JPH1014591A - ２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物の製造方法 - Google Patents
２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物の製造方法Info
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- JPH1014591A JPH1014591A JP17350396A JP17350396A JPH1014591A JP H1014591 A JPH1014591 A JP H1014591A JP 17350396 A JP17350396 A JP 17350396A JP 17350396 A JP17350396 A JP 17350396A JP H1014591 A JPH1014591 A JP H1014591A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物を安価な
原料から微生物反応を利用して工業的に有利に製造す
る。 【解決手段】 下記一般式（Ｉ） 【化１】 （上記一般式（Ｉ）中Ｒ1は水素原子、ハロゲン原子ま
たはメチル基を表し、Ａは炭素原子または窒素原子を表
す。）で表される含窒素６員環化合物にＭＣＩ３２８８
もしくはＭＣＩ３２８９を作用させて下記一般式（Ｉ
Ｉ） 【化２】 （上記一般式（ＩＩ）中Ｒ1およびＡは上記一般式
（Ｉ）中で定義したとおり。）で表される２−ヒドロキ
シ含窒素６員環化合物を得る。
原料から微生物反応を利用して工業的に有利に製造す
る。 【解決手段】 下記一般式（Ｉ） 【化１】 （上記一般式（Ｉ）中Ｒ1は水素原子、ハロゲン原子ま
たはメチル基を表し、Ａは炭素原子または窒素原子を表
す。）で表される含窒素６員環化合物にＭＣＩ３２８８
もしくはＭＣＩ３２８９を作用させて下記一般式（Ｉ
Ｉ） 【化２】 （上記一般式（ＩＩ）中Ｒ1およびＡは上記一般式
（Ｉ）中で定義したとおり。）で表される２−ヒドロキ
シ含窒素６員環化合物を得る。
Description
【０００１】
【発明の属する分野】本発明は、２−ヒドロキシ含窒素
６員環化合物の製造方法に関し、詳細には医薬、農薬、
染料等の重要な合成中間体である２−ヒドロキシピリジ
ン誘導体および２−ヒドロキシピラジン誘導体を、微生
物反応を利用して製造する方法に関するものである。
６員環化合物の製造方法に関し、詳細には医薬、農薬、
染料等の重要な合成中間体である２−ヒドロキシピリジ
ン誘導体および２−ヒドロキシピラジン誘導体を、微生
物反応を利用して製造する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】ピリ
ジン環の２位及び３位に置換基を有する化合物は、医
薬、農薬の分野における重要な合成中間体である。これ
まで生化学的な方法による２−ヒドロキシ含窒素６員環
化合物の製造は、ＤＳＭ６９２０株の作用によるニコチ
ン酸の２位に水酸基を導入する方法のみであった（特開
平６−１９９７９７号公報）。しかしながらこの方法
は、培養に高価な６−メチルニコチン酸を多量に用いる
など、工業的には不利であった。
ジン環の２位及び３位に置換基を有する化合物は、医
薬、農薬の分野における重要な合成中間体である。これ
まで生化学的な方法による２−ヒドロキシ含窒素６員環
化合物の製造は、ＤＳＭ６９２０株の作用によるニコチ
ン酸の２位に水酸基を導入する方法のみであった（特開
平６−１９９７９７号公報）。しかしながらこの方法
は、培養に高価な６−メチルニコチン酸を多量に用いる
など、工業的には不利であった。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記問題点
について検討を重ねた結果、特定の微生物の作用により
３−置換含窒素６員環化合物の２位に選択的にヒドロキ
シル基を導入できることを見出し、本発明を完成するに
至った。即ち、本発明の要旨は下記一般式（Ｉ）
について検討を重ねた結果、特定の微生物の作用により
３−置換含窒素６員環化合物の２位に選択的にヒドロキ
シル基を導入できることを見出し、本発明を完成するに
至った。即ち、本発明の要旨は下記一般式（Ｉ）
【０００４】
【化３】 （上記一般式（Ｉ）中、Ｒ1は水素原子、ハロゲン原子
またはメチル基を表し、Ａは炭素原子または窒素原子を
表す。）で表される含窒素６員環化合物に、ＭＣＩ３２
８８もしくはＭＣＩ３２８９の菌体および／または該菌
体処理物を作用させることを特徴とする下記一般式（Ｉ
Ｉ）
またはメチル基を表し、Ａは炭素原子または窒素原子を
表す。）で表される含窒素６員環化合物に、ＭＣＩ３２
８８もしくはＭＣＩ３２８９の菌体および／または該菌
体処理物を作用させることを特徴とする下記一般式（Ｉ
Ｉ）
【０００５】
【化４】 （上記一般式（ＩＩ）中、Ｒ1およびＡは上記一般式
（Ｉ）中で定義したとおり。）で表される２−ヒドロキ
シ含窒素６員環化合物の製造方法に存する。
（Ｉ）中で定義したとおり。）で表される２−ヒドロキ
シ含窒素６員環化合物の製造方法に存する。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明においては、原料として上記一般式（Ｉ）で表さ
れる含窒素６員環化合物を用い、これに上記特定の微生
物の菌体又は該菌体処理物を作用させて、上記一般式
（ＩＩ）で表される２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物
を製造する。
本発明においては、原料として上記一般式（Ｉ）で表さ
れる含窒素６員環化合物を用い、これに上記特定の微生
物の菌体又は該菌体処理物を作用させて、上記一般式
（ＩＩ）で表される２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物
を製造する。
【０００７】本発明において使用する微生物は、例えば
ＭＣＩ３２８８、ＭＣＩ３２８９が挙げられ、酸官能基
と窒素との間にある炭素原子を特異的にヒドロキシル化
する能力を有する微生物である。ＭＣＩ３２８８および
ＭＣＩ３２８９は、本発明者らにより天然土壌から分離
された細菌であり、工業技術院生命工学技術研究所に平
成８年６月２７日付けでそれぞれＦＥＲＭ Ｐ−１５７
１１およびＦＥＲＭＰ−１５７１２として寄託されてい
る。ＭＣＩ３２８８およびＭＣＩ３２８９の菌学的性状
は以下のとうりである。
ＭＣＩ３２８８、ＭＣＩ３２８９が挙げられ、酸官能基
と窒素との間にある炭素原子を特異的にヒドロキシル化
する能力を有する微生物である。ＭＣＩ３２８８および
ＭＣＩ３２８９は、本発明者らにより天然土壌から分離
された細菌であり、工業技術院生命工学技術研究所に平
成８年６月２７日付けでそれぞれＦＥＲＭ Ｐ−１５７
１１およびＦＥＲＭＰ−１５７１２として寄託されてい
る。ＭＣＩ３２８８およびＭＣＩ３２８９の菌学的性状
は以下のとうりである。
【０００８】（ＭＣＩ３２８８株、３２８９株の同定結
果） ＭＣＩ３２８８株の特徴 １．形態的性質 ＭＣＩ３２８８ （１）細胞の形 短桿状 （２）細胞の多形性 なし （３）運動性 なし （４）胞子の有無 なし
果） ＭＣＩ３２８８株の特徴 １．形態的性質 ＭＣＩ３２８８ （１）細胞の形 短桿状 （２）細胞の多形性 なし （３）運動性 なし （４）胞子の有無 なし
【０００９】２．培養的性質 （１）平板培養 本菌株は肉汁寒天平板培地上では容易にコロニーを形成
しない。以下に示す培地上では非常に遅い生育を示し、
３０℃、１〜２週間培養で直径１〜２mm、白色、全縁の
コロニーを形成する。コロニーは粘性を示し膜状にな
る。 生育培地： ６−メチルニコチン酸 １ｇ／Ｌ ＤＬ−リンゴ酸 ２ｇ／Ｌ コーンスティープリカー １ｇ／Ｌ （ＮＨ4）2ＳＯ4 １ｇ／Ｌ ＫＨ2ＰＯ4 １ｇ／Ｌ Ｋ2ＨＰＯ4 ３ｇ／Ｌ 寒天 １５ｇ／Ｌ アガーメイト ２ｇ／Ｌ ＭｇＳＯ4 １００ｍｇ／Ｌ （ｐＨ７.０） （２）液体培養 上記の液体生育培地中では、３０℃、１〜３日振とう培
養により白濁及び繊維状の菌体凝集が見られる。液面で
の生育は示さない。
しない。以下に示す培地上では非常に遅い生育を示し、
３０℃、１〜２週間培養で直径１〜２mm、白色、全縁の
コロニーを形成する。コロニーは粘性を示し膜状にな
る。 生育培地： ６−メチルニコチン酸 １ｇ／Ｌ ＤＬ−リンゴ酸 ２ｇ／Ｌ コーンスティープリカー １ｇ／Ｌ （ＮＨ4）2ＳＯ4 １ｇ／Ｌ ＫＨ2ＰＯ4 １ｇ／Ｌ Ｋ2ＨＰＯ4 ３ｇ／Ｌ 寒天 １５ｇ／Ｌ アガーメイト ２ｇ／Ｌ ＭｇＳＯ4 １００ｍｇ／Ｌ （ｐＨ７.０） （２）液体培養 上記の液体生育培地中では、３０℃、１〜３日振とう培
養により白濁及び繊維状の菌体凝集が見られる。液面で
の生育は示さない。
【００１０】３．生理学的性質 （１）グラム染色 陰性 （２）オキシダーゼ 陽性 （３）カタラーゼ 陰性 （４）酸素に対する態度 嫌気条件下では生育せ
ず （５）Ｏ−Ｆテスト 生育せず （６）炭素源の資化性 グルコース ― フルクトース ― ソルビトール ― グリセリン ― 酢酸ナトリウム ― スターチ ― グルタミン酸ナトリウム＋ DL-リンゴ酸 ＋ フマル酸 ＋ ６ーメチルニコチン酸＋
ず （５）Ｏ−Ｆテスト 生育せず （６）炭素源の資化性 グルコース ― フルクトース ― ソルビトール ― グリセリン ― 酢酸ナトリウム ― スターチ ― グルタミン酸ナトリウム＋ DL-リンゴ酸 ＋ フマル酸 ＋ ６ーメチルニコチン酸＋
【００１１】４．化学分類学的性質 （１）イソプレノイドキノン ユビキノン Ｑ８ ５．分類学的考察 本菌株ＭＣＩ３２８８はグラム陰性桿菌で運動性を示さ
ない。またグルコースを資化せず、普通寒天培地等の天
然培地にも殆ど生育しないなど、培養が困難なため１６
Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列を調べることによって、本菌の
帰属を明らかにすることを試みた。本菌株よりＤＮＡを
抽出、１６Ｓ ｒＲＮＡに対応する１６Ｓ ｒＤＮＡ（大
腸菌ナンバー８〜１５４０）１５３３塩基をＰＣＲ法に
より増幅し、シークエンサーにより塩基配列を決定し
た。その結果に基づいてデータベース検索を行い類縁菌
との系統樹を作成したところ、図１に示すようにＢｕｒ
ｋｈｏｌｄｅｒｉａ属または Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ
属に近縁であることが示唆されたが、属の特定はできな
かった。従って本菌株をグラム陰性菌ＭＣＩ３２８８株
とした。
ない。またグルコースを資化せず、普通寒天培地等の天
然培地にも殆ど生育しないなど、培養が困難なため１６
Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列を調べることによって、本菌の
帰属を明らかにすることを試みた。本菌株よりＤＮＡを
抽出、１６Ｓ ｒＲＮＡに対応する１６Ｓ ｒＤＮＡ（大
腸菌ナンバー８〜１５４０）１５３３塩基をＰＣＲ法に
より増幅し、シークエンサーにより塩基配列を決定し
た。その結果に基づいてデータベース検索を行い類縁菌
との系統樹を作成したところ、図１に示すようにＢｕｒ
ｋｈｏｌｄｅｒｉａ属または Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ
属に近縁であることが示唆されたが、属の特定はできな
かった。従って本菌株をグラム陰性菌ＭＣＩ３２８８株
とした。
【００１２】ＭＣＩ３２８９株の特徴 １．形態的性質 （１）細胞の形 短桿状 （２）細胞の多形性 なし （３）運動性 なし （４）胞子の有無 なし
【００１３】２．培養的性質 （１）平板培養 本菌株は肉汁寒天平板培地上では容易にコロニーを形成
しない。以下に示す培地上では非常に遅い生育を示し、
３０℃、１〜２週間培養で直径１〜２mm、白色、全縁の
コロニーを形成する。 生育培地： ６−メチルニコチン酸 １ｇ／Ｌ イーストエキス ５ｇ／Ｌ （ＮＨ4）2ＳＯ4 １ｇ／Ｌ ＫＨ2ＰＯ4 １ｇ／Ｌ Ｋ2ＨＰＯ4 ３ｇ／Ｌ 寒天 １５ｇ／Ｌ アガーメイト ２ｇ／Ｌ ＭｇＳＯ4 １００ｍｇ／Ｌ （ｐＨ７.０） （２）液体培養 上記の液体生育培地中では、３０℃、１〜３日振とう培
養により良好な生育を示す。液面での生育は示さない。
しない。以下に示す培地上では非常に遅い生育を示し、
３０℃、１〜２週間培養で直径１〜２mm、白色、全縁の
コロニーを形成する。 生育培地： ６−メチルニコチン酸 １ｇ／Ｌ イーストエキス ５ｇ／Ｌ （ＮＨ4）2ＳＯ4 １ｇ／Ｌ ＫＨ2ＰＯ4 １ｇ／Ｌ Ｋ2ＨＰＯ4 ３ｇ／Ｌ 寒天 １５ｇ／Ｌ アガーメイト ２ｇ／Ｌ ＭｇＳＯ4 １００ｍｇ／Ｌ （ｐＨ７.０） （２）液体培養 上記の液体生育培地中では、３０℃、１〜３日振とう培
養により良好な生育を示す。液面での生育は示さない。
【００１４】３．生理学的性質 （１）グラム染色陰性 （２）オキシダーゼ陽性 （３）カタラーゼ陽性 （４）酸素に対する態度 嫌気条件下では生育せ
ず （５）Ｏ−Ｆテスト 生育せず ４．化学分類学的性質 （１）イソプレノイドキノン ユビキノン Ｑ８
ず （５）Ｏ−Ｆテスト 生育せず ４．化学分類学的性質 （１）イソプレノイドキノン ユビキノン Ｑ８
【００１５】５．分類学的考察 本菌株ＭＣＩ３２８９はグラム陰性桿菌で運動性を示さ
ない。普通寒天培地等の天然培地にも殆ど生育しないな
ど、培養が困難なため１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列を調
べることによって、本菌の帰属を明らかにすることを試
みた。本菌株よりＤＮＡを抽出、１６Ｓ ｒＲＮＡに対
応する１６Ｓ ｒＤＮＡ（大腸菌ナンバー８〜１５４
０）１５３３塩基の塩基配列を決定した。その結果に基
づいてデータベース検索を行い系統樹を作成したとこ
ろ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ属 または Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ属に近縁であることが示唆されたが、属の
特定はできなかった。また前述のＭＣＩ３２８８株とは
最も近縁であり同じ系統枝を形成するが、図１に示すよ
うに両菌は明らかに異なっていた。従って本菌株をグラ
ム陰性菌ＭＣＩ３２８９株とした。
ない。普通寒天培地等の天然培地にも殆ど生育しないな
ど、培養が困難なため１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列を調
べることによって、本菌の帰属を明らかにすることを試
みた。本菌株よりＤＮＡを抽出、１６Ｓ ｒＲＮＡに対
応する１６Ｓ ｒＤＮＡ（大腸菌ナンバー８〜１５４
０）１５３３塩基の塩基配列を決定した。その結果に基
づいてデータベース検索を行い系統樹を作成したとこ
ろ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ属 または Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ属に近縁であることが示唆されたが、属の
特定はできなかった。また前述のＭＣＩ３２８８株とは
最も近縁であり同じ系統枝を形成するが、図１に示すよ
うに両菌は明らかに異なっていた。従って本菌株をグラ
ム陰性菌ＭＣＩ３２８９株とした。
【００１６】また、上記微生物は、変異株、あるいは細
胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法によ
り誘導される組換え株などのいずれの株であってもよ
い。本発明の製造方法においては、上記微生物の１種あ
るいは２種以上が菌体および／または菌体処理物として
用いられる。具体的には、上記微生物を培養して得られ
た菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌体を公
知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理したも
の、凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵素的
に破砕したもの等の菌体処理物を用いることができる。
また、これらの菌体または菌体処理物から、上記一般式
（Ｉ）で表される含窒素６員環化合物に作用しこれを一
般式（ＩＩ）で表される２−ヒドロキシ含窒素６員環化
合物へ変換する能力を有する酵素画分を粗製物あるいは
精製物として取り出して用いることも可能である。さら
には、このようにして得られた菌体、菌体処理物、酵素
画分等をポリアクリルアミドゲル、カラギーナンゲル等
の担体に固定化したもの等を用いることも可能である。
そこで本発明において、「菌体および／または該菌体処
理物」の用語は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、
及びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いら
れる。
胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法によ
り誘導される組換え株などのいずれの株であってもよ
い。本発明の製造方法においては、上記微生物の１種あ
るいは２種以上が菌体および／または菌体処理物として
用いられる。具体的には、上記微生物を培養して得られ
た菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌体を公
知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理したも
の、凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵素的
に破砕したもの等の菌体処理物を用いることができる。
また、これらの菌体または菌体処理物から、上記一般式
（Ｉ）で表される含窒素６員環化合物に作用しこれを一
般式（ＩＩ）で表される２−ヒドロキシ含窒素６員環化
合物へ変換する能力を有する酵素画分を粗製物あるいは
精製物として取り出して用いることも可能である。さら
には、このようにして得られた菌体、菌体処理物、酵素
画分等をポリアクリルアミドゲル、カラギーナンゲル等
の担体に固定化したもの等を用いることも可能である。
そこで本発明において、「菌体および／または該菌体処
理物」の用語は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、
及びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いら
れる。
【００１７】次に、本発明の製造方法について具体的に
説明する。本発明の製造方法において微生物は、通常、
培養して用いられるが、この培養については定法通り行
うことができる。本微生物の培養の為に用いられる培地
には本微生物が資化しうる炭素源、窒素源、及び無機イ
オン等が含まれる。炭素源としては、グルコース等の炭
水化物、グリセロール等のアルコール類、有機酸その他
が適宜使用される。窒素源としては、ＮＺアミン、トリ
プトース、酵母エキス、ポリペプトンその他が適宜使用
される。無機イオンとしては、リン酸イオン、マグネシ
ウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、モリブデンイ
オンその他が必要に応じ適宜使用される。更に、イノシ
トール、パントテン酸、ニコチン酸アミドその他のビタ
ミン類を必要に応じ添加することは有効である。培養
は、好気的条件下に、ｐＨ約６〜８、温度約２０〜３５
℃の適当な範囲に制御しつつ１５〜１００時間行う。
説明する。本発明の製造方法において微生物は、通常、
培養して用いられるが、この培養については定法通り行
うことができる。本微生物の培養の為に用いられる培地
には本微生物が資化しうる炭素源、窒素源、及び無機イ
オン等が含まれる。炭素源としては、グルコース等の炭
水化物、グリセロール等のアルコール類、有機酸その他
が適宜使用される。窒素源としては、ＮＺアミン、トリ
プトース、酵母エキス、ポリペプトンその他が適宜使用
される。無機イオンとしては、リン酸イオン、マグネシ
ウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、モリブデンイ
オンその他が必要に応じ適宜使用される。更に、イノシ
トール、パントテン酸、ニコチン酸アミドその他のビタ
ミン類を必要に応じ添加することは有効である。培養
は、好気的条件下に、ｐＨ約６〜８、温度約２０〜３５
℃の適当な範囲に制御しつつ１５〜１００時間行う。
【００１８】上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環
化合物は、Ｒ1としては水素原子、ハロゲン原子または
メチル基であるがハロゲン原子が好ましく、Ａとしては
炭素原子または窒素原子であるが、炭素原子が好まし
い。また、Ｒ1のハロゲン原子としては、通常、塩素原
子、臭素原子またはフッ素原子である。上記一般式
（Ｉ）で表される含窒素６員環化合物に上記微生物を作
用させて２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物を製造する
方法としては、本微生物を培養し、得られた菌体懸濁液
に上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環化合物を添
加し反応させ２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物を得る
方法、培地に上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環
化合物を添加し培養と反応を同時に行う方法、あるいは
培養終了後、上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環
化合物を添加して更に反応を行う方法等が挙げられる。
反応温度は１５〜４０℃が好ましく、ｐＨ５〜１０の範
囲である。上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環化
合物濃度は０．１〜３％の範囲が望ましく、必要ならば
上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環化合物は反応
の間、追補添加される。また、必要に応じて金属イオン
を添加することにより反応が促進される場合がある。培
養及び反応で得られた２−ヒドロキシ含窒素６員環化合
物の採取方法としては酸析法などの通常の分離・精製方
法により行うことができる。
化合物は、Ｒ1としては水素原子、ハロゲン原子または
メチル基であるがハロゲン原子が好ましく、Ａとしては
炭素原子または窒素原子であるが、炭素原子が好まし
い。また、Ｒ1のハロゲン原子としては、通常、塩素原
子、臭素原子またはフッ素原子である。上記一般式
（Ｉ）で表される含窒素６員環化合物に上記微生物を作
用させて２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物を製造する
方法としては、本微生物を培養し、得られた菌体懸濁液
に上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環化合物を添
加し反応させ２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物を得る
方法、培地に上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環
化合物を添加し培養と反応を同時に行う方法、あるいは
培養終了後、上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環
化合物を添加して更に反応を行う方法等が挙げられる。
反応温度は１５〜４０℃が好ましく、ｐＨ５〜１０の範
囲である。上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環化
合物濃度は０．１〜３％の範囲が望ましく、必要ならば
上記一般式（Ｉ）で表される含窒素６員環化合物は反応
の間、追補添加される。また、必要に応じて金属イオン
を添加することにより反応が促進される場合がある。培
養及び反応で得られた２−ヒドロキシ含窒素６員環化合
物の採取方法としては酸析法などの通常の分離・精製方
法により行うことができる。
【００１９】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に
説明するが、その要旨を越えない限り本発明の技術分野
における通常の変更をすることができる。 ＜実施例１＞６−メチルニコチン酸 １．０ｇ／Ｌ、イ
ーストエキス ５．０ｇ／Ｌ、コーンスティープリカー
５．０ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム １．０ｇ／Ｌ、リ
ン酸２水素カリウム １ｇ／Ｌ、リン酸水素２カリウム
３ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム １００ｍｇ／Ｌ（ｐＨ
７．０）の組成からなる液体培地４００ｍＬに、ＭＣＩ
３２８９を接種し、３０℃で４８時間好気的に培養し
た。培養途中、６−メチルニコチン酸を２ｇ／Ｌ量培養
液に添加し、培養終了後、菌体を集め５０ｍＭ塩化カリ
ウム水溶液で洗浄した。これに１０ｇ／Ｌのニコチン酸
を含む３０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．７）を
加え、全量を４００ｍＬとし３０℃で好気条件下で２４
時間反応させた。反応終了時の２−ヒドロキシニコチン
酸生成蓄積量は８．４ｇ／Ｌであった。
説明するが、その要旨を越えない限り本発明の技術分野
における通常の変更をすることができる。 ＜実施例１＞６−メチルニコチン酸 １．０ｇ／Ｌ、イ
ーストエキス ５．０ｇ／Ｌ、コーンスティープリカー
５．０ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム １．０ｇ／Ｌ、リ
ン酸２水素カリウム １ｇ／Ｌ、リン酸水素２カリウム
３ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム １００ｍｇ／Ｌ（ｐＨ
７．０）の組成からなる液体培地４００ｍＬに、ＭＣＩ
３２８９を接種し、３０℃で４８時間好気的に培養し
た。培養途中、６−メチルニコチン酸を２ｇ／Ｌ量培養
液に添加し、培養終了後、菌体を集め５０ｍＭ塩化カリ
ウム水溶液で洗浄した。これに１０ｇ／Ｌのニコチン酸
を含む３０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．７）を
加え、全量を４００ｍＬとし３０℃で好気条件下で２４
時間反応させた。反応終了時の２−ヒドロキシニコチン
酸生成蓄積量は８．４ｇ／Ｌであった。
【００２０】＜実施例２＞６−メチルニコチン酸 ０．
５ｇ／Ｌ、ニコチン酸 １．５ｇ／Ｌ、イーストエキス
５．０ｇ／Ｌ、コーンスティープリカー ５．０ｇ／
Ｌ、硫酸アンモニウム １．０ｇ／Ｌ、リン酸２水素
カリウム １ｇ／Ｌ、リン酸水素２カリウム ３ｇ／
Ｌ、硫酸マグネシウム １００ｍｇ／Ｌ（ｐＨ７．０）
の組成からなる液体培地４００ｍＬに、ＭＣＩ３２８９
を接種し、３０℃で６０時間好気的に培養した。得た培
養液を遠心分離し、菌体を集め５０ｍＭ塩化カリウム水
溶液で洗浄した。これに１０ｇ／Ｌのニコチン酸を含む
３０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．７）を加え、
全量を４００ｍＬとし３０℃で好気条件下で２４時間反
応させた。反応終了時の２−ヒドロキシニコチン酸生成
蓄積量は６．１ｇ／Ｌであった。
５ｇ／Ｌ、ニコチン酸 １．５ｇ／Ｌ、イーストエキス
５．０ｇ／Ｌ、コーンスティープリカー ５．０ｇ／
Ｌ、硫酸アンモニウム １．０ｇ／Ｌ、リン酸２水素
カリウム １ｇ／Ｌ、リン酸水素２カリウム ３ｇ／
Ｌ、硫酸マグネシウム １００ｍｇ／Ｌ（ｐＨ７．０）
の組成からなる液体培地４００ｍＬに、ＭＣＩ３２８９
を接種し、３０℃で６０時間好気的に培養した。得た培
養液を遠心分離し、菌体を集め５０ｍＭ塩化カリウム水
溶液で洗浄した。これに１０ｇ／Ｌのニコチン酸を含む
３０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．７）を加え、
全量を４００ｍＬとし３０℃で好気条件下で２４時間反
応させた。反応終了時の２−ヒドロキシニコチン酸生成
蓄積量は６．１ｇ／Ｌであった。
【００２１】＜実施例３＞６−メチルニコチン酸 １．
０ｇ／Ｌ、リンゴ酸 ２．０ｇ／Ｌ、コーンスティープ
リカー ２．０ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム １．０ｇ／
Ｌ、リン酸２水素カリウム １ｇ／Ｌ、リン酸水素２カ
リウム ３ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム １００ｍｇ／Ｌ
（ｐＨ７．０）の組成からなる液体培地１２００ｍＬ
に、ＭＣＩ３２８８を接種した。培養途中、６−メチル
ニコチン酸を２ｇ／Ｌ量培養液に添加し、３０℃で４８
時間好気的に培養した。得た培養液を遠心分離し、菌体
を集め５０ｍＭ塩化カリウム水溶液で洗浄した。これに
１５ｇ／Ｌのニコチン酸を含む３０ｍＭリン酸カリウム
緩衝液（ｐＨ６．７）を加え、全量を４００ｍＬとし３
０℃で好気条件下で２４時間反応させた。反応終了時の
２−ヒドロキシニコチン酸生成蓄積量は１０．２ｇ／Ｌ
であった。
０ｇ／Ｌ、リンゴ酸 ２．０ｇ／Ｌ、コーンスティープ
リカー ２．０ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム １．０ｇ／
Ｌ、リン酸２水素カリウム １ｇ／Ｌ、リン酸水素２カ
リウム ３ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム １００ｍｇ／Ｌ
（ｐＨ７．０）の組成からなる液体培地１２００ｍＬ
に、ＭＣＩ３２８８を接種した。培養途中、６−メチル
ニコチン酸を２ｇ／Ｌ量培養液に添加し、３０℃で４８
時間好気的に培養した。得た培養液を遠心分離し、菌体
を集め５０ｍＭ塩化カリウム水溶液で洗浄した。これに
１５ｇ／Ｌのニコチン酸を含む３０ｍＭリン酸カリウム
緩衝液（ｐＨ６．７）を加え、全量を４００ｍＬとし３
０℃で好気条件下で２４時間反応させた。反応終了時の
２−ヒドロキシニコチン酸生成蓄積量は１０．２ｇ／Ｌ
であった。
【００２２】＜実施例４＞上記培養法で培養したＭＣＩ
３２８８菌の培養液を遠心分離し、菌体を集め５０ｍＭ
塩化カリウム水溶液で洗浄した。これに１５ｇ／Ｌの６
−クロロニコチン酸を含む３０ｍＭリン酸カリウム緩衝
液（ｐＨ６．７）を加え、全量を４００ｍＬとし３０℃
で好気条件下で２４時間反応させた。反応終了時の２−
ヒドロキシ−６−クロロニコチン酸生成蓄積量は８．５
ｇ／Ｌであった。
３２８８菌の培養液を遠心分離し、菌体を集め５０ｍＭ
塩化カリウム水溶液で洗浄した。これに１５ｇ／Ｌの６
−クロロニコチン酸を含む３０ｍＭリン酸カリウム緩衝
液（ｐＨ６．７）を加え、全量を４００ｍＬとし３０℃
で好気条件下で２４時間反応させた。反応終了時の２−
ヒドロキシ−６−クロロニコチン酸生成蓄積量は８．５
ｇ／Ｌであった。
【００２３】
【発明の効果】本発明の微生物を用いた２−ヒドロキシ
含窒素６員環化合物の製造方法は、従来の方法に比べ
（特開平６−１９９７９７号公報）、コーンスティープ
リカー、イーストエキス、リンゴ酸などの安価な栄養源
で増殖でき、６−メチルニコチン酸のみならず安価なニ
コチン酸で活性発現を誘導できかつ高い生産性であるこ
とから、２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物の工業的な
生産を行う際に非常に有効である。
含窒素６員環化合物の製造方法は、従来の方法に比べ
（特開平６−１９９７９７号公報）、コーンスティープ
リカー、イーストエキス、リンゴ酸などの安価な栄養源
で増殖でき、６−メチルニコチン酸のみならず安価なニ
コチン酸で活性発現を誘導できかつ高い生産性であるこ
とから、２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物の工業的な
生産を行う際に非常に有効である。
【図１】図１は菌体の系統樹を示す図である。
Claims (1)
- 【請求項１】 下記一般式（Ｉ） 【化１】 （上記一般式（Ｉ）中、Ｒ1は水素原子、ハロゲン原子
またはメチル基を表し、Ａは炭素原子または窒素原子を
表す。）で表される含窒素６員環化合物に、ＭＣＩ３２
８８もしくはＭＣＩ３２８９の菌体および／または該菌
体処理物を作用させることを特徴とする下記一般式（Ｉ
Ｉ） 【化２】 （上記一般式（ＩＩ）中、Ｒ1およびＡは上記一般式
（Ｉ）中で定義したとおり。）で表される２−ヒドロキ
シ含窒素６員環化合物の製造方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17350396A JPH1014591A (ja) | 1996-07-03 | 1996-07-03 | ２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17350396A JPH1014591A (ja) | 1996-07-03 | 1996-07-03 | ２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1014591A true JPH1014591A (ja) | 1998-01-20 |
Family
ID=15961735
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17350396A Pending JPH1014591A (ja) | 1996-07-03 | 1996-07-03 | ２−ヒドロキシ含窒素６員環化合物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1014591A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003508046A (ja) * | 1999-08-27 | 2003-03-04 | インビトロジェン コーポレイション | 金属結合化合物および細胞培養培地組成物中でのそれらの使用 |
-
1996
- 1996-07-03 JP JP17350396A patent/JPH1014591A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003508046A (ja) * | 1999-08-27 | 2003-03-04 | インビトロジェン コーポレイション | 金属結合化合物および細胞培養培地組成物中でのそれらの使用 |
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