2 (ja) | ||
| JP3754785B2 (ja) | ３−ヒドロキシ含窒素六員環化合物の製造方法 | |
| Aono | Subcellular distribution of alkalophilic Bacillus penicillinase produced by Escherichia coli HB101 carrying pEAP31 | |
| KR960007741B1 (ko) | 신규 α-1, 6-글루코시다제 및 그의 제조방법 | |
| JP2946055B2 (ja) | 光学活性（ｓ）‐（＋）‐３‐ハロ‐１，２―プロパンジオールの製造法 | |
| JPH05260964A (ja) | 新規酵素、その製造方法及びこの酵素を用いたｄ−乳酸の製造方法 | |
| JPH07313153A (ja) | 新規ｎａｄ＋ 依存型アルコール脱水素酵素およびその製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20050802 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
|
| A521 | Written amendment |
Effective date: 20050927 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20051025 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Effective date: 20051107 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081125 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091125 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101125 Year of fee payment: 5 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |